石蜡切片制作

一、概述
石蜡切片制作
二、实验材料和仪器
三、实验内容与步骤：
四、作业： 提交制作合格的石蜡切片和实验报告。
一、概述
• 当我们研究生物体的组织或细胞时，除了某些生 物体可用相差显微镜或偏光显微镜等方法达到观 察目的外，其余大部分生物体，因为组织较厚， 光线不易透过内部等关系而达不到观察的要求， 为了达到此目的，就必须将生物体的组织切成薄 切片或不切片，经过一系列处理，使光线易于透 过，即可进行观察。因此，根据标本的制作方法 分为切片法和非切片法两种。这些方法，各有优 缺点，应该适当的配合使用，才能获得比较理想 的结果。
冰冻切片法
• 冰冻切片法是利用液体二氧化碳或其它药 剂（如氯乙烷）在变成气体时吸收大量的 热使组织迅速结成冰块而后再进行切片的 方法。目前国内外用半导体致冷调节器来 代替二氧化碳的冰冻，冷冻速度更快更为 方便。
• 冰冻切片法的优点是较前石蜡方法简便，组织不 经脱水、透明、包埋等手续即可切片，因而可节 省很多时间，十分钟左右即能制成切片。常用于 临床病理手术诊断，银材料不经溶媒处理就可直 接进行切片，材料不受试剂的激烈刺激及温度影 响，所以组织没有显著的收缩，细胞形态不致有 大的改变，也引冰冻切片不需有机溶剂处理，所 以能保存脂肪、类脂等成分，所以冰冻切片法常 用于组织化学，尤其是神经组织，临床病理学等 方面的研究。
火棉胶切片法
• 火棉胶切片法是以火棉胶为支持剂进行切片的方 法。此法的优点是包埋过程中不用二甲苯及石蜡， 不经高温，可避免组织收缩及变脆，适于精细材 料（如脑）的切片，也引火棉胶有韧性切片不知 有折卷或破裂，适宜于大块组织及多空洞的组织 （脑、眼球），硬度较高的组织（骨、肌腱）。 缺点：手续麻烦、费时间，切片不能切薄，起码 在10um以上，不能作连续切片，因此，在生物制 片技术上已经不经常采用。
数量
• 切片机（带切片刀一把） 1台
• 溶蜡箱（数控）
1台
• 展片台（数控）或水浴锅 1台
• 染色缸（立式或卧式） 30个
• 酒精灯
6个
• 树胶瓶 1个
• 切片盘 6个
• 硬纸板 若干
• 单面刀片 6盒
• 标本瓶（30ml） 6个
• 载玻片 2盒
• 盖玻片 1盒
•
•
• 洗瓶
6个
• 抹布
6块
• 纱布
6块
• 新鲜的组织或已经固定的组织，经短时间处理后 即可进行切片。用任何固定及处理的材料均适合 冰冻切片，但一般的经验用福尔马林固定的材料 最适合冰冻切片，而用酒精、甘油保存的材料必 须充分水洗后才易于冰冻，否则不易切成完整的 切片（银究竟、甘油都能妨碍冰冻）。
• 冰冻切片的缺点：不能作连续切片，组织块不能 过大，过大不易结冰，冰冻切片易于破碎，一般 冰冻切片机不易薄切，其切片往往要比石蜡切片 厚1～2倍，染色也不记石蜡切片清晰，观察要有 一定经验。
Baidu Nhomakorabea蜡切片法
• 石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片 的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理 学等常规制片方法，因此用得最多，它有 很多优点：比较省时间，容易操作，可切 成极薄的切片（4um以下），能制作连续切 片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺 点是只能用于较小的组织块，较大的组织 块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明 过程中产生收缩并易变脆。制片时间太长。
• 由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新 鲜越好，一般不应超过死后24小时。如果是管状 器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采 取，以免组织自溶或上皮剥落。
• 材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的 是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以 保持其原有的结构。
• 固定液：10%福尔马林和乙醇
取材－ 固定－ 脱水－ 包埋－ 切片－ 染色－ 封片
实验原理
• 首先固定液固定组织会渗透整个组织，然 后脱水过程中，梯度酒精进入组织置换固 定液，然后二甲苯（或TO，透明剂）置换 酒精，最后透蜡，石蜡进入组织置换二甲 苯，因为石蜡和酒精不溶，所以需要二甲 苯作为媒介来用。
二、实验用具与药品
• 用具及药品
炭蜡切片法
炭蜡切片法优点是操作时间比火棉胶和石蜡法都 短，在急用场合2～3小时即可制成切片标本。组 织经固定后不经酒精及二甲苯直接进入炭蜡，故 组织收缩少，能和石蜡法一样薄切，并可经行连 续切片，染色效果也好，又因组织或器官不经有 机溶剂处理，因而可作脂肪及类脂的检查，可代 替冰冻切片法制作脂类制片。
切片的种类
• 切片法就是利用锐利的刀具，将器官组织或 幼小个体分割成许多极薄的薄片，而制成切 片标本的一种方法。
• 切片法在切成薄片以前必须设法使组织内渗 透某种支持物质。使组织保持一定的硬度， 然后利用切片机进行切片。根据所用支持物 质的不同切片法又可分为石蜡切片法、火棉 胶切片法、冰冻切片法、炭蜡切片法等类型。 现分述如下：
• 缺点：对大块及坚硬易碎的组织不适宜，切片时 室温不可过高，因易软化，炭蜡吸水性强，极易 融化故包埋块应妥善保管。制成的连续切片也不 如石蜡法的质量高。
切片法制作的过程
（以石蜡切片法为例）
• 采集标本―→动物―→麻醉或杀死―→割 取所需组织―→固定―→冲洗―→脱水或 保存―→透明―→透蜡―→包埋―→修块 ―→切片―→贴片机展片―→烘干―→脱 蜡―→染色―→封片。
• 毛笔
1支
• 记号笔
1个
• 无水乙醇
3瓶
• 95％乙醇
5瓶
• 二甲苯
3瓶
• 苏木精
1瓶
• 伊红
1瓶
• 甲醛 1瓶
• 石蜡（52～54、56～58、60～ 62） 3盒、3盒、3盒
三、实验内容与步骤
• 1．取材及固定 • 取动物体上的小块组织成为组织块。组织块的大
小以不超过0.5立方厘米为宜。切去组织块时动作 要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生 变化。 • 组织块取下后，先用先用0.9％的生理盐水漂洗以 洗掉血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔 中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生 理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀 或其他器具刮之。
• 固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。 不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名 称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
• 2．冲洗