紫外可见光分光光度计酶活性测定的实验流程和方法
紫外可见分光光度计操作流程
紫外可见分光光度计操作流程紫外可见分光光度计是一种常见的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本文将详细介绍紫外可见分光光度计的操作流程，以帮助读者更好地使用该仪器。
一、准备工作1. 清理仪器：确保仪器处于干净整洁的状态。
使用软布擦拭仪器外壳，尤其是光路部分，避免灰尘或污渍对测试结果的影响。
2. 打开电源：将仪器连接到电源，并确保电源稳定。
二、启动仪器1. 打开仪器软件：启动与紫外可见分光光度计配套的控制软件。
2. 点击“启动”或“连接”按钮：在软件界面中找到相应按钮，启动光度计设备。
三、进行基线校正1. 准备工作：将工作室清洁干燥，确保无杂质或污渍。
2. 开始校正：在软件界面上选择“基线校正”功能，按照系统提示进行操作。
通常需要进行双波长校正或参照物校正等步骤，确保系统在零点状态下。
四、样品测量1. 设置测试条件：选择所需的波长范围和检测模式（紫外或可见光）。
在软件界面上设置波长、时间和数据采集模式等参数。
2. 外壳和样品室：打开仪器盖，将待测样品放置在样品室中。
3. 测量样品：点击软件界面上的“开始测量”按钮，启动数据采集功能。
此时，光度计将通过光路测量样品的吸收或透射值。
4. 数据记录和保存：在测试完成后，将数据保存到电脑或其他储存设备上，以备后续分析与处理。
五、清洁与关闭1. 清洁操作：在使用完毕后，及时清洁样品室和光路，防止污染或杂质对下次测试的影响。
注意使用适当的清洁剂，并避免刮伤光路。
2. 关闭软件：保存测试数据后，关闭光度计控制软件。
3. 关闭电源：关闭仪器电源，并拔出电源插头。
六、注意事项1. 操作规范：按照仪器使用说明书进行操作，遵循正确的操作流程。
2. 样品准备：确保待测样品的准备工作符合实验要求，避免样品本身的问题对测试结果产生误差。
3. 数据分析：根据实验需要，选择合适的数据分析方法和软件进行进一步的数据处理和结果解读。
结语紫外可见分光光度计是一种重要的实验仪器，在化学和生物领域中具有广泛的应用。
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程一、仪器准备1.打开紫外可见分光光度计，等待它进行自检。
2.检查仪器是否正常，包括光源、检测器、单色器等。
如有故障，请及时修复或更换。
3.将样品室清洁干净，并检查透射池是否干净。
如有污染，请用纯水和无尘纸擦拭。
二、仪器校准1.对紫外可见分光光度计进行校准。
校准包括零点校准和波长校准。
2.零点校准：使用纯溶剂（例如纯水或纯乙醇）进行零点校准。
在选定的波长下，将溶剂放入透射池中，点击“零点校准”按钮进行校准。
3.波长校准：使用已知浓度且吸收峰位清晰的标准品进行波长校准。
在选定的波长下，将标准品放入透射池中，点击“波长校准”按钮进行校准。
三、样品测试1.取出已经准备好的样品，在样品室中放入透射池。
2.选择合适的波长范围和波长值。
根据样品的吸收峰位和浓度范围，选择一个适当的波长范围。
四、测量样品吸光度1.点击“开始”按钮进行测量。
仪器将在选定的波长下自动扫描，显示吸光度曲线。
2.观察吸光度曲线，确定样品的吸收峰位和吸光度值。
五、数据处理和结果记录1.根据吸光度曲线，确定样品的吸光度值。
可以选择峰值吸光度或在特定波长下的吸光度值。
2.如果需要，可以进行数据处理，例如计算吸光度差、构建标准曲线等。
3.记录测量结果，包括样品名称、浓度、波长范围、吸光度值等信息。
六、仪器维护1.测量完毕后，及时清洁透射池和样品室，避免样品残留。
2.关闭紫外可见分光光度计，并将仪器盖上，以防尘埃进入。
3.定期维护仪器，例如清洁光源、调整灯泡亮度等。
七、注意事项1.在操作过程中，避免直接接触光源和检测器，以免引起损坏。
2.使用纯净溶剂进行校准，避免杂质对测量结果的影响。
3.在进行波长校准时，选择已知浓度且吸收峰位清晰的标准品，以确保测量结果的准确性。
4.在清洁透射池时，使用纯净水和无尘纸进行擦拭，避免使用有机溶剂和粗糙材质。
5.操作过程中避免碰撞和震动仪器，以免影响测量结果。
6.长时间不使用时，及时关闭仪器，以延长仪器寿命。
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程
《紫外可见分光光度计操作规程》
一、工作准备
1. 开机前检查：清洁光栅、检查光源和探测器是否正常。
2. 准备标准溶液：根据实验需要准备好待测溶液和标准溶液并进行标定。
3. 准备样品：将待测溶液转移至透明的玻璃试管或石英比色皿中。
二、仪器调节
1. 打开光度计：按照仪器说明书操作，打开光度计，等待仪器预热。
2. 调节参比通道：选择适当的参比波长，并将参比通道调至零点。
3. 调节样品通道：选择待测波长，并将样品通道调至零点。
三、测量操作
1. 测量样品：将待测溶液装入样品比色皿中，放入光度计样品槽内。
2. 执行测量：按照操作说明，进行测量并记录数据。
3. 清洗仪器：测量完成后，及时清洗样品比色皿和样品槽。
四、数据处理
1. 计算浓度：根据测量数据和标定曲线，计算样品的浓度。
2. 记录结果：将浓度及测量数据记录在实验记录表中。
五、仪器关闭
1. 关闭光度计：根据操作说明，正确关闭光度计。
2. 清洁仪器：清洁光度计表面和槽口，保持仪器干净整洁。
通过以上操作规程，能够正确、准确地操作紫外可见分光光度计，为实验数据的获取和分析提供可靠的支持。
同时，也能够保护和延长仪器的使用寿命。
实验室紫外分光光度计使用说明及注意事项
实验室紫外分光光度计使用说明及注意事项一、紫外分光光度计的使用方法及注意事项1.1 准备工作我们需要准备好紫外分光光度计。
在购买时，要选择一款性能稳定、精度高的仪器。
在使用前，还需要对仪器进行校准，以确保测量结果的准确性。
我们还需要准备一些标准溶液，用于后续的实验操作。
1.2 实验操作步骤(1)打开紫外分光光度计的电源，等待仪器自检完成。
(2)根据实验需求，选择合适的波长范围。
通常情况下，我们会选择一个较小的范围，如200-400nm,以便更好地观察样品的变化。
(3)将标准溶液倒入比色皿中，然后将比色皿放入紫外分光光度计的样品室中。
注意不要让比色皿中的溶液溢出。
(4)调整仪器的参数，如增益、狭缝宽度等，以获得最佳的测量结果。
(5)等待仪器显示稳定的读数后，记录下测量值。
这个数值就是样品在该波长下的吸光度。
(6)重复上述操作，分别测量不同波长的吸光度值。
根据实验需求，计算出样品的总吸光度。
1.3 注意事项(1)在使用紫外分光光度计时，要注意保护眼睛。
因为该仪器会产生较强的紫外线辐射，长时间直接观察可能会对眼睛造成伤害。
因此，在操作过程中，要佩戴防护眼镜。
(2)在测量过程中，要确保比色皿中的溶液不会溢出。
如果发现溶液有溢出的现象，要及时停止实验，避免影响测量结果和仪器的使用寿命。
(3)在调整仪器参数时，要根据实际需求进行调整。
不同的样品可能需要不同的参数设置才能获得准确的测量结果。
因此，在操作过程中，要灵活运用各种参数设置方法，以便更好地满足实验需求。
二、紫外分光光度计的应用领域及发展前景紫外分光光度计作为一种重要的分析仪器，广泛应用于生物化学、环境监测、食品检测等领域。
随着科学技术的发展，紫外分光光度计在更多领域的应用也将得到拓展。
例如，在药物研发过程中，紫外分光光度计可以用于测定药物的吸收光谱，从而为药物的设计提供重要依据；在新材料研究中，紫外分光光度计可以帮助研究人员了解材料的电子结构和能带结构等信息。
紫外可见分光光度计实验报告
紫外可见分光光度计实验报告实验目的：1.学习操作紫外可见分光光度计，并了解其原理和使用方法。
2.通过测量不同溶液的吸光度，了解溶液的浓度与吸光度之间的关系。
3.掌握分光光度计的标定方法。
实验原理：紫外可见分光光度计是一种常用的光谱仪器，可用于测定溶液吸光度。
其原理是通过将入射光分光为不同波长的光束，经过被测溶液后，测量出透射光强度与入射光强度的比值，即吸光度。
吸光度与溶液浓度之间通常存在一定的线性关系。
实验步骤：1.打开紫外可见分光光度计的电源，待仪器启动后进行预热。
2.调节光电倍增管的位置，使得入射光线居中。
3.根据实验要求选择合适的波长范围和检测波长。
4.调节样品舱盖，将待测样品放入样品舱内。
5.按下“调零”按钮，将吸光度调零。
6.按下“测量”按钮，记录下测量的吸光度数值。
7.将待测样品取出，用试剂喷洒清洗样品舱。
8.重复步骤4-7，测量其他样品的吸光度。
实验结果与讨论：1.测量了一系列浓度不同的对苯二酚溶液的吸光度，并绘制了吸光度与浓度之间的曲线。
通过拟合可以得到该溶液的吸光度与浓度的线性关系，这为后续测量其他溶液的浓度提供了基础。
2.在测量过程中，注意避免样品舱残留上一次测量的溶液，以免影响测量结果。
3.在选择波长时，应根据被测样品的特性和需要，选择合适的波长范围和检测波长，以提高测量精度。
实验体会：通过这次实验，我初步掌握了紫外可见分光光度计的使用方法和原理，了解了溶液浓度与吸光度之间的关系。
实验中需要注意操作的细节，如样品舱的清洗、选择合适的波长等。
在实验过程中，我也遇到了一些问题，但在指导老师的帮助下，逐渐解决了这些问题。
总的来说，这次实验对我深化了对光谱仪器的理解，并提高了我的实验操作能力。
紫外可见分光光度计的操作步骤
紫外可见分光光度计的操作步骤紫外可见分光光度计操作步骤紫外可见分光光度计是一种常用的实验仪器，常用于测量溶液的吸光度和透过率。
下面将介绍紫外可见分光光度计的操作步骤，帮助读者了解如何正确地使用该仪器。
1. 准备工作在开始使用紫外可见分光光度计之前，需要进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否正常运行，包括电源、灯泡和检测器等。
确保仪器处于正确的工作状态。
其次，准备好所需的样品溶液，并将其放置在透明的玻璃或石英容器中，以避免对测量结果的影响。
最后，检查擦拭仪器的可见光波长校准标准溶液，并确保其符合标准要求。
2. 打开仪器并调整参数将仪器接通电源并打开开关。
在仪器界面上选择所需的波长，可以通过键盘或旋钮来输入目标波长。
根据样品的特点和需要测量的光谱范围，选择起始波长和终止波长，并设置扫描速度。
一般情况下，快速扫描适用于样品溶液透过率的快速测量，而慢速扫描适用于吸光度的测量。
3. 校正零点在进行样品测量之前，需要对仪器进行零点校准。
校准零点是为了消除仪器的内部误差，确保测量结果的准确性和可靠性。
校正零点的方法是切换至“T”模式，即透过率模式，并将空白试剂（如纯溶剂或去离子水）放入光池中进行测量。
记录下校正后的透过率值。
4. 测量样品溶液吸光度将样品容器放入光池中，并选择“Absorbance”模式。
确保样品溶液充满光池，避免气泡的存在。
开始测量后，仪器将自动测量样品的吸光度，并显示在仪器界面上。
记录下测量值，可以根据需要保存或导出数据。
5. 数据处理与分析获取吸光度数据后，可以进行相应的数据处理与分析。
比如，可以计算样品溶液的浓度、绘制吸光度曲线等。
根据实验需求，选择不同的数据处理方法，并使用相应的软件进行分析。
确保选择合适的数据处理方法和参数，以获得准确的结果。
6. 关闭仪器在使用完毕后，需要正确地关闭紫外可见分光光度计。
首先，将波长设定为较高的数值，以避免损坏检测器。
然后，关闭仪器的电源开关，将仪器断电。
紫外可见分光光度计操作流程及注意事项
紫外可见分光光度计操作流程及注意事项下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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紫外可见分光光度计的操作规程
紫外可见分光光度计的操作规程一、仪器及试剂准备1.确保仪器所在的工作台或使用环境整洁干净，确保工作台上无烟灰、灰尘等对结果产生干扰的物质。
2.检查仪器各个部分的连接是否牢固，仪器表面是否有损坏或污损情况。
3.检查紫外可见分光光度计所需的试剂是否充足，试剂是否过期。
二、做样品前的准备1.根据实验要求，选取适当的溶剂，将待测试样品溶解或稀释至适当浓度。
如果有特殊要求，还需要进行滤液作业。
2.确保样品容器干净，没有异物或杂质。
三、仪器开机及预热1.确认紫外可见分光光度计与电源连接正常，开启电源开关。
2.打开仪器电源后，等待其自检完成，确保各个部分的功能正常。
3.操作前预热，大多数仪器需要预热一段时间，以确保仪器能够达到工作温度，并保持稳定。
四、波长设置及基线调整1.根据实验要求，在键盘上设置所需的波长。
2.将试剂添加至样品池中，调节“调零”钮，使仪器显示为零吸光度。
五、样品测定1.将校准好的样品注入样品池中，确保样品池干净、无气泡。
2.调整仪器使其显示所需波长，并进行基线调整。
3.测量前，用空白试剂进行零点矫正，将试剂加入样品池中，点击“零位调整”按钮。
4.加入待测试样品后，点击“测量”按钮，以获取样品的吸光度值。
5.如需多次测量，应按要求将样品室清洗干净，然后重复上述步骤。
六、数据处理1.根据实验要求，对所得的吸光度数据进行计算，如浓度计算等。
2.准确记录实验所得数据，包括吸光度值、浓度等。
七、仪器关闭及清洁1.测量结束后，关闭仪器电源开关。
2.清除样品池中的试剂，用洁净的纸巾或棉签擦拭样品池。
3.用干净的棉布或纸巾清洁仪器表面，以确保仪器干净整洁。
4.如有需要，关闭其他仪器配件，如电源、冷光源等。
八、故障排除总结：紫外可见分光光度计的操作规程包括仪器及试剂准备、做样品前的准备、仪器开机及预热、波长设置及基线调整、样品测定、数据处理、仪器关闭及清洁和故障排除等步骤。
在操作过程中需要注意仪器的正确使用和维护，以确保实验的准确性和仪器的正常运行。
紫外可见分光光度计检测步骤说明书
紫外可见分光光度计检测步骤说明书1. 引言紫外可见分光光度计是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、制药、生物科学等领域。
本文将详细介绍紫外可见分光光度计的检测步骤，以帮助操作人员正确运用该仪器。
2. 仪器准备在进行实验前，需要确保紫外可见分光光度计的仪器参数设置正确，并准备好合适的实验样品和标准溶液。
同时，确保工作区域整洁，并检查仪器是否有损坏或污染。
3. 校准操作使用紫外可见分光光度计前，应首先进行校准操作，以保证结果的准确性。
校准步骤如下：a. 使用空白溶剂进行空白校准。
将适量的纯溶剂（例如去离子水或甲醇）置于参比池中，调节光程至最小，记录空白吸光度值。
b. 使用标准溶液校准。
选择合适的标准溶液，按照厂家提供的说明进行测量和校准。
记录标准溶液的吸光度值，并与厂家提供的数值进行比对。
4. 样品处理在进行实验样品测量前，需要进行样品处理。
通常包括样品的稀释、过滤、预处理等步骤。
样品处理的目的是提高测量的准确性和可重复性。
5. 测量操作测量操作是紫外可见分光光度计的核心步骤。
按照以下步骤进行测量：a. 将处理好的样品放入测试池中，并确保样品与光束垂直。
b. 调节光程，使得样品的吸光度处于合适的范围内。
c. 选择合适的波长进行测量，并记录吸光度值。
d. 如需测量多个波长，重复步骤c。
6. 数据分析测量完成后，需要对测得的数据进行分析。
根据实验的目的和要求，可以进行数据处理、曲线拟合、结果计算等操作。
使用适当的软件工具能够方便进行数据处理和分析。
7. 清洗与维护实验完成后，及时对紫外可见分光光度计进行清洗和维护。
清洗仪器的步骤包括将测试池和光程进行清洗，以及清除仪器表面的污染物。
维护仪器的方法包括定期更换灯泡、校正仪器等。
8. 结论本文对紫外可见分光光度计的检测步骤进行了详细说明，包括仪器准备、校准操作、样品处理、测量操作、数据分析以及清洗与维护等。
正确的操作步骤能够保证实验结果的准确性和可靠性，同时延长仪器的使用寿命。
紫外可见分光光度计的操作流程
紫外可见分光光度计的操作流程分光光度计是一种常用的实验仪器，用于测量物质在紫外和可见光波长范围内的吸光度。
本文将介绍紫外可见分光光度计的操作流程，帮助读者正确使用该仪器并获取准确的实验结果。
一、准备工作1. 检查仪器：确认仪器处于正常工作状态，检查光源、进光口、检测器等部件是否完好。
2. 打开仪器：按照仪器操作手册的要求打开仪器的电源。
3. 清洁仪器：使用干净的软布擦拭光路和样品室，确保没有灰尘或残留物干扰实验结果。
二、设置实验条件1. 选择波长范围：根据待测物质的吸光度最大值确定所需的波长范围，调整分光光度计的选择器或操作软件来选择合适的波长范围。
2. 预热光源：根据仪器要求，预热光源一定时间以确保稳定的光输出。
3. 调节光强：使用仪器提供的光强调节功能，确保光强适中，不过强或过弱都会影响测量结果的准确性。
三、校准仪器1. 零点校准：使用空白试样（不含待测物质）进行零点校准。
将样品室清洁干净，并按照仪器要求执行零点校准操作。
2. 波长校准：使用已知吸光度的标准试样进行波长校准。
将标准试样放入样品室，选择标准试样的波长，并进行波长校准操作。
四、测量样品1. 准备样品：根据实验要求准备待测样品，并将其转移到合适的样品容器中。
2. 样品处理：根据待测样品的特性，可能需要进行一些样品处理操作，如稀释、溶解等。
确保样品处理的方法与实验要求一致。
3. 放置样品：将经过处理的样品放入分光光度计的样品室中，并将样品室盖好以避免光干扰。
4. 开始测量：在仪器软件或控制面板上选择所需的测量模式（如吸光度、透射率等），并点击开始测量按钮。
五、记录结果1. 测量数据：仪器会显示出测量得到的吸光度或透射率数值，记录这些数据以备后续分析和处理。
2. 图谱分析：根据需要，可以选择画出光谱曲线图谱进行更详细的分析。
仪器软件通常提供这个功能，可以将光谱图保存为图片或输出为打印文件。
六、清理仪器1. 关闭仪器：按照仪器操作手册的要求关闭仪器的电源。
紫外可见分光光度计操作步骤
紫外可见分光光度计操作步骤分光光度计是一种用于测量样品溶液中吸光度的仪器。
在化学、生物、药学等领域中应用广泛。
紫外可见分光光度计是其中一种常见的类型，用于测量紫外和可见光区域的吸光度。
以下是紫外可见分光光度计的操作步骤：1. 准备工作：在进行实验前，确保工作区域整洁，并确保仪器处于正确的工作状态。
检查光源、光栅、样品室和检测器等部件，确保它们正常工作并干净。
2. 样品的制备：根据实验要求，准备待测样品的溶液。
确保溶液浓度适宜，并考虑到样品的化学性质。
3. 仪器的开机：打开紫外可见分光光度计的电源开关，并等待一段时间，让仪器预热。
根据仪器型号的不同，可能需要预热几分钟或更长时间。
4. 波长的选择：根据实验需求，选择适当的波长范围。
通过调节光栅或使用仪器上的转盘，选择所需的波长。
5. 参比校准：进行参比校准以确保仪器的准确性和稳定性。
使用空白试剂或者校准溶液进行基准校准，将吸光度调整为零。
6. 目标样品测量：用吸光度盅或石英池装载样品，并将其放入样品室。
关闭样品室的盖子，确保良好的密封性。
获得准确的吸光度读数，注意记录所测得的吸光度值。
7. 重复测量和平均值：为了确保结果的准确性，可以进行多次重复测量，并计算平均值。
8. 数据处理：根据实验要求，对测得的吸光度数据进行相应的数据处理。
可以绘制曲线图、计算浓度或者比较不同样品之间的吸光度差异。
9. 关机：测量完成后，关闭仪器的电源开关，并进行必要的清理工作。
清除样品室和其他部件上可能残留的溶液或污染物。
紫外可见分光光度计的操作步骤可以根据实验需求的不同而有所变化。
以上步骤只是一个基本的操作指南，大致展示了使用分光光度计的一般流程。
在具体操作中，根据实验要求和仪器的使用说明进行操作，以确保实验的准确性和可靠性。
紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性
紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性一、本文概述本文旨在探讨紫外分光光度法在测定土壤过氧化氢酶活性中的应用。
过氧化氢酶是一种重要的土壤酶，其在土壤生物化学过程中起着至关重要的作用，如有机物的分解、营养元素的转化和循环等。
因此，准确测定土壤过氧化氢酶活性对于理解土壤生物地球化学过程、评估土壤健康状况以及指导农业生产具有重要意义。
紫外分光光度法作为一种常用的生物化学分析方法，具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点，在土壤酶活性测定中得到了广泛应用。
本文将详细介绍紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性的原理、步骤、注意事项以及可能的影响因素，以期为相关领域的研究人员提供有益的参考和借鉴。
本文还将对紫外分光光度法在土壤酶活性测定中的优势和局限性进行讨论，以期推动该方法的不断完善和优化。
二、材料与方法1 土壤样品：采集自不同环境条件下的土壤样品，包括农田、森林、草地等。
采集后，将土壤样品风干、研磨，并通过2mm筛网筛选，备用。
2 试剂：过氧化氢（H2O2）、磷酸盐缓冲液、硫酸钛溶液、浓硫酸等。
所有试剂均为分析纯，购自正规化学试剂供应商。
3 仪器：紫外可见分光光度计、离心机、电子天平、恒温水浴锅、研钵、筛网等。
1 土壤过氧化氢酶活性的提取：取适量土壤样品，加入磷酸盐缓冲液，充分摇匀后，在恒温水浴锅中恒温振荡提取一定时间。
提取结束后，将提取液离心，取上清液作为测定过氧化氢酶活性的待测液。
2 紫外分光光度法测定过氧化氢酶活性：取一定量待测液，加入一定量的过氧化氢溶液，充分摇匀后，在恒温条件下反应一定时间。
反应结束后，加入硫酸钛溶液终止反应，并生成有色络合物。
在紫外可见分光光度计上，以波长415nm测定吸光度值。
3 数据处理：以过氧化氢溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
根据待测液的吸光度值，从标准曲线上查得对应的过氧化氢浓度，从而计算出土壤过氧化氢酶活性。
4 实验设计与数据分析：设置不同环境条件下的土壤样品为实验组和对照组，每组至少3个重复。
紫外可见分光光度计使用方法
紫外可见分光光度计使用方法1. 简介紫外可见分光光度计是一种常用的实验仪器，用于测量物质溶液中不同波长光线的吸光度。
它能够提供关于样品的溶解程度、浓度、反应速率等信息，广泛应用于化学、环境、生物、药学等领域的研究和分析中。
2. 前期准备在使用紫外可见分光光度计之前，需要进行一些前期的准备工作：2.1 校准光度计使用专门的标准溶液校准光度计，确保仪器的准确性和稳定性。
校准过程可以参照光度计的使用手册进行操作。
2.2 准备样品准备待测物质的样品溶液，确保样品溶液的浓度适当，并且没有杂质和颗粒。
避免空气中的湿气进入样品中，以免影响测量结果。
3. 仪器的基本操作步骤3.1 打开光度计按下光度计的电源开关，等待一段时间，直到仪器完全启动并进入工作状态。
3.2 设置检测波长通过仪器上的波长选择器，选择所需的检测波长。
不同的分析物质对应的吸光度峰值波长不同，根据实验需要选取合适的波长。
3.3 调整光程根据样品的特点和要求，调整光程，即样品光束通过池的长度。
一般情况下，常用的光程为1cm。
3.4 测量空白样品在空白计用池中注入无待测物质的溶液，将空白样品放入光度计，记下显示的吸光度值。
这样可以消除仪器本身的误差。
3.5 测量待测样品将待测物质的溶液注入样品计池中，将样品计池放入光度计，记录下显示的吸光度值。
同时，应注意避免样品受到阳光或强光的直接照射，以防止光照影响测量结果。
4. 测量数据处理方法4.1 计算吸光度将测量得到的吸光度值减去空白样品的吸光度值，得到样品的吸光度值。
通常，吸光度值是采取A值表示。
4.2 绘制吸光度-浓度曲线根据已知溶液的浓度和对应的吸光度值，绘制吸光度-浓度曲线。
根据该曲线，可以通过测量样品的吸光度值推测出样品的浓度。
4.3 计算样品的浓度根据吸光度-浓度曲线，通过样品的吸光度值，找到对应的浓度，从而计算出样品的浓度。
这一步适用于未知浓度的样品。
4.4 数据分析和结果解读根据实验结果，进行数据分析和结果解读。
紫外可见分光光度计的操作步骤
紫外可见分光光度计的操作步骤
1. 准备样品：将待测样品按照所需要的浓度调配好，并将样品转移到光学比色皿中。
2. 打开仪器：将紫外可见分光光度计接通电源，打开电源开关，并将仪器预热至所需温度。
3. 程序设置：选择所需波长和光程长度，并设置程序参数，确定实验条件。
4. 校准仪器：进行零点校准和基线校准，使仪器精确度更高。
若仪器已进行过校准，则此步骤可以省略。
5. 放置样品：将光学比色皿放置于样品仓中，确保样品表面水平和平整，并注意放置方向。
6. 读取数据：按照程序设置的参数，进行数据读取和处理，例如计算吸光度和浓度等信息。
7. 结束实验：读取完数据后，关闭光源和仪器电源，清洗仪器及其配件，并妥善保管。
注意事项：
1. 操作前要仔细阅读仪器说明书，了解其性能和特点。
2. 操作仪器时应当穿戴实验衣、手套等防护装备，以免对人体造成伤害。
3. 在进行实验时，应当保持实验室干净整洁，稍有污染的样品应重新调制。
4. 在使用仪器之前，要对其进行检查，确保其功能完好。
若出现问题，应及时维修更换。
紫外可见分光光度计的操作和使用
紫外可见分光光度计是一种广泛应用于化学、生物、药物等领域的实验仪器，它可以用来测量样品对紫外和可见光的吸收情况，从而得到样品的吸光度和浓度等重要参数。
在科研实验室和生产现场中，紫外可见分光光度计的操作和使用技巧非常重要，正确的操作可以确保实验结果的准确性和可靠性。
下面将介绍紫外可见分光光度计的操作和使用方法：一、准备工作1.1 样品的制备：首先要准备好需要测量的样品，确保样品的制备符合实验要求，并且样品溶液的浓度和透明度在光度计测量范围内。
1.2 仪器的准备：打开紫外可见分光光度计的电源，将仪器预热至稳定的工作温度，同时检查仪器的灯泡和光栅等部件是否正常。
二、测量操作2.1 校准仪器：在进行测量之前，必须对仪器进行校准，保证测量结果的准确性。
2.2 装样品：将样品溶液分别加入光度计的比色皿或石英比色皿中，注意不要留下气泡或杂质。
2.3 设定参数：根据样品的特性和测量要求，设定光度计的波长、光程和测量范围等参数。
2.4 测量数据：开始测量之后，观察样品的吸光度变化曲线，并记录下稳定的吸光度数值。
三、数据处理3.1 计算浓度：根据测得的吸光度数值，使用比色法或标样法计算出样品的浓度。
3.2 分析结果：根据测得的数据，分析样品的吸收特性和浓度变化规律，得出实验结论。
四、仪器维护4.1 清洁保养：每次使用完毕后，要及时清洁光度计的仪器和光学部件，确保仪器的稳定性和精度。
4.2 故障排除：如果在使用过程中发现仪器出现故障或异常，及时进行故障排除和维修处理。
五、注意事项5.1 防止污染：在操作过程中要注意避免样品污染或交叉污染，确保测量结果的准确性。
5.2 安全操作：使用化学药品和致癌物质时，要做好个人防护，避免对身体造成伤害。
通过以上对紫外可见分光光度计的操作和使用方法的介绍，相信大家对这一实验仪器有了更加深入的了解。
正确的操作和使用方法可以帮助科研人员和实验人员获得准确可靠的实验数据，为科学研究和生产实践提供有力支持。
紫外可见光分光光度计酶活性测定的实验流程和方法
2
文献参考
3A
4
图 4：“单波长λ- 连续”（Singleλ- cont） 方法中己糖激酶测定初步 实验的参数设置
3B
为 测 试 己 糖 激 酶 反 应 的 进 程，先 使 用 “单 波 长λ- 连 续”
（Singleλ- cont）方法进行初步反应。选择的参数可以对反
应混合液的吸光度在一定持续时间内（10 分钟）的变化进
再加入葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶和己糖激酶，充分混匀溶液， 分别在 22 °C、30 °C 和 37 °C 进行测定。
通过己糖激酶测试测定底物 为测定底物，使用与己糖激酶活性检测相同的成分。为测定 样品中未知浓度的 ATP，使用 1 mM 和 0.1 mM 的 ATP 作 为标准品。
BioSpectrometer kinetic 的设置 BioSpectrometer kinetic 紫外 ／ 可见光分光光度计（动力学款） 提供三种方法测定酶的活性（图 3）：
图 2 中描述的检测反应是本用户指南中的一个样例反应。 其目的是为了演示使用 Eppendorf BioSpectrometer kinetic 紫外 ／ 可见光分光光度计（动力学款）进行酶动力学测定的 两种应用：
1) ATP 浓度的酶测定 底物的浓度通过 37 ° C 下定量 ATP 的两点校准法来确定。 这一过程中，在底物转化的线性范围内进行两次测定。该转 化的线性范围需在初步测定中确定。 2) 酶活性的测定 如图 2 所示，己糖激酶反应对温度的依赖性。在 Eppendorf BioSpectrometer kinetic 紫外 ／ 可见光分光光度计（动力学 款）具备可加热比色皿槽，可以对样品进行温度控制：可选 温度范围在 20 °C 到 42 °C 之间。由于酶活性与孵育温度相关， 所以温度调节对于酶活性的精确测定至关重要。因此，分别 在 22 ° C、30 ° C 以及 37 ° C 下测定己糖激酶的酶活性。根 据曲线的线性回归确定准确的酶活性。
紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介
紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。
所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。
每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。
但是，如果检测到任何异常，初始化过程将立即中止，星标也不会加亮显示。
1.2屏幕显示和触摸键盘UV-1700的触摸键盘图可用数字键0~9和功能键F1~F4选择不同屏幕中的模式和设置。
选择时，按下相应的数字键或功能键即可，无需按ENTER键确认。
此外，输入数值时，如波长设置或显示模式等，必须按ENTER键确认输入值。
下面介绍每个键的基本功能，在不同屏幕下有一些键可能被赋予特殊的功能。
①START/STOP键一旦参数设置完成，可用该键开始和停止测量过程。
②AUTO ZERO键按该键，当前波长的吸光度自动调整为0（100%T）。
测量前，必须确保在样品侧和参比侧中都放有盛有空白的比色池。
③GOTOWL键该键可用来改变当前的波长。
④ENTER键输入数值后，按该键确认。
⑤Cursor光标键（＜（-），＞）这组键可控制液晶显示屏幕中光标的左右移动。
输入数值时，左光标键还可以用来输入负值（-）。
⑥Function功能键（F1~F4）这组键的功能与液晶显示屏幕下方所显示的功能相对应。
⑦RETURN键按下该键可返回当前屏幕的前一屏。
⑧MODE键用该键可从每种测量模式的参数设置屏返回到主模式屏。
⑨Print打印键用该键可输出当前屏幕显示的硬拷贝。
⑩Numeric数字键用该键可输入数值？CE键用该键可清除数值输入错误。
按该键，已输入的数值将被清除，可重新输入正确的数值。
模式选择和共享操作初始化完成后即显示模式选择屏幕各种模式概述：在模式选择屏幕下选择各种测量模式，即显示各自的参数配置屏幕。
试述紫外、可见分光光度计检验步骤
试述紫外、可见分光光度计检验步骤
分光光度计是测定溶液、气体或固体中化合物的吸收光谱的一种重要仪器。
在实验室中，紫外可见分光光度计被广泛应用于生化、医学、环境和工业等领域的分析与检测。
紫外、可见分光光度计检验步骤如下：
1.准备试样
按照样品的特性和实验要求，选择适当的样品，定量称取约1.0g 放入1L量瓶中，并用去离子水定容至刻度，摇匀后得到试样液。
如若是溶液，可直接取适量溶液。
2.调节分光光度计
打开分光光度计电源，之后进行初始校准，然后根据要测定的波长范围和样品特性调节仪器功能，选择正确的光栅和检测器，并设置合适的波长、带宽、积分时间等参数。
3.进行基线校准
将样品槽清洗干净，并将去离子水倒入样品槽中，调整仪器至零位位置，进行基线校准。
4.测定样品吸收光谱
将试样液注入样品槽中，放入仪器中进行测量，记录各波长下溶液密度与吸光度的值，得到样品的吸收光谱。
5.数据处理及分析
根据实验记录的数据，可以计算出样品的浓度和纯度，在此基础上进行数据处理及统计分析。
对于一些需要进一步分析的复合体系，可采用相关分析和主成分分析等方法进行数据处理。
6.清洗分光光度计
清洗分光光度计及样品槽，保持仪器干净、整洁及功能正常。
需要注意的是，在进行分光光度计检验时，应注意标准操作流程，遵守实验室安全规范，严格控制实验条件和操作环境，以获得准确、可重复的实验结果。
紫外分光光度法测蛋白酶酶活[详解]
![紫外分光光度法测蛋白酶酶活[详解]](https://img.taocdn.com/s3/m/f0f89073f4335a8102d276a20029bd64783e62bd.png)
紫外分光光度法测蛋白酶酶活1、原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪素沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定。
根据吸光度计算其酶活力。
酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。
2、试剂和溶液2.1 三氯乙酸c（CCL3·COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。
2.2 氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L按GB601配制。
2.3 盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HＣＬ:取90mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
0.1 mol/L HＣＬ：取9mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
2.4 缓冲溶液a、磷酸缓冲液（pH＝7.5）适用于中性蛋白酶称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4·12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。
b、乳酸缓冲液（pH＝3.0）适用于酸性蛋白酶甲液称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取乳酸钠（70％）16g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液8 mL，加乙液1 mL，混匀，稀释一倍，即成0.05moi/L乳酸缓冲溶液。
c、硼酸缓冲溶液（pH＝10.5）适用于碱性蛋白酶甲液称取硼酸钠（硼砂）19.08g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取氢氧化钠4.0g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液500 mL、乙液400 mL混匀，用水稀释至1000mL。
上述各种缓冲溶液，均须用pH计校正。
2.5 10g/L酪素溶液称取酪素1.000g，精确至0.001g，用少量0.5mol/L氢氧化钠溶液（若酸性蛋白酶则用浓乳酸2～3滴）湿润后，加入适量的各种适宜pH的缓冲溶液约80 mL，在沸水浴中边加热边搅拌，直到完全溶解，冷却后，转入100 mL容量瓶中，用适宜的ｐH缓冲溶液稀释至刻度。
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在 BioSpectrometer kinetic 上进行线性回归分析以测定酶活 只在在曲线线性范围内的酶活性进行分析，因为只有在线性 范围内才可以排除诸如底物浓度降低或来自最终产物的抑制 作 用 等 类 似 抑 制 因 素。Eppendorf BioSpectrometer kinetic 紫外 ／ 可见光分光光度计（动力学款）反向将回归曲线变为 线性曲线，并提供在活性检测时使用线性回归加以分析。在 测定过程结束后，激活 “处理结果”（Process results）区 里的 “线性回归”（Linear regression）功能。这样，就可以 重新设定回归曲线的起点和终点（图 6）。
为了进行测定，使用源自面包酵母的己糖激酶和葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶进行偶联反应。由于 Eppendorf BioSpectrometer kinetic 紫外 ／ 可见光分光光度计（动力学款）带有温控比色皿槽，也可演示这一反应对温度的依赖性。在 37 °C 时，检测到最高活性。
引言
己糖激酶反应的代谢意义
3C
迟”（Delay））加入己糖激酶开始的，总共检测时间为 6 分钟。
实验参数是根据初步实验使用 “单波长λ- 连续”（Singleλ-
continuous）（见上）设定的。以下公式分别用于计算酶活
性和底物浓度：
图 3：活性测定选项 A) 单波长λ- 连续 B) 简单动力学 C) 高级动力学 （Singleλ- continuous） （Simple kinteics） （Advanced kinetics）
1
文献参考
酶活性测定不但可以确定酶的性质，还可以用来分别检测某 些底物或底物的浓度。如可以使用以上提到的己糖激酶反应 测定葡萄糖或 ATP 的浓度。通过与葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶 在偶联反应中生成 NADPH2 可间接检测葡萄糖或 ATP。生 成 ATP 的量与葡萄糖或 ATP 的量成正比（图 2）。
葡萄糖 + ATP
己糖激酶 / Mg 2+
葡萄糖-6-磷酸 + ATP
葡萄糖－６－磷酸脱氢酶
葡萄糖-6-磷酸 + NADP
6-磷酸葡萄糖 + NADPH2
图 2：葡萄糖或 ATP 的间接酶检测 两种物质可以通过己糖激酶和葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶催化的偶联反 应得以确定（偶联测试系统 [1]）。通过生成的 NADPH2 的量来计算 两种物质的量。
Tris 缓冲液 pH 7.0 MgCl2 葡萄糖 NADP+ ATP 己糖激酶 葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶
以上溶液均使用分子生物学用水进行制备，并在 Eppendorf IsoPack 冰盒中以 4 °C 保存。Tris 缓冲液在室温下保存。酶 在使用后立即放回冰箱。
以下是用于一次测定反应所需溶液的量：
2
文献参考
3A
4
图 4：“单波长λ- 连续”（Singleλ- cont） 方法中己糖激酶测定初步 实验的参数设置
3B
为 测 试 己 糖 激 酶 反 应 的 进 程，先 使 用 “单 波 长λ- 连 续”
（Singleλ- cont）方法进行初步反应。选择的参数可以对反
应混合液的吸光度在一定持续时间内（10 分钟）的变化进
糖酵解 几乎所有生物新陈代谢的一个中间环节就是葡萄糖分别在细 胞的细胞液或细胞质内进行的酶促降解。这一过程叫做糖酵 解。葡萄糖通过分步反应转化为 2 分子的丙酮酸。1 分子的 葡萄糖生成 2 分子的 ATP 和 2 分子以 NADPH2 形式存在的 氧化还原产物。然后，丙酮酸进入初步代谢途径，即丙酮酸 循环，进一步生成呼吸链的还原产物，最终转化为氧。最终 的降解产物是 H2O 和 CO2。
5
µl MgCl2
5 µl NADP
5 µl 葡萄糖
12.5 µl ATP
121.5 µl Tris 缓冲液
0.5 µl 葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶
∑= 149.5 µl
使用移液器快速将溶液转移到比色皿槽的超微量比色皿中。 为适应反应温度，测定参数包括预孵育时间，时间至少为 6 分钟。 开始测定时，记录在 340nm 时的吸光度值变化。当检测不到 吸光度的进一步变化时，加入 0.5 µl 的己糖激酶溶液开始酶 促反应（约 1 分钟后）。
a) “单波长λ- 连续”（Singleλ- cont） ：限定波长、限定 时间间隔以及限定一段时间内简单测定吸光度值的变化。温 度控制功能可选。该方法特别适用于初步实验，即某反应的 动力学检测（速度、线性范围）。 b) “简单动力学”（Simple kinteics） ：和 a) 一样；另外可 以定义直接换算吸光度值的单位和换算系数。可以进行终点 测定、两点测定以及线性回归分析。“延迟”（Delay）功能 可对延迟检测过程进行编程，以确保反应混合液充分适应实 际测定温度等。 c) “高级动力学”（Advanced kinetics） ：和 b) 一样；另外 提供 “试剂空白对照”（Reagent blank）编程以及标准品编程。 “试剂空白对照”（Reagent blank）可以验证在反应开始前 没有显著的吸光度值变化。
行跟踪。由于反应速度在酶测定时可能会快速变化，所以
每 10 秒（图 4）收集一次数据。活性测定的参数（图 5A）
和底物测定的参数（ 图 5B 和 5C）是根据初步实验的结果
设定。如图 5 所示，为测定活性和底物浓度，选择了不同
的方法。使用线性回归方法确定己糖激酶的活性。线性回归
分析中，每 5 秒测定一次。该反应是在预热 6 分钟后（参数“延
3
文献参考
5A
6A
5B 6B
5C 6C
图 5：酶活性和底物浓度测定参数 Ａ） “ 简单动力学”（Simple kinteics） 方法中通过线性回归测定己糖 激酶的参数。 Ｂ） ＋ Ｃ）“ 高级动力学”（Advanced kinetics） 方法中通过两点校准测 定底物浓度的参数。
底物浓度测定 在测定底物浓度的过程中，预孵育 7 分钟后进行一次测定，然 后加入己糖激酶，将反应混合物温育 2 分钟。根据两点测定法， 分别在孵育起始时和结束时各进行一次测定。为计算样品的浓 度，在限定底物浓度的情况下进行两次初步标准品测定。未知 样品的浓度根据标准品来计算。
直接计算酶活性 图 5A 中的系数是根据 NADPH 的摩尔吸光系数（6.32×103 L / (mol * cm)）计算所得。
朗伯 － 比尔定律基本原理： A= ε× c × l 或 c=A/ε× l 其中 c 为浓度，A 为吸光度，ε为摩尔吸光系数，l 为光路（比 色皿光路长度）。 对于光路长度为 1 cm 的比色皿，适用以下公式：分别是 c=A/ε或 c=A × 1/ε或 c=A × F。 这样，系数 F 就是摩尔消光系数的倒数，它的单位分别是 mol/L 或 µmol/µl（相对于 NADPH2 1.61 × 10-4）。
文献参考
使用酿酒酵母己糖激酶和葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶 在 Eppendorf BioSpectrometer® kinetic 紫外 / 可见光
分光光度计上进行酶动力学测定
简介
该用户指南将演示使用 Eppendorf BioSpectrometer 紫外 ／ 可见光分光光度计进行的酶活性测定。为优化测定流程，先使用 “单 波长λ- 连续”（Singleλ- continuous）测定法进行初步测定。然后，根据这些结果进行实际活性测定。通过线性回归确定酶活性。
代谢酶的酶促降解检测 由于这些相关代谢途径和酶的意义重大，所以它们在生化研 究和教育领域中倍受关注。其中一个重要的方面是酶活性的 测定，因为酶活性是酶的独有特征。测定各个酶活性的基本 方法是使用分光光度计进行光度测定法。
由于 NADP（NAD）和 NADPH2（NADH2 ）分别参与中间代 谢中几乎所有酶促反应，酶活性的确定主要是通过 NADPH2 的增加或减少来确定。NADP 和 NADPH2 均在 260 nm 波 长下显示出最大吸收峰。然而，NADPH2 在 340 nm 波长下 还会显示一个波峰（图 1），这就可以在光度测定上区分 NADPH2 和 NADP。
图 2 中描述的检测反应是本用户指南中的一个样例反应。 其目的是为了演示使用 Eppendorf BioSpectrometer kinetic 紫外 ／ 可见光分光光度计（动力学款）进行酶动力学测定的 两种应用：
1) ATP 浓度的酶测定 底物的浓度通过 37 ° C 下定量 ATP 的两点校准法来确定。 这一过程中，在底物转化的线性范围内进行两次测定。该转 化的线性范围需在初步测定中确定。 2) 酶活性的测定 如图 2 所示，己糖激酶反应对温度的依赖性。在 Eppendorf BioSpectrometer kinetic 紫外 ／ 可见光分光光度计（动力学 款）具备可加热比色皿槽，可以对样品进行温度控制：可选 温度范围在 20 °C 到 42 °C 之间。由于酶活性与孵育温度相关， 所以温度调节对于酶活性的精确测定至关重要。因此，分别 在 22 ° C、30 ° C 以及 37 ° C 下测定己糖激酶的酶活性。根 据曲线的线性回归确定准确的酶活性。
吸光度
NAD(P)/NAD(P)H2 光谱
3.000
2.500 2.000 1.500
NAD(P) NAD(P)H2
1.000
0.500
0.000 240 260 280 300 320 340 360 380 400 波长 ［ｎｍ］