结核分枝杆菌在两种培养基上生长情况的观察比较_咸爱金
微生物检验技术中级《基础知识》(题库)模拟试卷二
微生物检验技术中级《基础知识》（题库）模拟试卷二[单选题]1.《突发公共卫生事件应急条例》规定突（江南博哥）发事件责任报告人是指A.疾病预防控制中心B.卫生行政部门C.医疗卫生机构和有关单位D.各级地方人民政府E.突发事件监测机构、医疗卫生机构和有关单位参考答案：E参考解析：《突发公共卫生事件应急条例》第二十条规定：突发事件监测机构、医疗卫生机构和有关单位发现有本条例第十九条规定情形之一的，应当在2h内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告。
所以突发事件责任报告人是指突发事件监测机构、医疗卫生机构和有关单位。
[单选题]2.用酶联免疫吸附试验（ELISA）最早检出SARS冠状病毒抗体的时间为A.1dB.7dC.10dD.15dE.28d参考答案：B参考解析：非典"病人发病后，最早的抗体IgM出现要在7d左右，10d时达到高峰，15d左右下降，抗体IgG10d后产生，20d左右达到高峰。
[单选题]4.抗原抗体的结合力最重要的是A.范德华引力B.氢键C.静电引力D.共价结合力E.疏水作用力参考答案：E参考解析：抗原抗体是一种非共价的结合，不形成共价键，需要四种分子间引力参与。
1.静电引力又称库伦引力，是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力，这种吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。
两个电荷距离越近，静电引力越大。
2.范德华引力这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原、抗体两个大分子外层轨道上电子相互作用时，两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。
这种引力的能量小于静电引力。
3.氢键结合力是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。
其结合力较强于范德华引力。
4.疏水作用力水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。
当抗原表位和抗体超变区靠近时，相互间正负极性消失，周围亲水层也立即消失，从而排斥两者间的水分子，使抗原抗体进一步吸引和结合。
结核分枝杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解结核分枝杆菌的生物学特性及致病机理；2. 掌握结核分枝杆菌的培养、分离、鉴定及检测方法；3. 增强实验室操作技能，提高对结核病的防控能力。
二、实验原理结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种革兰氏阳性细菌，是引起结核病的病原体。
本实验通过培养、分离、鉴定及检测结核分枝杆菌，了解其生物学特性及致病机理。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）结核分枝杆菌菌种；（2）牛肉浸液；（3）鸡蛋；（4）石炭酸复红染液；（5）无菌生理盐水；（6）无菌试管；（7）酒精灯；（8）高压蒸汽灭菌器；（9）显微镜；（10）生物安全柜。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）电热恒温水浴锅；（3）无菌操作台；（4）超净工作台；（5）显微镜。
四、实验方法与步骤1. 菌种复苏（1）将冷冻保存的结核分枝杆菌菌种复苏于牛肉浸液中，37℃恒温培养24小时；（2）观察菌落生长情况，记录结果。
2. 分离纯化（1）将复苏后的菌液涂布于牛肉浸液琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（2）挑取单菌落进行纯化，重复涂布、培养，直至获得纯化菌落。
3. 鉴定（1）挑取纯化菌落，用无菌生理盐水洗涤，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于石炭酸复红染液中，37℃恒温染色30分钟；（3）用无菌生理盐水冲洗，观察菌体形态及染色特性；（4）挑取染色阳性菌落，进行生化试验，如氧化酶试验、触酶试验等，以鉴定结核分枝杆菌。
4. 检测（1）挑取纯化菌落，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于含有药物的琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（3）观察药物对菌落的抑制作用，判断药物对结核分枝杆菌的敏感性。
五、实验结果与分析1. 菌种复苏：复苏后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
2. 分离纯化：纯化后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
3. 鉴定：挑取染色阳性菌落，进行生化试验，结果显示氧化酶试验、触酶试验均为阳性，符合结核分枝杆菌的生物学特性。
二种结核分枝杆菌药物敏感试验方法的评估
二种结核分枝杆菌药物敏感试验方法的评估张莹蓉1,桂晓虹1,李 静1作者单位:11上海市肺科医院 200433; 收稿日期:2000-03-06; 作者简介:张莹蓉,女,上海市肺科医院. 结核分枝杆菌药物敏感试验通常采用L 2J 常规法中的绝对浓度法,即在固体改良罗氏培养基中加入各种抗结核药物,药物分低浓度和高浓度两种浓度,根据细菌在培养基上的生长情况判断药物敏感试验的结果。
目前,许多单位采用BACTEC 法,即在12B 培养基中加入各种抗结核药物,根据结核分枝杆菌的生长指数(GI 值)判断药物敏感试验的结果,此法与比例法有所相同。
本院实验室对300例住院初、复治病人的痰标本分离培养后的结核分枝杆菌,进行了上述二种方法的药物敏感试验,观察二种方法对抗结核药物耐药性的符合率及耐药性的检出率。
从观察结果可见BACTEC 法与绝对法的低浓度药物敏感试验的总符合率为86.8%,与高浓度药物敏感试验的总符合率为89.3%。
说明,二种不同浓度药物的药物敏感试验与BACTEC 法的总符合率,无显著性差异(P >0.05)。
BACTEC法与绝对法的低、高浓度药物敏感试验的耐药性的总检出率分别为:20.9%、18.61、10.9%。
说明,BACTEC 法与绝对法的低浓度药物敏感试验耐药性的检出率比较接近,无显著性差异(P >0.05),但低浓度药物敏感试验的符合率却比高浓度药物敏感试验的符合率稍低,而BACTEC 法与高浓度药物敏感试验的检出率相差稍大,有显著性差异(P <0.05),这可能是由于高浓度药物敏感试验中的药物浓度较高对结核分枝杆菌抑制作用较强,使部分在低浓度药物敏感试验中的耐药菌种变成了敏感菌种,BACTEC 法耐药性的检出率恰好介于低、高浓度药物敏感试验的检出率之间,使BACTEC 法的符合率与高浓度药物敏感试验法更较接近,而其耐药性的检出率却与低浓度药物敏感实验更接近一些。
由于L 2J 常规法的培养基中鸡蛋等成分与药物结合,加之培养基配制过程中要加热灭菌等,使药物效介有不同程度的降低。
医学统计学练习题
医学统计学练习题徐州医学院流行病与卫生统计学教研室实习一统计表与统计图1．请将下列数据编制成合格的统计分析表。
2．有人调查维吾尔族和回族居民的ABO血型分布，结果如表1-2所示，试用图形表示两个民族的ABO 血型分布。
表1-2 两个民族ABO血型构成民族A型B型O型AB型合计维吾尔族442 483 416 172 1513回族369 384 487 115 1355合计811 867 903 287 28683．将40只接种肿瘤的小白鼠给予不同剂量的三菱莪术注射液，半月后称量瘤重，数据见表1-3，试用图形表示三组的抑瘤效果。
表1-3 不同剂量三菱莪术注射液抑瘤效果剂量（ml）样本量均数±标准差0 10 4.66±1.010.5 10 2.50±0.931.0 102.46±1.181.5 10 1.87±1.164. 请对下表资料绘制合适的统计图，表示某地居民1950-1966年伤寒与结核病死亡率的变化趋势与变化速度。
表1-4 某地居民1950-1966年伤寒与结核病死亡率（1/10万）年份伤寒死亡率结核病死亡率1950 31.3 1.50 174.5 2.24 1952 22.4 1.35 157.1 2.20 1954 18.0 1.26 142.0 2.15 1956 9.2 0.96 127.2 2.11 1958 5.0 0.69 97.7 1.99 1960 3.8 0.58 71.3 1.85 1962 1.6 0.20 59.2 1.77 1964 0.8 -0.10 46.0 1.66 1966 0.3 -0.52 37.5 1.57实习二数值变量资料描述指标计算1.某地随机抽取110名正常成年男子的红细胞计数值如表2-1。
表2-1某地110名正常成年男子的红细胞计数值（1012/L）4.91 4.28 4.895.03 4.33 4.17 4.68 4.45 4.94 5.22 4.524.21 4.135.79 4.78 5.09 4.56 5.45 3.956.10 4.53 5.194.68 4.58 4.915.86 4.85 5.27 5.46 4.40 4.86 4.83 3.704.925.25 4.46 4.41 3.84 3.86 4.32 4.31 4.13 4.11 5.514.445.17 5.33 4.90 5.25 4.24 3.52 3.77 5.31 3.29 4.645.13 4.68 4.02 4.49 5.39 5.14 4.58 4.16 4.84 4.18 4.925.14 4.28 4.09 5.26 5.36 4.786.18 4.58 4.20 4.13 4.933.734.37 4.795.69 4.58 4.56 5.48 5.35 5.21 4.06 4.905.09 4.43 5.46 4.75 4.64 5.53 4.32 5.27 4.05 3.42 3.92（（2）计算均数x、标准差s及变异系数CV；（3）计算95%及99%参考值范围和可信区间。
结核分枝杆菌耐药性检测
四、MTB DST检测结果的判读
初治TB患者的耐药性检测与结果判读
（1）初治TB患者1次分子DST检测为对RFP、INH和FQs耐药时可判断为 耐药，并同时进行表型DST，以了解耐药水平及对其他药物的耐药情况， 以供临床医生进行综合分析。
（2）初治TB患者1次分子DST检测为对RFP、INH和FQs以外抗结核药物 耐药时，建议复查，并同时进行表型DST；如果复查分子DST或表型DST 仍为耐药时，DR-TB的结论成立；如果分子DST复查结果为对被检测药 物敏感，则建议等待表型DST结果；若表型DST结果为耐药，则判断为 耐药；若表型DST结果为敏感，应结合临床资料进行综合判断。
二、常用的MTB DST检测方法
（五）基因测序技术
采用PCR-Sanger测序方法检测MTB对 RFP和INH耐药的常见基因型，可 了解突变的位点和性质，但目前尚未在临床广泛开展。
三、MTB耐药性检测策略
目前，采用任何单一形式的DST方法均无法完全满足临床需求，而采用 多种方法联合检测虽能提高耐药MTB的检出率、缩短诊断时间，但同时 也增加了TB患者的检测费用，而且若不同检测方法的结果不一致，也给 医生的诊断和化疗方案的制定带来许多困扰。
二、常用的MTB DST检测方法
（三）基因芯片技术
采用基因芯片技术较简便、快速地检测MTB对 RFP和INH耐药的常见基 因型，可了解突变的位点和性质，辅助诊断MDR-TB，整个检测过程只 需24～48 h；其缺点是杂交、检测过程较繁琐。
二、常用的MTB DST检测方法
（四）反向杂交技术
采用反向杂交技术可同时快速检测对RFP、INH、EMB、FQs、Am、Km 和Cm耐药的常见基因型，可了解突变的位点和性质，辅助诊断MDR-TB 和pre-XDR-TB、XDR-TB，整个检测过程只需1～2 d时间；但其为开放 性检测，可能会污染扩增产物而导致假耐药的报告，并且杂交、显色过 程较繁琐。
几种结核分支杆菌培养方法的应用分析
几种结核分支杆菌培养方法的应用分析作者：周俊梅来源：《中国实用医药》2012年第30期结核病是一种较严重的传染病，高耐药性结核病的疫情呈上升趋，已经成为结核病诊断和治疗的难点。
结核分枝杆菌培养在结核病的诊断和治疗中起着重要作用。
目前公认的结核分支杆菌培养方法有两种，即液体培养基快速检测法、罗氏固体培养法。
液体培养法特点是结果报告时间短。
缺点是价格昂贵，需特殊仪器。
罗氏固体培养法是我国普及通用的方法，但缺点是时间长。
针对二方法的优缺点我们研究出结核分支杆菌固液双向培养基，本文对三种培养方法进行对比分析。
1 材料和方法1.1 2010年1月至2011年8月期间我院收治的结核病患者或疑似结核病患者共927份痰标本。
1.2 酸性罗氏培养法操作、培养基的制备及结果判定，按《结核病诊断细菌学检验规程》进行。
BACTEC MGIT960全自动分枝杆菌检测系统按操作指南完成。
结核分支杆菌固液双向培养基培养前处理操作步骤同酸性罗氏培养法法。
1.3 结核分支杆菌固液双向培养基的制备：称取7H9干粉培养基4.7 g，蒸馏水溶解后加入4 ml甘油，蒸馏水补足至900 ml，进行分装，高压灭菌，置4℃冰箱备用。
使用前加入营养增强剂（OADC）、抑菌剂（终浓度为50 μg/ml羟苄青霉素、10 μg/ml两性霉素B）。
以中性罗氏培养基为基础，加入7H9液相培养基4 ml（约占斜面的一半）。
2 结果2.1 三种培养方法的阳性率、污染率的比较，结果见表1。
三种方法培养阳性率无显著性差异（P2.2 三种培养方法培养阳性报告时间的比较，结果见表2。
结核分支杆菌在BACTEC MGIT960法平均生长时间11.2 d，固液双相培养基平均生长时间14.4 d，改良罗氏培养20.5 d。
2.3 三种培养方法培养及药敏成本的对比（药敏按四种药物计算）改良罗氏培养基的培养药敏的成本为76元，固液双相培养基的培养药敏的成本为80元，液体培养基的培养药敏的成本为360元。
结核分枝杆菌实验室检测方法
局限性：
假阴性： 小儿结核、老年人结核、免疫缺陷或免疫功
能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制 剂治疗的患者) 假阳性： 接种过卡介苗的人也会产生阳性反应
γ干扰素释放试验
被认为是近十年来结核诊断史上取得的最重要成 就，该检测方法的原理是：结核感染后体内长期 存在抗原特异性的记忆性Ｔ 细胞，当再次遇到 抗原刺激时，能迅速活化增值，释放γ干扰素。 目前市售两种， QFT-G和T-SPOT.TB，比较两 种方法， T-SPOT.TB更灵敏但QFT-G更特异，但 均优于结核菌素试验，同时也被推荐用于潜伏结 核诊断。
细胞壁中含有大量脂质而不易着色，特别是有 大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，一般 用抗酸染色。萋尼染色呈红色，背景为蓝色； 荧光染料金胺“O”染色，荧光显微镜下为橘黄色
培养特性
8
实验室检测方法
病原学 免疫学 分子生物学
• 萋尼染色+荧光染色 • 罗氏培养+分枝杆菌快速培养
• 抗原抗体检测 • 细胞因子检测
不能区分结核和非结核分枝杆菌 不能区分活菌和死菌 敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000条菌
时可检出，而培养可检出>10-100条菌.
发光二极管荧光显微镜（LED）
荧光显微镜成本高、易损坏、耗电量大、光 源寿命短、显微镜价格昂贵且需要在暗室内 工作等，荧光染色法一直没有在结核病痰涂 片诊断中得到广泛的应用。
结核分枝杆菌属于缓慢生长分支杆菌
非典型分枝杆菌
偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟/脓肿、胞内分枝 杆菌、鸟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝 杆菌、偶然分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、浅黄分枝 杆菌、土分枝杆菌、草分枝杆菌、不产色分枝杆 菌、海-溃疡分枝杆菌、金色分枝杆菌、苏尔加 分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌等
结核分枝杆菌快速培养两种前处理方法分析比较
结核分枝杆菌快速培养两种前处理方法分析比较目的分析比较结核分枝杆菌快速培养两种前处理方法，从而大大减少了操作过程中被污染的几率，也提高了该培养方法的准确性。
方法采用的结核菌快速液体培养方法中使用的前处理方法为N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法，与我院经改良后的结核菌快速液体培养方法为NaOH-生理盐水法相比较。
结果使用N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）-NaOH法进行前处理的培养阳性结果为92例。
使用NaOH-生理盐水法进行前处理的培养阳性结果为90例。
结论使用NaOH-生理盐水法进行前处理可以减少前处理过程中的许多环节，减少被污染，降低了实验成本。
Abstract：Objective Comparison of mycobacterium tuberculosis fast develop two kinds of pretreatment method，thus greatly reducing the chance of contamination in the process of operation，and also improve the accuracy of the training methods. Methods N/med tuberculosis bacterium rapid liquid culture method used in the pretreatment method for n-acetyl - L - cysteine （NALC）- NaOH method，with our improved n/med tuberculosis bacterium rapid liquid culture method for NaOH - saline method comparison. Results Use n-acetyl - L - cysteine （NALC）- NaOH method for pretreatment of the positive results of 92 cases. Using NaOH - saline method for pretreatment of the positive results of 90 cases. Conclusion Using NaOH - saline method for pretreatment can reduce many links in the process of pretreatment，reduce the pollution，reduce the experiment cost.Key words：Mycobacterium tuberculosis；Rapid liquid culture；Training method结核分枝杆菌的快速液体培养方法在结核分枝杆菌检测阳性率方面显著高于涂片法，也高于罗氏培养法。
结核杆菌应用两种培养基分离鉴定的比较分析
结核杆菌应用两种培养基分离鉴定的比较分析发表时间：2015-11-06T15:48:22.640Z 来源：《中国医学人文》2015年第9期供稿作者：韦桂雪[导读] 日照市结核病防治所检验科结核病是感染结核分枝杆菌引起的慢性疾病，是严重危及全球的公共卫生问题之一。
韦桂雪（日照市结核病防治所检验科，山东276800）【摘要】目的：探讨应用两种培养基分离鉴定结核杆菌的不同效果。
方法：2009年1月-2014年12月，我们收集我院患者640份临床送检标本，分别划线接种于罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上，分离鉴定结核杆菌效果。
结果：罗氏培养基与丙酮酸钠培养基对白色念珠菌和热带念珠菌分离鉴定效果差异有显著性（P< 0.05），而罗氏培养基与丙酮酸钠培养基对其它结核杆菌生长阳性率鉴定差异无显著性（P<0.05）。
结论：罗氏培养基和丙酮酸钠培养基都有较好的分离结核杆菌的鉴别效果，丙酮酸钠培养基在分离鉴定酵母样菌中操作简便、抑杂菌强，又优于罗氏培养基。
【关键词】罗氏培养基；丙酮酸钠培养基；白色念珠菌；热带念珠菌；结核杆菌；分离鉴定结核病是感染结核分枝杆菌引起的慢性疾病，是严重危及全球的公共卫生问题之一。
结核分枝杆菌的快速检出在结核病的诊断中起着重要作用[1]。
而结核分枝杆菌在普通的培养基上生长缓慢，因此培养基的选择直接影响着疾病诊断的快慢 [1]。
为了提高其诊断率和治愈率，临床急需新技术代替传统的常规鉴定方法[2]。
丙酮酸钠培养基是一种新型的分离和鉴定的培养基，近年来应用日益广泛。
本研究采用此培养基与传统的罗氏培养基对结核杆菌的分离鉴定进行比较，取得了预期的诊断效果，现将有关结果分析报告如下：1 资料与方法1.1 一般实验资料2009年1月-2014年12月期间，我们收集在我院住院及门诊结核病患者临床送检的痰液、咽拭子、呼吸道分泌物等标本共640例。
丙酮酸钠培养基我们购自山东济南博赛生物研究所，罗氏培养基我们按照《全国临床检验操作规程》中的规定进行自配。
结核分枝杆菌在两种培养基上生长情况的观察比较_咸爱金
结核分枝杆菌在两种培养基上生长情况的观察比较_咸爱金结核分枝杆菌在两种培养基上生长情况的观察比较咸爱金摘要目的 :探讨结核分枝杆菌在改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基上阳性分离培养情况及形成菌落天数情况。
方法 :对 100例新登记肺结核患者的痰液标本经去污染处理 ,接种在自制改良罗氏、丙酮酸钠培养基上。
接种后在 37ħ孵箱内培养 8周 , 每周观察一次记录菌落生长情况及污染情况。
每份标本用改良罗氏培养基2支 , 丙酮酸钠培养基 2支。
结果 :结核分枝杆菌在改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上均生长 20例 , 在改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上均不生长 70例。
结核分枝杆菌在改良罗氏培养基上生长而在丙酮酸钠培养基上不生长 6例 , 在丙酮酸钠培养基上生长 , 而在改良罗氏培养基上不生长 4例。
结核分枝杆菌改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基在形成典型菌落数上无差异 (t =0. 57,P ＞0. 01) 。
结论 :分枝杆菌分离培养检查法 , 是结核病确诊最可靠的方法。
关键词结核分枝杆菌 ; 改良罗氏培养基 ; 丙酮酸钠培养基中图分类号 :Ｒ446文献标识码 :B 文章编号 :2095－1434. 2013. 02. 038作者单位 :吉林省汪清县结核病防治所 , 汪清 133200结核病是长期严重危害人类健康的慢性传染病 , 目前已在全球范围内造成严重的社会和经济问题。
结核分枝杆菌是引起人类结核病的主要病原体 , 此外牛分枝杆菌引起牛结核病外 , 少数人类结核病也由其引起。
分离培养结核分枝杆菌的培养基有改良罗氏培养基、丙酮酸钠培养基、酸性罗氏培养基、小川培养基四种 , 我们常用的培养基有改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基。
为了观察结核分枝杆菌在改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基上的阳性分离培养情况及形成菌落天数情况 , 对我所新登记 100例肺结核病人的痰液标本进行了培养 ,其培养结果分析如下。
1材料与方法1. 1实验材料实验标本来自本所新登记的肺结核患者的痰液 , 共 100例。
结核分枝杆菌在两种不同培养基中的阳性检出率比较
结核分枝杆菌在两种不同培养基中的阳性检出率比较【摘要】目的：比较结核分枝杆菌在改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基中的阳性检出率，为提高实验室结核分枝杆菌阳性培养率提供科学依据。
方法：首先按常规方法对715份送检标本进行前处理，然后同时接种于两种培养基中，前两周每2天观察1次，之后每周观察2次，并记录阳性出现的时间，8周没有出现结核分枝杆菌菌落者记录为阴性。
结果：丙酮酸钠培养基比改良罗氏培养基能平均提前6.87天得到阳性结果，而且能明显提高复治病例的阳性培养率。
【关键词】结核分枝杆菌改良罗氏培养基丙酮酸钠培养基结核病是感染结核分枝杆菌引起的慢性疾病，是严重危及全球的公共卫生问题之一。
结核分枝杆菌的快速检出在结核病的诊断中起着重要作用[1]。
而结核分枝杆菌在普通的培养基上生长缓慢，因此培养基的选择直接影响着疾病诊断的快慢。
为了及时诊断结核病，按照有关文献报道的方法[2]，本研究将715份临床送检标本分别接种于改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基中，比较分析两种培养基的培养阳性率及分离速度，旨在为提高实验室分枝杆菌阳性培养率提供科学依据。
1 材料和方法1.1 材料来源及分类实验材料来自我院附属医院呼吸内科，共715例，其中临床确诊为结核病的620例，初治患者419例，复治患者201例。
1.2 改良罗氏培养基的配制按常规配制[3]。
1.3 丙酮酸钠培养基的配制把改良罗氏培养基中的甘油改为丙酮酸钠（7g）。
1.4 实验方法首先按常规方法对715份送检标本进行前处理，然后同时接种于改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基中，前两周每2天观察1次，之后每周观察2次，同时记录阳性出现的时间，8周没有出现分枝杆菌菌落者记录为阴性。
1.5 统计方法采用SPSS17.0统计软件进行统计和分析。
2 结果2.1 培养阳性率比较从715份标本中改良罗氏培养基分离出165例分枝杆菌，阳性分离率为23.07%；丙酮酸钠培养基分离出174例，阳性分离率为24.34%。
新型改良罗氏培养基与罗氏酸基检测结核分枝杆菌的结果对比分析
新型改良罗氏培养基与罗氏酸基检测结核分枝杆菌的结果对比分析【摘要】目的对比研究结核分枝杆菌培养过程中采用新型改良罗氏培养基与罗氏酸基两项技术的效果。
方法选择在我院进行结核分枝杆菌痰液检测的患者标本120份，分别采用新型改良罗氏培养基与罗氏酸基两项技术进行检测，并将其定义为研究组和对照组。
对比两组阳性检出率水平、报阳时间、患者对检测方法及结果的满意度。
结果研究组研究对象阳性检出率水平高于对照组，组间差异有统计学意义（P＜0.05）；报阳时间短于对照组，组间差异有统计学意义（P＜0.05）；患者对检测方法及结果的满意度达到95.8%，高于对照组的77.5%，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论结核分枝杆菌培养过程中采用新型改良罗氏培养基，与罗氏酸基比较而言，其报阳时间更短，阳性检出率水平更高，可以使对患者检测方法及结果的满意度显著提升。
【关键词】结核分枝杆菌培养；新型改良罗氏培养基；罗氏酸基1资料和方法1.1一般资料选择2018年10月-2020年10月在我院进行结核分枝杆菌痰液检测的患者标本120份，分别采用MGIT960系统液体培养法和L-J培养法进行检测，并将其定义为研究组和对照组。
其中包括男性69例，女性51例；年龄32-76岁，平均51.8±6.0岁；患病时间1-17个月，平均6.3±0.8个月。
数据组间无统计学意义（P＞0.05），可以进行比较分析。
1.2方法在晨起状态下令患者嗽口后咳痰在已经经过消毒处理的塑料瓶当中。
标本首先做涂片经抗酸法进行染色后镜检，阳性标本(++～+++) 根据黏稠度水平的差异，按照1-2倍量加入浓度为4%氢氧化钠在旋涡混合器上，进行混合处理5min左右，痰标本液化作前处理15min左右。
标本分别接种在罗氏酸性培养基和改良新型改良罗氏培养基。
每支培养基中各加入0.1-0.2mL的样品，改良新型改良罗氏培养基中再加入剂量为0.1mL的维生素E，了解培养基制作过程中温度是否会对维生素E成分造成的影响。
细菌学---结核分枝杆菌
结核分枝杆菌一.概述结核分枝杆菌（M. tuberculosis）简称为结核杆菌（tubercle bacilli）。
早在1882年，德国细菌学家郭霍（Robert Koch，1843-1910）就已证明结核分枝杆菌是结核病的病原菌。
本菌可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见。
随着抗结核药物的不断发展和卫生生活状况的改善，结核的发病率和死亡率曾一度大幅下降。
20世纪80年代后，由于艾滋病和结核分枝杆菌耐药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、贫困及人口流动等因素，全球范围内结核病的疫情骤然恶化。
据WHO统计，全世界约每3个人中就有1个人感染了结核分枝杆菌，在某些发展中国家成人中结核分枝杆菌携带率高达80%，其中约5%～10%携带者可发展为活动性结核病。
近二十年,由于艾滋病的流行，感染了HIV的结核分枝杆菌携带者，由于病毒破坏了机体的免疫功能，发展为活动性结核病的可能性比未感染HIV者高30～50倍，且结核的病程发展更快。
此外，在HIV感染的发展进程中，结核是最早发生的一种机会性感染，结核病加重了HIV感染者或艾滋病人的疾病负担，使其更易死亡。
目前全球每年约出现8百万结核新病例，并导致约3百万人死亡。
中国每年死于结核病的人约25万之多，是各类传染病死亡人数总和的两倍多。
因此，结核病又成为了威胁人类健康的全球性卫生问题，并成为某些发展中国家和地区，特别是艾滋病高发区人群的首要死因。
1.结核分枝杆菌为分枝杆菌属，本属分类较多，其中结核分枝杆菌，麻风分枝杆菌和某些非结核分枝杆菌，生长较慢对人有致病性，非结核分枝杆菌根据生长速度和产色等不同又分为4组。
2.表形特性：结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1～4X0.4μm。
牛分枝杆菌则比较粗短。
分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸（mycolic acid）包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。
分枝杆菌一般用齐尼（Ziehl- Neelsen）抗酸染色法，以5% 石炭酸复红加温染色后可以染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色。
两种不同固体培养基对结核分枝杆菌培养阳性率的影响
两种不同固体培养基对结核分枝杆菌培养阳性率的影响潘美玉;吴龙章;陈剑锋;苏碧仪【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2012(28)5【摘要】目的:了解和分析丙酮酸钠培养基与改良罗氏培养基对分枝杆菌培养阳性率的影响,为实验室提高分枝杆菌培养阳性率提供科学依据.方法:714 份临床送检标本按常规进行有关前处理后同时接种于丙酮酸钠培养基与改良罗氏培养基,前两周每3 天观察1 次,以后每周观察1 次,并记录出现阳性的时间,8 周后未见生长者记录为阴性结果.结果:丙酮酸钠培养基与改良罗氏培养基总阳性率分别是24.09%和22.97%,两者比较差异无统计学意义.其中复治组病例阳性率分别是23.76%和19.80%,两者差异有显著性意义;出现阳性平均天数分别是25.33、31.29 天.结论:丙酮酸钠培养基能提高分枝杆菌尤其是复治病例的培养阳性率,而且能比改良罗氏培养基平均提前6 天得出阳性结果.【总页数】2页(P830-831)【作者】潘美玉;吴龙章;陈剑锋;苏碧仪【作者单位】510095,广州市胸科医院分枝杆菌实验室;510095,广州市胸科医院分枝杆菌实验室;510095,广州市胸科医院分枝杆菌实验室;510095,广州市胸科医院分枝杆菌实验室【正文语种】中文【相关文献】1.不同盐类对固体培养基水分活度的影响 [J], 王满生;曾新安;孙大文2.合并艾滋病的结核病患者血液结核分枝杆菌培养阳性率影响因素的分析 [J], 袁婧;刘俊;金永梅;李重熙;陈耀凯3.两种培养方法对儿科血培养阳性率的影响分析 [J], 周汉义;熊敏4.无外源激素条件下液体和固体培养基对黄瓜子叶培养器官分化的不同影响 [J], 杜勤;竺莉红;梁海曼;钟华鑫5.两种方法检测结核分枝杆菌阳性率的比较 [J], 张正勋;邱光艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
结核杆菌培养基的种类及应用
结核杆菌培养基的品种及利用之杨若古兰创作一个多世纪的不懈努力，曾经对结核杆菌的生长规律有了比较深入地了解，而且构成了很多成熟的培养方法.尽管古代分子生物学技术在结核病研讨中发挥着愈来愈次要的感化，但是结核杆菌的培养在结核病的诊断、流行病学目标、结核菌的分型鉴定、药敏试验、结核病药物的研讨等方面仍然有着不成替代的菇双相培养基［2］是利用平菇浸出液为基础，加小牛血清、琼脂等成分而配制的一种培养基，根据琼脂的量分歧制成液相、固相培养基.在国内利用较少，次要特点是成本低，制备简单，适合于基层使用，有必定的研讨价值.2 按成分分类次要分为以鸡卵和琼脂为基础的两种培养基［3］.为了使结核杆菌达到快速生长的目的，可加上血液、椰汁、平菇液等分歧养分成分，从而配制出各种分歧的培养基.2.1 以鸡卵为基础的培养基有L-J培养基、Ogawa培养基、丙酮酸钠培养基和丙酮酸钠细胞色素C培养基等.在鸡卵为主的培养基中，鸡卵液是关键成分，在制备培养基时，要充分考虑鸡卵液的新颖程度和养分成分是否受到破坏.L-J培养基是一种经典的培养基［4］，次要成分有天门冬素、KH2PO4、MgSO4・7H2O、枸橼酸镁、甘油、鸡卵液等，须要血清凝固器对培养基进行凝固，以包管培养基中有必定的凝固水，以满足长时间培养的须要.根据成分品种及剂量的分歧，又可分为酸性L-J培养基和碱性L-J培养基.将L-J培养基中KH2PO4的量由添加为14g，就是酸性L-J培养基，而将KH2PO改为K2HPO，就是碱性L-J培养基.L-J培养基制备简单，次要用于分枝杆菌初次分离培养、传代培养、菌落观察、保管菌种、药物敏感性测定及菌种鉴定等，而酸性L-J培养基和碱性L-J培养基用于分枝杆菌分离培养时，标天职别用碱和酸处理.结核杆菌在L-J培养基上生长时，培养时间较长，大约在4~8周，是以晦气于临床快速检测的需求，但作为其他快速诊断的参照，和作为结核杆菌诊断的尺度有非常次要的意义.Ogawa培养基成分较少，又少了天门冬素，是以是一种比L-J 培养基更为经济的培养基，次要成分有谷氨酸钠、KH2PO4、甘油、鸡卵液等，还可以通过调整KH2PO4的量及谷氨酸钠的量制备成改良培养基（Modified Ogawa），此培养基的用处与L-J培养基不异，因为价廉，特别适合于发展中国家［5］.丙酮酸钠培养基是在L-J培养基的基础上加入丙酮酸钠，除去甘油制备而成，次要用于从标本平分离牛型分枝杆菌或作为本菌的传种及保管.而丙酮酸钠细胞色素C培养基是在Ogawa培养基基础上，杨乐荫等用0.1%丙酮酸钠代替甘油，并加入2.5%葡萄糖液及细胞色素C制成丙酮酸钠细胞色素C培养基，与丙酮酸钠培养基、Ogawa培养基对临床标本比较，其培养的培养阳性率最高，显示了丙酮酸钠细胞色素C培养基的优胜性.2.2 以琼脂为基础培养基包含苏通（Sauton）培养基Middle brook 7H9、7H10、7H11、7H12，匡氏培养基Proskauer 培养基和Beck琼脂培养基等.这些培养基主如果由无机盐类及一系列的无机化合物等成分构成.琼脂的感化主如果赋形剂，通过3 按目的分类在前述的培养基基础上，根据研讨目的分歧，加入特定物资后，可以制备成用于快速培养、鉴别、药敏等分歧用处的培养基，次要为了满足临床的须要.3.1 用于快速培养次要有Becton Diskinson（BD）公司研制的系列全主动培养零碎和Organon Teknika公司研制开发的培养零碎.其的还有Difco公司ESP零碎、生物梅里埃公司的VITAL零碎等.因为与古代进步前辈的仪器设备、技术结合，检测灵敏度高，时间短，但通常价位较高.20世纪70年代末，BD公司研制的培养零碎次要有初期的BACTEC 460TM TB，成为全球第一台专业的全主动分枝杆菌培养鉴定仪，该零碎培养基以Middle brook7H12为基础，在培养基中加入标识表记标帜14C的棕榈酸，因故也称为放射同位素液体培养法，因为存在废弃物放射性环境净化和探针空刺开放性检测技术缺陷，公司又推出无放射性净化的BACTEC 9000MB 及BACTEC MGIT 960全主动快速分枝杆菌培养鉴定药敏零碎，真正实现了分枝杆菌快速、平安、无放射性检测.BACTEC MGIT 960培养基以Middle brook 7H9为基础，配方良好的BBL PANTA TM抗菌剂和OADC养分剂.采取一种荧光物资作为分枝杆菌生长唆使剂，是以也称为分枝杆菌生长唆使管法（mycobacteria growth indicator tube，MGIT），是目前全球最快3.2 用于选择因为结核杆菌生长缓慢，且养分请求高，是以对于其他的微生物极易生长，通常在培养基中都加有抑菌物资.在罗氏培养基中，微量孔雀绿既可按捺杂菌的生长，又可对结核杆菌的生长有促进感化.Gynft通过把孔雀绿的浓度提高，同时加入青霉素、萘啶酸制备成选择性的改良罗氏培养基［14］.在Middle brook 7H10、Middle brook 7H11的基础上，通过加上多黏菌素B、羧苄青霉素C、两性霉素B和三甲氧氨嘧啶即可制备成结核菌素的选择培养基，其目的主如果为了减少净化率，提高阳性率.3.3 用于鉴别最次要的有（对硝基苯甲酸）和TCH（噻吩-2-羧酸）鉴别培养基.用溶解浓缩后，在制备L-J培养基的同时，加入二甲基甲酰胺或丙二醇制成PNB培养基，加入噻吩-2-羧酸制成TCH培养基，用于结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非结核性分枝杆菌的初步鉴定［15］.3.4 用于药敏匡氏培养基是由我国研制的一种在结核杆菌快速药敏试验中有很好价值的培养基［16］.虽然BD公司的产品能够快速的检测结核杆菌，而且在药敏方面也有必定的上风，但初期的培养零碎存在放射性，新开发的培养零碎又存在净化率较高的成绩，而在传统的含药罗氏培养基上存在抗结核药物受热失活和蛋白质吸附两个次要成绩至今尚未解决，而匡氏培养基的长处在于不存在高蛋白组分对药物的吸附感化，又无加热凝固等形成药物失活成绩，是以在药敏试验方面有着明显的优胜性.次要由无机盐、维生素、琼脂、甘油和小牛血清等成分构成.药敏试验陈述结果比罗氏培养基平均早29天，多数药敏结果可在3周内陈述，对结核病的临床医治有次要指点意义.BACTEC系列培养零碎、ESP零碎等都可用于药敏试验，一些液体培养基（苏通培养基和胆固醇液体培养）可用于中草药对结核杆菌抑菌试验.3.5 用于L型细菌的培养结核杆菌L型的养分基本上与原菌不异，但普通须要加入必定量的渗透压波动剂和血清，国外次要使用的培养基［17］有巯基醋酸盐培养基、PPLO琼脂、VSY肉汤和高桥的胰腺大豆蛋白胨琼脂培养基(TSA-I)等.国内庄玉辉等［18］已成功地利用改良TSA-L培养基培养L型菌.此外安徽蚌埠医学院的L型液体培养基(代号92-3TBL)，培养15天后可取沉渣镜检.在结核杆菌的培养研讨中出现过很多培养基，以上介绍的是国内外通用的一些培养基，有很多新出现的培养基虽然培养时间缩短，但同时出现成绩也很多，是以要慎重选择.另外，要用一种培养基同时达到多种目的也是很困难的，是以很多实验室多同时利用几种培养基，以便于从各个角度来满足临床和科研的须要.总之，只需结核病还威逼着人类的健康，对培养基的研讨还将继续下去，但是如何深入、过细地研讨现有培养基各成分的彼此感化及如何使古代生物技术与传统培养技术更好的结合等成绩还有待于进一步的研讨.【参考文献】1 Isenberg HD, D’Amato RF, Heifets L, et al. Collaborative feasibility study of a biphasic system(Roche Septi-Chek AFB)for rapid detection and isolation of mycobacteria. J Clin Microbiol,1991,29(8):1719-1722.2 申建维，袁玮，李娉，等.平菇双相培养基用于结核杆菌培养的研讨.中国防痨杂志，2001，23（4）：241-244.3 Saito H. Laboratory media for the cultivation of tubercle bacillus. Kekkaku,1998,73(5):329-337.4 WHO. Laboratory services in tuberculosis control,1998.5 David Lubasi, Charity Habeenzu, Satoshi Mitarai. Evaluation of an ogawa mycobacterium culture method modified for higher sensitivity employing concentrated samples. Tropical Medicine and Health,2004,32(1):1-4.6 张敦熔.古代结核病学.北京：人民军医出版社，2000,17-19.7 闻玉梅.古代医学微生物学.上海：上海医科大学出版社，1999，507.8 Hanna BA, Ebrahimzadeh A, Elliott LB, et al. Multicenter evaluation of the BACTEC MGIT 960 system for recovery of mycobacteria. J Clin Microbiol,1999,37(3):748-752.9 Chien HP, Yu MC, Wu MH, et al. Comparison of the BACTEC MGIT 960 with Lowenstein-Jensen medium for recovery of mycobacteria from clinical specimens. Int J Tuberc Lung Dis,2000,4(9):866-870.10 kos Somoskvi, Csaba Kdmn, kos Lantos, et al. Comparison of recoveries of Mycobacterium tuberculosis using the automated BACTEC MGIT 960 System, the BACTEC 460 TB System, and Lowenstein-Jensen medium. J Clin Microbiol,2000,38(6):2395-2397.11 Woods GL,Fish G, Plaunt M, et al. Clinical evaluation of difco ESP culture system Ⅱ for growth and detection of mycobacteria. Journal of Clinical Microbiology,1997,35 (1): 121-124.12 Enrico Tortoli, Paola Cichero, M Gabriella Chirillo, et al. Multicenter comparison of ESP culture system Ⅱ with BACTEC 460TB and with lowenstein-Jensen medium for recovery ofmycobacteria from different clinical specimens, including blood. Journal of Clinical Microbiology,1998,36(5): 1378-1381.13 Williams-Bouyer N, Yorke R, Lee HI, et al. Comparison of the BACTEC MGIT 960 and ESP culture system Ⅱ for growth and detection of mycobacteria. J Clin Microbiol，2000,38(11):4167-4170.14 闫国蕊，苏保亮.结核病细菌学检验技术.郑州：郑州大学出版社，2001，9：32.15 中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程.中国防痨杂志，1996，18（1）：28-31.16 匡铁吉，董梅，张青霞，等.匡氏琼脂培养基用于痰结核菌直接药敏试验的后果研讨.中国检验医学与临床，2002,3（2）：54-56.17 王进.结核分支杆菌L型的研讨近况.中华新医学，2003，4（19）：1774-1776.庄玉辉，李国利，张小刚，等.肺结核病人L型分离培养方法的研讨.微生物学通报，。
结核分枝杆菌的检验及鉴别
结核分枝杆菌的检验及鉴别【摘要】分枝杆菌属是一类细长略弯曲的细菌，有分枝生长趋势，可呈丝状或菌丝样生长。
无鞭毛，无芽孢。
本属细菌的主要特点是细胞壁脂质含量高，其主要成分是分枝菌酸。
本菌需氧，营养要求特殊，大多数生长缓慢，个别菌种目前尚不能人工培养。
结核分枝杆菌复合群是人类结核病的主要病原体，包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌。
【关键词】分枝杆菌；检验1生物学特性1.1形态染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，有分枝生长趋势，单个、成堆或呈束状排列，大小（0．3～0．6）μm×（1～4）μm，形态如球状、串珠状或丝状，革兰染色不易着色，抗酸染色阳性，一般分枝杆莴采用齐-尼（Ziehl-Neelsen，E-N）抗酸染色后，结核分枝杆菌呈红色，非抗酸菌染色呈蓝色。
1.2培养特性本菌为专性需氧菌。
最适生长温度为37℃，低于30℃不能生长。
pH 6．5～6．8。
营养要求较高，但生长缓慢。
必须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能良好生长。
本菌在培养基上缓慢生长，一般2～4周才能生长出菌落。
菌落表面干燥、粗糙、隆起、呈颗粒状、结节状或菜花状、乳A色或淡黄色，不透明。
结核分枝杆菌在5％～l0％的C02条件下对其生长有促进作用。
其对营养要求高，对一些营养成分有特殊的要求。
例如，结核分枝杆菌专嗜甘油为碳源，而牛分枝杆菌则以丙硐酸盐为碳源。
天冬酰胺是结核分枝杆菌生长最好的氮源，钾、镁、铁、磷等无机离子对其生长有促进作用。
1.3生化反应结核分枝杆菌的生化反应不活泼。
不发酵糖类。
多数菌株触酶试验阳性，但68℃加热后酶活性消失即热触酶阴性，借此可与非结核分枝杆菌区别，后者热触酶试验大多阳性。
结核分枝杆菌硝酸盐还原试验、烟酸试验和烟酰胺酶试验阳性，而牛分枝杆菌则为阴性，可有助于两菌的鉴别。
2细菌学检验结核病的症状和体征往往都不典型，虽可借助x线摄片诊断，但确诊仍依赖于细菌学检验。
微生物检验学之分枝杆菌属及检验
分枝杆菌属及检验分枝杆菌属是一类细长或略带弯曲、为数众多（包括54个种）呈分支状生长的需氧杆菌。
因其繁殖时呈分支状生长故称分枝杆菌。
本属细菌的主要特点是细胞壁含有大量脂类，可占其干重的60%，这与其染色性、抵抗力、致病性等密切相关。
耐受酸和抗乙醇，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后，能抵抗3%盐酸乙醇的脱色作用，故又称抗酸杆菌。
需氧生长，无鞭毛，无芽胞和荚膜。
引起的疾病均为慢性，有肉芽肿病变的炎症特点。
分枝杆菌的种类较多，包括结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌和麻风分枝杆菌。
非典型分枝杆菌是一大群分枝杆菌的总称，与人类有关的非典型分枝杆菌主要有堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、戈分枝杆菌、鸟分枝杆菌、蟾分枝杆菌、龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌和耻垢分枝杆菌等。
本属细菌无内外毒素，其致病性与菌体某些成分如索状因子、蜡质D及分枝菌酸有关。
根据国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT）的方案将本属细菌分为三类，即缓慢生长菌、迅速生长菌和不能培养菌。
一、结核分枝杆菌在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆菌。
（一）生物学特性1.形态与染色结核分枝杆菌为细长或略带弯曲的杆菌。
在培养基中可呈球状或丝状，陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状。
抗酸染色时因菌体含有大量脂类而不易着色，无论是否经碘液处理，着色后均不易被盐酸乙醇脱色，所以使菌体呈红色。
本菌无芽胞、无鞭毛，近年发现有荚膜。
2.培养特性本菌专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%～10%CO2环境中可刺激其生长。
烛缸不适合本菌培养，需用二氧化碳培养箱。
培养温度适应范围较大，35～40℃均可生长，最适温度为35～37℃。
最适pH为6.5～6.8。
兼性胞内寄生菌，在细胞内外均可发育繁殖，强毒株可长期生存于巨噬细胞内。
生长时还需适当的湿度。
本菌生长缓慢，最快的分裂速度为18小时一代。
在固体培养基上，一般需2～6周才能长出菌落。
菌落呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄色，表面呈皱纹状，形似菜花。
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结核分枝杆菌在两种培养基上生长情况的观察比较_咸爱金结核分枝杆菌在两种培养基上生长情况的观察比较咸爱金摘要目的 :探讨结核分枝杆菌在改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基上阳性分离培养情况及形成菌落天数情况。
方法 :对 100例新登记肺结核患者的痰液标本经去污染处理 ,接种在自制改良罗氏、丙酮酸钠培养基上。
接种后在 37ħ孵箱内培养 8周 , 每周观察一次记录菌落生长情况及污染情况。
每份标本用改良罗氏培养基2支 , 丙酮酸钠培养基 2支。
结果 :结核分枝杆菌在改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上均生长 20例 , 在改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基上均不生长 70例。
结核分枝杆菌在改良罗氏培养基上生长而在丙酮酸钠培养基上不生长 6例 , 在丙酮酸钠培养基上生长 , 而在改良罗氏培养基上不生长 4例。
结核分枝杆菌改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基在形成典型菌落数上无差异 (t =0. 57,P ＞0. 01) 。
结论 :分枝杆菌分离培养检查法 , 是结核病确诊最可靠的方法。
关键词结核分枝杆菌 ; 改良罗氏培养基 ; 丙酮酸钠培养基中图分类号 :Ｒ446文献标识码 :B 文章编号 :2095－1434. 2013. 02. 038作者单位 :吉林省汪清县结核病防治所 , 汪清 133200结核病是长期严重危害人类健康的慢性传染病 , 目前已在全球范围内造成严重的社会和经济问题。
结核分枝杆菌是引起人类结核病的主要病原体 , 此外牛分枝杆菌引起牛结核病外 , 少数人类结核病也由其引起。
分离培养结核分枝杆菌的培养基有改良罗氏培养基、丙酮酸钠培养基、酸性罗氏培养基、小川培养基四种 , 我们常用的培养基有改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基。
为了观察结核分枝杆菌在改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基上的阳性分离培养情况及形成菌落天数情况 , 对我所新登记 100例肺结核病人的痰液标本进行了培养 ,其培养结果分析如下。
1材料与方法1. 1实验材料实验标本来自本所新登记的肺结核患者的痰液 , 共 100例。
每例患者就诊当时留取“ 即时痰” 标本 , 同时给患者 2个痰盒 , 嘱患者留取“ 夜间痰” 和“ 晨痰” , 于次日交验。
每例患者的 3个痰标本中挑选质量好的进行去污染处理 (消化液 ) 。
1. 2培养基自制改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基。
1. 3实验方法用吸管吸取消化液 0. 1mL , 均匀接种在整个培养基斜面 , 每份标本接种用改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基各 2支。
接种后斜面向上 ,于 37ħ孵箱内平放 24h 后检查培养基污染情况 , 拧紧瓶盖直立放置 37ħ孵箱内继续培养。
1. 4统计学处理改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基内结核分枝杆菌生长情况比较采用χ2检验 , 两种培养基上形成菌落所需天数比较采用 t 检验。
2结果接种后每周观察一次菌落生长及污染情况 , 阳性生长物经抗酸染色证实后报告分枝杆菌生长。
培养满 2个月后观察未见菌落生长者报告培养阴性。
2. 1两种培养基阳性分离率 100例患者标本中 , 两种培养基共分离出 30例分枝杆菌 , 阳性分离率为 30%。
改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基上均生长的 20例 , 改良罗氏培养基上生长丙酮酸钠培养基上不生长的有 6例 , 丙酮酸钠培养基上生长改良罗氏培养基上不生长的 4例。
改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基分离分枝杆菌有显著性差异(χ2=50. 10, P ＜0. 05) , 改良罗氏培养基分枝杆菌培养阳性分离数比丙酮酸钠培养基分枝杆菌培养阳性分离数多。
形成典型菌落所需天数见表 1。
表 1形成典型菌落所需天数天数改良罗氏培养基丙酮酸钠培养基7 133314 208521 2761228 345135 411242 481049 551056 6011合计2624改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基在形成典型菌落数上无差异 (t =0. 57, P ＞0. 01) 。
2. 2在两种培养基上分枝杆菌均生长良好 ,400支培养基中只有 2支可见杂菌生长 , 观察时发现非分枝杆菌生长时报告污染。
这次培养基污染率控制在 0. 5%范围内。
3讨论结核分枝杆菌在自然界中 , 非在动物机体内不能繁殖 , 在培养基中生长适应温度为 37ħ , 与人的体温相似。
在富于氧的环境中生长良好 , 若含有有 2. 5% 10%二氧881Vol. 24No. 2Journal of Aerospace MedicineFeb 2013化碳则生长更旺盛 , 在低氧环境中生长 , 所需营养成分大多能自行合成。
《伯杰氏系统细菌学手册》将分枝杆菌菌种划分为两大类 :缓慢生长分枝杆菌和快速生长分枝杆菌。
一般而言 , 结核杆菌即指人型结核杆菌 , 人型结核杆菌是引起人类结核病的主要病原菌 , 占人类结核病的发病率的 90%; 其次为牛分枝杆菌占 5%左右。
人型结核杆菌在甘油鸡蛋固体培养基上生长旺盛。
牛型结核杆菌在含甘油鸡蛋固体培养基上不易生长 ,如以丙酮酸钠培养基代替甘油培养基则生长良好 , 牛型结核杆菌可利用丙酮酸钠做碳源代替甘油。
所以在上述实验中出现的 4例在丙酮酸钠培养基上生长 , 而在改良罗氏培养基上不生长的分枝杆菌考虑是牛型结核杆菌。
用改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基分离结核分枝杆菌的分离率有显著性差异(χ2=50. 10, P ＜0. 05) , 改良罗氏培养基分枝杆菌的阳性数比丙酮酸钠培养基多。
改良罗氏培养基与丙酮酸钠培养基在形成典型菌落数上无差异 (t =0. 57,P ＞0. 01) 。
分枝杆菌分离培养检查法 , 是结核病确诊最可靠的方法 , 是获得纯培养物进行菌种鉴定、药物敏感性试验 , 以及其他生物学研究的基础。
参考文献1潘美玉 , 吴龙章 , 陈剑锋 , 等 . 两种不同固体培养基对结核分枝杆菌培养率的影响 [J ]. 实用医学杂志 , 2012, 28(8) :42.2王陇德 . 结核病防治 [M ]. 北京 :中国协和医科大学出版社 ,2004. 313 314. 3曾正国 , 王南华 . 现代实验结核病学 [M ]. 北京 :科学技术文献出版社 ,2003. 389 392. (收稿日期 :2012－11－15)两种手术切口治疗阑尾炎的临床效果比较于文滨摘要目的 :探讨小口径切口阑尾切除术的临床效果。
方法 :选择 2010－01 2012－06收治腹壁较薄的急性和慢性阑尾炎 119例的临床资料进行回顾性分析。
结果 :119例分为治疗组 56例 , 对照组 63例。
治疗组采用小口径阑尾切除术 ,手术时间 18 30min , 术后 4 8h 肛门排气 , 6h 进饮 , 8h 下床活动 , 切口均为Ⅰ 期愈合 , 无一例切口感染 , 住院 3 5d 出院 , 与对照组常规切口相比有显著性差异。
结论 :阑尾小口径切口手术时间短、创伤小、恢复快、安全可靠 , 适用于基层医院。
关键词阑尾炎 ; 小口径 ; 手术中图分类号 :Ｒ656.8文献标识码 :B 文章编号 :2095－1434. 2013. 02. 039作者单位 :黑龙江大庆市让胡路区人民医院 , 大庆163712阑尾炎是普外科的常见病和多发病 , 无论是急慢性阑尾炎 , 一旦诊断明确 , 均主张早期手术治疗 , 我院外科自 2010－01 2012－06共收治的 119例腹壁较薄的急性阑尾炎和慢性阑尾炎 , 其中 , 对 56例患者采用小口径切口切除阑尾 , 均获得满意疗效 , 现将结果报告如下。
1资料与方法1. 1一般资料治疗组 :56例 , 其中男 29例 , 女 27例 , 年龄 5 62岁 , 病程 2h 5年 , 均以右下腹或剑突下疼痛为首发症状 ,多数伴有恶心呕吐及发热 , 其中 , 急性阑尾炎 38例 , 慢性阑尾炎 18例。
对照组 :63例 , 其中男 34例 , 女 29例 , 年龄 5 68岁 , 病程 3h 6年 , 主要以右下腹或剑突下疼痛为首发症状 , 多数伴有恶心呕吐及发热 , 其中急性阑尾炎 40例 , 慢性阑尾炎 23例。
两组在年龄病史、病程等方面无明显差异 , 具有可比性。
1. 2方法1. 2. 1术前准备所有患者体征均以右下腹麦氏点固定性压痛及反跳痛 , 入院后即行血常规、凝血常规、大小便常规、 B 超等相关检查。
两组均排出化脓性、坏疽性及穿孔性阑尾炎、阑尾周围脓肿以及有腹腔粘连性病例 , 建立静脉通道 , 提前给予抗生素后施行手术。
1. 2. 2手术方法治疗组 :在麻醉成功后 , 常规消毒铺巾 , 作一右下腹McBurneY's 切口长约 1. 5 2cm , 分别切开皮肤皮下组织 , 剪开腹外斜肌腱膜 , 钝性分开腹内斜肌和腹横肌 ,直至腹膜 , 用止血钳将腹膜提起 , 切开一小口 , 然后剪开腹膜 ,用肌拉钩牵开切口 , 能容一指 , 术野较小 , 用长平无齿镊将下降的大网膜推向上腹 , 然后松开肌拉钩 , 用左手食指伸向右髂窝 , 沿着结肠带盲探 , 触及一游离的条索状物即是阑尾 , 食指不动 , 紧贴阑尾 , 右手用阑尾钳 (闭合 ) 沿小切口间隙缓慢伸入左手食指触及阑尾位置 , 张开阑尾钳并钳住阑尾 , 注意不误伤肠管 , 松开左手食指 , 右手将阑尾提出腹外 , 然后按常规操作完成阑尾的切除 , 腹膜及腹外斜肌腱膜分别缝合 2针 , 皮肤缝合一针或用一张创可贴即可。
对照组 :采用常规右下腹 McBurneY's 切口完成981第 24卷第 2期航空航天医学杂志2013年 2月。