免疫浊度测定检验技术
免疫浊度技术
范
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
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欢迎来到
速率散射王国
Edited by E. Dalla Dea ESTS
IMMAGE
Immunochemistry System
—在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常 血清的50倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与 抗体的结合。 对抗原过量进行阈值限定 —先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
Edited by E. Dalla Dea ESTS
毒品
Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验 免疫浊度技术
免疫检测的基础—抗原抗体间的特异性反应 手工操作 免疫比浊分析技术发展
测定抗原抗体形成后的阶段 散射(终点)比浊
Edited by E. Dalla Dea ESTS
自动化分析
两 个 阶 段
测定抗原抗体结合的峰值 速率散射比浊
实验 免疫浊度技术
实验 免疫浊度技术
免疫反应进展
1897年
1905年 1946年 1965年 1966年
免疫比浊检验技术原理
自动化检测
免疫比浊检验技术可以与自动化仪器配合使用， 提高检测效率和准确性。
免疫比浊检验技术的原理
在免疫比浊检验技术中，检测物质与特异性抗体结合形成免疫复合物，这些 复合物会在溶液中形成可见的浑浊度，浑浊度与物质浓度呈正相关。
免疫比浊检验技术的步骤
3
样本准备要求高
样本的预处理对测量结果有一定影响，样本准备要求较高。
免疫比浊检验技术的未来发展方向
未来，免疫比浊检验技术有望进一步发展，结合新的成像和数据处理技术，实现更高的灵敏度和准确度，以满 足更多领域的需求。
在药物研发过程中，可以 用于评估药效和药代动力 学。
3 环境监测
用于检测环境中的毒性物 质，保护人类健康和环境 安全。
免疫比浊检验技术的优点
准确度高
相对传统的比色法和酶联免疫吸附法，免疫比浊检 验技术具有更高的准确度。
快速得出结果
免疫比浊检验技术通常只需要几分钟到几小时，可 以得到快速的检测结果。
免疫比浊检验技术原理
免疫比浊检验技术是一种基于光学原理的生化分析方法，通过测量溶液中悬 浮颗粒的浑浊度来确定其对应的分析物浓度。
免疫比浊检验技术的定义
快速、灵敏
通过相对简单的操作流程，可以快速检测样本 中微量物质的浓度。
数量测定
可以准确测定血液、尿液、唾液等生物样本中 的特定分析物的浓度。
广泛应用
1
样本预处理
将待测样本进行预处理，如离心、稀释等，以提高结果的准确性。
2
免疫反应
将样本与特异性抗体一起反应，允许免疫复合物形成。
3
测量浑浊度
利用光学仪器测量样品溶液的浑浊度，得到测量结果。
免疫学实验 免疫比浊(免疫球蛋白的测定)
3 免疫胶乳比浊法
原理
选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗 粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则 发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之 内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则 使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝 集成正比，与抗原量成正比。
（a）带抗体的胶乳在波长之内可透过光线； （b）结合后，则形成光线衰减
2. 海德堡（heidelberger）曲线理 论
2 抗体的质量
（1）特异性高 （2）效价高 （3）亲和力高 （4）抗血清来源
3 抗原抗体反应的溶液
• pH 6.5~8.5
• 电解质 离子强度、种类（磷酸盐缓冲液）
4 增浊剂的使用
• PEG、tween-20等非离子型亲水 剂
• 作用：消除蛋白质分子周围的电子 云和水化层，促进抗原、抗体分子 靠近，结合形成大分子复合物。
（二）类型
1. 透射免疫比浊法 2. 散射免疫比浊法 3. 免疫胶乳比浊法
1 透射免疫比浊法
原理：
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复 合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减 少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线 吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物 的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量 成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出 待检抗原含量。
•
样本管吸光度
• 浓度＝————————×校准液浓度（g/L）
•
校管吸光度
• 结果及讨论
– 检测报告 – 检测意义
实验二、免疫浊度测定 ——免疫球蛋白检测
实验步骤见说明书 IgG9.77g/L IgA1.72g/L IgM1.37g/L
沉淀反应
微生物与免疫教研室
免疫浊度技术概述
在预反应时段， 加小量样本与 抗原抗体反应， 测定第一次散 射光信号值
加全量样本， 约反应 2分 钟后，第二 次测定散射 光信号
信号峰值
计算机处理 转换为样 品浓度
Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验 免疫浊度技术
二、定时散射比浊分析
（二）抗原过量检测 采用两项保证措施：
抗体过量
—在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常 血清的50倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与 抗体的结合。 对抗原过量进行阈值限定 —先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
IMMAGE 双光径速 率浊度分析系统
高效蛋白分析仪 随机TDM分析仪 两种技术(透射法+散射法)，四种方法
速率散射比浊法 ( 蛋白检测)
速率抑制散射比浊法 ( TDM) 近红外颗粒速率法免疫分析(Rate NIPIA) 速率抑制NIPIA
Edited by E. Dalla Dea ESTS
LED光源
Edited by E. Dalla Dea ESTS
速率散射抑制法(670nm)
TDM检测
Conjugate-antibody complexing
1
2
Inhibition of complexing by hapten (drug)
1
2
3
Edited by E. Dalla Dea ESTS 2. Antibody
Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验测试方法免疫比浊法原理
实验测试方法免疫比浊法原理免疫比浊法（immunoturbidimetry）是一种常用的实验测试方法，用于测定血清或尿液中特定分析物质的浓度。
它基于免疫学原理，通过测量可见光的散射程度来获得目标物质的浓度信息。
在实验中，样品中的目标物质与专门设计的抗原抗体反应，形成可见性沉淀物，从而引起溶液的浑浊程度的变化。
免疫比浊法的原理可以概括为以下几个步骤：1.抗原抗体反应：在实验开始前，需要将抗原抗体组分预先混合。
抗原可以是目标物质的衍生物或合成物，而抗体是特异性识别和结合抗原的蛋白质。
2.沉淀形成：向样品中加入混合的抗原抗体溶液，使其与样品中的目标物质相互作用。
当目标物质存在于样品中时，抗体会识别并与其结合，形成可见性沉淀物。
3.光散射测量：实验中使用的光散射测量器可以测量光线通过沉淀物混浊的溶液时的散射程度。
目标物质的浓度越高，形成的沉淀物越多，溶液的浑浊程度越高，从而引起更强的散射。
4.标准曲线计算：为了准确测量目标物质的浓度，需要根据已知浓度的标准品制备一条标准曲线。
标准品的浓度范围一般从低浓度到高浓度逐步增加。
通过测量标准品和待测样品的散射程度，并使用标准曲线进行外推和内推，可以得出待测样品中目标物质的浓度。
免疫比浊法的优点包括操作简单、结果快速、成本较低和高灵敏度。
然而，它也存在一些限制和注意事项。
由于光散射测量主要基于理论计算，因此需要确保实验中的测量条件如温度、光源强度和检测器的响应都是稳定和准确的。
另外，免疫比浊法在样品中可能存在其他干扰物质时可能会失去灵敏度和特异性。
因此，在进行免疫比浊法实验时，需要进行一系列的控制实验来检测和排除干扰因素。
除了免疫比浊法，还有其他一些常用的免疫学方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫分析（RIA）。
这些方法在分析物质浓度的测量范围、特异性和精确度方面可能略有不同。
因此，在选择适当的实验方法时，需要考虑样品性质、目标物质的特征和实验室的设备和技术条件。
免疫比浊检验技术原理与进展
水果检测
检测水果中的农药残留，保障食 品安全。
饮料检测
食品制造商可以使用免疫比浊检 测检测其产品中的营养素含量和 成分组成。
免疫比浊检验技术在环境监测中的应用
水质检测
通过检测水中污染物的含量，保护自来水中的 化学和生物安全。
空气质量检测
用免疫比浊检测检测空气中常见的有害气体 （如烟尘和花粉），保障工作场所的空气质量。
3 测量结果
检测并记录样品的光学浊 度变化，得出结果。
免疫比浊检验技术的主要进展1快速检测新一代的荧光免疫比浊检测方法可以在5-
高灵敏度
2
30分钟内完成检测，速度更快。
金纳米粒子和荧光标记物的出现使得免
疫比浊检测的灵敏度得到大幅提高。
3
自动化流程
随着自动化仪器的发展，免疫比浊检测 的多样性和自动化程度更高。
免疫比浊检验技术原理与 进展
免疫比浊检验技术是一种快速、准确、灵敏的免疫学检测方法，其原理基于 光学浊度的变化。本文将介绍其定义与概念。
免疫比浊检验技术的基本原理
1 标准物质
将待检物质与易于检测的 标准物质结合，形成免疫 复合物。
2 光学浊度变化
通过加入反应物，使得免 疫复合物聚集形成浑浊物 质，从而改变光学性质。
免疫比浊检验技术在医学领域的应用
诊断
免疫比浊检测可以用于检测血清中的肿瘤标志物、 细胞因子、抗体等，用于辅助医生做出诊断。
药物监测
免疫比浊检测可以用于监测炎症、感染等疾病治疗 过程中药物的有效性和副作用。
免疫比浊检验技术在食品安全检测中的应 用
酸奶检测
通过检测酸奶中的大肠菌群，保 证食品卫生和质量。
免疫比浊检验技术的优势和局限性
1.2免疫浊度法
1.2免疫浊度法比浊法中文名称：比浊法英文名称：turbidimetry定义：悬浮颗粒在液体中造成透射光的减弱，减弱的程度与悬浮颗粒的量相关，据此可定量测定物质在溶液中呈悬浮状态时浓度的方法。
定义又称浊度测定法。
为测量透过悬浮质点介质的光强度来确定悬浮物质浓度的方法，这是一种光散射测量技术。
运用本法主要是用于测定能形成悬浮体的沉淀物质,例如微量磷、硫、氯和钙等的测定,生物碱沉淀试剂形成的混浊也可用此法测定。
这是根据悬浮体的透射光或散射光的强度以测定物质组分含量的一种分析方法。
当光线通过一混浊溶液时,因悬浮体选择地吸收了一部分光能,并且悬浮体向各个方面散射了另一部分光线,减弱了透过光线的强度。
在水质监测和管理过程中，比浊法常用于测量饮用水、工业用水、废水的透明度；也用于测量空气及其他各种气体中悬浮固体的含量，是空气和水污染研究的一种工具。
在酿造工业中，比浊法常用于各种饮料澄清过程的控制和过滤过程的监控。
在分析化学上，可通过生成悬浮沉淀的反应产物来测定某些元素的浓度,例如,通过生成硫酸钡悬浮物来测定Ba2+ 或SO2-,以及在煤、焦炭、油、橡胶中的总硫量；通过生成硫化银和氯化银悬浮物来测定Ag+或Cl-；在容量分析中,浊度测量也可用于确定滴定终点，如用钙盐滴定氟化物、用银盐滴定溴化物、用钡盐滴定硫酸盐等。
在生物化学中，比浊法广泛用于测定液体食品中细菌的生长量及氨基酸、维生素和抗生素等。
根据悬浮体系中粒子的沉降速度与其半径的平方成正比的原理，比浊法可用于不同大小粒子沉降速度的监测和粒子大小的分类。
分析过程当光束通过一含有悬浮质点的介质时，由于悬浮质点对光的散射作用和选择性的吸收，使透射光的强度减弱。
在比浊法中，透光度和悬浮物质浓度的关系类似于朗伯－比尔定律（见紫外-可见分光光度法）的数学式：数学式式中s为浊光度（或浊率）,表示由于悬浮物的散射作用而引起的光强度衰减;I0和I分别为入射光强度（通过纯溶剂）和透射光强度(通过混浊样品)；b为光程长度；c为悬浮质点的浓度；K为常数，有时又叫浊度系数,其值与粒子的大小、形状、入射光的波长、悬浮物和介质的折射率有关。
疫比浊检验技术原理与进展
半抗原 + 蛋白质（载体） ＝ 完全抗原。
1、抗原与抗体
半抗原
+
载体
抗体
B
Th
完全抗原
B
B
B
Th
半抗原—载体效应示意图 半抗原 + 蛋白质（载体） ＝ 完全抗原
抗原决定簇：抗原分子存在的能TCR/BCR或抗体Fab片段特异性结合的特殊化学基团，是免疫应答特异性的物质基础。
当复合物小于入射波长时呈全透射， 透射与散射相当
比浊测定法原理示意图
免疫比浊技术分类：
01
按光路
02
透射免疫比浊 散射免疫比浊
03
按测定时间
04
终点比浊 速率比浊
05
按增敏剂
06
无增敏 PEG增敏 胶乳增敏
07
三、免疫比浊技术原理
透射比浊法和散射比浊法光路
检测器A
检测器B
IC
I0
Iθ
I
凝集与沉淀 比浊 电位、微天平
非标记免疫检测技术
放射性核素标记 酶标记、荧光标记和胶体金标记 化学发光物标记或偶联化学发光反应
标记免疫检测技术
3、免疫学检测技术
二、免疫沉淀
凝集：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为凝集反应（agglutination）是最经典的免疫学检测技术。
02
抗体（antibody, Ab）功能性概念
免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）结构性概念
是由抗原刺激而产生并能与刺激其产生的抗原发生特异性结合的、具有免疫功能的球蛋白。抗体主要存在血清中，也存在于如呼吸道粘膜液、小肠粘膜液、唾液以及乳汁等其它体液中。
卫生资格《检验技士》预习资料 免疫浊度法
卫生资格《检验技士》预习资料免疫浊度法区分误差和不确定度很重要，因为误差定义为：被测量的单位结果和真值之差。
由于真值往往不知道，故误差是一个理想的概念，不可能被确切地知道。
但不确定度是可以一个区间的形式表示，如果是为一个分析过程和所规定样品类型做评估时，可适用于其所描述的所有测量值。
因此，测量误差与测量不确定度无论从定义、评定方法、合成方法、表达形式、分量的分类等方面均有区别。
当可溶性抗原与相应抗体在两者比例适宜时，抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反响液出现浊度，如形成的复合物增加，反响液的浊度随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。
按照仪器设计的不同分为透射比浊仪测定法和散射比浊仪测定法。
测定方法又可分为速率法和终点法。
凝胶内沉淀试验是利用可溶性抗原和相应抗体在凝胶内扩散，形成浓度梯度，在抗原与抗体浓度比例恰当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。
凝胶支持物的种类：凝胶支持物的种类有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙酰胺凝胶等。
不同分子量的物质在凝胶中扩散速度不同，藉此可用以识别不同待测物分子量的差异。
免疫电泳技术实质上是在直流电场作用下的凝胶扩散试验。
它的原理是将凝胶扩散置于直流电场中，在一定的条件下，抗原及抗体离解成为带正电或负电的电子，在电场中向异相电荷的电极移动，所带净电荷量越多、颗粒越小，泳动速度越快，反之那么慢。
由于电流加速了抗原、抗体的运行速度，缩短了两者结合的时间，加快了沉淀现象的产生。
当有多种带电荷的物质电泳时，由于静电荷不同，而区分成不同区带，使抗原决定簇不同的成分得以区分。
影响因素有：①电场强度;②溶液pH;③离子强度;④电渗等。
免疫浊度实验报告处理
免疫浊度实验报告处理引言免疫浊度实验是一种常见的免疫学实验方法，它通过测定样品的浊度来评估免疫反应的程度。
免疫反应的浊度与抗原-抗体反应的强度成正相关，因此测定免疫浊度可以为科研人员提供重要的实验数据。
本实验报告将介绍免疫浊度实验的原理、实验步骤以及数据处理方法。
实验原理免疫浊度实验的原理主要涉及两个方面：抗原-抗体反应和浊度测定。
1. 抗原-抗体反应：在实验中，我们通常将抗原与抗体进行反应。
当抗原与抗体结合时，会产生可见的免疫沉淀，导致溶液变浑浊。
抗原-抗体结合的强度与免疫沉淀的量成正相关。
2. 浊度测定：浑浊溶液的浊度可以通过光学密度测定来评估。
在实验中，我们通常使用光谱分析仪器或光度计来测定样品的光学密度。
光学密度越高，说明溶液越浑浊。
实验步骤1. 制备样品：首先，准备需要检测浊度的样品。
根据实验设计的不同，可以是生物组织、细胞培养物、血清或其他含抗原的溶液。
2. 免疫反应：将样品与相应的抗体进行免疫反应。
反应时间和温度需要根据实验要求来确定。
3. 溶解和混匀：通过溶解、混匀等操作，使免疫沉淀均匀分布在溶液中。
4. 测定浊度：使用光学密度测定仪器对样品进行测定。
按照实验设计的要求选择合适的波长进行测量。
5. 实验重复：为了保证实验结果的可靠性，应该重复实验，并计算平均浊度值。
数据处理在免疫浊度实验中，我们通常需要对数据进行处理和分析来得出有意义的结果。
以下是一些常见的数据处理方法：1. 平均浊度值计算：根据进行的多次实验测定值，计算平均浊度值。
这样可以减小误差，并提高结果的可信度。
2. 统计学分析：使用适当的统计方法对测定值进行分析，比如方差分析、t检验等。
这可以帮助确定结果之间是否存在显著差异。
3. 曲线拟合：如果实验中存在多个浓度的样品，可以通过对浊度与浓度之间的关系进行曲线拟合，得出相关的方程式。
这种方法可以帮助进一步推断样品的浓度。
4. 图表展示：将测定结果以图表形式展示出来，有助于直观理解实验结果。
关于免疫浊度分析的原理
关于免疫浊度分析的原理
免疫浊度分析是一种常用的实验技术，用于测量溶液中特定抗原或抗体的浓度。
其原理基于免疫反应的特性和光散射现象。
在免疫浊度分析中，首先将待测溶液与特定的抗体或抗原结合形成免疫复合物。
这种免疫复合物会导致溶液中的颗粒或聚集物的形成。
免疫复合物的形成引起了溶液中的光散射增加，导致浊度上升。
光散射是光经过微小颗粒或介质时发生的现象。
散射的程度与颗粒的大小、形状、浓度和光波长有关。
在免疫浊度分析中，浊度可以通过测量溶液中散射光的强度来确定。
常见的测量方法包括使用光散射仪器或光密度计。
在测量过程中，光经过待测溶液时会发生散射，散射光会被探测器接收并转化为电信号。
然后，根据接收到的电信号强度，可以计算出溶液的浊度。
浊度与溶液中免疫复合物的浓度呈正相关关系。
因此，通过测量浊度可以推断特定抗原或抗体在溶液中的浓度。
需要注意的是，免疫浊度分析是一种相对定性的方法，通常无法直接得到溶液中抗原或抗体的精确浓度。
因此，实际应用中可能需要结合其他技术或标准曲线来
进一步定量分析。
免疫浊度法的原理与分类
免疫浊度法的原理与分类
免疫浊度法（Immunoturbidimetry）是一种常用的免疫分析方法，用于测定体液样品中的特定物质浓度。
其原理基于免疫反应中抗原与抗体结合形成免疫复合物的性质。
免疫浊度法分为两类：直接测定法和间接测定法。
1. 直接测定法：
直接测定法是指将已知浓度的标准品或标准曲线与待测样品中的抗原免疫反应，测定其复合物的浓度。
该方法的测定过程通常包括以下步骤：
a. 准备含有抗原的标准品溶液，根据其浓度制备不同浓度的标准品系列。
b. 将标准品系列和待测样品分别与相应的抗体试剂混合，使抗原与抗体发生特异性结合反应生成免疫复合物。
c. 混合物产生的免疫复合物会在一定时间内沉淀，形成混浊的溶液。
浊度的变化与抗原的浓度成正比。
d. 通过比较待测样品和标准品系列的浊度差异，确定抗原的浓度。
2. 间接测定法：
间接测定法是指通过测定抗原与抗体结合后引起的抗体多聚体或其他化学反应产生的光学性质的变化，来间接测定抗原的浓度。
该方法的测定过程通常包括以下步骤：
a. 准备含有抗原的标准品溶液，根据其浓度制备不同浓度的标准品系列。
b. 将标准品系列和待测样品分别与相应的抗体试剂混合，使抗原与抗体发生特异性结合反应。
c. 添加溶液或试剂，使抗体结合引起的免疫反应产生一定光学性质的变化，如颜色、荧光等。
d. 使用光学方法，测定光学性质变化的程度或强度与抗原浓度的相关性，并将待测样品的测定结果与标准品系列进行比较，确定抗原浓度。
通过免疫浊度法，可以快速、准确地测定体液样品中特定物质的浓度，广泛应用于临床诊断和实验室研究。
免疫浊度测定终点法和速率法
免疫浊度测定终点法和速率法说起免疫浊度测定，可能很多人听了会一脸懵逼，觉得这跟自己有什么关系。
其实呀，这种测定方法在很多领域都非常重要，尤其是在临床诊断和环境监测中。
免疫浊度测定有两种常见的测定方式，一种叫终点法，一种叫速率法。
今天就给大家聊聊这两种方法，听起来复杂，实则简单，只要你能听懂我接下来要讲的这些，搞懂它们就不再是难事了。
咱们得搞明白“免疫浊度”到底是什么。
简单来说，免疫浊度测定是利用抗原抗体反应的原理来测量样品中的某些物质含量。
把这个反应弄成一个个“雪球”，雪球越来越大，浑浊度就越来越高。
这个浑浊度呢，就是我们需要测量的“免疫浊度”，通过它可以判断样品中到底有多少这种物质。
听起来是不是有点高大上？但其实原理就是这么简单：越多物质，越浑浊，反应越强烈。
接着咱们聊聊免疫浊度测定的两种方法。
终点法和速率法其实就是测量浑浊度变化的两个不同角度。
先说终点法，顾名思义，这就是让你等到反应完全完成了再测量一次。
换句话说，就是给反应充足的时间，让抗原抗体之间的结合完全发生，形成了最大量的沉淀，这时候的浑浊度就能反映出样品中的物质浓度。
这个过程吧，有点像做饭，得等米饭蒸熟了，才能判断好不好吃。
终点法的优势就是准确，反应完成后，能得到比较稳定的数据。
不过，也有个小问题，那就是整个反应需要时间，得等一段时间才能得到结果。
所以，如果急需知道结果的话，可能就有点拖沓了。
再说速率法，这个和终点法相比，就像是个急性子，做事迅速不拖拉。
速率法是通过测量反应初期的变化速度来预测最终的浑浊度。
简单来说，反应一开始，浑浊度的变化比较快，这时候我们就测量这个变化的速度，结合已知的反应条件，就能大致推测出样品的浓度。
速率法的好处就在于快速，反应刚开始时测量，几分钟就能出结果，特别适合那些急需结果的场合。
可是，速率法也有它的缺点，那就是准确性稍差，毕竟它并没有等到反应完全结束，所以结果的波动可能会比终点法大一些。
大家一定会想，这两种方法，哪个更好呢？其实吧，关键看你需求啥。
免疫浊度法的临床应用
免疫浊度法的临床应用免疫浊度法是一种常用的生物化学分析方法，主要用于定量测定溶液中特定物质的浓度。
它基于抗原与抗体结合后形成机械稳定的免疫复合物，在一定波长下测定复合物的浊度来推断样品中抗原或抗体的含量。
这种方法在临床诊断中具有广泛的应用，本文将从原理、优势以及具体应用方面来探讨免疫浊度法在临床中的重要性。
原理及优势免疫浊度法的原理在于对样品中特定抗原与抗体结合后形成复合物的特性进行测定。
当抗原与抗体相互结合后，形成可被光束散射的颗粒团簇，从而造成溶液的浊度增加。
利用光度计测定免疫复合物的浊度，可以间接推断抗原或抗体在样品中的浓度。
这种方法不仅操作简单、快速，还具有高灵敏度和特异性，可以用于各种类型的生物样本的检测。
在临床应用中，免疫浊度法具有许多优势。
首先，该方法对于微量物质的检测非常敏感，可以达到低至微克/毫升的检测下限。
其次，免疫浊度法不需要昂贵的仪器设备，只需要常见的光度计即可完成测定，成本较低。
此外，免疫浊度法还可以实现高通量和自动化操作，适用于临床实验室中大批量样本的检测，提高工作效率。
临床应用免疫浊度法在临床诊断中的应用广泛。
首先，该方法可以用于各类感染病原体的检测。
例如，流感病毒、结核杆菌等病原体的快速检测就常采用免疫浊度法。
通过测定患者样本中特定抗体或抗原的浓度，可以快速筛查感染情况，为临床诊断提供重要参考。
其次，免疫浊度法也常用于肿瘤标志物的检测。
肿瘤标志物的检测是癌症早期筛查的重要手段，通过测定患者血清或尿液中特定肿瘤标志物的浓度，可以及早发现潜在的肿瘤病变。
免疫浊度法具有灵敏度高、准确性好的特点，适用于各类肿瘤标志物的检测。
此外，免疫浊度法还可以用于免疫药物浓度的监测。
在临床治疗中，一些药物需要监测其在体内的浓度，以确保治疗效果和安全性。
免疫浊度法可以针对药物与其代谢产物之间的特异性反应，测定样本中药物的浓度，为临床用药提供指导。
总结免疫浊度法作为一种常见的生物化学分析方法，在临床中有着重要的应用价值。
实验十三 免疫浊度试验
医学免疫学实验指导实验十三免疫浊度试验由长沙达尔锋生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。
BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。
BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。
BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。
【实验目的】掌握免疫浊度测定的原理，熟悉其操作方法，了解其应用及意义。
【实验原理】抗原和抗体在液相中反应，所形成的免疫复合物使液相出现浊度，复合物的量与浊度呈正相关。
这种浊度可以反射、散射和吸收入射的光线，使入射光衰减，因此可通过测定透射光衰减（以A值表示）或散射光强度来检测抗原抗体反应。
本实验以常用透射比浊法检测人血清IgG为例。
在反应系统中IgG抗体过量时，所形成的免疫复合物与血清IgG量呈正相关，而形成的浊度大小与入射光的衰减呈正相关，因此测定A值反映液相中的抗原量，通过参照标准曲线或标准品数值的计算，即可得知待测血清中IgG含量。
【实验用品】1.标本：待测人血清、标准血清（混合正常人新鲜血清）、人IgG标准品（或冻干人血清IgG 参考标准）。
2.PEG溶液：PEG 6000-8000 4.0g、NaF 1.0g、Na2HPO4•12H2O 10.15g、NaH2PO4•2H2O 1.0g、NaN3 0.1g，加蒸馏水至100ml。
3.其他试剂：羊抗人IgG抗血清、生理盐水、蒸馏水。
4.主要器材：分光光度计（721或731等）、水浴箱、微量移液器、刻度吸管、试管等。
免疫浊度技术
免疫浊度技术免疫浊度技术介绍：免疫浊度技术早期主要用于血清、尿和脑脊液中蛋白质含量的测定。
免疫浊度技术是利用可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。
当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出样品的含量。
目前免疫浊度技术主要用于各种蛋白质、载脂蛋白、半抗原(如激素、毒物和各种治疗性药物等)及微生物等检测。
免疫浊度技术正常值：一般是呈阴性结果。
免疫浊度技术临床意义：异常结果：1、免疫功能监测：免疫球蛋白G、A、M，免疫球蛋白轻链κ、λ，补体C3、C4测定。
2、心血管疾病监测:载脂蛋白A、B，脂蛋白(a)，C-反应蛋白等。
3、炎症状况监测:C-反应蛋白，a-酸性糖蛋白，触珠蛋白，铜蓝蛋白等。
4、风湿性疾病检测：ASO、RF、CRP5、肾脏功能检测：尿微量白蛋白，a-微球蛋白，β-微球蛋白，转铁蛋白，免疫球蛋白G等。
6、营养状态监测：白蛋白，前白蛋白，转铁蛋白等。
7、凝血及出血性疾病的检测：抗凝血酶Ⅲ，转铁蛋白，触珠蛋白等。
8、血脑屏障监测：脑脊液白蛋白，免疫球蛋白G、A、M。
需要检查的人群：一般要求免疫力低下者检查，新生儿和孕妇也要做某些项目的检查。
免疫浊度技术注意事项：不合宜人群：无特殊要求。
在服用免疫力药物时最好不要检查。
检查前禁忌：一般是早晨空腹抽血检查，因此禁忌暴饮暴食和剧烈运动。
检查时要求：注意伪浊度的影响：伪浊度形成原因很复杂，主要是抗血清含有非特异性的交叉反应性杂抗体成分;增浊剂浓度和反应时间掌握不当;样品本身的浊度处理不当;试剂的污染和变质;器材尤其是比色杯等不够清洁等因素。
免疫浊度技术检查过程：免疫浊度技术是利用可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。
当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出样品的含量。
免疫浊度测定原理
免疫浊度测定原理
免疫浊度测定的基本原理是根据米歇尔逊-莫雷散射定律，即光束透
过颗粒或粒子悬浮液时产生散射现象。
在光线透过样品时，悬浮液中的颗
粒会散射光线，造成光的强度减弱。
测量散射光的强度变化可以反映出悬
浮液中的颗粒浓度或粒子大小。
在免疫浊度测定中，首先将待测样品与专一性抗体结合，形成抗原-
抗体免疫复合物。
然后，通过将样品光学透射度与标准曲线或标准样品的
光学透射度进行比较，可以定量测定待测样品中抗原或抗体的浓度。
免疫浊度测定的准确性和可靠性主要取决于几个因素，包括抗原与抗
体的亲和性和特异性、光源的稳定性、仪器的灵敏度等。
在选择抗原和抗
体时，需要确保它们具有足够的专一性和亲和力，以免造成误差。
同时，
光源的稳定性也非常关键，因为光的强度变化会直接影响测量结果的准确性。
除了免疫复合物的散射能力，还有其他因素可能对测定结果产生影响，例如溶剂的化学性质、光路的干扰等。
因此，在进行免疫浊度测定时，需
要对这些因素进行正确的控制，以保证测定结果的准确性。
总结来说，免疫浊度测定是一种通过测量免疫复合物散射光的强度变
化来定量测定抗原或抗体浓度的方法。
它基于米歇尔逊-莫雷散射定律，
通过比较样品的光学透射度与标准曲线或标准样品的光学透射度来确定待
测样品中抗原或抗体的浓度。
免疫浊度测定需要考虑抗原与抗体的亲和性
和特异性、光源的稳定性、仪器的灵敏度等因素，以保证测定结果的准确性。
免疫测定
实验器材和材料
试剂 1.羊抗人IgG抗血清、 2.IgG标准品（含量10g/ L ） 、待检血清 3.稀释液（PEG 6000 43.5g、NaF 21.0g、NaCl 9.0g、 NaN3 1.0g，加蒸馏水溶解后补水至1000ml，3号玻璃滤器 过滤，室温保存） 仪器
水浴箱、酶联免疫检测仪、微量振荡器 。
免疫浊度测定
（Immunoturbidimetry）
免疫浊度测定是将液相内的沉淀试验
与现代光学仪器和自动分析技术相结合的 一项分析技术。
原 理
当可溶性抗原与相应抗体特异结合 ，二者比例合适时，在特殊的缓冲液中 它们快速形成一定大小的抗原抗体复合 物，使反应液体出现浊度。利用现代光 学测量仪器对浊度进行测定，可推算出 免疫复合物的量，从而检测抗原含量。
表1 各孔加样量
孔编号
1:10抗体 （ul）
1
200
2
200
3
200Leabharlann 42005
200
6
200
7
200
8
210
各抗原稀 释度
加抗原量 （ul） 各孔总量
1：128
1：64 1：32
1：16
1：8
1 ：4 1 ：2
10
10
10
10
10
10
10
0
210
210
210
210
210
210
210
210
5.微量振荡器上混匀1min，置37℃水浴箱30min。
1.抗人IgG血清要求效价高（双向扩散效价 1:32以上）而且特异性强。 2.标准曲线须与待检样品同时制备，不可一 次做成，反复应用。 3.操作中最好设置质控血清孔，建立室内质 控，以保证实验的精确度。
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原理：
一．
人血清或血浆中免疫球蛋白G/A/M与 其相应抗体（羊抗人免疫球蛋白 G/A/M血清）在液相中相遇，立即形 成抗原-抗体复合物，并形成一定浊 度。与通过同样处理的校准血清比较 ，即可计算出样品中免疫球蛋白 G/A/M含量。
试剂盒组成：
R：
IgG试剂：羊抗人IgG血清 消脂剂 R： IgA试剂：羊抗人IgA血清 消脂剂 R： IgM试剂：羊抗人IgM血清 消脂剂 STD：免疫球蛋白G/A/M校准血清
贮存： 一． 本试剂密闭避光贮存2～8℃稳定12个 月。 参考值范围： 一． IgG：8.00～16.00g/L 二． IgA：0.70～ 3.30g/L 三． IgM：0.50～ 2.20g/L
数据评估
检验技术－－免疫浊度测定
IMMUNOASSAY
授课教师：郑军
I A
免疫测定分类
免疫浊度测定 标记免疫测定 g ~ ng ng ~ pg
免疫浊度测定
免疫沉淀反应
海德堡曲线 Heidelberg’s Curve
Ag * Ab
测定范围
抗体 过剩
抗原 过剩
抗原浓度
免疫浊度测定分类
透射浊度法 散射浊度法
透射浊度法
浑浊样品 I0 光源 I
(透射浊度法)
检测器A
检测器B
(散射浊度法)
抗体试剂的要求
1 2 3 4 特异性 亲和力 反应时保持抗体过剩 测定范围应包括高于及低于 正常值的50% 5 测定的精密度应在5%左右
校正曲线：聚乙二醇的增强作用
吸光度 4%聚乙二醇
不加聚乙二醇
C1
C2
C3
抗原浓度
速率散射浊度法
基本原理：是一种抗原抗体结合反应 的动态测定法。速率即指在抗原抗体 反应的测定过程中，每一单位时间内 两者结合的速度，将各单位时间内抗 原与抗体形成复合物的速率及复合物 颗粒形成的散射信号连接在一起，即 形成动力学分析方法。
Measure the RATE After Antibody Addition
周到的样本处理系统 · 原试管上机 · 全面条形码系统 · 真正的急诊插入 · 样本检测项目的随机组合
如何正确阅读自动化浊度分析 仪的说明书
规格：
一．
二．
三．
R IgG 1× 50ml 普通瓶型 R IgA 1× 50ml 普通瓶型 R IgA 1× 50ml 普通瓶型
用途：
一．
本试剂用于测定血清或血浆中免疫球 蛋白IgG、IgA及IgM的含量。适用于 半/全自动生化分析仪。
Time
1. Buffer addition 2. Sample Addition 3. Antibody addition
免疫浊度测定分类
终
速
点
率
法
法
终
点
法
定时散射比浊分析 Fixed time nephelometry
基本原理：
一．
免疫沉淀反与散射比浊分析相结合的 技术。沉淀反应是在抗原抗体相遇后 立即进行，到沉淀形成信号变化巨大 影响散射的精确度，因此进行检测时 会人为的进行几秒的延迟。
一． 二．
3. 准确度：不准确度≤15% 4. 空白吸光度：试剂在340nm处， 10mm光径下，吸光度应小于0.150。
注意事项
一．
二． 三． 四．
1. 如果样品中Ig含量超过测定范围，则用生 理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。 2. 试剂与样品量可根据需要按比例改变。 3. 试剂使用后立即关紧瓶盖，避免污染。 4. 试剂变混浊或空白吸光度值大于0.150， 将不能使用，应弃去。
NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析
Benefits Ability to expand the menu into high sensitivity assays including: Ferritin, Digoxin, and IgE.
NIR eliminates the interference of biological substances such as biliribin and hemoglobin.
激光光源
免疫浊度 自动分析系统
先进独特的原理 · 两种技术(透射法+散射法)，四种方法： - 速率散射比浊法(蛋白检测) - 速率抑制散射比浊法(TDM) - 近红外颗粒速率法免疫分析(Rate NIPIA) - 速率抑制NIPIA(低分子量TDM)
严密的仪器运行系统 · 真正24小时待机 · 检测速度达每小时180测试 · 液面探测系统全程监控反应过程 · 试剂冷藏系统－增加试剂稳定性 · 自动校正光源
Rate Nephelometry
Scatter
3
2 1 Time
1. Buffer addition 2. Sample Addition 3. Antibody addition
First derivative: rate of change of scatter over time; this is the SLOPE of the curve
简便的操作系统 · 四个缓冲液位－完成1400个测试 · 39个半永久性反应杯 · 灵活的系统界面：触屏、鼠标、键盘 · 每日保养少于1分钟 · 穿刺式试剂盖，不需开关瓶 · 一次编程72个样本，每个样本24个项目 · 完善的用户自定义系统，与原装试剂同时运行
准确稳定的结果 · 真正实现抗原过量检测(所有项目)，避免假阴性结果 · NIPIA排除生物活性物质非特异性干扰 · 稳定的原装试剂：开瓶效期18-24个月 · 单点定标，有效期超过28天 · 完善的用户自定义系统，与原装试剂同时运行
性能指标
1. 测定范围：
一． 二． 三．
IgG：0.00～40.00g/L，γ≥0.99 IgA：0.00～ 6.20g/L，γ≥0.99 IgM：0.00～ 5.08g/L，γ≥0.99
2. 精密度：
一．
二．
三．
IgG：批内、批间平均CV分别为2.5% ；4.5% IgA：批内、批间平均CV分别为3.5% ；7.0% IgM：批内、批间平均CV分别为3.5% ；7.0%
透射浊度法和散射浊度法的光路
浑浊样品 I0 光源 I
(透射浊度法)
检测器A
检测器B
(散射浊度法)
反应物含量与散射浊度
遵守Heidelberger Curve。 内容：当抗体量恒定时，抗原与抗体结合，
形成免疫复合物的反应与散射光信号响 应值的上升成正比。同时散射信号亦随 抗原抗体结合时间的增加而曲线上升。
Rate
在速率峰基础上完成的标准曲线
RATE
CONCENTRATION
速率法的特点：
测定的是抗原抗体反应的第一阶段。 快速，灵敏度高，可检测微量样品。 检测的是速率，因此理论上讲不受本 底影响。
抗原过剩的测定
ARRAY抗原过量自动检测
加入校正液
抗体过量时的反应
抗原过量时的反应
0 60 85 反应时间(秒)
样品要求：
一．
样品为空腹血清、血浆（肝素抗凝， 0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液；EDTA抗 凝，1.8mgEDTA可抗1.0ml血液）。样 品应在低温条件下运输保存，样品中 Ig在2～8℃保存可稳定7天，冰冻保 存可稳定3个月。
基本参数：
一． 二．
三．
方 法：终点法 主波长： 340nm 度： 37℃ 副波长： 700nm 间： 10min
Nephelometry
Scatter
3 2 1
Adding antibody causes a large increase in light scattering
Adding sample increases scatter slightly
Fluid in the cell has causes little scatter
反应温
反应时
操作
一．
具有个人特征性。
ห้องสมุดไป่ตู้
计算及校准及质控
一．
二．
三．
使用多点非线性/样条函数校准模式由仪器自 动生成校准曲线后测定样品含量或以各标准 管浓度值作为横坐标，吸光度变化值作为纵 坐标，手工绘制校准曲线图，查阅该图即可 得样品含量。 1. 建议使用四川迈克科技公司提供的Ig校准 品进行校准。 2. 推荐使用卫生部临检中心提供的免疫质控 品进行室内质控。
NIPIA：近红外颗粒速率法免疫分析
优点
扩展检测菜单，增加高敏项目分析： 如铁蛋白，地高辛 ，IgE，超敏CRP等 近红外波长分析消除生物物质如胆 红素和血色素的干扰
NIR：940nm波长
近0oC检测角
检测颗粒大小：200~500nm直径 速率法测定
NIPIA：
940nm LED光源
速率散射法：670nm
What happens inside the flow cell?
Analyte-antibody complexing
Too small to detect optically
Now big enough to scatter light
Analyte
Antibody
Other stuff
Scatter Signal Versus Time