血浆EB病毒DNA载量检测在儿童EB病毒感染中的应用价值_胡荣盛

儿童 ＥＢ 病 毒 （ＥＢＶ）感 染 临 床 表 现 较 为 多 样， 与其相关的 疾 病 很 多，易 误 诊，实 验 室 诊 断 十 分 重 要。ＥＢＶ 抗体谱检测可以综合判断出 ＥＢＶ 感染时 期，区分 ＥＢＶ 急性感染与既往感染，其敏感性高、特 异性 强、诊 断 明 确，为 ＥＢ 病 毒 感 染 诊 断 的 首 选 指 标 。 ［１－２］ 本研究旨 在 通 过 分 析 血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 与 儿 童 ＥＢ 病毒感染分期的关系，跟踪监测 ＥＢ 病毒感染 患儿 ＥＢＶ 抗 体 谱 与 ＥＢＶ－ＤＮＡ 的 变 化，探 讨 血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 检测在患儿 ＥＢＶ 感染诊断、疗效观察和 愈后评估中的应用价值。
（１．浙江省宁海县第一医院检验科，浙江 宁海县 ３１５６００；２．宁波市第三医院检验科，浙江 宁波 ３１５０２０）
摘要：目的 评价血浆 ＥＢ 病毒 ＤＮＡ（ＥＢＶ－ＤＮＡ）载量检测在儿童 ＥＢＶ 感染中的应用价值。方法 采用实验 室 指标对照研究，选取１８９例 ＥＢ 病毒感染患儿（ＥＢＶ 原发感染１２３例，ＥＢＶ 复发感染６６例）及１５３例非 ＥＢＶ 感染 患儿（ＥＢＶ 既往感染１３５例，无 ＥＢ 病毒感染１８例），采用实时荧光定量 ＰＣＲ 方法检测 血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 载 量 及 间 接免疫荧光法（ＩＦＡ）检测 ＥＢＶ 抗体谱，跟踪监测３３例 ＥＢ 病毒原发感染患儿２周，２、６个月的血浆 ＥＢＶ－ＮＤＡ 载 量及 ＥＢＶ 抗体谱变化。结果 ＥＢＶ 感 染 组 血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 阳 性 率 ２２．２％，血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 平 均 载 量 为 ３．７２ ｌｇＣｏｐｉｅｓ／ｍｌ，ＥＢＶ 原发感染组与复发感染组血浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 阳 性 率 分 别 为 ２６．８％、１３．６％，两 组 比 较，差 异 有 统 计学意义（Ｐ＜０．０５）；患儿 ＥＢ 病毒感染的 诊 断 中，血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 的 敏 感 度 ２２．２％、特 异 度 １００．０％、诊 断 符 合 率５７．０％，血浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 与 ＥＢＶ－ＣＡ ＩｇＭ 的诊断符合率差异无统计学意义；在患 儿 ＥＢ 病 毒 原 发 感 染 诊 断 中， 血浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 的敏感度２６．８％、特异度９５．７％、诊 断 符 合 率 ５４．４％，血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 与 ＥＢＶ－ＣＡ ＩｇＭ 的 诊 断 符合率差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；血浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 与 ＥＢＶ－ＣＡ ＩｇＭ 检测结果一致性不佳，差异有统计学 意 义 （Ｐ＜０．０５）；３３例 ＥＢ 病毒急性 感 染 患 儿 血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 转 阴 率 ２ 周 为 ８４．８％、２ 个 月 为 ９３．９％，ＥＢＶ 抗 体 谱 原 发感染转为既往感染率２个月为６．１％、６个月为９３．９％。结论 血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 载 量 检 测 有 助 于 患 儿 ＥＢＶ 感 染的治疗效果观察和愈后评估。 关键词：患儿；血浆；ＥＢ 病毒；ＤＮＡ；ＥＢＶ 抗体谱 中 图 分 类 号 ：Ｒ４４６ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１００５－４５２９（２０１４）１１－２８５５－０３
收稿日期：２０１４－０３－１１ ； 修回日期：２０１４－０４－０８ 基 金 项 目 ：宁 波 市 科 技 基 金 资 助 项 目 （２０１０Ｃ９００２８）
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中华医院感染学杂志２０１４年第２４卷第１１期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ Ｖｏｌ．２４Ｎｏ．１１ ２０１４
ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗａｓ ｎｏｔ ｇｏｏｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｉｎ ３３ｃａｓｅｓ ｏｆ ａｃｕｔｅ ＥＢ ｖｉｒｕｓ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗａｓ ８４．８％ （２ｗｅｅｋｓ），９３．９％ （２ｍｏｎｔｈｓ ），ＥＢＶ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｆｒｏｍ ｐｒｉｍａｒｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｔｏ ｐｒｅｖｉｏｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ６．１％ ｆｏｒ ｔｗｏ ｍｏｎｔｈｓ ａｎｄ ９３．９％ ｆｏｒ ６ ｍｏｎｔｈｓ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ｌｏａｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｃａｎ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ＥＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｈｉｌｄｒｅｎ；Ｐｌａｓｍａ；ＥＢＶ；ＤＮＡ；ＥＢＶ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｓｐｅｃｔｒｕｍ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ｌｏａｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ＥＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｌｄｒｅｎ． ＭＥＴＨＯＤＳ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １８９ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ＥＢ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ （１２３ｃａｓｅｓ ｏｆ ＥＢＶ ｐｒｉｍａｒｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，６６ｃａｓｅｓ ｏｆ ＥＢＶ－ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）ａｎｄ １５３ｃａｓｅｓ ｏｆ ｎｏｎ－ＥＢＶ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃｈｉｌｄｒｅｎ （１３５ｃａｓｅｓ ｏｆ ＥＢＶ ｐｒｅｖｉｏｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，１８ｃａｓｅｓ ｏｆ ｎｏｎ－ＥＢ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）．Ｔｈｅ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ｌｏａｄ ａｎｄ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｓｓａｙ （ＩＦＡ） ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＥＢＶ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｐｅｃｔｒｕｍ．３３ｃａｓｅｓ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ＥＢ ｖｉｒｕｓ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｅｒｅ ｔｒａｃｋｅｄ ａｎｄ ｍｏｎｉｔｏｒｅｄ ｆｏｒ ｔｗｏ ｗｅｅｋｓ，２，６ ｍｏｎｔｈｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＮＤＡ ｌｏａｄ ａｎｄ ＥＢＶ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｐｅｃｔｒｕｍ．ＲＥＳＵＬＴＳ Ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ２２．２％ ｉｎ ｔｈｅ ＥＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ｌｏａｄ ｗａｓ ３．７２ ｌｇｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ．Ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｉｎ ＥＢＶ ｐｒｉｍａｒｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ２６．８％ ａｎｄ １３．６％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ （Ｐ＜０．０５）．Ｉｎ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｃｈｉｌｄｒｅｎ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ２２．２％ ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｗａｓ １００％ ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｒａｔｅ ｗａｓ ５７．０％ ，ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ａｎｄ ＥＢＶ－ＣＡ ＩｇＭ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．Ｉｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ′ｓ ＥＢ ｖｉｒｕｓ ｐｒｉｍａｒｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ２６．８％ ， ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｗａｓ ９５．７％ ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｒａｔｅ ｗａｓ ５４．４％ ，ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ａｎｄ ＥＢＶ－ＣＡ ＩｇＭ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ （Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ＥＢＶ ＤＮＡ ａｎｄ ＥＢＶ－ＣＡ ＩｇＭ
中华医院感染学杂志２０１４年第２４卷第１１期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ Ｖｏｌ．２４Ｎｏ．１１ ２０１４
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ｄｏｉ：１０．１１８１６／ｃｎ．ｎｉ．２０１４－１３２４０２
·论 著·
血浆 ＥＢ 病毒 ＤＮＡ 载量检测在儿童 ＥＢ 病毒感染中的应用价值
胡 荣 盛１ ，徐 亚 丽１ ，俞 晓 春１ ，薛 静 俊１ ，张 超２
２ 结 果
１．１ 资料来源 选取 ２０１１ 年 １ 月 －２０１２ 年 １２ 月 医院就诊患儿３４２例，其中男 １８４例，女 １５８ 例，年 龄６月龄～１４岁，中 位 年 龄 ４ 岁。 根 据 病 史、临 床 表现、实验室检查 等，１８９ 例 患 儿 诊 断 为 ＥＢ 病 毒 感 染，１５３例患儿 诊 断 为 非 ＥＢＶ 感 染，诊 断 符 合 美 国 ＣＤＣ ＥＢ 病 毒 感 染 诊 断 标 准。１８９ 例 ＥＢ 病 毒 感 染 患 儿 中 ＥＢＶ 原 发 感 染 １２３ 例，ＥＢＶ 复 发 感 染 ６６ 例；１５３例 非 ＥＢＶ 感 染 患 儿 中 ＥＢＶ 既 往 感 染 １３５ 例，非 ＥＢＶ 感 染 １８ 例。ＥＢ 病 毒 感 染 组 与 非 ＥＢＶ 感 染 组 男 女 比 例 、年 龄 分 布 基 本 一 致 。 １．２ 标本处 理 ＥＢＶ 感 染 患 儿 及 非 ＥＢＶ 感 染 患 儿 均 采 集 静 脉 血 ３ ｍｌ，ＥＤＴＡＫ２ 抗 凝 ，分 离 血 浆 后 ， 分成 两 份，分 别 用 于 血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 载 量 检 测 和 ＥＢＶ 抗体谱检测。跟踪 分 析 ３３ 例 ＥＢ 病 毒 原 发 急 性感染 患 儿 ２ 周，３、６ 个 月 的 血 浆 ＥＢＶ－ＤＮＡ 与 ＥＢＶ 抗体谱变化。血浆标本均－８０ ℃ 保存，３ 个月 内完成检测。 １．３ 间 接 免 疫 荧 光 法 （ＩＦＡ）检 测 方 法 ＥＢＶ－ＣＡ ＩｇＧ、ＥＢＶ－ＣＡ ＩｇＧ 亲和力、ＥＢＶ－ＣＡ ＩｇＭ、ＥＢＶ－ＥＡ ＩｇＧ、ＥＢＮＡ ＩｇＧ 操 作 过 程 及 结 果 判 断 严 格 遵 守 试 剂盒说明。 １．４ ＥＢＶ 核 酸 提 取 与 检 测 方 法 核 酸 提 取 方 法： 取 待 测 血 浆 标 本、试 剂 盒 内 阳 性 对 照、阴 性 对 照 １００μｌ，分 别 加 入 １００μｌ核 酸 提 取 液 １，振 荡 混 匀 １０ｓ，１３ ０００ｒ／ｍｉｎ 离 心 １０ ｍｉｎ，弃 上 清 液，再 加 入 ２５μｌ核 酸 提 取 液 ２，振 荡 混 匀 至 沉 淀 溶 解，１００ ℃