肠球菌、溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基
溶血性链球菌及检验
溶血性链球菌及检验一、生物学特性1、形态与染色链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链状排列，长短不一，从4-8个至20-30个菌细胞组成不等，链的长短与细菌的种类及生长环境有关。
在液体培养基中易呈长链，固体培养基中常呈短链，由于链球菌能产生脱链酶，所以正常情况下链球菌的链不能无限制的延长。
多数菌株在血清肉汤中培养2-4h易形成透明质酸的荚膜，继续培养后消失。
该菌不形成芽胞，无鞭毛，易被普通的碱性染料着色，革兰氏阳性，老龄培养或被中性粒细胞吞噬后，转为革兰氏阴性。
2、培养特征需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。
最适生长温度为37℃，在20-42℃能生长，最适pH为7.4-7.6。
在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。
在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株溶血不一。
3、生化反应分解葡萄糖，产酸不产气，对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七叶苷的分解能力因不同菌株而异。
一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，触酶阴性。
4、抗原结构链球菌的抗原构造较复杂，主要有三种：（1）核蛋白抗原或称P抗原，无特异性，各种链球菌均相同。
（2）多糖抗原或称C抗原，系群特异性抗原，是细胞壁的多糖组分，可用稀盐酸等提取。
（3）蛋白质抗原或称表面抗原，具有型特异性，位于C抗原外层，其中可分为M、T、R、S四种不同性质的抗原成分，与致病性有关的是M抗原。
5、分类根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其溶血性质分为三类。
（1）α-溶血性链球菌：菌落周围有1-2mm宽的草绿色溶血环，也称甲型溶血，这类链球菌多为条件致病菌。
（2）β-溶血性链球菌：菌落周围形成一个2-4mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环，也称乙型溶血，因而这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强，常引起人类和动物的多种疾病。
肠球菌属标准操作规程
肠球菌属标准操作规程1.概述肠球菌属于1984年从链球菌属划出，单独成为一个菌属，包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、坚韧肠球菌、铅黄肠球菌、蒙氏肠球菌、海氏肠球菌、鹑鸡肠球菌和病臭肠球菌等18个种和1个变异株。
临床上常见的菌株为粪肠球菌。
2.标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。
3.鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链状排列。
3.2 培养特性在血琼脂平板上形成较小、灰白色，有a 溶血或β溶血环的菌落。
在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。
3.3 生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇、山梨醇、胆汁七叶苷试验阳性、在含6.5%氯化钠的肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在65g/L 氯化钠中生长，胆汁、七叶苷试验阳性，45℃中生长。
3.4.2与屎肠球菌的鉴别：粪肠球菌不分解阿拉伯糖，而屎肠球菌能分解阿拉伯糖3.4.3 与链球菌属和乳球菌属的鉴别：见表5-353.4.4 粪肠球菌与其他各主要菌种间的鉴别：见表5-36操作步骤3.5.1 触酶试验阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.2 鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析在β-内酰胺酶阴性球菌肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。
青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。
粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。
对于血培养和脑脊液中分离到的肠球菌，需做β-内酰胺酶检测，β-内酰胺酶阳性，则对青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。
肠球菌、溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基
葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养匹克氏肉汤基础APick’s Broth BaseA用途：用于溶血性链球菌的增菌培养肉浸液肉汤培养基Meat Infusion Broth用途：用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养（GB标准）叠氮钠葡萄糖肉汤Azide Dextrose Broth 用途：用于链球菌的增菌培养乙基紫叠氮钠肉汤用途：用于链球菌的增菌培养KF链球菌琼脂KF Streptococcus Agar 用途：用于链球菌的选择性分离及计数（GB、SN标准）肠球菌琼脂(胆盐－七叶苷－叠氮钠琼脂)Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 用途：用于食品和水中肠球菌的计数CATC琼脂CATC Agar 用途：用于食品和饮料肠球菌的分离培养胆盐七叶苷琼脂Bile Esculin Agar用途：用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养哥伦比亚血琼脂基础Columbia Blood Agar Base 用途：营养非常丰富，用于各种细菌的基础培养基LIM培养基LIM Medium 用途：用于链球菌的分离培养（Japan方法）BETA-SSA琼脂BETA-SSA Agar用途：用于链球菌的选择性分离培养粪肠球菌琼脂Enterococcus faecalis Agar 用途：用于粪肠球菌的选择性分离缓冲蛋白胨水Buffered Peptone Water 用途：用于阪崎杆菌前增菌培养（GB2008标准）胆汁液态培养基Bile broth用途：用于粪链球菌的胆汁耐受试验。
M-肠道菌琼脂M-Enterococcus Agar用途：用于水中或其它物质中肠球菌分离培养和计数（滤膜法或划线法）THB培养基THB Medium 用途：用于链球菌增菌培养PS琼脂PS Agar 用途：用于消化球菌的培养肠球菌肉汤Enterococcus Broth 用途：用于肠球菌增菌培养脑心浸液肉汤（BHI）Brain Heart Infusion Broth 用途：用于细菌的增菌培养脑心浸萃液肉汤Brain Heart Infusion Broth 用途：用于营养苛求细菌的增菌培养脑心浸液琼脂（BHIA）Brain Heart infusion Agar 用途：用于营养苛求细菌的增菌培养Pfizer肠球菌选择性琼脂（PSE琼脂）Pfizer Enterococcus Selective Agar 用途：用于粪链球菌的选择性分离和计数（SN标准）MEI培养基MEI Medium 用途：用于一步滤膜法显色检测或计数水中的肠球菌。
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验.
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3．1 温箱：36±1℃。
3．2 水浴：36±1℃。
3．3 显微镜。
3．4 离心机。
3．5 试管架。
3．6 灭菌平皿。
3．7 灭菌小试管。
3．8 载玻片。
3．9 灭菌吸管：1 mL、10 mL。
3．10 灭菌镊子。
3．11 均质器。
3．12 酒精灯。
3．13 接种环。
4 培养基和试剂4．1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4．2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定。
4．3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28 中4.62 规定。
4．4 血琼脂平板：按GB 4789.28 中4.6 规定。
4．5 人血浆。
4．6 0.25%氯化钙。
4．7 灭菌生理盐水。
4．8 杆菌肽药敏纸片（含 0.04 单位）。
5 检验程序6 操作步骤6．1 样品处理称取 25 g 固体检样；称取25 mL 液体检样，加入 225 mL 灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6．2 一般培养将上述混悬液吸取 5 mL，接种于 50 mL 葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经 36±1℃培养 24 h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6．3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径 0.5～1 μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者 20～30 个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。
肠球菌属的检验实训报告
一、实训目的1. 熟悉肠球菌属的生物学特性。
2. 掌握肠球菌属的分离、鉴定和药敏试验方法。
3. 培养微生物检验的基本技能和实验操作规范。
二、实训时间2023年4月15日三、实训地点微生物实验室四、实训材料1. 标本：尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等。
2. 培养基：营养肉汤、血琼脂平板、叠氮胆汁七叶苷琼脂、麦康凯琼脂等。
3. 鉴定试剂：革兰染色液、触酶试剂、胆汁七叶苷试剂、6.5%NaCl耐受试验试剂等。
4. 药敏纸片：青霉素、氨苄西林、万古霉素、庆大霉素等。
5. 仪器设备：显微镜、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、移液器等。
五、实训方法1. 标本采集与处理采集尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等标本，按照无菌操作原则进行采集。
将标本接种于营养肉汤中，37℃恒温培养24小时。
2. 初步分离取培养后的肉汤，采用涂片、染色、镜检等方法进行初步分离。
观察菌落形态，选择可疑菌落进行进一步鉴定。
3. 鉴定（1）挑取可疑菌落，进行革兰染色、镜检，观察菌落形态。
肠球菌属为革兰阳性球菌，呈短链排列，卵圆形。
（2）进行触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl耐受试验。
肠球菌属对触酶、胆汁七叶苷和6.5%NaCl具有耐受性。
（3）将可疑菌落接种于血琼脂平板，37℃恒温培养24小时。
观察菌落形态，判断溶血情况。
肠球菌属在血平板上为溶血或不溶血。
（4）对具有临床意义的肠球菌进行生化试验，如糖发酵试验、吲哚试验等，以鉴定到种。
4. 药敏试验将鉴定后的肠球菌接种于麦康凯琼脂平板，贴上青霉素、氨苄西林、万古霉素、庆大霉素等药敏纸片，37℃恒温培养24小时。
观察抑菌圈大小，判断菌种对药物的敏感性。
六、实训结果1. 标本采集与处理：成功采集到尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等标本，并进行了接种培养。
2. 初步分离：从培养后的肉汤中分离出可疑菌落，进行革兰染色、镜检，形态符合肠球菌属。
3. 鉴定：经触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl耐受试验，确定为肠球菌属。
粪肠球菌粪链球菌使用说明
放置会导致菌种衰退；
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才
能正常生长；
4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时 来电询问； 5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌 氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态； 6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要 5-‐10%CO2 促 进生长； 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。 保 藏 条 件 ： -‐20℃保存（复溶液于 2-‐8℃保存） 保 藏 时 间 ： 2-‐10 年，应根据菌种状况及时转接
保存方式： 30%甘油，-‐80℃
操作说明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面
蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次
数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
粪肠球菌粪链球菌
编号
名称
北京华越洋生物 NRR00300
粪肠球菌粪链球菌
基 本 信 息 ：
名称：粪肠球菌粪链球菌
规格：300ul 甘油菌
中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌 株 复 壮 ：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培
养。细菌在 30-‐35℃培养箱中培养 24-‐48h，真菌在 23-‐28℃培养箱中培养
24-‐72h（必要时，可适当延长培养时间）。
储存温度：-‐80℃
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。
因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。
1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。
病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。
对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。
2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。
若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。
3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。
另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。
4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。
如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。
【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。
细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。
一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。
穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。
2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。
伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。
3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。
不同培养基对肠球菌的检测效果比较
农产 品加工 ・ 学刊 Ａ ａ ｅ ｃＰ ｒ ｄｃｌ ｆ ａｍ ｒｄ ｃ ｒｃｓｉｇ ｃｄｍｉ ｅｉ ｉ ｒ Ｐｏ ｕｔ Ｐｏｅｓ ｏ ａ ｏＦ ｓ ｎ
Ｎｏ １ ．
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文 章 编 号 ：１７ — ６ Байду номын сангаас （０ ２ ０ — １９ ０ ６ １９ ４ ２ １） １ ００ — ２
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（ｕｈ ｕＥ ｔ — ｘ ｓｅｔ ｎａ ｄＱ ａａ ｔ ｅＢ ｒａ ，Ｊ ｎ ｓ ，Ｓ ｚｏ １ ４ ｈｎ ） Ｓ ｚｏ ｎ ｙ ｅｉＩ ｐ ｃｏ ｎ ｕｒｎｉ ｕｅｕ ｉ ｇｕ ｕｈｕ２ ５ ０ ，Ｃ ｉ ｒ ｔｎ ｉ ｎ ａ １ ａ
和准 确 性 。 关键词 ：肠球菌 ；培养基 ；最近似值测定法
中图分类号 ：Ｑ ３３ ２ ９． ３
文献标 志码 ：Ａ
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链球菌属及其检验「微生物检验」
链球菌属及其检验「微生物检验」链球菌属(Streptococcus)细菌，呈链状排列的革兰阳性球菌，个别种成双排列。
广泛分布于自然界、人及动物肠道和健康人鼻咽部，大多数不致病，致病菌可引起各种化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病。
下面是yjbys店铺为大家带来的关于链球菌属细菌的知识，欢迎阅读。
⒈分类链球菌的分类方法尚未统一。
常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象：分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
⑵根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D …等20个群。
同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。
如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。
对人致病的链球菌菌株，主要是 A群，多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性⑴链球菌① 形态染色球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。
无芽胞，无鞭毛。
多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的荚膜。
革兰染色阳性。
②分离培养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。
多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。
在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
链球菌及肠球菌鉴定说明
链球菌及肠球菌鉴定试剂使用说明书 3.4【原理】：本试剂盒用于体外标本中细菌（链球菌及肠球菌）的鉴别培养。
【试剂盒组成】：① 10或20个鉴定板(培养基) ② 10或20张结果记录单。
③操作说明书1份【本试剂盒所需显色试剂及配制方法】： VPⅠ：5% α-萘酚无水乙醇溶液。
VPⅡ：40% KOH水溶液。
【贮存及效期】：2-8℃贮存，效期见外标签。
【操作】：1.菌落的选择●根据革兰氏染色，触酶等确定菌株属链球菌科。
记录溶血类型（这组成第22个测试结果）。
●挑取单个菌落在哥伦比亚羊血琼脂平板上均匀涂抹整个表面。
(如疑为肺炎链球菌应涂2个平板最合适)●根据菌株生长条件在厌氧或好氧条件下于35-37℃培养18-24小时。
注：一般菌在培善24小时后可产生足够大的菌落。
有些菌落太小应培养48小时后才选择菌落。
对营养苛求菌(在48小时后只产生小菌落)，应将培养菌落种于1ml增菌培养基中，置35-37℃培养5小时。
用整个培养物注入哥伦比亚羊血琼脂平板上。
2.接种●取出试验板条，平衡于室温。
在鉴定试条伸出的边沿处标上菌株编号。
●取无菌蒸馏水3ml，将培养18-24小时的目的菌洗脱下来,制成菌悬液，使其浊度相当于4号McFarland标准浊度。
●将调制好的菌悬液按每孔100ul，加入试验板条中。
除VP孔外，每孔滴加液体石蜡2滴覆盖。
（为防止VP孔蒸干，可在未加试剂的三个孔中各加蒸馏水100-200ul）●盖上盖子，放35～37℃孵育18～24小时，取出按判读标准判读自然发生的结果和加入反应试剂后出现的结果（滴加VP试剂于相应孔中观察），并记录在记录单上。
●将反应结果输入计算机BIO-KONT STREP软件得到鉴定结果。
使用后的所有的玻璃管、玻璃片、吸头、试条及试验纸条等均须高压灭菌处理。
【质量控制】：为保证试验条的质量试验板条启封后应保持干燥，尽量无菌操作。
BIO-KONT STREP试剂盒的质量检查推荐用以下菌株进行。
肠球菌属的鉴定要点
肠球菌属的鉴定要点
肠球菌属的鉴定要点
肠球菌属（Enterococcus）是革兰阳性球菌的一类，是一些重要且广泛存在于人和动物肠道中的细菌。
此类细菌是病原菌和医院感染的主要来源之一，因此对于肠球菌属的鉴定显得尤为重要。
本文将从形态特征、生理生化特性以及分子生物学方法等方面介绍肠球菌属的鉴定要点。
形态特征
从形态特征方面，肠球菌属的细菌在革兰染色结果中通常呈现革兰阳性，球形或椭圆形，直径一般为0.5-1.5 μm，有一定的链状或成对排列现象。
在培养基上进行培养时，其菌落呈灰白色或白色，表面多呈平坦或凹陷状，粘度较高，可形成微嗅气味。
生理生化特性
除了形态特征外，还可通过生理生化实验鉴定肠球菌属。
在营养需求方面，肠球菌属偏爱碱性环境，常常能够生长在高盐分和多种碳源的基础培养基中，低温、低氧和高CO2浓度的环境中也可适应生长。
在酶学反应方面，肠球菌属是鲜奶酪加工过程中极为常见的乳酸菌，表现出强烈的产酸、产气和哑巴菌特性。
分子生物学方法
除了生理生化实验外，分子生物学方法也成为肠球菌鉴定的一种新的手段，比如PCR扩增和16S rRNA基因测序等方法。
这些方法的出现对于鉴定肠球菌属的种类和种群密度起到了很大的帮助，同时也大幅度增加了鉴定的准确性。
在进行PCR扩增时，常常会采用16S rRNA 基因作为检测的目标基因，从而通过对其序列的分析来进行细胞种类的识别。
总之，对于肠球菌属的鉴定来说，在形态特征、生理生化特性以及分子生物学方法方面都有着相应的鉴定要点。
我们需要结合多种方法进行鉴定，从而保证准确性和精度。
同时也需要注意防止肠球菌的传播和感染，保障我们的健康和生命安全。
肠球菌属标准操作规程
肠球菌属标准操作规程1.概述肠球菌属于1984年从链球菌属划出，单独成为一个菌属，包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、坚韧肠球菌、铅黄肠球菌、蒙氏肠球菌、海氏肠球菌、鹑鸡肠球菌和病臭肠球菌等18个种和1个变异株。
临床上常见的菌株为粪肠球菌。
2.标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。
3.鉴定3.1形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链状排列。
3.2培养特性在血琼脂平板上形成较小、灰白色，有a 溶血或0溶血环的菌落。
在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。
3.3生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇、山梨醇、胆汁七叶苷试验阳性、在含 6.5%氯化钠的肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。
3.4鉴别要点3.4.1本菌特征革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在65g/L氯化钠中生长，胆汁、七叶苷试验阳性，45℃中生长。
3.4.2与屎肠球菌的鉴别：粪肠球菌不分解阿拉伯糖，而屎肠球菌能分解阿拉伯糖3.4.3与链球菌属和乳球菌属的鉴别：见表5-353.4.4粪肠球菌与其他各主要菌种间的鉴别：见表5-36操作步骤3.5.1触酶试验阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.2鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20 最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析在台内酰胺酶阴性球菌肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。
青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。
粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。
对于血培养和脑脊液中分离到的肠球菌，需做B-内酰胺酶检测，B-内酰胺酶阳性，则对青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。
为耐万古霉素肠球菌做氯霉素、红霉素、四环素和利福平药敏试验，根据结果进行治疗。
肠球菌、溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基
葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养Pick ' s Broth BaseA用途：用于溶血性链球菌的增菌培养pH 值7.3-7.5 25 C原理：胰蛋白胨、牛心浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子；脱纤维兔血〔或羊血〕为溶血性链球菌提供大量生长因子；结晶紫和叠氮钠为选择性抑菌剂。
用法：称取本品，加热溶于1000ml蒸馏水中，分装,121 C高压灭菌15分钟，冷至50C左右时，参加脱纤维羊血，混匀。
质量控制：在36 ±1 C培养18-24小时。
Meat Infusion Broth用途：用于溶血性链球菌、蜡样芽抱杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养〔GB标准〕配方：〔g/L〕原理: 蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；氯化钠可维持均衡的渗透压。
用法：称取本品，溶解于1000ml蒸馏水中,121C高压灭菌15分钟，备用质量控制：在36 ±1 C培养18-24小时。
Azide Dextrose Broth 用途：用于链球菌的增菌培养用途：用于链球菌的增菌培养KF Streptococcus Agar 用途：用于链球菌的选择性别离及计数〔GB、SN标准〕肠球菌琼脂胆盐-七叶苷-叠氮钠琼脂Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 用途：用于食品和水中肠球菌的计数CATC Agar用途：用于食品和饮料肠球菌的别离培养Bile Esculin Agar 用途：用于肠球菌和肠道致病菌的别离培养配方：〔g/L〕Columbia Blood Agar Base 用途：营养非常丰富，用于各种细菌的根底培养基用法：称取本品39克，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121 C高压灭菌15分钟，冷至45-50'C左右时, 参加相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素，混匀，倾入无菌平皿。
微生物检验实验室链球菌属标准操作规程
微生物检验实验室链球菌属标准操作规程1. 概述链球菌是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。
该菌属种类繁多，目前临床上仍延用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。
2.标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3.鉴定3.1 形态与染色：革兰阳性球菌，固体培养基上单个或成双排列，较少呈链状排列；肉汤培养基中呈长链排列；从脓液、尿液和痰液等标本直接涂片镜检，呈单个、成双或短链排列。
3.2 培养特性：在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：a溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；B溶血周围有明显较大的完全透明环；。
溶血（不溶血）无异常变化。
周围有灰绿色的狭窄溶血环；肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色溶血环。
3.3 生化反应：触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。
肺炎链球菌分解菊糖，胆汁溶菌试验阳性，Optochin试验敏（抑菌环>14mm）。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征：革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小、可出现：a溶血、B溶血或不溶血，触酶试验阴性。
3.4.2根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群：A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。
B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。
C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：CAMP试验、马尿酸钠、65g/L氯化钠耐盐试验均为阴性，杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。
D群非肠球菌（马肠链球菌、牛链球菌、变形链球菌等）：胆汁七叶苷试验阳性，65g/L氯化钠耐盐试验为阴性。
D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌和坚忍肠球菌等）：胆汁七叶苷、65g/L氯化钠耐盐试验阳性，45℃生长。
现归属于肠球菌属。
C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。
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葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养配方：（g/L）牛肉粉氯化钠蛋白胨磷酸氢二钾葡萄糖pH值7.5 ± 0.1 3.0 5.0 10.0 2.0 10.0 25℃原理：蛋白胨、牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钾为缓冲剂；葡萄糖提供碳源。
用法：称取本品 30.0g,煮沸溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：在36±1℃培养24小时。
质控菌株ATCC生长情况溶血性链球菌（10-8）+++单增李斯特氏菌27853 （10-8）+++大肠杆菌25922 +/-沙门氏菌14028 +/-匹克氏肉汤基础APick’s Broth BaseA用途：用于溶血性链球菌的增菌培养配方：（g/L）胰蛋白胨牛心浸粉叠氮钠结晶紫pH值7.3-7.5 10.0 20.0 0.065 0.002 25℃原理：胰蛋白胨、牛心浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子；脱纤维兔血（或羊血）为溶血性链球菌提供大量生长因子；结晶紫和叠氮钠为选择性抑菌剂。
用法：称取本品 30.0g,加热溶于1000ml 蒸馏水中,分装, 121℃高压灭菌 15 分钟, 冷至 50℃左右时,加入脱纤维羊血,混匀。
质量控制：在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株ATCC生长情况溶血现象溶血性链球菌+++ +（大）单增李斯特氏菌27853 ++ +（小）大肠杆菌25922 - -沙门氏菌14028 - -肉浸液肉汤培养基Meat Infusion Broth用途：用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养（GB标准）配方：（g/L）牛肉粉氯化钠蛋白胨磷酸氢二钾pH值7.5 ± 0.1 3.0 5.0 12.0 2.0 25℃原理：蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；氯化钠可维持均衡的渗透压。
用法：称取本品 20.0g,溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株菌株编号生长情况其它特征溶血性链球菌ATCC32210 +++ 浑浊金黄色葡萄球菌ATCC25923 +++ 浑浊大肠埃希氏菌ATCC25922 +++ 浑浊沙门氏菌ATCC14028 +++ 浑浊叠氮钠葡萄糖肉汤Azide Dextrose Broth 用途：用于链球菌的增菌培养配方：（g/L）胰蛋白胨牛肉浸粉氯化钠葡萄糖叠氮钠pH值7.0 - 7.4 15.0 4.5 7.5 7.5 0.2 25℃原理：胰蛋白胨和牛肉浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；葡萄糖提供碳源；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌。
用法：称取本品 34.7g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装， 121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株菌株编号生长情况其它特征肠球菌+++ /大肠埃希氏菌ATCC25922 - /粪肠球菌ATCC29212 +++ /金黄色葡萄球菌ATCC25923 - /乙基紫叠氮钠肉汤用途：用于链球菌的增菌培养配方：（g/L）酪蛋白胨酵母浸粉13.5 6.5葡萄糖氯化钠磷酸氢二钠磷酸二氢钠叠氮钠乙基紫pH值7.0±0.2 5.05.0 2.72.70.40.00083 25℃原理：酪蛋白胨和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供碳源；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠和磷酸二氢钠做缓冲剂；乙基紫作为指示剂。
用法：取本品 35.8g,溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：KF链球菌琼脂KF Streptococcus Agar用途：用于链球菌的选择性分离及计数（GB、SN标准）配方：（g/L）月示蛋白胨酵母粉甘油磷酸钠氯化钠麦芽糖乳糖叠氮钠琼脂溴甲酚紫pH值7.2±0.2 10.0 10.0 10.0 5.0 20.0 1.0 0.4 13.0 0.015 25℃原理：月示胨和酵母粉提供氮源、维生素和生长因子；麦芽糖和乳糖为可发酵糖类；氯化钠维持均衡的渗透压；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌；琼脂是培养基的凝固剂；溴甲酚紫为指示剂染料。
用法：称取本品 69.4g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,冷却至50-60℃时,加入无菌1%TTC溶液10ml, 混匀,倾入无菌平皿,备用。
质量控制：在36±0.5℃下培养48h。
菌名菌号生长状况培养特征粪性链球菌CMCC(B)32223 良好红色或粉红色中心大肠埃希氏菌ATCC25922 被抑制＿＿肠球菌琼脂(胆盐－七叶苷－叠氮钠琼脂)Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar)用途：用于食品和水中肠球菌的计数货号：HB0133-3配方：（g/L）牛肉浸粉胰酪蛋白胨酵母粉牛胆粉氯化钠七叶苷柠檬酸铁铵叠氮化钠柠檬酸钠琼脂pH值7.1 ± 0.2 3.0 17.0 5.0 10.0 5.0 1.0 0.50.251.0 13.5 25℃原理：胰酪蛋白胨和牛肉浸粉、酵母粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；细菌水解七叶苷和柠檬酸铁铵中铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素；柠檬酸钠、牛胆粉和叠氮化钠为选择性抑菌剂，抑制非链球菌的细菌；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：称取本品 56.3g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至45±1℃，倾入含1ml样品液平皿中约15ml培养基，混匀，凝固。
35±2℃倒置培养基培养24±2h。
注：从保温开始至做成平板时间不要超过4h。
质量控制：在36±0.5℃培养24小时。
菌名菌号生长状况培养特征粪链球菌CMCC(B)32223 良好棕黑色，具有棕色晕轮金黄色葡萄球菌ATCC6538 被抑制——大肠埃希氏菌ATCC25922 被抑制——CATC琼脂CATC Agar用途：用于食品和饮料肠球菌的分离培养配方：（g/L）胰酪蛋白胨酵母浸粉磷酸二氢钾柠檬酸钠吐温80碳酸钠叠氮钠红四氮唑(TTC)琼脂pH值7.0± 0.2 15.0 5.0 5.0 15.01.02.0 0.4 0.1 15.0 25℃原理：胰酪蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、维生素和矿物质，磷酸二氢钾是缓冲剂。
琼脂是培养基凝固剂。
用法：称取本品 58.5g ,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至 50~55℃时，倾入无菌平皿，备用。
质量控制：胆盐七叶苷琼脂Bile Esculin Agar用途：用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养配方：（g/L）蛋白胨牛胆盐柠檬酸铁七叶苷琼脂pH值7.1 ± 0.2 8.0 20.00.51.0 15.0 25℃原理：蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子；细菌水解七叶苷和柠檬酸铁中铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素；牛胆盐为选择性抑菌剂，抑制非链球菌的细菌；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：称取本品 44.5g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制：在36±1℃培养22-24小时。
质控菌株ATCC生长情况黑色肠球菌（10-7）+++ +大肠杆菌25922 （10-7）+++ -金黄色葡萄球菌25923 - /哥伦比亚血琼脂基础Columbia Blood Agar Base用途：营养非常丰富，用于各种细菌的基础培养基配方：（g/L）酪蛋白胰酶消化物心胰酶消化物玉米淀粉肉胃酶消化物酵母浸出粉氯化钠琼脂PH值10.0g 3.0g 1.0g 5.0g 5.0g 5.0g 10.0g 7.3±0.2原理：酪蛋白胰酶消化物、肉胃酶消化物、心胰酶消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、维生素和氨基酸；淀粉能促进奈瑟氏菌的生长和增强链球菌的溶血特性；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：称取本品 39克，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15分钟，冷至45-50℃左右时，加入相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素，混匀，倾入无菌平皿。
质量控制：在30-35℃培养18-24小时。
质控菌株菌株编号生长情况其它特征金黄色葡萄球菌ATCC 25923 良好有黄色色素单增李斯特氏菌ATCC 19114 良好无色透明小菌落大肠埃希氏菌ATCC 25922 良好无色透明大菌落沙门氏菌ATCC 14028 良好无色大菌落铜绿假单胞菌CMCC 10104 良好有绿色色素LIM培养基LIM Medium用途：用于链球菌的分离培养（Japan方法）配方：（g/L）牛肉粉胰蛋白胨葡萄糖碳酸氢钠氯化钠磷酸氢二钠pH值7.8 ± 0.1 10.0 20.0 2.0 2.0 2.0 0.4 25℃原理：胰蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供碳源；氯化钠维持均衡的渗透压磷酸氢二钠作为缓冲剂。
用法：取本品 36.4g,溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,待培养基冷至 45-50℃时，加入多粘素 E10mg 和萘啶酮酸 15mg ,混匀质量控制：BETA-SSA琼脂BETA-SSA Agar用途：用于链球菌的选择性分离培养配方：（g/L）蛋白胨大豆蛋白胨氯化钠麦芽糖15.0 5.0 5.0 0.25琼脂抑菌剂pH值7.1 - 7.5 13.0 0.0262 25℃原理：蛋白胨和大豆蛋白胨提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠可维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：取本品 38.3g,溶解于1000ml 蒸馏水中,115℃高压灭菌 20 分钟,冷至 50℃左右时，无菌加入5-10%的脱纤维羊血，混匀，倾入无菌平皿。
质量控制：粪肠球菌琼脂Enterococcus faecalis Agar用途：用于粪肠球菌的选择性分离配方：（g/L）月示胨麦芽糖酵母浸粉甘油磷酸钠氯化钠乳糖溴甲酚紫叠氮钠TTC琼脂pH值7.2 ± 0.2 10.0 20.0 10.0 10.0 5.0 1.0 0.015 0.4 0.1 13.0 25℃原理：月示胨和酵母浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；乳糖是大肠菌群可发酵的糖类；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌；溴甲酚紫和TTC作为指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。
用法：取本品 70.0g , 加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,煮沸5 分钟,冷至50℃左右，倾入无菌平皿，备用。