5菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法一、原理：1.休眠状态：微生物菌种在低温下可进入休眠状态，减缓代谢活动，延长存活时间。
2.冷冻保存：通过降低温度到零下或较低的温度，减慢微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
3.干燥保存：通过去除菌种周围的水分，降低微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
4.冻干保存：先冷冻再干燥保存，通过冷冻降低微生物体内的水分活性，再通过干燥去除冻结水，使菌种能在实验室条件下保存较长时间。
二、方法：1.冷冻保存：（1）使用离心管或培养管制备菌种的蛋白质保护液，可以是细胞培养基、缓冲液等。
（2）将培养物转移到保护液中，使其悬浮均匀。
（3）加入保护剂，如甘油或DMSO（二甲亚砜），提高菌种的冷冻抵抗力。
（4）将混合物分装到小容器或冻存管中。
（5）使用特定的冷冻方案，将菌种快速冷冻，并存储在低温下，通常为零下80℃或更低的温度。
2.干燥保存：（1）用无菌技术转移到无菌条件下的试管中。
（2）将菌种培养在无菌的固体培养基上。
（3）收集培养物，将其平均分布在无菌试管或培养皿中。
（4）将试管或培养皿放在无菌的通风柜中，使培养物在无菌环境下干燥。
（5）将干燥的培养物贮存在干燥无菌容器中。
3.冻干保存：（1）将培养物转移到无菌离心管或培养皿中。
（2）使用细菌培养基将菌种制备为细菌悬浮液。
（3）在细菌悬浮液中加入保护剂，如蔗糖或甘露醇。
（4）将混合物分装到冻干瓶中。
（5）使用低温冷冻机将菌种冷冻为固体，再将其放入冻结干燥机中进行冻干。
（6）将冻干的菌种贮存在密封的冻干瓶中。
4.长期保存：通常，冷冻保存和冻干保存可以实现长期保存，但仍需定期检测和维护保存条件。
在微生物菌种保藏过程中，还需注意以下几点：1.选择合适的保存条件：根据菌种的特性和要求，选择适宜的保存方法和温度。
2.制备合适的保存液：保存液的配方和pH值应与菌种相适应，以保证菌种的存活和精确性。
3.保持无菌操作：在菌种保藏过程中，需保持无菌操作，以防止细菌污染。
发酵工程考试必备简答题
五.简答题1.菌种保藏的原理与方法？答：菌种保藏的方法很多，其基本原理都是根据微生物的生理生化特性，人为的创造条件，是微生物处于代谢不活跃(泼)，生长繁殖受到抑制的休眠状态，以减少菌种的变异。
一般可以通过降低培养基营养成分、低温、干燥和缺氧等方法，达到防止突变、保持纯种的目的。
常用菌种保藏方法有①斜面冰箱保藏法；②沙土管保藏法；③石蜡油封保藏法；④真空干燥冷冻保藏法；⑤液氮超低温保藏法⑥低温冷冻保藏。
2.培养基成分选择要考虑的问题？答：（1）菌体的同化能力（2）代谢的阻遏和诱导，（3）合适的碳氮比，（4）pH的要求。
3.培养基营养成分包括那几类？答：培养基的成分包括：能源物质、 碳源物质、氮源物质、无机盐、微量元素、特殊生长因子、前体、促进剂和抑制剂、水分。
4.发酵培养基由哪些成份组成？答：（1）碳源 构成菌体和产物的碳架及能量来源（2）氮源 构成微生物细胞物质或代谢产物中氮素来源的营养物质（3）无机盐和微量元素（4）生长因子：微生物生长不可缺少而细胞自身不能合成的微量的有机物质，如氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等均称生长因子。
（5）水、产物形成的诱导物、前体和促进剂5.简述培养基的类型有哪些？答：培养基的类型有很多，按照组成成分，有合成培养基和天然培养基，按照培养基的状态，可以分为固体，液体和半固体培养基，也可以按照用途分为孢子培养基，种子培养基和发酵培养基。
6.什么是一类发酵？二类发酵？三类发酵？（分类依据发酵类型可分哪几类？）答：根据产物形成与底物利用的关系，即碳源利用与产物形成速度的关系，将微生物发酵过程分成以下三个类型：第Ⅰ型（又称为与生长相关型）、第Ⅱ型（又称为与生长部分相关型）、第Ⅲ型（又称为与生长不相关型）。
一类发酵：产物形成与底物利用直接相关，为生长联系型，又称简单发酵型，产物直接由碳源代谢而来,产物生成速度的变化与微生物对碳源利用速度的变化是平行的，产物生成与微生物的生长也是平行的。
菌种保藏的原理
菌种保藏的原理菌种保藏是指将微生物菌株进行冷冻或干燥等处理，以延长其保存时间和保持其遗传特性的一种方法。
菌种保藏的原理主要包括以下几个方面：一、低温保存原理。
低温保存是目前最常用的菌种保藏方法之一。
通过将微生物菌株置于低温环境中，可以减缓细胞代谢速率，降低细胞内的化学反应速率，从而延长菌株的保存时间。
在低温条件下，微生物细胞内的代谢活动减缓，细胞内的酶活性降低，细胞膜和细胞壁的破坏减少，从而减少了微生物的死亡率，延长了菌株的保存时间。
二、干燥保存原理。
干燥保存是另一种常用的菌种保藏方法。
通过将微生物菌株置于干燥环境中，可以去除细胞内的水分，使细胞处于休眠状态，从而延长菌株的保存时间。
在干燥条件下，微生物细胞内的水分被大大减少，细胞内的生化反应受到抑制，细胞代谢活动减缓，从而延长了菌株的保存时间。
三、冷冻干燥保存原理。
冷冻干燥保存是将微生物菌株先冷冻，然后在真空条件下进行干燥处理的一种保存方法。
冷冻干燥保存结合了低温保存和干燥保存的优点，能够更好地保持菌株的遗传特性和保存时间。
四、液氮保存原理。
液氮保存是将微生物菌株置于液氮中进行保存的一种极低温保存方法。
在液氮的极低温条件下，微生物细胞内的代谢活动几乎停止，细胞内的化学反应速率大大降低，从而极大地延长了菌株的保存时间。
五、保存原理的应用。
菌种保藏的原理在微生物资源的长期保存和利用中起着非常重要的作用。
通过合理选择保存方法，可以有效地延长菌株的保存时间，保持菌株的遗传特性，为微生物资源的研究和应用提供了可靠的保障。
综上所述，菌种保藏的原理主要包括低温保存、干燥保存、冷冻干燥保存和液氮保存等方法。
这些方法通过降低微生物细胞的代谢活动，延缓细胞内的化学反应速率，有效地延长了菌株的保存时间，保持了菌株的遗传特性，为微生物资源的研究和应用提供了重要的支持。
菌种保藏的主要方法
菌种保藏的主要方法(总3页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--菌种保藏（一）、菌种保藏的目的微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡，因而常常造成菌种的衰退，并有可能使优良菌种丢失。
菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。
（二）、菌种保藏的原理无论采用何种保藏方法，首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏，最好保藏它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等。
其次，应根据微生物生理、生化特点，人为地创造环境条件，使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态。
这些人工造成的环境主要是干燥、低温和缺氧，另外，避光、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂也能有效提高保藏效果。
（三）、菌种保藏的方法1、斜面低温保藏法将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。
此法广泛适用于细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等大多数微生物菌种的短期保藏及不宜用冷冻干燥保藏的菌种。
放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保存6个月左右，无芽孢的细菌可保存1个月左右，酵母菌可保存3个月左右。
如以橡皮塞代替棉塞，再用石蜡封口，置于4℃冰箱中保藏，不仅能防止水分挥发、能隔氧，而且能防止棉塞受潮而污染。
这一改进可使菌种的保藏期延长。
该法的优点是简便易行，容易推广，存活率高，故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法。
其缺点是菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染。
2、石蜡油封藏法此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端lcm，使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。
简要说明菌种保藏原理及复壮
1.简述菌种菌种保藏原理及复壮？
答：大肠杆菌和其它微生物一样,都具有稳定遗传性和变异性。
遗传性可以保证微生物本身特征的相对稳定,即无性繁殖过程中能够保持原有的性状,为菌种保藏提供了有利因此,而变异性,使微生物的性状在繁殖过程中出现某些改变,给菌种保藏带来了困难。
由于存在变异,菌种常出现所谓的退化,主要指理想性状的丧失,从而导致发育缓慢,存活率和产量降低等现象。
菌种保藏工作就是通过低温、干燥、隔绝空气和断绝营养等手段,最大限度地降低菌种的代谢强度,抑制细菌的生长和繁殖。
由于菌种的代谢相对静止,生命活动将处休眠状态,从而可以保藏较长时间。
保存的菌种在复苏后除保持以前的生活与繁殖能力、不发生形态特征、生理状态及遗传性状的改变外,还不允许污染任何杂菌,能够长期在研究上应用。
此外,在保存前应确保菌种的单纯性,先分离单菌落后进行鉴定,然后再繁殖保存。
菌种保藏原理
菌种保藏原理
在菌种保藏中，主要通过冷冻和冻干技术来延长菌种的保存时间和保持其活力。
冷冻保藏是将菌株培养物中的微生物细胞在低温下迅速冷冻保存，而冻干保藏则是将菌株培养物中的水分逐渐去除，使其变成干燥的状态。
冷冻保藏的原理是通过将菌株培养物中的水分迅速冷冻，使细胞内的代谢反应减缓，防止代谢产物的积累和细胞损伤。
同时，低温下的冷冻可以防止细胞内的酶活性和酸碱平衡的改变，从而减少冻存过程中的细胞死亡率。
冻干保藏的原理则是通过将菌株培养物中的水分逐渐去除，使其转变成干燥的状态。
这种保藏方式主要通过冷冻干燥设备，将培养物缓慢冷冻至低温，然后将水分在低温下逐渐去除，最终形成干燥的菌株。
冻干保藏可以有效地减少冷冻过程中的细胞损伤，同时还能极大地减少微生物的营养需求和代谢活动，从而延长菌株的保存时间。
综上所述，菌种保藏的原理主要是通过冷冻和冻干技术来延长菌种的保存时间和保持其活力。
这些方法可以有效地减少菌株的代谢活动和细胞损伤，从而保持菌株的活力和遗传特性。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
在现代生物学研究和生物技术应用中，菌种保藏是至关重要的环节。
恰当的菌种保藏方法能够确保菌种的活性、遗传稳定性和可用性，为科学研究的持续开展以及相关产业的发展提供坚实的基础。
本文将重点介绍实验室中最常用的五种菌种保藏方法，深入探讨它们各自的特点、适用范围以及操作要点。
一、低温冷冻保藏法低温冷冻保藏法是目前最为广泛应用且效果较为可靠的菌种保藏方法之一。
其基本原理是将菌种置于超低温环境（通常为液氮温度，即-196℃）下，使菌种细胞处于极度冷冻的状态，从而抑制其代谢活动，达到长期保存的目的。
该方法具有诸多显著优点。
低温能够极大地减缓细胞的生理活动，几乎使其处于完全停滞状态，从而有效地延长菌种的存活时间。
低温冷冻保藏对菌种的遗传稳定性影响较小，经过长期保存后，菌种的特性通常能够较好地保持。
操作相对简单，只需将菌种制备成适宜的冷冻保存液，然后置于液氮罐中即可。
在具体操作时，首先要选择合适的冷冻保存液。
常用的冷冻保存液一般含有一定比例的保护剂，如甘油、二甲基亚砜等，它们能够降低细胞内冰晶的形成对细胞的损伤。
制备好冷冻保存液后，将菌种接种到冷冻保存液中，制成菌悬液。
将菌悬液分装到合适的冷冻管中，迅速放入液氮罐中进行保存。
在液氮罐中，要定期检查液氮的液位，确保菌种始终处于适宜的低温环境中。
低温冷冻保藏法适用于大多数微生物菌种的长期保存，尤其对于那些对温度敏感、容易变异的菌种，如细菌中的一些致病菌、真菌中的丝状真菌等，具有良好的保藏效果。
然而，该方法也存在一些不足之处，例如液氮的成本较高，液氮罐的储存空间有限，以及在取出菌种进行复苏时可能存在一定的风险等。
二、干燥保藏法干燥保藏法是利用菌种在干燥环境下代谢活动受到抑制的原理来实现保藏的方法。
常见的干燥保藏法包括沙土管保藏法、滤纸保藏法等。
沙土管保藏法是将菌种接种到无菌的沙土中，然后将沙土管置于干燥器中进行干燥保存。
该方法具有操作简便、成本低廉的特点。
在干燥过程中，菌种细胞内的水分逐渐散失，代谢活动减缓，从而达到保藏的目的。
5菌种保藏的原理和方法
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方法。
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（六）液氮保藏法
原理：低温 悬浮介质： 10%甘油或5%的二甲亚砜 机理：甘油或二甲亚砜可进入细胞，并通过降低强烈的
脱水作用而保护细胞。 甘油—般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。 适用菌种：适用于所有微生物、动植物细胞保藏。 保藏期：置液氮内（-196 ℃ ），保存5-10年。 特点：保藏期最长，但保藏费用高，仅用于保存经济价
4 菌种保藏的原理和方法
菌种保藏原理及条件 菌种保藏的方法 菌种保藏的注意事项 菌种保藏机构
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一、菌种保藏原理
原理：
根据菌种的生理生化特性，人为创造条件使菌 体的代谢活动处于休眠的状态。
条件：
挑取优良纯种，最好是休眠体（孢子、芽孢等）
创造一个最有利于休眠的环境条件，如：降低培 养基营养成分、低温、干燥、隔氧及添加保护剂 等方法。
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二、菌种保藏的方法
斜面保藏法 穿刺保藏法 固体曲保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法
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（一）斜面保藏法
原理：低温 方法： 将培养好的斜面菌种，置于4-5℃冰箱保存，定期
移植到新的斜面培养基上继续保藏。 一般保存期3-6个月。 注意事项: 冰箱的温度； 培养基水分蒸发情况（用橡皮塞代替棉塞）。 优点：简便，适合于实验室中菌种的短期保藏。 缺点：短期内多次传代，易引起菌种变异、退化，染菌
过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质，
可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载 体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
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（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整， 然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。
第5章 菌种保藏的原理和方法
这种保藏方法的弊端在于短期内多次传代
–容易引起菌种发生变异，
–杂菌污染的机会也随之增多。
采用这种方法保藏菌种时， –可以在可能的范围内减少碳水化合物的 含量， –或者将试管口更好地密封， 减少培养基失水和杂菌污染，以延长保 藏期。
斜面保藏法
5.1.2 穿刺保藏法
穿刺保藏法是斜面保藏法的一种改进，常用于 各种好气性细菌的保藏。 （1）其方法是配置1%的软琼脂培养基，装入小 试管或螺口小管内，高度1～2cm。
世界上现有700多家菌种保藏机构，其中国际 知识产权组织承认的法定保藏机构仅有28家。
–如美国的标准菌种保藏所（ATCC，American Type Culture Collection，Rockvill，Maryland， USA），保藏各类菌种一万株以上。 –美国农业部农业研究服务部（ARS）菌种保藏所收 藏近两万株，主要是有关农产品加工所用的菌种， 其中酵母近一万株。 –英国国立标准菌种保藏所（NCTC，National Collection of Type Culture）。 –荷兰霉菌中心保藏所（CBS）保藏各种菌种达两万 株，其中霉菌有一万株以上。 –日本大阪发酵研究所等。
（2）121℃灭菌后不制成斜面而使其凝固，
（3）用接种针将菌种穿刺接入培养基的1/2处。
（4）经培养后，微生物在穿刺处和培养基表面 均可生长， 冰箱保藏，可保藏6～12个月。
• 液体石蜡能够防止培养基失水并隔绝氧气，降低 微生物的代谢作用，因此保藏效果比斜面要好。 • 如果直接将液体石蜡加入生长好菌种的斜面上， 也可以得到相似的效果。 • 在保藏期间如果发现液体石蜡减少，应及时补充。 • 这种方法的适用范围较广，也可用于放线菌和真 菌的保藏。
• 种保藏法适用于产生孢子的丝状真菌和放线菌， 或形成芽孢的细菌。 • 其原理是造成干燥和寡营养的保藏条件。 • 它的制备方法见书p48。 • 也有只用土或只用沙作载体进行保藏的。保藏期 一般为两年，有的微生物可保藏长达10年之久。
菌种保藏的三大原理
菌种保藏的三大原理
菌种保藏的三大原理包括：冻存、干燥保藏和液氮保藏。
1. 冻存：将菌种培养物在低温条件下迅速冷冻保存。
冻存一般使用液氮或深冷冰箱等低温设备进行，通过快速降温减少细胞内冻结结晶的形成，以减少冻结对细胞的损伤。
冻存适用于大多数细菌和真菌。
2. 干燥保藏：将菌种培养物在无水或低湿度条件下进行干燥保存。
干燥保藏可以通过直接晾干或使用干燥剂等方法实现。
干燥保藏可以有效地抑制微生物生长和代谢，并减缓其老化速度。
干燥保藏适用于许多细菌、真菌和酵母等微生物。
3. 液氮保藏：将菌种培养物在低温液氮中进行保存。
液氮保藏是最常用的长期菌种保藏方法之一，可以将菌种长期保存数十年甚至更久。
液氮保藏利用液氮的低温和绝缘性质，有效防止细胞内的代谢反应和酶活性，并减缓噬菌体感染、遗传变异和突变等现象。
液氮保藏适用于许多微生物，包括细菌、真菌、酵母等。
这三种保藏方法可以根据具体菌种的特点和需求选择使用，以确保菌种的长期保存和使用。
微生物的菌种保藏
培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培
养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，
垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。
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• 菌种保藏方法
微 生
3.砂土管保藏法
物
将砂与土分别洗净、烘干、过筛，
的 菌 种
装于小试管中，砂土的高度约1cm， 121℃蒸汽灭菌1～1.5h，间歇灭菌3
保 藏
次。50℃烘干后经检查无误后备用。 将待保藏的菌株制成菌悬液或孢子
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斜面低温保藏法操作步骤
1.斜面低温保藏法 2.固体穿刺保藏法 3.液体石蜡保藏法 4.沙土管保藏法 5.甘油保藏法
— 2—
• 菌种保藏方法操作步骤
微
生
1.斜面低温保藏法
物 的 菌
（1）贴标签 将注有菌株名称和日期的标签贴于试管斜面的正下方。 （2）接种 将待保藏的菌种用斜面接种法移接至注明菌名的试管
悬液滴入砂土管中，放线菌和霉菌也
可直接刮下孢子与载体混匀，而后置
于干燥器中抽真空约2～4h，用火焰
熔封管口(或用石蜡封口)，置于干燥
器中，在室温或4℃冰箱内保藏。
— 1—
• 菌种保藏方法
微
生 物 的
4.甘油悬液保藏法 此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保藏，本
菌 种 保
法较简便，但需置备低温冰箱。保藏温度若采用－20℃， 保藏期约为0.5～1年，而采用－70℃，保藏期可达10年。
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• 菌种保藏方法
微
生 物 的
1.斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长
菌 种 保
完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定 时间再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保
实验室最常用的五种菌种保藏方法
实验室最常用的五种菌种保藏方法一、冷冻保存在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。
这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。
冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。
在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。
二、干燥保存干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。
这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。
常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。
干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。
三、低温保存除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。
在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。
这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。
四、液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。
这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。
液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。
五、冻干保存冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。
这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。
总结回顾通过冷冻保存、干燥保存、低温保存、液氮保存和冻干保存等五种菌种保藏方法，可以满足实验室对于微生物样品保存的不同需求。
不同的菌种和实验目的，需要选择合适的保存方式，以确保微生物的品质和可用性。
在进行菌种保存的过程中，需要注意样品的密封性、温度和湿度的控制，以及保存设备的维护和管理。
菌种保藏方法
选择与试管口径相符的白胶塞，用0.2%煤酚皂溶液洗涤，浸泡在酒精内待用。当试管斜面长满菌丝后，在无菌条件下拔去棉塞，取浸泡的白胶塞1个，通过火焰迅速塞入试管口内，并用石蜡熔封。此法能达到与石蜡油封存相似的效果。用该法保存菌种可存活1～3年，但以每年移植1次为好。
4蒸馏水保藏法
将8成熟试管菌种放在接种箱内，注入蒸馏水，将培养基斜面全部淹没至管口2cm。管口用白胶塞塞紧，并用石蜡涂封，常温下置于阴凉处立放，可以保藏1年左右。
利用孢子保存菌种系列方法
1滤纸片保藏法
取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）滤纸，剪成4.0cm×0.8cm的小纸条，平铺在培养皿中用纸包裹进行灭菌。采用钩悬法收集孢子，让孢子落在滤纸条上。将载有孢子的滤纸条放入保藏试管中，白胶塞封口，再将保藏试管放入干燥器中1～2d，除去滤纸水分，然后低温保藏。保存期可达２～10年。
2沙土管保藏法
取河沙用水浸泡洗涤数次，过60目筛除去粗粒，加用1％稀盐酸煮沸30min，以除去其中的有机质，再用水冲洗至pH值达到中性，烘干备用。同时取非耕作层的瘦黄土或红土，用水反复冲洗至中性，烘干碾细，过100目筛，将处理好的沙与土以2～4∶1混匀，然后分装小试管内，每管装0.5g，高压灭菌（1.5kg/cm2）3次，再干热灭菌（160℃，2h）1次，待无菌检验合格后方可使用。将已形成孢子的斜面菌种，在无菌条件下注入无菌水3mL，刮菌苔，制成菌悬液，再用无菌吸管吸取菌液滴入砂土管中，以浸透砂土为止。将接种后的沙土管放入盛有干燥剂的真空干燥器内，接上真空泵抽气至沙土干燥为止。真空干燥操作需在孢子接入后48h内完成，以免孢子发芽。制备好的沙土管石蜡封口，在低温下可保藏2～10年。
二、菌种保藏的方法
试管斜面菌种系列保存方法
菌种保藏的原理
菌种保藏的原理
菌种保藏是指将微生物菌种保存并保持其活性的一种方法。
其原理是通过合适的条件和技术手段，将菌种冻结或保存在特定的培养基中，使其能够在较长时间内存活和维持其基因特性。
首先，选择适当的保藏方法是关键。
常用的方法包括冷冻保藏和低温液氮冷冻保藏。
其中，冷冻保藏是将菌种在-70°C或更
低的温度下保存，通过降低温度来减缓细胞代谢和生长速度，从而延缓细胞死亡的过程。
而低温液氮冷冻保藏是将菌种保存在液氮温度下(-196°C)，这种极低温度可以更好地维持菌种的
稳定性和活性。
其次，要配制适当的保存液或培养基来维持菌种的生长和存活。
保存液中通常需要添加保护剂，如甘油、蔗糖、牛血清等，以防止菌株遭受冰冻或干燥引起的细胞损伤。
培养基的选择需要考虑到菌种的特性和需要，同时应注意维持适当的pH、温度
和氧气供应等环境条件。
最后，严格控制保存条件也是保藏菌种的重要因素之一。
保存菌种的环境应保持干燥、无菌和无污染，避免氧气和水分的进入。
同时，定期检查和维护保存设备的功能，如冰箱或液氮罐的温度稳定性和密封性。
总之，菌种保藏的原理是通过适当的保藏方法、保存液和保存条件来维持菌种的活性和稳定性，以便在需要时能够提取并进行后续研究或应用。
这种保藏方式可以有效地保存和保护珍贵的微生物资源，对于科研、生产和应用等领域有着重要的意义。
5菌种的管理和保藏
2024/7/3
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低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可 以抑制微生物的代谢和生长繁殖，因此低温、 干燥和真空是菌种保藏的重要手段。 标准储备菌株经纯度和特性确认后保存时，可 将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中，并分 装于小瓶中,建议采用低温冷冻干燥，液氮储存， 超低温冷冻(低于-70℃)等方法保存。
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⑵创造适宜的培养条件 ⑶用不同类型的细胞进行传代 ⑷采用有效的保藏方法
2024/7/3
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定期检查
主要检查项目 菌落形态、革兰染色、显微镜下菌体形
态、生化特性及血清学检查。
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菌种的复壮 使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性的 过 程验室主要采用分离纯化的方法。
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⑴ 挑选特征典型的纯菌菌落。 ⑵确定保藏的合适菌体。 ⑶选择最适宜的方法保藏。 ⑷定期对保藏的菌种进行检查。
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二、菌种的传代和使用
工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代， （从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0代）防止 过度的传代造成菌种变异。
1代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任 何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。必要 时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。
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菌种的来源
药品微生物检验用的试验菌应来自认 可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株， 或使用与标准菌株所有相关特性等效的商 业派生菌株。
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菌种保藏的中心任务
⒈广泛收集各种有用的微生物菌种。 ⒉选择最适宜的保藏方法。 ⒊研究、检验、交换和使用。
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菌种保藏的原理
菌种保藏的原理
菌种保藏是指将微生物菌种保存在适宜的条件下，以确保其长期保存和稳定性的一种技术。
菌种保藏的原理主要包括选择合适的保存方法、保存条件和保存容器等几个方面。
首先，选择合适的保存方法是菌种保藏的关键。
目前常用的保存方法有冷冻保存、干燥保存和液氮保存等。
冷冻保存是将菌种在-80℃或更低温度下保存，通过降低温度来减缓细胞新陈代谢速度，从而达到保存的目的。
干燥保存则是将菌种在无水或低水活性条件下保存，通过降低水分活性来抑制微生物的代谢和生长。
液氮保存则是将菌种保存在液氮中，利用极低的温度来冻结细胞内的水分，从而达到保存的目的。
其次，保存条件也是菌种保藏的重要因素。
不同的微生物菌种对保存条件的要求有所不同，一般包括温度、湿度、光照、氧气浓度等因素。
在冷冻保存中，温度是最为关键的保存条件，而在干燥保存中，湿度则是最为重要的保存条件。
因此，根据不同菌种的特性和保存方法的选择，确定合适的保存条件是确保菌种长期保存的关键。
最后，保存容器的选择也对菌种保藏起着至关重要的作用。
合适的保存容器应该具备密封性、耐高低温、耐腐蚀等特点，以确保菌种在保存过程中不受外界环境的影响。
常用的保存容器包括冻存管、干燥瓶、液氮罐等，根据不同的保存方法和保存条件选择合适的保存容器也是菌种保藏的重要环节。
综上所述，菌种保藏的原理主要包括选择合适的保存方法、保存条件和保存容器等几个方面。
通过科学合理地选择保存方法、确定合适的保存条件和选择合适的保存容器，可以确保菌种长期保存和稳定性，为微生物研究和应用提供了可靠的保障。
多种菌种保藏的原理和方法
多种菌种保藏的原理和方法多种菌种的保藏是为了保持其生物特性和保存其遗传信息，以便后续研究和应用。
在微生物学研究和应用中，常见的菌种保藏方法有冷冻保藏、干燥保藏、冷冻干燥保藏、凝胶保藏和液氮保藏等。
以下将详细介绍这些保藏方法的原理和具体步骤。
一、冷冻保藏冷冻保藏是最常见的菌种保藏方法之一、其原理是通过在超低温条件下将菌株冷冻保存，阻止其新陈代谢和繁殖，从而使菌株保持低活性状态。
冷冻保存可以使用明胶冻块、甘油、液氮等不同保藏物质，具体步骤如下：1.选取新鲜的菌株，生长到对应的阶段。
2.制备保存液，通常使用明胶冻块（10%明胶+10%蔗糖+10%琼脂）、甘油（20%甘油+10%消毒水）、液氮等。
选择合适的保存液可以根据菌株的特性和使用要求进行调整。
3.微生物菌株生长到对应阶段后，用无菌工具将其移至保存液中。
4.放置在超低温冷冻箱中，通常设置在-80℃的环境下保存，避免产生晶状冰或冻伤。
可以考虑使用其他液氮冷冻方法，如液氮喷雾冷冻法等。
5.菌株保存时间根据所用保存液和保存条件而有所不同。
文献上常见的冷冻保存时间一般为6个月，但很多菌株可以保藏数年或数十年。
二、干燥保藏干燥保藏是将菌株通过脱水处理后进行保存。
此方法的原理是通过将菌株暴露在干燥条件下，除去菌体内的水分，从而抑制其活性，确保长时间保存。
常见的干燥保藏方法有真空冷冻干燥法和常温干燥法。
1.用无菌试管或无菌孢子瓶盛装菌株，通常使用液体培养基等。
2.将菌株液体培养基均匀均匀分配到无菌培养皿或钢平。
3.将培养皿置于通风恒温箱中进行干燥，可以选择真空干燥或通风干燥。
真空干燥通常在-80℃下真空干燥24小时以上，而常温干燥则需要3-7天左右。
4.干燥后的培养物使用无菌器具封装密封保存，放置在低湿、阴凉的地方，通常保存在常温下60-70%相对湿度的环境中或4℃冰箱中。
三、冷冻干燥保藏冷冻干燥保藏是将菌株进行预冷冻处理，然后在真空条件下进行干燥保存。
此方法的原理是在菌株处于冷冻状态下脱水处理，从而更好地保存菌株的生物学特性。
菌种保藏的原理
菌种保藏的原理
菌种保藏是指将某种微生物菌株保存在一定条件下，以便长期保存和使用。
菌种保藏的原理是通过控制菌株的生长和代谢，使其处于一种休眠状态，从而延长其寿命。
菌种保藏的目的是为了保证菌株的纯度和活力，以便在需要时能够重新使用。
菌种保藏的原理主要包括以下几个方面：
1. 低温保存
低温保存是最常用的菌种保藏方法之一。
将菌株保存在低温环境下，可以减缓其代谢速度，从而延长其寿命。
一般来说，菌株的保存温度在-80℃以下，可以保证其长期保存。
2. 干燥保存
干燥保存是将菌株保存在干燥的环境中，以便去除其水分，从而防止细胞膜的破裂和细胞死亡。
干燥保存的方法包括冷冻干燥和喷雾干燥等。
3. 液氮保存
液氮保存是将菌株保存在液氮中，以便冷冻其细胞，从而延长其寿命。
液氮保存的温度为-196℃，可以保证菌株的长期保存。
4. 冷藏保存
冷藏保存是将菌株保存在低温环境中，但温度比低温保存高一些。
一般来说，菌株的保存温度在4℃以下，可以保证其短期保存。
5. 防腐剂保存
防腐剂保存是将菌株保存在含有防腐剂的培养基中，以便防止细菌的生长和繁殖。
防腐剂保存的方法包括添加甲醛、苯甲酸钠等。
菌种保藏的原理是通过控制菌株的生长和代谢，使其处于一种休眠状态，从而延长其寿命。
不同的保存方法适用于不同的菌株和保存时间。
在进行菌种保藏时，需要根据具体情况选择合适的保存方法，以保证菌株的纯度和活力。
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适用菌种：产孢子的真菌 该法麸皮、大米、小米或麦粒等天然农产品为 产孢子培养基，使菌体产生大量的休眠体（孢 子）后加以保存。 注意：控制适当的水分。 保存期：1-3年
（四）沙土管干燥保藏法
原理：低温、寡营养 保藏期：4-5
℃冰箱 保存期1-2年。 适用菌种：产孢子的丝状真菌和放线菌以及产 芽孢的细菌。 过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质， 可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载 体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
（二）穿刺保藏法
原理：低温、缺氧 保藏期：
4-5℃冰箱 保存期6-12个月 适用菌种：各种好气性细菌 液体石蜡作用：防止培养基失水并隔绝氧气 液体石蜡保藏法 （在斜面菌种上加入灭菌后 的液体石蜡） 适用于不能以石蜡为碳源的菌种，如：固 氮菌、分枝杆菌、沙门氏菌、毛霉、根霉等。
（三）固体曲保藏法
三、菌种保藏的注意事项
1 菌种在保藏前所处状态 休ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ体如孢子或芽胞 培养时间（过短，容易死亡；过长，生产性能 衰退） 培养温度 一般采用生长最适温度培养至孢子成熟的菌种 进行保藏效果好
三、菌种保藏的注意事项
2 菌种保藏所用基质 斜面保藏所用的培养基，碳源比例应少些，营 养成分贫乏些较好； 沙土管保藏需将沙和土充分洗净，以防其中过 多的有机物，影响菌的代谢或经灭菌后产生一 些有毒物质； 冷冻干燥所用的保护剂，有不少经加热分解或 变性的物质，如还原糖和脱脂乳，过度加热易 形成有毒物质。
（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整， 然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。 步骤： ①安瓿瓶的处理：灭菌 ②保护剂:其作用是保持菌种细胞的生命状态，尽量减少冷 冻干燥对微生物引起的冻结损伤。 常采用脱脂牛奶或血清。 ③菌悬液制备：与保护剂混合，放在安瓿瓶内； ④冷冻干燥（用低温酒精或干冰（-15 ℃以下）使之速冻， 在低温下用真空泵抽干） 保藏期：将安瓿瓶熔封，低温4-5 ℃，保藏5-10年。
二、菌种保藏的方法
斜面保藏法 穿刺保藏法 固体曲保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法
（一）斜面保藏法
原理：低温 方法： 将培养好的斜面菌种，置于4-5℃冰箱保存，定 期移植到新的斜面培养基上继续保藏。 一般保存期3-6个月。 注意事项: 冰箱的温度； 培养基水分蒸发情况（用橡皮塞代替棉塞）。 优点：简便，适合于实验室中菌种的短期保藏。 缺点：短期内多次传代，易引起菌种变异、退化，染菌 几率增加。 适用菌种：细菌、放线菌、酵母、丝状真菌等短期保藏
三、菌种保藏的注意事项
3 操作过程对细胞结构的损伤 冷冻干燥时，冻结速度缓慢易导致细胞内形成 较大的冰晶，对细胞结构造成损伤； 真空干燥程度影响细胞结构，加入保护剂为了 减轻冷冻干燥所引起的细胞结构破坏。
四、菌种保藏机构
普通微生物菌种保藏管理中心（ＣＣＧＭＣ） 农业微生物菌种保藏管理中心（ＡＣＣＣ） 工业微生物菌种保藏管理中心（ＣＩＣＣ） 医学微生物菌种保藏管理中心（ＣＭＣＣ） 中国抗生素菌种保藏管理中心（ＣＡＣＣ） 兽医微生物菌种保藏管理中心（ＣＶＣＣ） 林业微生物菌种保藏管理中心（ＣＦＣＣ） 中国典型培养物保藏管理中心（ＣＣＴＣＣ）
（五）真空冷冻干燥保藏法
影响保藏效果的因素: 菌种、菌龄和样品中的含水量。 适用菌种：适用于各种微生物。 特点：保藏期长、变异小、适用范围广，较理想保藏 方法。
（六）液氮保藏法
原理：低温 悬浮介质： 10%甘油或5%的二甲亚砜 机理：甘油或二甲亚砜可进入细胞，并通过降低强烈的 脱水作用而保护细胞。 甘油—般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。 适用菌种：适用于所有微生物、动植物细胞保藏。 保藏期：置液氮内（-196 ℃ ），保存5-10年。 特点：保藏期最长，但保藏费用高，仅用于保存经济价 值高、容易变异，或其他方法不能长期保存的菌种
4 菌种保藏的原理和方法
菌种保藏原理及条件 菌种保藏的方法 菌种保藏的注意事项 菌种保藏机构
一、菌种保藏原理
原理： 根据菌种的生理生化特性，人为创造条件使菌 体的代谢活动处于休眠的状态。 条件： 挑取优良纯种，最好是休眠体（孢子、芽孢等） 创造一个最有利于休眠的环境条件，如：降低培 养基营养成分、低温、干燥、隔氧及添加保护剂 等方法。
（七）悬液保藏法
原理：寡营养保存，将菌种悬于不含养分的溶
液中。 适用菌种：丝状真菌、酵母状真菌及肠道科细 菌。 保藏期：10 ℃或室温保藏（18-20 ℃ ） 1年 以上
（八）低温保藏法
方法：在封密性能好的螺口小管中，加入1-2ml菌液， 封口后直接放入低温冰箱中保藏。 保藏期：-20 ℃ 保藏期1年左右。