叶绿素的测定
叶绿素含量的测定分光光度法
叶绿素含量的测定分光光度法叶绿素是植物和一些原生生物中重要的光合色素之一，它在光合作用中起到接收和转换光能的关键作用。
测定叶绿素含量可以帮助我们了解植物的光合效率和健康状况，以及研究光合作用的机制和调控。
分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法，本文将介绍该方法的原理、实验步骤和数据分析。
一、原理分光光度法测定叶绿素含量的原理是基于叶绿素对光的吸收特性。
叶绿素分子可以吸收特定波长的光，特别是蓝光和红光，而对绿光的吸收较弱。
利用分光光度计测量叶绿素溶液在不同波长的光下的吸光度，可以通过比较吸光度与叶绿素浓度的标准曲线，计算出待测样品中叶绿素的含量。
二、实验步骤1. 制备叶绿素提取液：将适量的鲜叶片（去除茎和大的叶脉）放入离心管中，加入少量酒精，并用研钵捣碎，使叶绿素释放到酒精中。
然后用酒精将研钵中的残渣洗入离心管中，最后用酒精将叶绿素完全溶解。
注意，酒精的使用要避免火源。
2. 离心沉淀：将叶绿素提取液离心10分钟，以沉淀残渣和悬浮物。
3. 分光光度计测量：取离心后的叶绿素提取液，用分光光度计在特定波长下（如645 nm和663 nm）测量其吸光度。
记录吸光度值。
4. 制备标准曲线：取不同浓度的叶绿素标准溶液，用同样的方法测量其吸光度，记录吸光度值。
5. 计算叶绿素含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。
三、数据分析1. 标准曲线的绘制：将各个标准溶液的叶绿素浓度作为横坐标，吸光度作为纵坐标，绘制曲线。
利用标准曲线可以通过待测样品的吸光度值，反推出其叶绿素的浓度。
2. 计算待测样品中叶绿素的含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。
四、注意事项1. 实验中应尽量避免阳光直射，以免光线对实验结果的干扰。
2. 操作时应注意安全，避免酒精接触到火源。
3. 叶绿素提取液的制备应充分溶解，避免残渣和悬浮物的影响。
叶绿素的测定
叶绿素的测定
叶绿素是植物中的重要色素，用于光合作用中的光能捕捉和转化。
测定叶绿素的含量可以评估植物的光合活性和健康状况。
常用的叶绿素测定方法包括：
1. 酸醇提取法：将植物组织置于酸醇混合液中，利用酸溶解细胞膜，醇提取叶绿素。
然后用光度计测定提取液的吸光度，根据吸光度与叶绿素浓度的关系计算出叶绿素的含量。
2. 高效液相色谱法(HPLC)：通过将植物样品制备成溶液，在高效液相色谱仪中进行分离和检测。
根据标准曲线或内标法，确定叶绿素的浓度。
3. 光谱分析法：通过测量叶绿素在可见光区域的吸收光谱，计算叶绿素的浓度。
常用仪器包括光度计或分光光度计。
4. 荧光光谱法：通过测量样品在激发光下发射的荧光光谱，间接推测出叶绿素的浓度。
这种方法可以通过测量不同波长下激发光和荧光信号的比值来评估叶绿素的含量。
5. 无损测定法：利用近红外光谱或其他无损技术，通过样品材料的光学特性来推测叶绿素的含量。
这种方法适用于大范围的植物样本测定。
叶绿素测定方法的选择取决于实验条件、设备和样品特性。
根据需求，可以选用适当的方法来测定叶绿素的含量。
叶绿素测定的原理
叶绿素测定的原理叶绿素是一种存在于植物、藻类和一些细菌中的绿色色素，它聚集在叶绿体中，起着光合作用的关键角色。
叶绿素测定的原理基于叶绿素吸收和反射光谱特性的不同。
叶绿素吸收光谱显示在蓝光和红光区域吸收高，而在绿光区域反射和几乎不吸收。
这是因为叶绿素a和b分子的结构中含有大量的酞咯环和烯丙基它们在不同区域的光谱产生显著的吸收峰。
此外，叶绿素a和b之间的差别在绿光区域更大，这是为什么植物呈现绿色的原因。
1.色度法：色度法是最常用的叶绿素测定方法之一、它通过提取叶片中的叶绿素，并利用叶绿素与乙醇或酸性溶液的反应形成叶绿素酸钠的溶液。
然后，通过测量叶绿素酸钠溶液的吸光度或荧光强度来确定叶绿素的含量。
2.光谱法：光谱法利用不同波长下叶绿素的吸收峰的特性，通过测量叶片或细胞所吸收或反射的光的强度来测定叶绿素的含量。
这种方法可以根据不同的吸收峰来计算叶绿素a、叶绿素b和叶绿素总量的含量。
3.高效液相色谱法：高效液相色谱法是一种精确测定叶绿素含量的方法。
它通过将提取的叶绿素样品分离，并用激光或紫外光检测器来检测叶绿素的浓度，从而确定叶绿素的含量。
4.光电导比色法：光电导比色法是一种快速测定叶绿素含量的方法。
它利用叶绿素溶液的电导率与其浓度之间的关系，通过测量叶绿素溶液的电导率来计算叶绿素的含量。
叶绿素测定的原理主要基于叶绿素分子的吸收和反射光谱特性的不同。
通过测量叶绿素吸收或反射的光的强度，可以计算出叶绿素的含量并评估植物的光合作用效率和叶绿素含量的变化。
这种测定对于研究植物的光合作用效率、光合产物的积累以及植物在环境胁迫下的适应性具有重要意义。
叶绿素的提取与分析测定
叶绿素的提取与分析测定叶绿素是一类广泛存在于植物、藻类和一些细菌中的色素分子，它在光合作用中起着重要的作用。
叶绿素的提取和分析测定是植物生理学、植物生态学、环境科学等领域的研究中常用的实验操作之一、本文将介绍叶绿素的提取和分析测定的方法及其应用。
1.取新鲜叶片，将其放置于干净的细网纱袋中，用乙醇浸泡片刻，使其浸润。
2.将浸泡的细网纱袋取出，轻轻挤压以使叶绿素溶出。
3.用乙醇将溶液稀释至一定浓度。
4.离心沉淀，将上清液取出，即可得到叶绿素溶液。
叶绿素的浓度可以通过分光光度法进行测定。
分光光度法是根据不同物质对光的吸收特性来测定其浓度的一种分析方法。
具体步骤如下：1.将提取得到的叶绿素溶液置于紫外可见分光光度计中。
2. 使用合适的波长进行测定，一般波长为663 nm和645 nm。
3.依次测定样品和纯溶剂（如乙醇）的吸光度，并计算其差值。
4.根据比色法原理，利用比色计算公式或标准曲线，计算叶绿素的浓度。
叶绿素的分析测定可以帮助我们了解植物光合作用的效率、叶片的生理状态、环境因子对植物的影响等。
叶绿素浓度的变化可以指示植物对环境的适应能力和营养状态。
因此，叶绿素的提取与分析测定在植物生态学研究、农业生态学研究、环境科学研究等领域中得到广泛应用。
叶绿素的提取与分析测定方法的选择应根据具体的研究目的和实验条件进行优化。
例如，在进行叶片叶绿素含量测定时，应尽量选择含有丰富叶绿素的叶片样品，避免阳光直射、避免用硬物破坏叶片结构等。
在选择测定波长时，要根据叶绿素的特性选择吸收峰值附近的波长，以提高测定的准确性。
总之，叶绿素的提取与分析测定是植物生理学、植物生态学、环境科学等领域研究中常用的实验操作。
通过选择合适的提取方法和测定方法，可以准确测定叶绿素的含量，从而为相关研究提供重要的数据支持。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法一、引言叶绿素是植物体内的一种重要的生物色素，对于植物的光合作用和生长发育有着至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物生理生态学、环境保护等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的叶绿素含量测定方法。
二、材料与仪器1. 乙醇：纯度为95%。
2. 醋酸：纯度为99%。
3. 氯仿：纯度为99%。
4. 石油醚：纯度为95%。
5. 甲醛：纯度为37%。
6. 碳酸钠：分析纯。
7. NaOH溶液：浓度为0.1mol/L。
8. 蒸馏水：去离子水或超纯水均可。
9. 离心管、比色皿、移液管等实验器具。
三、方法1. 乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%乙醇中，放置在室温下静置20-24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
2. 醋酸法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入80%醋酸中，放置在室温下静置24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的80%醋酸；（5）用分光光度计在652nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
3. 氯仿-甲醛法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%甲醛中，在水浴中加热至90℃保持10分钟；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的氯仿，并振荡混合均匀后静置10分钟；（5）用分光光度计在649nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
4. 石油醚-乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入石油醚中，放置在室温下静置2-3小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
5. NaHCO3-NaOH法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入NaHCO3-NaOH缓冲液中，在冰箱中保持暗处理2小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，并用蒸馏水稀释至一定浓度；（5）用分光光度计在665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定(分光光度法)一、直接浸取法1.将新鲜的小麦叶片剪成0.2cm左右的细丝或小块混合均匀后，称取0.1—0.2g，放入25ml的容量瓶或具塞试管中。
2.在容量瓶或试管中加入0.5ml纯丙酮和10—15ml 80%的丙酮，并仔细将粘附在瓶壁边缘的叶子碎末洗到丙酮溶液中，盖上瓶塞，室温下置暗处浸提过夜，其间摇动3—4次3.次日取出容量瓶，观察叶组织已全部变白时，表示叶绿素已浸提干净，然后用80%丙酮定容至25ml，过滤或离心后，波长645nm，663nm，652nm 比色二、研磨法根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度C以及光径L成正比，即A＝aCL（a为该物质的吸光系数）。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b含量，只需测定该提取液在2 个特定波长下的吸光度度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。
在测定叶绿素a、b含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、b的80 ％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04 和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca +9.27Cb (1)A645=16.75Ca+45.6Cb (2)式中A663、A664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的吸光度值；Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度(g/L)。
解联立方程(1)、(2)可得以下方程：Ca=0.0127A663-0.00269A645 (3)Cb=0.0229A645-0.00468A663 (4)如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，(3)、(4)式则可改写为：Ca(mg/L)=12.7A663-2.69A645 (5)Cb(mg/L)=22.9A645-4.68A663 (6)叶绿素总量CT(mg/L)=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663 (7)叶绿素总量也可根据下式求导A652=34.5×CT由于652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点(等吸收点)，两者有相同的比吸收系数（均为34.5 ），因此也可以在此波长下测定一次吸光度（A652）求出叶绿素总量：CT(g/L)=A652/34.5CT(mg/L)=A652×1000/34.5 (8)因此，可利用(5)、(6)式可分别计算叶绿素a与b含量，利用(7)式或(8)式可计算叶绿素总量。
叶绿素的测定(分光光度法)
中华人民共和国行业标准叶绿素的测定（分光光度法）ＳＬ88—1994Determination of chlorophyII（Spectrophotometric method）水利部1995／05／01批准1995／05／01实施1 总则1.1主题内容本标准规定了用分光光度法测定水体中的叶绿素。
1.2适用范围本标准适用于河流、湖泊、水库或池塘等水体中叶绿素的测定。
1.3 干扰及消除1.3.1脱镁叶绿素ａ能够干扰叶绿素ａ的测定，当含有脱镁叶绿素时叶绿素ａ的测定值偏高。
因此，在测定叶绿素ａ的时候，还要测定脱镁叶绿素ａ1.3.2脱镁叶绿素ａ对叶绿素ａ的干扰，可通过测定叶绿素ａ酸化前后产生的吸收峰之比，对表观叶绿素ａ的浓度作脱镁叶绿素ａ的校正。
2 原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，收集植物性浮游生物，用90%的丙酮溶液提取。
将提取液离心分离后，测定750、663、645、630ｎｍ的吸光度，计算叶绿素的浓度。
3 仪器3.1分光光度计。
3.2比色池：10ｍｍ和50ｍｍ。
3.3医用离心机。
3.4离心管：10～15ｍＬ带塞刻度管。
3.5研钵：直径约80ｍｍ。
3.6过滤装置：过滤器，微孔滤膜（孔径0.45μｍ，直径60ｍｍ），真空泵（吸气泵或蠕动泵）。
3.7常用实验设备。
4 试剂4.1碳酸镁悬浮液：1%（ｍ／Ｖ）。
称取1.0ｇ细粉末碳酸镁（ＭｇＣＯ3）悬浮于100ｍＬ蒸馏水中。
每次使用时，要充分摇匀。
4.2丙酮溶液：90%（ｖ／Ｖ）。
在900ｍＬ丙酮中加100ｍＬ蒸馏水。
4.3盐酸溶液：1ｍｏｌ／Ｌ。
量取83ｍＬ盐酸（ρ＝1.19ｇ／ｍＬ）溶于水中，冷却并稀释至1000ｍＬ。
5 样品的采集与保存5.1样品应按浮游植物定量采样方法，采集在玻璃或聚乙烯瓶子里。
河流、湖泊、水库取500ｍＬ，池塘取300ｍＬ。
5.2采样后，样品应放在荫凉处，避免日光直射，最好立即对水样进行分析处理。
如需放置水样，则应避光冷藏保存（2～5℃），而且每升水样需加1ｍＬ1%碳酸镁悬浮液，以防止酸化引起色素溶解。
叶绿素的测定
叶绿素的测定（分光光度计法）
1.样品的选取
在测定叶片光和作用的枝条上，随机选取3~5片叶子，用水洗净并用滤纸吸干，取其中脉两侧的叶肉组织，取其鲜重0.1g，剪碎放于试管中。
2.叶绿素的提取
在试管中加入10毫升二甲基甲酰氨，加塞，放于阴暗处提取，待样品为白色透明时即表明叶绿素提取完毕。
3.测定
把提取的上清液注入比色杯中，以二甲基甲酰氨为对照，用72G型分光光度计测定在645nm和663nm时的光密度。
4.计算
（1）叶绿素浓度的计算：以Amon公式计算
参考文献：丁圣彦编著的《常绿阔叶林演替系列比较生态学》河南大学出版社.1999年
熊庆娥编著的《植物生理学实验教程》四川科学技术出版社2003年
呼吸速率的测定
卞勇主编的《植物与植物生理》中国农业大学出版社2007。
叶绿素含量的测定及计算
叶绿素含量的测定及计算叶绿素含量的测定及计算方法如下：1. 原理：根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
2. 计算公式：根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即：A=acl。
式中：a为比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，a 为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
3. 测定波长的选择：在测定叶绿素a、b时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、h的80%丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663 nm 和645 nm，又知在波长663 nm下，叶绿素a、b在该溶液中的吸光系数分别为82.04和9.27，在波长645 nm下分别为16.75和45.60。
4. 计算：叶绿素a（Ca）、叶绿素b（Cb）和类胡萝卜素（Cx）的浓度可以根据测定的波长吸光度计算得出。
计算公式如下：Ca=（13.95*A665-6.88*A649）；Cb=（24.96*A649-7.32*A665）；Cx=（1000*A470-2.05*Ca-114.8*Cb）/245。
5. 叶绿素含量计算：根据求得的色素浓度（mg/L），再计算出各色素含量（mg/g鲜重表示）。
叶绿素含量（mg/g）=（色素浓度mg/L * 提取液体积ml * 稀释倍数）/(1000 * 样品鲜重g)。
上述信息仅供参考，如果想要获取更多关于叶绿素含量测定的专业指导，可以查阅相关的学术文献或者咨询专业科研人员。
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定：
1实验仪器：高级型分光光度计，离心机，电子天平，剪刀，研钵，漏斗，移液管。
2实验试剂：丙酮，石英砂。
3实验材料：植物叶片。
4实验步骤：
（1）色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，秤取0.5g放入研钵中加纯丙酮5ml ，少许石英砂，研磨成匀浆，，再加入80%丙酮5ml ，将匀浆转入离心管，并用适量80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后弃沉淀，上清液用80%丙酮定容至20ml。
（2）测定OD值：取上述色素提取液1ml，加80%丙酮4ml稀释后转入比色杯中，以80%丙酮为对照，分别测定663nm、645nm的OD值。
（3）计算：按照公式计算叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度，再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量。
（4）公式：ρa=12.7A663—2.69A645；
ρb=22.9A645—4.68A663；
ρ（a+b）=ρa+ρb =8.02A663 +20.21A645
注意：ρ代表叶绿素浓度，单位：mg/L 。
1.由于植物叶子中含有水分，故先用丙酮进行提取，以使色素提取液中丙酮的最终
浓度近似80% 。
2.由于叶绿素a、b的吸收峰很陡，仪器波长稍有变差，就会是结果产生很大的误
差，因此最好能用波长较正确的高级型分光光度剂。
叶绿素的测定
2.仪器设备
分光的滤膜，在冰箱内低温干燥6--8小时后放入组织研磨器中，加入少量碳酸镁粉末及2--3毫升90%丙酮，充分研磨，提取叶绿素a。用离心机（3000--4000r/min)离心10分钟。将上清液倒入5毫升或10毫升的容量瓶中。
在用2--3毫升90%丙酮，继续研磨提取，离心10分钟，并将上清液再转入容量瓶中。重复1--2次，用90%丙酮定容为5毫升或10毫升，摇匀。
叶绿素a的测定
叶绿素是植物光合作用中的重要光和色素。通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况。在环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊营养化的指标之一。
1.水样的采集与保存
可根据工作的需哟进行分层采样或混合采样。湖泊、水库采样500毫升、池塘300毫升，采样量视浮游植物分布量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000毫升。采样点及采样时间同浮游植物。
将上清液在分光光度计上，用1厘米光程的比色皿，分别读取750nm,663nm,645nm,630nm,波长的吸光度，并以90%的丙酮做空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。
4.计算方法
叶绿素a（mg/m3）
V-----水样体积（L）
D-----吸光度
V1-----提取液定容后的体积（ml）
δ------比色皿光程（cm）
乙酸纤维滤膜（孔径0.45微米）
抽滤器
组织研磨器或其他细胞破碎器
碳酸镁粉末
90%丙酮
测叶绿素含量实验报告
一、实验目的1. 了解叶绿素在植物生长过程中的作用和重要性；2. 掌握叶绿素含量的测定方法；3. 通过实验操作，提高学生的实验技能和实验数据处理的水平。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其主要成分包括叶绿素a和叶绿素b。
叶绿素含量的高低直接影响到植物的光合作用效率。
本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，通过测定叶绿素溶液在不同波长下的吸光度，根据朗伯-比尔定律计算出叶绿素的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶片；2. 仪器：分光光度计、电子天平、研钵、试管、移液管、量筒、剪刀、滤纸、吸水纸、蒸馏水、95%乙醇、碳酸钙粉。
四、实验步骤1. 准备实验材料：取新鲜菠菜叶片，用剪刀剪成小片，称取0.1g（准确到0.001g）放入研钵中；2. 加入碳酸钙粉：在研钵中加入少量碳酸钙粉，研磨至叶片呈绿色均浆；3. 加入乙醇：向研钵中加入3～5mL 95%乙醇，继续研磨至组织变白；4. 过滤：将研磨好的均浆倒入漏斗中，用滤纸过滤，收集滤液；5. 定容：用移液管将滤液移入10mL量筒中，用乙醇定容至刻度线；6. 测定吸光度：将定容后的溶液倒入比色杯中，以95%乙醇为空白，在波长663nm、645nm下测定吸光度；7. 计算叶绿素含量：根据朗伯-比尔定律，计算叶绿素的含量。
五、实验结果与分析1. 实验数据：| 叶片重量（g） | 吸光度A645nm | 吸光度A663nm | 叶绿素含量（mg/g） ||--------------|--------------|--------------|------------------|| 0.1 | 0.6 | 0.5 | 1.5 |2. 结果分析：根据实验数据，菠菜叶片的叶绿素含量为1.5mg/g。
实验结果表明，菠菜叶片中含有较高的叶绿素，有利于植物的光合作用。
六、实验讨论1. 实验过程中，叶片的研磨程度和乙醇的用量对实验结果有一定影响。
研磨程度过浅或过深，以及乙醇用量不足，都会导致实验结果偏差；2. 实验过程中，需严格控制实验条件，如温度、光照等，以保证实验结果的准确性；3. 本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，操作简便、快速，适用于实验室和教学实验。
叶绿素的测定
实验六富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）一、实验目的富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。
此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。
本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。
二、器材与用品1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。
2、比色杯（1cm；4cm）。
3、台式离心机（3500r/min）4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱5、匀浆器或小研钵。
6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。
7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。
8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。
9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。
10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L.三、方法和步骤1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。
采样点及采水时间同“浮游植物”。
2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。
3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml 减压过滤。
待水样剩余若干毫升之前加入0.2ml MgCO3悬液、摇匀直至抽干水样。
加入MgCO3可增进藻细胞滞留在滤膜上，同时还可防止提取过程中叶绿素a被分解。
如过滤后的载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷（4℃）暗处保存，放置时间最多不能超过48小时。
4、提取；将滤膜放于匀浆器或小研钵内，加2－3ml90％的丙酮溶液，匀浆，以破碎藻细胞。
然后用移液管将匀浆液移入刻度离心管中，用5ml90％丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加90％丙酮，使管内总体积为10ml。
塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取18－24小时。
5、离心：提取完毕后，置离心管于台式离心机上3500r/min，离心10min，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min在离心10min。
叶绿素测定方法
叶绿素测定方法一、实验原理叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。
当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。
高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素a 和叶绿素b 在645nm 和663nm 处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm 处。
因此测定提取液在645nm、663nm、652nm 波长下的吸光值，并根据经验公式可分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。
二、仪器、和试剂仪器：分光光度计、电子天平(0．01g)、研钵、棕色容量瓶（容量瓶包锡纸代替）、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管。
试剂：丙酮；石英砂；碳酸钙粉三、操作步骤取新鲜蔬菜1g，洗净吸干水分，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3mL80％丙酮，研成均浆，再加丙酮10mL，继续研磨至组织变白。
暗处静置3～5min。
取滤纸1张置于漏斗中，用丙酮湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗，滤液流至50mL容量瓶中（外包锡纸）；冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
用滴管吸取丙酮，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。
直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用丙酮定容至100mL，摇匀。
取叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm下测定吸光度，以丙酮为空白对照。
四、计算按照实验原理中提供的经验公式，分别计算植物材料中叶绿素a、b 和总叶绿素的含量。
ρa =12.72A663-2.59A645ρ b =22.88A663-4.67A645ρ=ρa +ρb =20.29A645+8.05A663叶绿素含量=ρ*V /（m*1000）(mg/g)ρ：叶绿素质量浓度，mg/lV：提取液体积，mlm：样品质量，gPS:若处理干燥样品，则用80%丙酮（体积分数）。
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定方法
以下是 8 条关于叶绿素含量测定方法：
1. 嘿，你知道吗，分光光度法就可以测定叶绿素含量哦！就像用魔法镜一样，能把叶绿素的秘密都照出来。
比如说，在实验室里，小明拿着样本放在分光光度计前，专注地操作着，那认真的样子，简直酷毙啦！
2. 还有一种方法叫荧光分析法呢！哇哦，这就像是给叶绿素装上了信号灯，一测就知道它的情况啦！想象一下，小红在那里调试着仪器，期待着结果，那心情肯定很激动呀！
3. 说起来，高效液相色谱法也是很厉害的哟！这不就是给叶绿素来个精准的“体检”嘛！记得有一次，小王看着色谱图出来，脸上露出了惊喜的表情，嘿，肯定是发现了什么有趣的结果！
4. 重量法也能行呀！这就像称一称叶绿素有多重一样。
就像那次和小李一起做实验，看着天平上的数字，我们都在猜叶绿素到底有多少呢！
5. 浸提法也不错呢！感觉就像是给叶绿素泡个舒服的“澡”，然后就能知道它在里面的情况。
那次和朋友们一起用这个方法，大家边做边讨论，可有意思了！
6. 哇塞，难道你不知道还有纸层析法呀！这简直就是给叶绿素来一次奇妙的“旅行”嘛！上次看到老师熟练地操作着，那技术，真牛！
7. 原子吸收光谱法也能测定哦！这是不是跟找宝藏一样神奇呀！就像我们有一次好奇地看着仪器，在想它怎么就能找到叶绿素的秘密呢。
8. 近红外光谱法也很管用呢！想想看，就像是给叶绿素照了个特别的“照片”。
我记得有一次和同学一起用这个方法，大家都觉得好新奇呀！
总之呀，这些方法都各有各的奇妙之处，都能帮助我们了解叶绿素含量呢！。
叶绿素的测量方法
叶绿素的测量方法叶绿素是植物和浮游生物体内的一种绿色色素，具有光合作用和光合细菌中也存在这种色素。
叶绿素对于生物体内的光合作用非常重要，因此对于叶绿素的测量方法，一直是科学研究和工程应用中的重要问题。
本文将介绍叶绿素的几种常用测量方法，旨在通过详细的介绍和分析，使读者对叶绿素的测量方法有更为全面深入的了解。
一、光学吸收法1.常用紫外-可见分光光度计法(UV-Vis)光学吸收法是一种广泛使用的叶绿素测量方法之一。
通过利用叶绿素对特定波长光的吸收特性，可以测量叶绿素的浓度。
常用的是紫外-可见分光光度计法(UV-Vis)。
通过用叶绿素标准溶液构建标准曲线来测定待测叶绿素溶液的浓度，精确、快速、准确。
2.高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法(HPLC)是一种专业的叶绿素测量方法，对于复杂样品的分离和测量更加准确。
利用HPLC技术，可以进一步分析不同种类的叶绿素和其同系物的含量。
二、荧光法1.光诱导荧光法(PAM)光诱导荧光法(PAM)是一种基于叶绿素光合效率的测量方法。
通过测量叶绿素在光合作用过程中释放的荧光信号，可以快速、准确地评估叶绿素的光合活性和健康状态。
2.激光诱导荧光法(LIF)激光诱导荧光法(LIF)是利用激光激发样品后产生的荧光信号来测量叶绿素含量和活性的一种方法，具有高灵敏度和高空间分辨率。
三、生物化学法1.粉末化学法粉末化学法是通过将叶绿素样品制成粉末，再用特定的溶剂提取叶绿素进行测定的方法。
这种方法操作简单，适用于对叶绿素的快速测量。
2.超声波破碎法超声波破碎法利用超声波的作用，能够快速破碎植物细胞壁，并释放出细胞内的叶绿素。
该方法操作简单、高效。
以上所述的叶绿素测量方法只是其中的几种常用方法，随着科技的不断发展，还有许多新的测量方法不断涌现。
在实际的应用中，根据需求和样品的特性选择合适的测量方法至关重要。
希望本文所介绍的叶绿素测量方法能够为相关研究和实际应用提供参考。
叶绿素测定的原理
叶绿素测定的原理叶绿素是植物中的一种绿色色素，它在光合作用中起着重要的作用。
叶绿素的测定是研究植物生理过程的重要手段之一。
本文将介绍叶绿素测定的原理及其在科学研究和实际应用中的意义。
一、叶绿素的吸收光谱叶绿素在紫外和可见光区域有较强的吸收能力，特别是在蓝光和红光区域。
叶绿素a是最主要的叶绿素成分，其吸收峰位分别在430 nm和665 nm处。
叶绿素b的吸收峰位在452 nm和642 nm处。
二、叶绿素测定的方法1. 间接法：通过测定叶绿素对光的吸收来间接确定叶绿素的含量。
常用的方法有光度法和比色法。
光度法是利用叶绿素对光的吸收特性，通过光度计测定叶绿素溶液的吸光度来计算叶绿素的含量。
该方法简单、快速，但需要纯净的叶绿素提取液和标准曲线。
比色法是将叶绿素提取液与酸性碱性溶液反应生成色彩，再通过比色计测定溶液的吸光度来计算叶绿素的含量。
该方法适用于大批量样品的快速测定。
2. 直接法：通过显微镜或荧光光谱仪直接观察和测定叶绿素的荧光特性来确定叶绿素的含量。
显微镜法是将叶片放在显微镜下观察叶绿素的颜色和形态，通过与标准颜色比较来确定叶绿素的含量。
该方法简单直观，但需要经验丰富的观察者。
荧光光谱仪法是利用叶绿素的荧光特性来测定其含量。
叶绿素在受到激发光照射后会发出荧光，荧光的强度与叶绿素的含量成正比。
荧光光谱仪可以测定叶绿素的荧光强度，从而计算叶绿素的含量。
该方法准确性高，但设备复杂，操作较为繁琐。
三、叶绿素测定的意义1. 生态学研究：叶绿素测定可以帮助科学家了解植物的光合作用状况，从而研究植物的生长状态、适应能力和生态位。
2. 农业生产：叶绿素测定可以帮助农民和农业科学家了解农作物的养分状况和生长状态，从而指导农业生产和施肥管理，提高农作物产量和品质。
3. 环境监测：叶绿素测定可以用于水体和土壤的环境监测。
水体中的叶绿素含量可以反映水体中藻类和水生植物的生长情况，从而判断水质的好坏。
土壤中的叶绿素含量可以反映土壤中有机物的分解和植物残渣的降解情况，从而指导土壤改良和农田管理。
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叶绿素含量的测定（参考李合生）
一、实验原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
二、材料、仪器设备及试剂
25ml容量瓶14个，分别标号0~6和0Y~6Y（标有Y的装子叶,带0的表示实验组）；
80%的丙酮；剪刀；手术刀；注射器；长方形硬纸盒
三、试验方法与步骤
1、叶绿素的提取
取一个实验组，从每个培养皿中取出等量个数的材料，用手术刀将根茎叶分开，再单独取叶或茎剪碎，称取叶0.1g左右，茎段0.2g左右；记录各组的质量，然后分别放入对应的容量瓶中，等到所有实验组的叶和茎都装入容量瓶后，再用注射器吸取适量80%的丙酮，加入容量瓶中，并定容至刻度线，摇匀后立即放入预先准备的纸盒中（内用报纸垫着），依次逐个加入。
等所有的都加完后，把纸盒放在暗处，提取24小时以上，备用。
2、分光光度计测定其OD值
打开分光光度计，设置470、663、646nm三个波段，测量次数设为3，间隔10s。
预热30min。
预热结束后，用80%的丙酮较零，取出遮光下的溶液，从容量瓶中直接倒到比色杯中开始测量，每组试剂测3次。
注：之前先测两个实验组，若值偏大，可适当用80%的丙酮稀释，并记录好稀释倍数四、结果计算
叶绿素a Ca=12.21*A663-2.81*A646
叶绿素b Cb=20.13*A646-5.03*A663
类胡萝卜素Cx=（1000*A470-3.27*Ca-104*Cb）/229
叶绿素色素含量=色素浓度*提取液体积*稀释倍数/样品鲜重（mg/g）
注：A663、A646、A470分别指在663、646、470nm波长下的吸光度。