致病性大肠埃希氏菌及其检验
牛肉样品中产志贺毒素大肠埃希氏菌和肠致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定
牛肉样品中产志贺毒素大肠埃希氏菌和肠致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定朱应飞，聂 翔，熊丽霞，吴学平，占忠旭，匡佩琳（江西省检验检测认证总院食品检验检测研究院，江西南昌 330000）摘 要：于2018年9月—2019年3月，每个月从超市和农贸市场中抽取20个样本，共抽取140个牛肉及制品样本，在qPCR初筛时stx阳性率为45.8%，eae的阳性率为52.2%。
每月的stx初筛阳性率分别为65%、60%、80%、5%、25%、45%和40%；eae初筛阳性率分别为70%、70%、65%、0%、40%、65%和55%。
检出携带stx基因的产类志贺毒素大肠埃希氏菌样本4份，样本阳性菌株检出率为2.9%；检出携带eae基因的肠致病性大肠埃希氏菌样本12份，样本阳性菌株检出率为8.6%。
关键词：产志贺毒素大肠埃希氏菌；肠致病性大肠埃希氏菌；分离；鉴定Isolation and Identification of Shiga Toxin Producing Escherichia coli and Enteropathogenic Escherichia coli in BeefSamplesZHU Yingfei, NIE Xiang, XIONG Lixia, WU Xueping, ZHAN Zhongxu, KUANG Peilin (Jiangxi General Institute of Testing and Certification Food Testing Institute, Nanchang 330000, China)Abstract: From September 2018 to March 2019, 20 samples were taken from supermarkets and farmers’ markets every month, with a total of 140 beef and product samples taken. the positive rate of stx was 45.8%, and the positive rate of eae was 52.2%. The monthly positive rates of stx initial screening positive rates of 65%, 60%, 80%, 5%, 25%, 45%, and 40%, respectively; The positive rates of eae initial screening were 70%, 70%, 65%, 0%, 40%, 65%, and 55%, respectively. Four Shiga toxin producing Escherichia coli samples carrying the stx gene were detected, with a positive strain detection rate of 2.9%; From September 2018 to March 2019, 12 samples of enteropathogenic Escherichia coli carrying the eae gene were detected, with a positive strain detection rate of 8.6%.Keywords: Shiga toxin producing Escherichia coli; enterogenic Escherichi coli; separation; appraisal产志贺菌毒素的大肠杆菌（Shiga Toxin Producing Escherichia coli，STEC）和肠致病性埃希氏菌（Enterogenic Escherichi coli，EPEC）是世界上最重要的食源性病原体之一。
大肠埃希氏菌生化鉴定结果
大肠埃希氏菌生化鉴定结果大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，可以引起多种感染性疾病，包括腹泻、尿路感染和食物中毒等。
鉴定大肠埃希氏菌的生化特征可以帮助确定病原菌的身份以及其潜在的耐药性和毒力因子。
本次实验目的是对一株致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，以确认其菌株的性质和特征。
首先，我们进行了气体产生实验。
在Triple Sugar Iron Agar（TSI）培养基中，观察到菌落周围发生了气体产生，此结果表明该菌株具有产气性。
产气性通常意味着大肠杆菌等需要葡萄糖产生酸，进而分解产生气体的细菌。
其次，我们进行了甲烷发酵试验。
在Methyl Red（MR）试剂中，当菌液发酵产酸时，溶液颜色由黄色变成红色。
然而，该菌株在MR试剂中没有产生红色反应，这表明它无法通过甲烷发酵产酸。
这一结果与典型的大肠杆菌不同，因为大肠杆菌通常可以通过此途径产酸。
进一步，我们进行了亮氨酸脱氨酶试验。
使用亮氨酸脱氨酶（LDC）培养基，如果菌株具有亮氨酸脱氨酶活性，菌液会变色。
然而，我们观察到该菌株在培养基中没有出现任何颜色变化，这表明它不具备亮氨酸脱氨酶活性。
亮氨酸脱氨酶活性通常是大肠杆菌的典型特征之一。
此外，我们还进行了尿素酶试验。
使用尿素平板培养基，如果菌株具有尿素酶活性，培养基颜色将由黄色变为粉红色。
然而，我们观察到该菌株在培养基上未显示出任何颜色变化。
这暗示着该菌株可能缺乏尿素酶活性，与大肠杆菌的典型特征不同。
最后，我们进行了青霉素酶试验。
使用青霉素酶试纸进行反应检测，在试纸上出现蓝色点状斑点表示菌株具有青霉素酶活性。
而对于这个菌株，我们观察到在试纸上没有出现蓝色斑点。
这意味着该菌株可能对青霉素类药物敏感，这对于抗生素选择治疗提供了重要信息。
综上所述，通过对致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，我们发现该菌株具有产气性，但与典型的大肠杆菌不同，它不表现出甲烷发酵、亮氨酸脱氨酶和尿素酶活性。
大肠埃希菌的检测
食品加工环节的监控
在食品加工过程中，大肠埃希菌检测可用 于监控生产环境的卫生状况，以及加工过 程中食品是否受到污染。通过定期检测， 可以及时发现并纠正卫生问题，确保食品 的安全性。
临床诊断领域
疑似感染的诊断
在临床诊断领域，大肠埃希菌检测主要用于 疑似感染病例的诊断。当患者表现出类似感 染的症状时，通过检测粪便、尿液等样本中 的大肠埃希菌，可以协助医生确诊是否为大 肠埃希菌感染。
企业标准
01
02
企业可以根据自身需求 和产品特性，制定适用 于自身的企业标准，对 大肠埃希菌的检测方法 和限量进行规定。这些 标准通常会高于国家和 国际标准，以确保产品 质量和消费者安全。
详细描述
03
04
05
国际标准化组织（ISO） 国内标准通常由国家卫 发布的标准是全球范围 生健康委员会或相关部 内广泛接受的大肠埃希 门制定，并强制执行， 菌检测标准，为各国制 是保障食品安全的重要 定相关标准提供了参考 措施。 依据。
抗生素敏感性测试
对于大肠埃希菌感染病例，医生通常需要根 据病菌对不同抗生素的敏感性来选择合适的 药物治疗。通过检测大肠埃希菌对不同抗生 素的敏感性，可以指导临床用药，提高治疗 效果。
环保监测领域
水质监测
在环保监测领域，大肠埃希菌检测可用于水 质监测。水中存在大肠埃希菌可能表明水体 受到污染，可能对人类健康造成威胁。通过 定期检测水源中的大肠埃希菌，可以及时发 现水质问题，并采取相应措施保护公众健康 。
免疫学检测法
总结词
利用抗原-抗体反应的快速检测方法
详细描述
通过采集患者粪便、食物、水源等样本，利用特异性抗体与大肠埃希菌抗原结 合的原理，采用免疫学技术进行检测。该方法具有快速、简便的优点，但可能 会受到交叉反应的干扰，导致假阳性或假阴性结果。
环境微生物：大肠埃希氏菌的检验
二、检验程序
检样乳糖发酵 EC-MUG培养基管培养
结果报告
紫外荧光 检验
准备工作： 1．培养基： 乳糖蛋白胨液体培养基（同大肠菌群检验） EC-MUG培养基： 胰蛋白胨20g、乳糖5g、3号胆盐或混合胆盐1.5g、磷酸氢二
钾4g、磷酸二氢钾1.5g、氯化钠5g、4－甲基伞形酮－β－D－葡萄 糖醛酸苷（MUG）0.05g，pH6.9。
根据大肠埃希氏菌（大肠杆菌）不同的生物学特性将致病性 大肠杆菌分为6类：
肠致病性大肠杆菌（EPEC） 肠产毒性大肠杆菌（ETEC） 肠侵袭性大肠杆菌（EIEC） 肠出血性大肠杆菌（EHEC） 肠黏附性大肠杆菌（EAEC） 弥散粘附性大肠杆菌(DAEC)
相对于大肠菌群、耐热大肠菌等微生物，只有大 肠埃希氏菌是粪源特异性的，是最准确和专一的粪便 污染指示菌。
大肠埃希氏菌的检验
检测原理及程序 乳糖发酵检验 伊红美蓝平板分离检验 革兰氏检验 MPN检验报告
一、关于大肠埃希氏菌
大肠埃希氏菌是指能产生β－半乳糖苷酶分解ONPG使培养基呈黄色， 能产生β－葡萄糖醛酸酶分解MUG使培养液在波长366nm紫外光下产生荧 光的细菌。
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）通常被称为大肠杆菌，是 Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常 肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一 些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其婴儿和幼畜 （禽），常引起严重腹泻和败血症。
分装试管中，115℃20min。 2．无菌玻璃器皿等用具。
操作要求： EC-MUG结果观察： 将EC-MUG培养基管在暗处用波长为
366nm紫外灯照射，有蓝色荧光的为阳性。 其它操作要求，请参考大肠菌群的检验。
《微生物与实验技术》食品中大肠埃希菌的检验实验
《微生物与实验技术》食品中大肠埃希菌的检验实验一、实验目的1.熟悉大肠埃希菌的检验原理2.熟悉大肠埃希菌检验的基本操作二、实验原理1.大肠杆菌，又叫大肠埃希氏菌是条件致病菌，在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织器官感染。
因此，检查食品中是否存在治病大肠埃希氏菌具有实际意义。
2. 在TSI琼脂中,典型菌株为斜面与底层均呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢(H2S)。
置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察,MUG阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生,MUG阴性的应无荧光产生，大肠埃希氏菌O157:H7/NM为MUG试验阴性,无荧光。
三、试剂及器材1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤：2 EC肉汤（E.coli broth）：3 蛋白胨水：4磷酸盐缓冲液：5伊红美蓝（EMB）琼脂：6 营养琼脂斜面：7结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：8革兰氏染色液：9无菌1mol/LNaOH：10无菌1mol/LHCl：四、操作方法样品的稀释1. 固体和半固体样品：称取25g样品，放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，制成1:10的样品匀液或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min制成1:10的样品匀液。
2.液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1.10的样品匀液。
3. 样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl 调节。
4 .用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL 磷酸盐缓冲液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）振摇试管或换用1支1mL无菌吸管或吸头反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。
致病性大肠埃希氏菌及其检验
5）在鲜血琼脂平板上生长，有些菌株可见β溶血环。 6）在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色菌落 7）在S．S琼脂平板上多不生长，少数生长的细菌， 也因发酵乳糖产酸而形成红色菌落； 8）在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金属光泽的菌 落 9）在麦康凯琼脂上培养24小时后孤立菌落呈红色 •
埃希氏菌在S．S琼脂平板上形成红色菌落
• 在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌 大肠埃 希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基 是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和pH指 示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变 红。（麦康基琼脂，18小时，37℃）
革兰氏阴性杆菌
革兰氏阳性杆菌
大肠杆菌扫描电镜照片
大肠杆菌透射电镜照片
大肠杆菌革兰氏染色照片
致病性大肠埃希氏菌的检验
（四）血清学试验 • 假定试验： 从平板上选菌落生长稠密处挑取培养物，用致病 性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌、产肠毒 素大肠埃希氏菌多价O血清和出血性大肠埃希氏菌 O157血清做玻片凝集试验。不凝集的培养物可做 阴性报告。当与某一种多价O血清凝集时,再与该 多价血清所包含的单价血清做实验,如与某一种单 价O血清呈现强烈的凝集反应,即为假定实验阳性. 不凝集的培养物可做阴性报告。
一、埃希氏菌属生物学特性
致病性：（2）所致疾病 • 肠外感染：泌尿系统感染最常见病原菌。还可引 起胆囊炎、肺炎、新生儿或婴儿脑膜炎。 • 腹泻：产毒素大肠杆菌是婴儿及旅游者腹泻的主 要原因；致病性大肠杆菌是婴儿腹泻的主要原因； 侵袭型大肠杆菌主要引起较大儿童和成年人腹泻。
一、埃希氏菌属生物学特性
C-枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验
• 利用枸橼酸盐生长 + • 不能利用 •
致病性大肠埃希氏菌及其检验
详细描述
水源污染事件中，致病性大肠埃希氏菌的来源可能是生活污水、农业污水或工业废水等 。这种细菌可能通过污水排放进入水源，进而污染饮用水。在发展中国家或卫生条件较 差的地区，水源污染问题尤为突出，可能导致大规模的腹泻和肠道疾病流行。因此，对
控制措施
采取合理的抗生素使用策略、加强感染防控措施、提高公众 卫生意识等手段可以有效控制致病性大肠埃希氏菌的抗药性 。
04
致病性大肠埃希氏菌的预防和治疗
预防措施
保持个人卫生
经常洗手，避免接触污染水源，避免食用不洁食物。
饮食卫生
加强食品卫生监管，避免摄入污染的食品和水。
疫苗接种
针对高风险人群，如儿童和老年人，接种针对性的疫 苗。
详细描述
食源性疾病暴发通常与食品污染有关，而致病性大肠埃希氏菌是常见的污染源之一。这种细菌可能存在于畜禽、 水产以及蔬菜等食品中，导致消费者食用后出现中毒症状。在某些情况下，致病性大肠埃希氏菌还可能产生毒素 ，如志贺毒素和肠毒素，进一步增加疾病暴发的危险性。
水源污染事件中的致病性大肠埃希氏菌
总结词
培养温度
将培养基置于37℃左右的恒温 箱中培养，在24-48小时内观 察菌落形态。
菌落形态
致病性大肠埃希氏菌在显色培 养基上形成圆形、湿润、光滑 、半透明的菌落，呈紫黑色或 绿色。
染色观察
用革兰氏染色法处理菌落，可 见致病性大肠埃希氏菌为革兰 氏阴性短杆菌。
免疫学检测技术
酶联免疫吸附试验（ELISA）
THANK YOU
感谢聆听
DNA芯片技术
将致病性大肠埃希氏菌的基因片 段固定在芯片上，用标记过的探 针进行杂交检测。
埃希氏大肠菌及检验
埃希氏大肠菌及检验一、定义：大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。
大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。
与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（此名称不易与致病性大肠杆菌相混淆），一般包括五种：即肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）和粘附性大肠杆菌（EAEC）。
文献报道还有几种，象：凝集性大肠杆菌、即产VT毒素又具有侵袭性的大肠杆菌等，但目前尚未达成统一共识。
二、生物学特性：基本形态特征：此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般大小约0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。
此菌多单独存在或成双，但不呈长链状排列。
约有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株具有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
培养特征：由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。
在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。
（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。
（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。
此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。
生化反应与血清学反应大肠杆菌属于卫生学意义的大肠菌群和粪大肠菌群的范畴，因此，必须符合大肠菌群和粪大肠菌群的有关定义，在检测大肠菌群、粪大肠菌群的基础上，可以应用I（吲哚）、M（甲基红）、Vi（3羟基-2-丁酮）、C（柠檬酸）即IMViC 生化试验对大肠杆菌作进一步鉴定，其IMViC结果为++--或-+--。
引起仔猪腹泻的致病性大肠杆菌分离及鉴定-毕业论文
---文档均为word文档，下载后可直接编辑使用亦可打印--- 摘要：烟台海阳地区某猪场新生仔猪发生了大规模的腹泻，为了判断其发病原因及病原体种类，从该养猪场采集腹泻仔猪粪便及肛门拭子48份，对粪样进行了细菌的分离纯化、革兰氏染色镜检，生化试验，PCR鉴定，血清型鉴定以及药物敏感性检测。
结果表明，致病性大肠杆菌感染导致了该猪场发生仔猪腹泻疫情。
分离到的菌株血清型为987P型，该菌株对头孢噻肟、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星敏感。
通过检测为该猪场仔猪腹泻的治疗与防控提供了依据。
关键词：仔猪腹泻；大肠杆菌；分离；鉴定Isolation and identification of E. coli from piglets with diarrhea Abstract：Yantai haiyang area mass happened a pig newborn piglets diarrhea，in order to determine the causes and kinds of pathogens，collected from the pig diarrhea piglets 48，feces and anal swabs of fecal samples for the separation and purification of bacteria，gram's staining microscopy，biochemical test，PCR identification，serotype identification and drug sensitivity test.The results showed that the pathogenic escherichia coli infection caused diarrhea in piglets in the farm.The serotype of the isolated strain was 987p，which was sensitive to cefotaxime，enoxacin，ciprofloxacin and levofloxacin.The results provided a basis for the treatment，prevention and control of diarrhea in piglets.Key words:Piglets diarrhea;E. coli;Separation;Identification引言大肠杆菌（Escherichia coli），又叫大肠埃希氏菌，属于肠杆菌科埃希氏菌属，是短杆菌，它的两端呈钝圆形，大小一致，革兰氏染色下呈现红色，为革兰氏阴性菌，一般情况下多是单一或两个存在，但不会排列成长链。
致泄大肠杆菌检验技术
致病性
一、致泄大肠埃希氏菌概况
污染途径：污染水源和土壤，进而污染食物；肉类食品乳制品；水产品等 感染途径：①肠道内感染：腹泻、食物中毒、肠热症；②肠道外感染：鼠疫（烈性
传染病）、泌尿道感染、 肺炎、脑膜炎、伤口化脓、败血症
二、致泄大肠埃希氏菌检测
检样
测大肠菌群 MPN
污染严重的 检样匀液
三、注意事项
根据以上生化试验和血清学试验结果作出报告。 （1）大肠杆菌在某些食品中的抵抗力（如含亚硝酸盐的咸食品）或对某些处理过程
的抵抗力弱于致病菌。当它与致病菌同时存在时，只有在食品受污染后要马上检验才 能保证大肠杆菌的计数结果与粪便的污染成正比例。 （2）典型的大肠杆菌IMViC试验结果为“+ + - -”或“- + - -”。该结果表示食品 已经被粪便污染，有传播肠道传染病的危险。
或
污染严重检样匀液
36±1℃， 18~24h来自鲜桃红色或微红色, 菌落中心呈深桃红 色,圆形,扁平,边缘 整齐,表面光滑,湿润
验证试验 TSI
二、致泄大肠埃希氏菌检测
或
氧化酶试验
革兰氏染色
标记氧化酶阴性、革兰氏染 色阴性杆菌可疑典型菌落
靛基质
pH7.2尿素琼脂
KCN肉汤
赖氨酸脱酸酶
动力试验
•TSI斜面产酸或不产酸,底层产酸, H2S阴性,KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌. •TSI底层不产酸或 H2S、KCN、尿素有任何一项为阳性的培养物，均非大肠埃希氏菌。
一、致泄大肠埃希氏菌概况
生物学特性 致病性大肠杆菌与非致病性大肠杆菌在形态、培养特性及生化特性上是不能区别的， 只有用血清学方法按抗原性质来区分。 血清学特性：大肠埃希氏菌的抗原构造主要由菌体抗原(O)，鞭毛抗原(H)和荚膜抗 原(K)三部分组成。 ➢ O抗原：每一血清型只含有一种O抗原，以阿拉伯数字表示。 ➢ H抗原：一种大肠埃希氏菌只有一种H抗原。一般认为与致病性无关，因此，一般 不需要进行H抗原的鉴定。 ➢ K抗原：又称包膜抗原。新分离的大肠埃希氏菌70％具有K抗原。根据耐热性可把K 抗原分为A、B、L三类，致病性大肠埃希氏菌的抗原主要为B抗原，少数为L抗原。
食品中致病性大肠埃希氏菌及检验
医学ppt
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5）、不能在氰化钾培养基上生长，靛基质 试验阳性，V-P试验阴性，不利用枸橼酸 盐。后四项生化特性是典型的大肠埃希氏 菌，与此不一致的即为非典型大肠埃希氏 菌菌。
IMViC试验：如IMViC试验为+、+、-、-， 且乳糖发酵，表明被检物已有粪便污染， 有发生肠道传染病的危险，这是卫生细菌 中常用的检测指标。（I：吲哚形成试验， M：甲基红试验，Vi：V-P试验，C：枸橼 酸盐利用试验）
一、埃希氏菌属生物学特性
▪ 培养特性 1)需氧及兼性厌氧菌 2)对营养的要求不高，在普通琼脂上就生长良好，
在15C-45℃范围内均可生长，但最适生长温度为 37℃，最适pH为7.2-7.4。 3)在普通琼脂平板上培养24小时，可形成圆形、 凸起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等大 小的菌落．其菌落与沙门氏菌比较相似，但是， 大肠杆菌菌落对光(45角折射)观察可见荧光。 4)在肉汤培养基中生长18-24小时变为均匀浑，而 后底部出现粘性沉淀物，并伴有臭味。
医学ppt
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大肠杆菌扫描电镜照片
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大肠杆菌透射电镜照片
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大肠杆菌革兰氏染色照片
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大肠杆菌平板菌落照片
医学ppt
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一、埃希氏菌属生物学特性
▪ 生化特性 1）可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇
产酸产气，有些不典型的菌株不发酵或迟 缓发酵乳糖； 2）不同菌株对蔗糖，卫矛醇、水杨苷发酵 结果不一致; 3）本菌可使赖氨酸脱鞍、不能使苯丙氨酸 脱羧。 4）不产生H2S，不液化明胶，不分解尿素;
大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂平板上的特征
医学ppt
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食品中致病性大肠埃希氏菌及检验
未来研究方向与技术发展
01
02
03
04
快速检测技术的研发
针对现有检测方法的局限性， 未来研究应致力于开发更快速 、准确的新型检测技术，如基 于分子生物学和免疫学的方法 。
提高检测的特异性
针对假阳性的问题，研究应关 注提高检测方法的特异性，降 低交叉污染对检测结果的影响 。
食品生产和销售环境的卫生管理
人员卫生
食品生产和销售人员应保 持良好的个人卫生习惯， 勤洗手、穿戴清洁的工作 服、帽、口罩等。
ห้องสมุดไป่ตู้
环境卫生
定期对食品生产和销售环 境进行清扫、消毒，保持 环境整洁卫生，防止致病 菌滋生。
设备卫生
食品生产和销售设备应定 期清洗、消毒，确保设备 的清洁卫生，防止致病菌 的滋生和传播。
特性
具有多种形态，如杆状、球状和丝状，通常为革兰氏阴性菌，无 芽孢，无鞭毛，有菌毛。
传播途径与危害
传播途径
通过食物、水、接触等途径传播 ，在污染的食物中繁殖，导致食 源性疾病。
危害
引发腹泻、呕吐、腹痛等症状， 严重时可导致脱水、电解质紊乱 、休克等严重后果。
食品中污染的来源
动物粪便
动物粪便中携带大肠埃希氏菌，污染水源和土壤， 进而污染食品。
05
结论与展望
当前存在的问题与挑战
检测方法的局限性
目前对于致病性大肠埃希氏菌的检测仍依赖于传统的培养 方法和生化鉴定，这些方法耗时长，且对于某些特殊菌株 的识别能力有限。
交叉污染与假阳性问题
在食品生产和处理过程中，致病性大肠埃希氏菌可能会与 其他细菌发生交叉污染，导致检测结果出现假阳性。
大肠埃希氏菌检验
在临床诊断领域的应用
感染性疾病的诊断
通过检测患者体内的大肠埃希氏菌，诊断是否存在感染性疾病， 如肠道感染、尿道感染等。
抗生素敏感性试验
对分离出的大肠埃希氏菌进行抗生素敏感性试验，为临床医生提 供合理用药依据。
流行病学调查
通过检测患者和环境中的大肠埃希氏菌，了解疾病的传播途径和 流行趋势，为防控措施提供依据。
01
利用特异性抗体检测样本中的大肠埃希氏菌抗原，具有灵敏度
高、特异性强、操作简便等优点。
免疫磁珠分选技术
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利用磁珠表面包被的特异性抗体捕获样本中的大肠埃希氏菌，
再通过磁力分选出阳性菌株。
免疫荧光技术
03
利用荧光标记的特异性抗体检测样本中的大肠埃希氏菌，通过
荧光显微镜观察结果。
分子生物学方法
聚合酶链式反应（PCR）
感染途径
通过食物、水或与动物的 直接接触传播。
检验的重要性
食品安全
诊断依据
大肠埃希氏菌检验是食品安全检测的重 要环节，确保食品中不存在致病性大肠 埃希氏菌，防止食物中毒事件的发生。
对于临床病例，大肠埃希氏菌的检测 可作为感染的诊断依据，指导治疗和 预防措施。
公共卫生
对于水源和环境中的大肠埃希氏菌检 测，有助于保障公共卫生和防止疾病 传播。
03
检验步骤
样本采集
采集方法
采集样本时应使用无菌操作，确 保采集工具和容器清洁无菌。采 集的样本应具有代表性，能够反
映待检测对象的真实情况。
采集部位
采集样本时应选择大肠埃希氏菌 容易滋生的部位，如粪便、尿液、
食品、水源等。
采集量
采集的样本量应足够进行后续的 检验操作，同时也要考虑到检验
大肠埃希氏菌实验室检验方法
大肠埃希氏菌实验室检验方法简介大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，它可以引起多种疾病，包括食物中毒、泌尿道感染和肠道感染等。
因此，对大肠埃希氏菌进行实验室检验是非常重要的。
本文将介绍大肠埃希氏菌实验室检验的方法和步骤。
实验室检验方法大肠埃希氏菌实验室检验主要包括以下几个方面：1.样品采集：根据不同的检验要求，可以采集不同的样品，例如食物、水样、粪便等。
采集样品时需要注意避免污染和交叉感染。
2.样品处理：对于食物和水样，通常需要进行前处理步骤，如浸泡、稀释等。
对于粪便样品，可以直接进行处理。
3.培养方法：将样品接种到适当的培养基上，培养培养基通常包括富营养的琼脂、选择性培养基等。
大肠埃希氏菌喜欢在富含葡萄糖的培养基上生长。
4.鉴定方法：通过观察菌落形态、生理生化特性和抗生素敏感性等指标，进行大肠埃希氏菌的鉴定。
常用的鉴定方法包括免疫学方法、分子生物学方法和生化试剂盒等。
5.结果判读：根据鉴定结果，判断样品中是否存在大肠埃希氏菌。
根据不同的检验要求，可以进行定性或定量判读。
实验步骤下面是一个常见的大肠埃希氏菌实验室检验的步骤示例：1.样品采集：根据检验要求，采集相应的样品。
例如，如果是食物样品，可以使用无菌取样棒在食物表面轻轻刮取一些，然后放入无菌容器中。
2.样品处理：对于食物样品，可以将其浸泡在含有缓冲液的容器中，摇动一段时间，使菌落充分分散。
对于水样，可以进行适当的稀释。
3.培养方法：将处理后的样品接种到富含葡萄糖的培养基上，如MacConkey琼脂或EC琼脂。
根据需要，可以使用选择性培养基，如Eosin MethyleneBlue琼脂。
4.培养条件：将接种的培养基置于适当的温度和湿度条件下，一般为37摄氏度，培养时间通常为24小时。
5.菌落观察：观察培养基上的菌落形态，大肠埃希氏菌通常呈现为粉红色的菌落，具有金属光泽。
6.鉴定方法：根据需要，可以进行进一步的鉴定。
大肠艾希氏菌的鉴定
大肠艾希氏菌的鉴定[资料介绍]随着季节的转暖，人们身边的细菌和病毒又开始活跃起来，各家医院和新闻媒体相继报导了多起春季由于饮食造成的腹泻，人们的饮食卫生问题又再次被提上了议程。
本人对全市的几家冻禽供应商进行了抽样检测，用血清学诊断及生化鉴定方法对产肠毒素大肠艾希氏菌进行分离和鉴定，其结果可以说明当今冻离类产品中所存在的问题。
[目录][1]gb/t4789-2021中华人民共和国国家标准食品微生物学检验[2]韩秀兰,柳连顺,杜敏,等.致泻性大肠埃希菌病原学原产研究[j].中国医学检验杂志,2001,2(4):258～261.[3]杨胜彬,胡昌军,米庆秀等.一起肠产毒性大肠埃希菌o6:lt致婴幼儿腹泻爆发的调查[j].中华流行病学杂志,2021,25(11):977.keywords:enterovirulente.coliseparatejudge1.样品来源2.检验项目3.检验方法4.评判标准5.仪器与试剂结果与分析[原文]产肠毒素大肠艾希氏菌的拆分和鉴别所须要材料与方法1.样品来源：从本市批发部、超市、另售点等12家供货单位共采取鸡翅、鸡腿、鸡胸、鸡尖、鸡爪、整鸡及鸭头、鸭掌等9个冻离类产品计20件样品。
2.检验项目：致泻性大肠艾希氏菌。
3.检验方法：3.1增菌和拆分培育：以无菌相关手续称取检验25g，加到225ml营养肉汤中，以均质器击碎1min或用乳钵提杀菌砂切碎。
抽出适度，注射乳糖胆盐培养基，以测量大肠菌群mpn，其余的迁入500ml广口瓶内，于36±1℃培育6h。
挑取1环，注射于1管30ml肠道菌增菌肉汤内，于42℃培育18h。
3.2分离：将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板；污染轻微的检样，可以将检样匀液轻易划线注射麦康凯或伊红美绿平板，于36±1℃培育18～24h，观测菌落。
不但必须特别注意乳糖蒸煮的菌落，同时也必须特别注意乳糖不蒸煮和迟缓蒸煮的菌落。
肉制品中致病菌的检测(沙门氏菌)—致病菌检测的方法
）
.基因芯片技术
• 核酸探针
（
核 酸
通过酶切质粒DNA来进行，它主要采用一定数量的限制性内 切酶，对提纯质粒的DNA酶切，分别得到不同DNA片断，用
探
于检测食品中沙门氏菌的存在
针
）
(PCR)
（ 聚 术合 酶 链 式 ）反 应 技
• 聚合酶链式反应技术(PCR)
PCR技术是一项体外酶促扩增DNA技术，具有特异性强、敏 感性高、操作简便、快速高效等特点。目前，PCR技术是一 种快速、简便、特异、灵敏检测沙门氏菌的方法。
（ 免 疫
术 ）
荧 光
抗
体
技
• 免疫荧光抗体技术
免疫荧光抗体技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的 抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗 体作为探针检测组织或细胞内的相应抗原。在组织或细胞内 形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，利用荧光显微 镜观察标本，荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光 (黄绿色或橘红色)，可以看见荧光所在的组织细胞，从而确 定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。
ELISA的原理是是把抗原或抗体预先结合在某种固相载体表面， 然后加入受检样品和酶标抗原或抗体使其与结合在固相载体 上的抗原或抗体起反应形成抗原抗体复合物，经洗涤去除反 应液中其他物质，加入酶反应底物后，底物被固相载体上的 酶催化变为有色产物，最后通过定性或定量分析有色产物即 可确定样品中待测物质含量。 该法灵敏度高、特异性强，可避免人为因素造成的假阴性， 且能在短时间内快速筛去大量的阴性样品，
）
得到微生物的绝对数量。
（
• 环介导等温扩增技术（LAMP）
环
介 导
LAMP技术的原理是针对靶基因的6 个区域按照规定的顺序设
大肠埃希氏菌的生物学特性及鉴定要点
5.鉴定流程：
标本 麦康凯平板呈粉红色菌落 氧化酶（-） 生化鉴定试验 大肠埃希氏菌
致病性大肠埃希氏菌的概述： 致病性大肠埃希氏菌分5个血清群，分别是： 产毒型大肠埃希氏菌（ETEC）、肠致病大肠埃希氏菌（EPEC）肠侵袭型大肠埃希氏菌（EIEC）,肠出血型大肠埃希氏菌（EHEC），肠凝聚性大肠埃希氏菌（EAggEC）5群。 鉴定要点：
大肠埃希氏菌的生物学特性及鉴定要点
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形态与染色： 革兰阴性杆菌 培养特性： 在血平板上35℃培养18~24小时，呈灰白色菌落，在麦康凯平板上形成不透明，粉红色或无色菌落，少数呈黏稠状菌落
生化反应： 氧化酶（-），TSI或KIA为A/A，发酵葡萄糖，乳糖，甘露等多种糖类，产酸产气，赖氨酸脱羧酶和硝酸盐还原试验阳性。
鉴别要点：
本菌特征： TSI或KIA为A/A，发酵葡萄糖，乳糖，甘露醇等多种糖类，产酸产气。常规接种：KIA，MIA管。
与痢疾志贺氏菌的鉴别： 无动力而乳糖迟发酵的菌株，易于痢疾志贺氏菌相混淆。鉴别如下：
4.3 与肺炎克雷伯菌的鉴别：
少数黏液样菌落的大肠埃希菌在麦康凯平板上易于肺炎克雷伯菌相混淆，大肠埃希菌黏液样菌漏乘深粉红色，而肺炎克雷伯菌则呈浅粉红色，无动力。
生化反应与普通大肠埃希氏菌相似。
பைடு நூலகம்
EPEC,ETEC,EIEC,EHEC主要靠血清学进行O.H诊断血清进行分型。
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大肠埃希氏菌检测标准
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，其中某些菌株可能引起食物中毒或感染。
大肠埃希氏菌的检测标准可以根据不同的应用领域和目的而有所不同。
以下是一般食品安全和公共卫生领域中常见的大肠埃希氏菌检测标准：
食品中的大肠埃希氏菌检测：
检测方法：常用的检测方法包括培养法、分子生物学方法（如PCR）和免疫学方法（如ELISA）等。
培养法是最常用的方法，通过培养食物样品中的细菌并进行鉴定和计数。
标准数量限制：食品中大肠埃希氏菌的数量通常以菌落形成单位（CFU）来表示。
不同国家和地区可能有不同的标准限制，通常要求食品样品中大肠埃希氏菌数量低于一定的阈值。
饮用水中的大肠埃希氏菌检测：
检测方法：常用的检测方法包括多管发酵法、膜过滤法和分子生物学方法等。
多管发酵法和膜过滤法通过将水样进行培养并进行鉴定和计数。
分子生物学方法可以通过检测特定的基因序列来识别大肠埃希氏菌。
标准数量限制：饮用水中大肠埃希氏菌的数量通常以菌落形成单位（CFU）或基因检测结果来表示。
不同国家和地区可能有不同的标准限制，通常要求饮用水中大肠埃希氏菌数量低于一定的阈值。
大肠埃希氏菌生化鉴定结果
大肠埃希氏菌生化鉴定结果1. 引言大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰阴性杆菌，属于肠道菌群中的一员。
它具有重要的生化特性，可以通过生化鉴定方法进行鉴定和分类。
本文将对大肠埃希氏菌的生化鉴定结果进行全面详细、完整且深入的介绍。
2. 生化鉴定方法大肠埃希氏菌的生化鉴定方法主要包括传统的碳水化合物发酵试验和生化酶试验。
2.1 碳水化合物发酵试验碳水化合物发酵试验可以通过观察菌株对不同碳水化合物的发酵能力来鉴定大肠埃希氏菌。
常用的碳水化合物发酵试验包括：•葡萄糖发酵试验：大肠埃希氏菌能够利用葡萄糖进行酸和气体的产生。
•乳糖发酵试验：大肠埃希氏菌能够利用乳糖进行酸和气体的产生。
•蔗糖发酵试验：大肠埃希氏菌能够利用蔗糖进行酸和气体的产生。
•麦芽糖发酵试验：大肠埃希氏菌不能利用麦芽糖进行发酵。
2.2 生化酶试验生化酶试验可以通过观察菌株对特定酶的产生情况来鉴定大肠埃希氏菌。
常用的生化酶试验包括：•青霉素酶试验：大肠埃希氏菌能够产生青霉素酶。
•氧化/还原酶试验：大肠埃希氏菌能够产生氧化酶和还原酶。
3. 大肠埃希氏菌生化鉴定结果根据碳水化合物发酵试验和生化酶试验的结果，可以得出大肠埃希氏菌的生化鉴定结果。
3.1 碳水化合物发酵试验结果根据菌株对不同碳水化合物的发酵能力观察，可以得出大肠埃希氏菌的碳水化合物发酵试验结果。
碳水化合物发酵情况葡萄糖阳性碳水化合物发酵情况乳糖阳性蔗糖阳性麦芽糖阴性根据以上结果，菌株对葡萄糖、乳糖和蔗糖的发酵情况均为阳性，而对麦芽糖的发酵情况为阴性，因此可以初步判断该菌株为大肠埃希氏菌。
3.2 生化酶试验结果根据菌株对特定酶的产生情况观察，可以得出大肠埃希氏菌的生化酶试验结果。
生化酶产生情况青霉素酶阳性氧化酶阳性还原酶阳性根据以上结果，菌株能够产生青霉素酶、氧化酶和还原酶，因此可以确定该菌株为大肠埃希氏菌。
4. 结论根据碳水化合物发酵试验和生化酶试验的结果，我们可以得出结论：鉴定结果表明该菌株为大肠埃希氏菌。
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5）、不能在氰化钾培养基上生长，靛基质试验阳性， V-P试验阴性，不利用枸橼酸盐。后四项生化特性 是典型的大肠埃希氏菌，与此不一致的即为非典 型大肠埃希氏菌菌。 IMViC试验：如IMViC试验 为+、+、-、-，且乳糖发酵，表明被检物已有粪 便污染，有发生肠道传染病的危险，这是卫生细 菌中常用的检测指标。（I：吲哚形成试验，M： 甲基红试验，Vi：V-P试验，C：枸橼酸盐利用试 验）
• 如仔猪黄、白痢、猪水肿病、牛腹泻和败 血症等均可由大肠杆菌引起。
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一、埃希氏菌属生物学特性
形态与染色 本属细菌为革兰氏阴性 两端钝圆、中等大小的 无芽孢杆菌，绝大多数 周生鞭毛，能运动，周 身还有菌毛，不产生荚 膜，某些菌株有荚膜。
普通大肠完整埃ppt希氏菌Escherichia Col6 i
4)在肉汤培养基中生长18-24小时变为均匀浑，而后 底部出现粘性沉淀物，并伴有臭味。
•
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5）在鲜血琼脂平板上生长，有些菌株可见β溶血环。 6）在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色菌落 7）在S．S琼脂平板上多不生长，少数生长的细菌，
也因发酵乳糖产酸而形成红色菌落； 8）在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金属光泽的菌
• 5、肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)
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3பைடு நூலகம்
• 致病性大肠埃希氏菌中，一般认为能产生耐热{ST) 和不耐热(LT)肠毒素的两种菌株均可引起人的食 物中毒。引起大肠埃希氏菌中毒的主要是一些动 物性食品，如乳与乳制品、肉类、水产品等，牛 和猪是传播这种病菌、引起中毒的主要原因。
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• 1996年7月在日本就发生了大肠杆菌0157 型引起的食物中毒，造成9017多人中毒， 10人死亡，其原因与生食萝卜苗有关，其 中92例并发出血性肠炎及出血性尿毒症。 2001年，再江苏、安徽等地爆发的肠出血 性大肠杆菌0157:H7食物中毒，造成177人 死亡，中毒人数超过2万人。
落 9）在麦康凯琼脂上培养24小时后孤立菌落呈红色
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埃希氏菌在S．S琼脂平板上形成红色菌落
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• 在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌 大肠埃 希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基 是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和pH指 示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变 红。（麦康基琼脂，18小时，37℃）
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I-吲哚（indol）试验
色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑
吲哚试剂 •
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M-甲基红（methyl red）实验 葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 葡萄糖→丙酮酸
甲基红 甲基红 +
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V-VP（Voges-Proskauer）试验 葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→二乙酰→红色化合物+
胍基化合物 葡萄糖→丙酮酸 × × 乙酰甲基甲醇
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C-枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验
• 利用枸橼酸盐生长 +
• 不能利用
-
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一、埃希氏菌属生物学特性
• 抵抗力 • 该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60
分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。 • • 在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低
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革兰氏阴性杆菌
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革兰氏阳性杆菌
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大肠杆菌扫描电镜照片
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大肠杆菌透射电镜照片
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大肠杆菌革兰氏染色照片
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大肠杆菌平板菌落照片
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一、埃希氏菌属生物学特性
• 生化特性 1）可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇产酸
致病性大肠埃希氏菌及其检验
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大肠埃希氏菌,俗称大肠杆菌,是人 类和动物肠道中正常菌群的主要 成员,每克粪便中约含109个.大肠 埃希氏菌随粪便排出后,广泛分布 于自然界.水、牛乳及其他食品一 旦检出大肠埃希氏菌，即意味着 这些物品直接或间接被粪便污染。
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• 正常情况下，大肠埃希氏菌不致病，而且还能合 成维生素B和维生素K,生产大肠菌素，对机体有利。 但当机体抵抗力下降或大肠埃希氏菌侵入肠外组 织或器官时，可作为条件致病菌而引起肠道外感 染。有些血清型可引起肠道感染。致病性大肠埃 希氏菌属主要分为五大类，首先根据发病机理分 为三大类， 1、产毒素型大肠埃希氏菌(ETEC)， 2、侵袭型大肠埃希氏菌(EIEC) 3、肠道致病性大肠埃希氏菌(EPEC) 近来又提出另外两类 4、出血性大肠埃希氏菌(EHEC)
• 内毒素:大肠杆菌细胞壁具有内毒素的活性
• 肠毒素:有两种,不耐热肠毒素(LT),成分可能是蛋 白质,加热65℃经30min即被破坏. LT与霍乱菌肠 毒素作用相似,都是刺激小肠上皮细胞的腺苷环化 酶,使ATP转变为CAMP,促进肠黏膜细胞的分泌功能, 使肠液大量分泌,引起腹泻;耐热肠毒素(ST)无免 疫性,耐热,100℃经10-20min不被破坏,也可使肠 道细胞的CAMP水平升高,引起腹泻.
一、埃希氏菌属生物学特性
• 培养特性
1)需氧及兼性厌氧菌
2)对营养的要求不高，在普通琼脂上就生长良好， 在15C-45℃范围内均可生长，但最适生长温度为 37℃，最适pH为7.2-7.4。
3)在普通琼脂平板上培养24小时，可形成圆形、凸 起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等大小 的菌落．其菌落与沙门氏菌比较相似，但是，大 肠杆菌菌落对光(45角折射)观察可见荧光。
的粪便中存活更久。对磺胺类、链霉素、氯霉素 等敏感，青霉素对它的作用弱, 易产生耐药菌株.
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一、埃希氏菌属生物学特性
致病性：（1）致病因素
• 侵袭力:大肠杆菌具有抗原和菌毛,抗原有抗吞噬 作用,有抵抗抗体和补体的作用,菌毛能帮助细菌 黏附于黏膜表面.有侵袭力的菌株可以侵犯肠道表 皮层引起炎症.
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LT与ST的比较
特性
分子量
不耐热肠毒素