高效液相色谱法测定盐酸莫西沙星含量及其有关物质

高效液相色谱法测定盐酸莫西沙星含量及其有关物质

采用高效液相色谱法对盐酸莫西沙星含量及其有关物质进行检测，苯甲硅烷基键和硅胶色谱柱（250mm×4.0mm，5μm），流动相为甲醇-四丁基硫酸氢铵磷酸盐缓冲液（34∶66），检测波长为293nm，柱温为45℃，流速为1.0mL/min。结果表明，所建立的方法专属性、精密度、准确度、耐用性均较好，可用于盐酸莫西沙星含量及其有关物质的测定。

标签：高效液相色谱法；盐酸莫西沙星；检测

1 材料

1.1 仪器

高效液相色谱仪（Hitachi Chromaster-5430檢测器，Hitachi Chromaster-5310 柱温箱，Hitachi Chromaster-5110 泵），Chromaster色谱工作站，日本Hitachi公司；Intersil ph（250mm×4.0mm，5μm）色谱柱；AR1140电子天平。

1.2 试剂

盐酸莫西沙星对照品、盐酸莫西沙星峰位对照品（美国药典中杂质对照品，含有杂质A～E）、盐酸莫西沙星杂质对照品，德国Bayer公司；盐酸莫西沙星片（规格：400mg），德国Bayer公司；甲醇为色谱纯试剂；其余试剂为市售分析纯试剂。水为纯净水。

Moxifloxacin hydrochloride R1=F R2=OCH3

Impurity A：6，8-fluor-moxifloxacin R1=F R2=F

Impurity B：6，8-dimethoxy-moxifloxacin R1=OCH3 R2=OCH3

Impurity C：8-ethoxy-moxifloxacin R1=F R2=OC2H5

Impurity D：6-methoxy-8-fluor-moxifloxacin R1=OCH3 R2=F

Impurity E：8-hydroxy-moxifloacin R1=F R2=OH

Fig.1 Structure of moxifloxacin hydrochloride and its related substances

2 方法

2.1 色谱条件与系统适应性

色谱柱：Intersil ph（250mm×4.0mm，5μm）；流动相：四丁基硫酸氢铵磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾 1.0g与四丁基硫酸氢铵0.50g，加水溶解并稀释成1000ml，用磷酸调节pH至2.5）甲醇（66：34）；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长：293nm；进样量：20μl。理论板数按盐酸莫西沙星峰计算不低于2000。各物质间的分离度应大于1.5，拖尾因子应小于2.0。

2.2 溶液配制

对照品溶液：取盐酸莫西沙星对照品约10mg，置10ml容量瓶中，加磷酸溶液（1→1000）溶解并稀释至刻度，摇匀。供试品溶液：取本品5片，研细，精密称取适量（约相当于莫西沙星100mg），置100ml容量瓶中，加磷酸溶液（1→1000）溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量用水稀释成0.1mg/ml的溶液。

3 结果与讨论

3.1 专属性试验

取供试品溶液分别进行酸、碱、氧化、热及光照破坏试验，分别加入1mol/L 盐酸5mL，1mol/L氢氧化钠5mL，30%双氧水5mL调节pH至中性，直火烧2h，在4500lx光照条件暴露24h后，取续滤液20μl进样，记录色谱图。主要降解产物经与杂质峰位对照品比较均为杂质A～E，主成分峰与降解杂质峰分离良好。

3.2 线性相关性试验

精密称取盐酸莫西沙星对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成浓度约为1mg/ml的贮备液。精密量取贮备液0.2、0.4、0.8、1.0、1.2、1.5、2.0ml，置10ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，各进样20μl，记录色谱图。得线性回归方程，结果表明，莫西沙星在0.02mg/ml～0.2mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

3.3 仪器精密度试验

取浓度约为0.1mg/ml的盐酸莫西沙星对照品溶液，连续进样6次，各进样20μl，记录峰面积。平均峰面积为6384032，RSD为0.34%。结果表明仪器精密度良好。

3.4 回收率试验

精密称取盐酸莫西沙星对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成浓度约1mg/ml的对照品贮备液。加流动相溶解并稀释制成0.1mg/ml的溶液，作为对照溶液；精密量取对照品贮备液0.8、1.0、1.2ml各3份至10ml容量瓶，加入处方量混合空白辅料，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；计算莫西沙星的回收率，平均回收率为100.2%，RSD为0.87%。

3.5 样品测定

取对照品溶液和供试品溶液，测定三批样品含量及有关物质。批号BJ07725，含量99.6%，有关物质0.045%；批号BJ12685，含量100.1%，有关物质0.081%；批号BJ08256，含量99.8%，有关物质0.054%。

参考文献

[1]Sunderland J，Tobin CM，Hedges A J，et al. Antimicrobial activity of fluoroquinolone photodegradation products determinated by parallel-line bioassay and high performance liquid chromatography[J]. J Antimicrob Chemother，2001；47

[2]Stass H，Kubitza D. Pharmacokinetics and elimination of moxifloxacin after oral and intravenous administation in man[J].J Antimicrob Chemother ，1999；43（Supple B）：83.