常用临床病原学检测

AmpC酶的产生与抗生素诱导有关，三代头孢、克拉维酸、亚胺培南均为强诱导剂。
药物 AMP AMC TZP KZ COX CTX FEP ATM ETP FM
MIC(µg/ml) 敏感性
药物
MIC(µg/ml)
≥32
R
IPM
≤1
≥32
R
AK
16
≥128
R
GN
4
≥64
LOREM
R
IPSUM
DOTOLBOR
头孢泊肟≤17mm（或MIC≥8ug/ml)
确 头孢他啶≤22mm（或MIC≥2ug/ml) 证 头孢噻肟≤27mm（或MIC≥2ug/ml)
头孢曲松≤25mm（或MIC≥2ug/ml) 氨曲南≤27mm（或MIC≥2ug/ml)
头孢他啶/克拉 维酸-头孢他啶
和 头孢噻肟/克拉 维酸-头孢噻肟
初 头孢泊肟≤22mm（或MIC≥8ug/ml)
氨苄，美洛，替卡
• 头孢噻吩 肠杆菌科
拉定，氨苄，克罗
• 万古霉素s 所有
替考拉宁s
• 奈啶酸 肠杆菌科
所有FQs
报告结果方式
✓ 敏感（S）
▫ 用常规用量治疗有效 ▫ 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC
5倍以上。
✓ 耐药（R）
▫ 用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 ▫ MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
✓ MRSA对当前所有使用的b-内酰胺类药物均耐药（除具 有抗MRSA活性的新的头孢菌素外，如：头孢洛林）。
✓ 值得注意的是：由于罕见非mecA介导的苯唑西林耐药 机制，即mecA阴性但苯唑西林MIC是耐药（ mecA ≥4 µg/ml）的菌株，应报告苯唑西林耐药。
筛选高水平氨基糖苷类耐药的肠球菌
✓ 2.病原体特异性抗原检测
----用已知抗体，借且免疫荧光技术、酶联免疫技术、化学发光技 术、胶乳凝集试验、对流免疫电泳等技术检测标本中未知的病原体 抗原。
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形态学检查
革兰氏染色
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✓ （三）病原体的分离培养和鉴定
微生物
细菌培 养
培养分 类
血培 养
真菌培 养
自动培 养
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细菌鉴定
•形态学检查 •生物化学检查法 •免疫学检查法 •分子生物学检查法
分离平板
O数值鉴定的流程
调配菌液
测试组合
孵育 鉴定结果
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结果判读
查询编码 册或软件
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3.免疫学检查法
免疫学检查又叫血清学检查，它是利用抗体-抗原反应 在细菌感染的种类、性质、部位及病人的感染程度进行特 异性诊断，包括： ✓沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体相混合，在一定条件 下，形成肉眼可见的沉淀物 。应用于如链球菌、肺炎链 球菌、鼠疫耶尔森菌的鉴定 ✓凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体可发生特异性结合， 在一定条件下出现肉眼可见的凝集小块。用于沙门菌、志 贺菌、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、布氏杆菌、流感嗜 血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌及链球菌等的鉴定。 荚膜肿胀试验：常用于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和炭疽 芽胞梭菌等检测。 ✓制动试验：主要用于霍乱弧菌的快速鉴定。
➢ 然而，为了流行病学调查或感染控制目的仍可测 试ESBL。
✓ 氨苄西林测试结果可用于预报阿莫西林结果。
✓ 在许多国家供货有限药物（如，拉氧头孢、头孢尼西、头孢 孟多和头孢哌酮）的解释标准没有被评估，假如考虑使用这 些药物治疗大肠埃希菌、克雷伯菌或变形杆菌引起的感染， 应执行ESBL试验：如果分离菌株ESBL试验阳性，应报告以上 药物为耐药。
报告结果方式
O中介 (I)
• MIC接近血、体液中药物的浓度，治疗反 应率低于敏感株
• 药物生理浓集部位有效 (尿－FQ) • 加大用药剂量可能有效
非敏感（NS）：由于没有耐药菌株或耐药菌发
生罕见，此分类特指仅有敏感解释标准的分离菌株。
ESBL筛选和确证
大肠埃希菌
肺炎克雷伯菌
初 筛
产酸克雷伯菌
4
≥64
R
CIP
≥4
≥64
R
LEV
≥8
2
S
TE
2
≥16
R
SXT
≤20
≤0. 5
S
SPZ
14(KB法）
≥512
R
ESBL筛选
敏感性 S S S S R R S S R -
MRSA筛选
• 解读：
✓ 头孢西丁是被用于检测mecA介导苯唑西林耐药的替代 品；根据头孢西丁结果来报告苯唑西林敏感或耐药。
✓ 筛选阳性表示该菌存在mecA介导的苯唑西林耐药，属 于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。
注明标本来源和检验目的。
3.正确运送！
ห้องสมุดไป่ตู้
如：棉拭子宜用运送培养基；可能混有正常菌群的标本不能用肉汤培 养基运送；血培养瓶室温运送；尿液标本不能及时送检时，可4℃冷
藏，但若用于淋病奈瑟菌培养时则需室温保存和运送；胸腹水等无菌
体液可用无菌小瓶送检，也可直接注入血培养瓶中送检，等等。当标
本不能及时送检时，应使用运送培养基。
❖ 头孢噻肟或头孢曲松治疗脑膜炎需用最大剂量
❖ 为了在常见感染的脓肿和/或血供差的组织中达到最佳药物 浓度，治疗厌氧菌感染推荐用最大抗菌药物剂量。当使用 最大剂量，并进行适当的辅助治疗，如外科引流和清创术 等，对厌氧菌感染的治疗极其重要。
❖ 由于大部分革兰阳性微生物是b-内酰胺酶阴性，因此，推 荐青霉素和氨苄西林作为首选；但对于革兰阴性微生物则 否，由于大多产b-内酰胺酶。
✓ 对四环素敏感的菌株也被认为多西环素和米诺环素敏感。然 而，对四环素中介或耐药的某些菌株可以对多西环素或米诺 环素或二者敏感。
• ESBL筛选阴性，但1-3代头孢菌素类（R），β-内酰氨酶抑制剂组成的复方制剂（R）： 提示该菌株可能为高产AmpC酶，此时对所有青霉素类、1-3代头孢菌素类、氨曲南及头 霉素均耐药。 可以选用碳青霉烯类（如亚胺培南、美洛培南）或四代头孢（头孢吡肟）。 易产生诱导型AmpC酶的菌株主要有：肠杆菌属、沙雷菌属、枸橼酸杆菌属。而高产
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预报用药
测试药 菌名 推测其它药物的敏感性
• 苯唑西林 葡萄球菌
所有β-内酰胺类
• 四环素 所有（除葡
多西环素，米诺环素
萄球菌和不
动杆菌〕
• 红霉素
G＋球菌 罗红霉素，克拉霉素，阿奇霉素
• 克林霉素 所有
林可霉素
预报用药
测试药 菌名
推测其它药物的敏感性
• 氨苄西林 肠球菌
青霉素
• 青霉素G 葡萄球菌
4.安全运送！
----标本在运送过程中保证无渗漏、无污染等。
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二、微生物检查方法
✓ （一）直接显微镜检测法 （即形态学检查）
----涂片染色法：常用的有革兰染色、抗酸染色，主要用于直接观 察细菌形态、染色性状或观察宿主细胞内包涵体的特征等。 ----悬滴法或压片法：需借助暗视野显微镜或相关显微镜，主要用 于观察病原体的生长、运动方式、螺旋体的形态或动动。
筛 奇异变形杆菌
头孢他啶≤22mm（或MIC≥2ug/ml) 头孢噻肟≤27mm（或MIC≥2ug/ml)
=抑菌圈直径增
确 大值≥5mm(或 MIC减低≥3个
证 倍比稀释度）
判为产ESBL
目前国家规定需监测ESBLs的菌株是：大肠埃希菌、 肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变性杆菌。
ESBL解读：
（一）ESBLs 阳性（+）：
•生物学检查法
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细菌鉴定
形态学
✓革兰染色镜检 ✓真菌湿片镜检 ✓抗酸染色镜检 ✓墨汁染色
菌落特征
✓菌落大小 ✓菌落颜色 ✓溶血特点 ✓产色素情况 ✓气味
生化鉴定
G-菌：氧化酶、 OF ✓葡萄球菌属： 触酶、凝固酶 ✓b溶血链球菌： 血清凝集试验 ✓肠球菌属：高 盐、胆七试验
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1.形态学检查
• 一、观察细菌的培养特征来判断，观察内容包括：细菌培养物的颜色 、气味、溶血性、菌落形态、细菌动力及在液体、半固体、固体培养基 中的生长状态；
➢ 若实验室采用CLSI M100-S19及之前的标准，则需 要将所有青霉素类、头孢菌素类和氨曲南修订为 耐药。
➢ 当使用当前的解释标准时（采用CLSI M100-S26标 准），在报告结果前不再需要常规测试ESBL（即， 不再需要将青霉素类、头孢菌素类或氨曲南结果 从敏感修正为耐药）。（即检测为敏感即为敏感， 耐药即为耐药）。
5.安全采集：
采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染。同时也 要注意安全，防止传播和自身感染。
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✓ （二）微生物标本运送的一般原则：
1.及时送检！
----标本采集后应立即送至微生物学实验室。
----标本采集后在室温下超过2h未送达实验室者可视为不合格标本。
2.标识无误！
----送检标本必须与检验申请单有相同的唯一标识，而且送检标本应
药代动力学和药效学
O 药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄 O 药效学：药物对机体的作用 ➢ 时间依赖型（％T>MIC〕：β－内酰胺类，大环内酯类 ➢ 浓度依赖型（AUC/MIC比率〕：AGS, FQ
• 这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案
选药原则
➢ 主要根据细菌种类和抗生素作用机制选药。 选择试验的药物应具有确切的临床疗效，试验药 物的体外试验结果可以接受，并且试验药物具有 代表性。
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3.方法得当：
即根据检测的目的菌采用适宜的方法。如，厌氧菌、需氧或兼性厌 氧菌，以及L型菌采用的方法不同。如尿液标本，疑为厌氧菌感染时， 应以无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取；若怀疑是需氧或兼性 厌氧菌的感染。则可通过自然导尿获取标本。