人外周血单核细胞来源树突状细胞转染重组腺相关病毒诱导特异性T细胞的效应

漂星 景 题 由 课 广州市科委资助 ，
为重点面上项 目． 资 助 金 额 １ 万 ５ 元， 目前 已完 成 了
单位 ： 方 医科 大 学 附属 南方 医院肿 瘤 中 南
０ 引 言
心。
材料 ：实验 于 ２ ０ — ５１ ０ ６ ０ ／０在 南方 医 院肿
树 突状 细 胞 是 抗 原 递 呈 功 能最 强 的抗 原 瘤科 生物 室 完成 。 对象 ： Ａ Ａ ① ＨＬ — ２基 因亚 型 的 递 呈 细 胞 ， 直 接 抗 肿 瘤 效 应 ， 其 可 将 摄 取 健 康 自愿供 血 者 １名 ，对本 实验 知 情 同意 ， 无 但 实
发特 异性 抗 肿 瘤 免 疫 反 应 。转 染 基 因 所用 的 （ ｂ ｏ公 司 ） ＭＴ Ｓｇ Ｇｉ ｃ ； Ｔ（ ｉｍａ公 司 ） 重 组 人 粒 ； 载体主要是 病毒 ， 腺病毒 、 如 反转 录 病 毒 、 痘 细 胞一 巨噬细 胞 集落 刺激 因子 （ ＆ ｙ ｔｍｓ Ｒ Ｄ Ｓ ｓｅ 病 毒 、 相关病 毒等 ， 腺 以腺 病 毒 转 染 率 最 高 。 公 司 ）重组 人 白细 胞 介 素 ４ 比活 性 １ ／ｇ， ； （ ３Ｕｎ 经病 毒转 染 的树 突 状 细 胞疫 苗 ， 提 供 更 多 、 Ｐ ｏ ｇ 能 ｒｍｅ ａ公司 ） 肿 瘤坏 死 因子 Ｏ， 组人 白细 ； ． ｒ重 更 有 效 可 供 识 别 的 抗 原 表 位 ， 服 了 ＨＬ 限 胞 介 素 ２ （ 放 军军 事 医学科 学 院 ） Ｆｃ ｌ 克 Ａ 解 ；ｉ ｌ ｏ 淋 制 ， 持 续 诱 导 细 胞 毒 性 Ｔ细 胞 。利 用 基 因 巴 细 胞 分 层 液 （ 津 血 研 所 ） 能 天 ；小 鼠 抗 人
６ ｆ Ｔ ＣＤ８ 一 Ｉ ： ３ ＦＴＣ， ＣＤ４ — ０ ＰＥ， ＣＤ８ 一 Ｅ ０Ｐ 工 程 技 术 构 建树 突 状 细 胞 疫 苗 面 临 的一 个 难 ＣＤ８ ＿ ｌ Ｃ，
题 就 是 转 导 率不 高 ，且 目前 对 肿 瘤 抗 原 基 因 （ ｉｌ ｅ ｄ 公 司 ） 白 细 胞 介 素 １ ｐ ０ Ｂｏｅ ｎ ｇ ； ２（ ７ ）
Ｅ Ｅ ６、 ７基 因 和 Ｂ －６、 ｅ一／ｕ 基 因 转 染 系统 培训 ， 实用 盲法 评估 。 Ａ４ Ｈ ｒ ｎ ｅ ２ 未
树 突状 细胞 ，均 成 功 诱 导 出特 异 性 的 细 胞毒 性 Ｔ细胞 效 Ｊ ” 该 细胞 毒性 Ｔ细胞 对 于抗原 ｌ ， 立【
方法 ：
外周 血 树 突 状 细胞 的分 离 和 培 养 ：抽 取
－ ２ ５ Ｃ １ １ ３ ／ ＳＳ ６ ３ ８ ２ Ｎ ２ ． ５ ９Ｒ
吴自勃 ， 人外周血单核细胞来源树突状细胞转染重组腺相关病毒诱导特异性 Ｔ细胞的效应 等．
ｍ ｗ ｇ ｋ ｃｍ ｋ ３８ ０３ ｉ ， ｒ ￣ ． ｌ ｆｏ ｆ ３ ５８ ＠ｓ ａｃｎ ｚｃ ２ ｎ ｏ
阳性 的靶 细胞 具有 明显 的杀 伤作 用 。 究同 时 ＨＬ — ２基 因亚 型 的 健 康 自愿 供 血 者 外 周 血 研 ＡＡ ０ｍＬ 肝素抗 凝 ， 体 积 Ａｌ Ｖ无 血 清培养 ２倍 Ｍ－ 发现 ， 相关 病 毒对 树 突状 细 胞具 有 很高 的转 ５ ， 腺 染 效 率 ， 一 种 比较 理 想 的转 染 载 体 ， 全 高 基稀 释 。 是 安 每个 １ ５ｍＬ离心管 中加入 １０ ７ｇｍＬ ．７ ／ 效 ， 因是 腺 相 关 病 毒 无 明显 的致 病 性 ， 依 的 Ｆｃ ｌ 巴 细胞 分 层 液 ５ ｍＬ 原 为 ｉ ｌ ｏ 淋 ，倾 斜 离 心 管
体 外 细 胞 学 实 验 以 及 部 分 裸 鼠 体 内 实验 。 下一 步 将
要 进 行 小 样 本 临 床 实验 ， 需 获 得 但 伦 理 学论 证
的抗 原 递呈 给 Ｔ细 胞 ，诱 导 Ｔ细 胞 活 化 ， 引 验经 医 院医学 伦理 委 员会批 准 。 细 胞株 和试 ② 起 Ｔ 细 胞 介 导 的 免 疫 应 答 从 而 产 生 抗 肿 瘤 剂 ： 列 腺 癌 细 胞 株 Ｌ Ｃ Ｐ、 Ｕ１ ５ 携 带 前 前 Ｎ ａ Ｄ ４ ，
效 应 。利 用 基 因 工 程技 术 将 肿 瘤 抗 原 基 因导 列 腺 特 异性 抗 原 基 因 的重 组 腺 相 关 病 毒 均 由
入树 突状 细 胞 ，可 使树 突状 细 胞 在保 留正 常 美 国 阿肯色 大 学生 物 治疗 中心刘 勇 教授 惠 赠 ：
细胞 表 型特 征 的 同 时 ， 期 表 达 肿 瘤 抗 原 ， 长 激 Ａｌ Ｖ培 养液 （ ｖ ｒｇ ｎ公 司 ） Ｆ ２培养 液 Ｍ－ Ｉ ｉｏ ｅ ｎｔ ；１
５度 ， 于液 面 上方 １ｃ 处加 入 细 胞悬 液 ， ｍ 赖型病毒 ， 如果 没 有 辅 助 病 毒存 在 ， 能 完 成 约 ４ 不
自主包 装 ； 另外 腺 相关 病毒 可 将携 带 基 因特 异 不破 坏液 面 ， ０ ｍｉ 心 ３ ｎ 吸 出分 １５ ０ｒ ｎ离 ／ ０ ｍｉ 。 整 合于 人类 的第 １ ９号 染色 体 上 ，在保 证 基 因 界 面 的 灰 白 色 细 胞 层 ，磷 酸 盐 缓 冲 液 洗 涤 能 长期 表 达 的情 况下 ， 降低 了诱 发 癌 变 的危 １次 ， ５ ０ ｒ ｎ离 心 ５ ｍｉ ， 又 １ ０ ／ ｍｉ ｎ 获得 单 核 细胞 ，
了解 甚 少 ， 限制 了该 法 的 应用 。 的 Ｐ ｕ Ｌ Ｈｅｍｏ ｔ 授 和 刘 勇 教 授 合 作 ， ａｌ 、 ｒ ｎ教
Ｅ ＩＡ检 查试 剂 盒 ，干扰 素 Ｅ ＩＡ 检 查试 ＬＳ ＬＳ
设 计 、 施 、 估 者 ： 验 设 计 为第 四 作 实 评 实
本肿 瘤 中心 已 同美 国 阿肯 色 大 学 医学 院 剂 盒 （ Ｄ 公 司 ） Ｂ 。 以腺 相 关 病 毒 为 载 体 ，将 人 乳 头 状 瘤 病 毒 的 者 ， 预实 施 及 结 果 评估 为第 一 作 者 ， 经 过 干 均