第十一章荧光分析法

溶液荧光光 谱的特征
Stokes shift 荧光光谱的形状与激发波长无关 荧光光谱与激发光谱的镜像关系
第十一章 荧光分析法
二、荧光与分子结构
荧光寿命(f)和荧光效率 (f)
Ft = F0 e -t /f
ln F0
Ft
发射荧光的光子数
f=
吸收激发光的光子数
一般物质 f 0~1之间
仪器分析
第十一章 荧光分析法
有机化合物分子结构与荧光的关系 长共轭结构 刚性和共平面性 取代基
仪器分析
第十一章 荧光分析法
荧光试剂
荧光胺 Dansyl-Cl 邻苯二甲醛(OPA) 测定无机离子的荧光试剂
仪器分析
第十一章 荧光分析法
三、影响荧光强度的外部因素
温度 溶剂 pH值 荧光熄灭 散射光
极性溶剂 溶剂粘度
激发光谱和荧光光谱
双光束仪器时，误差可抵消
第十一章 荧光分析法
二、其他荧光分析技术简介
1.激光荧光分析 2.时间分辨荧光 3.同步荧光分析 4.胶束增敏荧光
仪器分析
第十一章 荧光分析法
仪器分析
第二节 荧光定量分析方法
第十一章 荧光分析法
一、荧光强度与物质浓度的关系
仪器分析
F=K’(I0-I) I=I010-ECL
F= K’I0(1-10-ECL) = K’I0(1-e-2.3ECL) 若c很小，Ecl ≤0.05 则
F=2.3K’I0Ecl=Kc
第十一Hale Waihona Puke Baidu 荧光分析法
3.多组分分析—多组分分析
第十一章 荧光分析法
仪器分析
第三节 仪器与其他荧光分析技术
第十一章 荧光分析法
一、荧光分光光度计
滤光片荧光计 滤光片—单色器 荧光分光光度计
仪器分析
第十一章 荧光分析法
仪器的校正
仪器分析
灵敏度
以能被检出的最低信号来表示 在选定条件下用稳定荧光物质校正
波长
用汞灯标准谱线校正
第十一章 荧光分析法
仪器分析
第一节 基本原理
第十一章 荧光分析法
仪器分析
第十一章 荧光分析法
仪器分析
第十一章 荧光分析法
仪器分析
（二）激发光谱与发射光谱
excitation spectrum
横坐标ex，纵坐标 发射光强度
fluorescence spectrum
横坐标em，纵坐标 发射光强度
F=2.3K’I0ECl=KC
仪器分析
ECl≤0.05 F C
ECl >0.05 F 与C不成正比
荧光分析法的灵敏度高于紫外-可见分光光度法
荧光法
F
紫外法
A= - lgT = - lgI /I0
第十一章 荧光分析法
二、定量分析方法
仪器分析
1.标准曲线法 2.比例法（对比法）
用空白溶液调零 用标准溶液调满刻度
荧光熄灭剂 荧光自熄灭 瑞利散射 拉曼上式
仪器分析
第十一章 荧光分析法
选择适当的激发波长可消除拉曼光的干扰
仪器分析
溶剂
水 乙醇 环己烷 CCl4 CHCl3
激 发 光（nm） 248 313 365 405 436 271 350 416 469 511 267 344 409 459 500 267 344 408 458 499 —— 320 375 418 450 —— 346 410 461 502