HIV-1病毒载量试剂1技术参数

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全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)

全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS（2015年修订版）中国疾病预防控制中心二○一五年十二月前言艾滋病在我国的流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群的变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。

为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。

本次《规范》修订工作立足于我国目前检测状况，结合发达国家使用的指南，主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；（2）增加了HIV-1新发感染检测一章；（3）新增补充试验概念,其内容包括抗体确证试验（WB，RIBA/LIA等）和核酸试验（定性和定量试验）；（4）增加了第4代试剂（抗原抗体联合检测试剂）的检测流程；(5)增加核酸检测流程；(6)完善了检测报告。

将抗体筛查和复检报告整合为 HIV抗体筛查检测报告，增加HIV-1核酸检测报告和婴儿艾滋病感染早期诊断检测报告，取消了流行病检测HIV抗体检测报告单、艾滋病病毒抗体检测数和阳性人数统计报表、艾滋病职业暴露个案登记表和艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表；（7）取消实验室生物安全一章和艾滋病检测实验室质量管理一章。

国产全自动hiv-1核酸定量检测试剂盒的性能评价

剂盒相当的国产试剂盒迫在眉睫[8]。目前，国内已有厂商自主研发了一些HIV-1核酸定量检测试剂盒，并用于临床检测，但准确性、敏感性尚不明确。本研究拟对国产全自动HIV核酸检测试剂的主要性能进行评估，并与进口试剂进行比对，探讨其临床应用的可行性。 1 材料和方法 1.1 样本
收集巴中市疾病预防控制中心2018年2—5 月210例临床样本，其中男127例、女83例，年龄15～68岁。感染HIV-1的样本190例，非HIV-1 感染样本20例。所有样本均采用乙二胺四乙酸二钾抗凝， 1 000×g离心15 min，吸取上层血浆待测。所有样本均无重度溶血、变质及反复冻融等情况。 1.2 仪器与试剂
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检验医学 2020 年 2 月第 35 卷第 2 期 Laboratory Medicine，February 2020，Vol. 35，No. 2
自东北制药集团辽宁生物医药有限公司。cobas AmpliPrep/cobas Taq-Man全自动核酸提取纯化及实时荧光定量PCR检测系统购自瑞士罗氏公司。待测试剂为NEPG全自动HIV-1核酸定量检测试剂盒（简称国产NEPG HIV-1试剂，批号
2018001），购自东北制药集团辽宁生物医药有限公司。参比试剂为cobas AmpliPrep cobas TaqMan HIV-1 Test v2.0试剂盒（简称进口HIV-1 试剂，批号Y06193），购自瑞士Roche公司。2 种试剂盒的技术参数见表1。
表1 国产NEPG HIV-1试剂和进口HIV-1试剂的技术参数
核酸提取方法纳米磁珠法
纳米磁珠法
定量原理内标定量
外标定量
1.3 方法 1.3.1 准确性将灵敏度/定量参考品用参考品稀释液稀释成低（5.0×102 IU/mL）、中（5.0×103 IU/mL）、高（5.0×104 IU/mL）3个浓度，采用国产NEPG HIV-1试剂检测，每个浓度重复检测3次，计算均值。将检测结果用lg函数转换成对数值。绝对偏差=测定结果均值的对数值-预期值的对数值。根据我国医药行业标准 YY/T 1182—2010中的要求，绝对偏差≤±0.5个对数数量级为符合要求。 1.3.2 灵敏度将灵敏度/定量参考品用参考品稀释液稀释至200、100、50、25 IU/mL，采用国产NEPG HIV-1试剂检测，每个浓度重复检测3 次，计算可检出浓度。 1.3.3 对照试验分别采用待测试剂和参比试剂双盲检测同份一血浆样本，评价2种试剂的符合率和一致性。待测试剂的定性结果判断：如果扩增曲线不呈现S型曲线或循环阈值（cycle threshold，Ct）为0，同时内标检测为阳性，报告为HIV-1 RNA阴性；除此之外，其他情况加上内标检测为阳性均判定为HIV-1 RNA阳性。 1.3.4 单位换算根据基于核酸技术的HIV-1 RNA世界卫生组织第1代国际标准品（NIBSC 97/656）[9]，1拷贝/mL相当于1.67 IU/mL。 1.4 统计学方法

Abbott雅培RealTimeHIV-1病毒载量检测试剂

Abbott雅培RealTimeHIV-1病毒载量检测试剂
包2-病毒载量试剂（雅培）
Abbott雅培RealTi m e HIV-1病毒载量检测试剂技术规格
1．检测项目：HIV-1病毒载量检测
1.1检测亚型：HIV-1型M组(A-H)、O组、N组
1.2检测方法：应用RT-PCR和Real-time实时荧光定量检测技术HIV-1型各组
病毒载量
1.3 检测平台：m2000sp或m24sp自动核酸提取仪或手工核酸提取，m2000rt实
时荧光定量PCR仪
2．定量方式：外部标准品定量
3．技术要求
3.1检测灵敏度: 40 copies/ml（0.6ml、1.0ml样本体积）
3.2特异性：100% ( 95%CI 99.28-100% )
3.3检测范围: 40-10,000,000 copies/ml
3.4检测样本: 血浆(ACD-A、EDTA抗凝)、干血斑
3.5检测样本体积: 可选0.2ml、0.5ml、0.6ml和1.0ml
3.6检测报告单位: copies/ml、log copies/ml、IU/ml、log IU/ml
3.7检测方式: 96孔PCR板
3.8 检测批量：一次检测批量可选24，48，72和96
3.9 内测标准差(SD): ≤0.25 log copies/ml
3.10 内标：添加于裂解液中，与样本一起提取和扩增，质控整个实验流程
3.11 执行标准：VQA和WHO第一届国际HIV-1 RNA定量标准
3.12供货计划：按用户要求数量分批次供货，到货试剂有效期大于10个月。

两种仪器定量检测HIV-1病毒载量比较研究

两种仪器定量检测HIV-1病毒载量比较研究李丽华;余婷婷;丁彩梅;张润武;杨冬梅;王红英;白经;普冬【摘要】目的比较雅培m2000和罗氏AmpliPrep/TaqMan两种全自动分析系统定量检测人类免疫缺陷病毒(HIV)-1病毒载量的一致性,为临床选择高精度检测方法提供参考.方法对30例艾滋病患者血浆标本同时采用雅培m2000全自动分析系统和罗氏AmpliPrep/TaqMan全自动分析仪进行病毒载量测定,比较二者检出率、相关性和一致性.结果雅培m2000全自动分析系统和罗氏AmpliPrep/TaqMan全自动分析仪测得HIV-1病毒载量平均值分别为(2.990±0.284)log copy/mL和(3.100±0.244)log copy/mL,差异无统计学意义(t=1.446,P>0.05);两种检测系统检测出的病毒载量有明显相关性(r=0.968,P<0.001),且与患者的CD4+T细胞数及CD4+/CD8+呈明显直线负相关.结论雅培m2000全自动分析系统和罗氏AmpliPrep/TaqMan全自动分析仪检测HIV-1病毒载量具有较好的相关性和一致性,在实际工作中,均可作为高精度检测HIV-1的可靠方法.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2018(015)024【总页数】4页(P3678-3681)【关键词】HIV病毒载量;雅培m2000全自动分析系统;罗氏AmpliPrep/TaqMan 全自动分析仪;高精度【作者】李丽华;余婷婷;丁彩梅;张润武;杨冬梅;王红英;白经;普冬【作者单位】云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041;云南省昆明市第三人民医院检验科 650041【正文语种】中文【中图分类】R33随着艾滋病(AIDS)防治工作的不断强化，AIDS实验室检测技术也在不断发展，根据《艾滋病资料手册》规定[1]，接受治疗的AIDS患者必须定期检测病毒载量，人类免疫缺陷病毒(HIV)载量检测被认为是目前预示疾病演变、提示开始临床治疗和评估疗效的有效指征[2]。

凯杰HIV说明书

【参考值（参考范围）】
1. 结果分析条件设定阈值(threshold)设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照曲线(无规
则的噪音线）的最高点为准。基线（baseline）应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比
较稳定的一段区域(所有样本荧光信号无较大波动)，起始点（循环数）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（循环数）应比最早出现指数扩增的样本 Ct 值减少 1-2 个循环。【注】具体设置方法请参照各仪器使用说明书。 2. 质控标准 2.1 将校准品 1-4 的浓度值输入，仪器将自动以定量标准品的浓度值为横坐标，以其实际测得的外标 Ct 值为纵坐标给出标准曲线，标准曲线的拟和度的绝对值应大于等于 0.980，否则视为定量结果无效。 2.2 阴性对照 HIV RNA 应为 0.0IU/ml(Ct 值应无数值显示)；强阳性对照 Ct 值≤25.0；强阳性对照 Ct 值≤临界阳性对照 Ct 值≤30.0；否则此次实验视为无效。所有实验从样本处理开始重做。
阳性对照+1 管阴性对照），作好标记。 1.2 在上述每一个管中加入 150μl 裂解液，然后加入待测样本和阴性对
照 50μl，强阳性对照管和临界阳性对照管中先加入强阳性对照和临界阳性对照 25μl，然后加入阴性对照管中的血浆 25μl(切不可将二者混合后加入)，用吸头反复吸打混匀（一份样本换用一个吸头）；再加入 50μl 氯仿，混匀器上振荡混匀 5 秒或颠倒混匀 15 次（不宜过
靶区域是 gag 基因区域中部的一段保守区，长度 102bp。gag 基因位于
HIV-1 基因组的 5’端约 790-2292nt 处，编码核衣壳蛋白等结构蛋白。试
剂盒同时利用荧光探针(Taqman 探针和杂交双探针)检测技术，该探针能

某国产HIV-1核酸定量检测试剂盒的应用性能评估

某国产HIV-1核酸定量检测试剂盒的应用性能评估李梅;王静【摘要】Objective To evaluate the variation and stability of a new domestic nucleic acid quantitative detec-tion kit for human immunodeficiency virus type 1( HIV-1) .Methods A total of 247 blood samples were detected by both the tested kit and the contrast kit approved by SFDA ,when different results were obtained ,the sample was re-examined with HIV-1 vrral load kit producted by Rochecompany .Results The results of 233 samples from the test-ed kit and the control kit were consistant ,and 14 samples were not consistent(8 samples were proved to be positive by the tested kit but to be negative by the control kit .Another 6 samples showed that the difference of the lg values between the two kits were more than 1) .The results weren't consistent reexamined by the revcew kit were in consis-tency with the results from the tested kit .The consistency of the evaluated kit with the control kit and the reexamined ki was 100% .There was a strong overall correlation of the test results between the two methods (r=0 .976 1) .Con-clusion High qualitative consistency and strong correlation between the tested kit and the control kit were found , and the tested kit showed the same sensitivity ,accuracy and consistency with the reexamined kit .%目的：对某国产人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）的临床应用性能进行评估。

病毒载量检测方法及其意义

工效率
6.5小时48份标本
48小时192份标本
二、病毒载量检测的意义

早期诊断婴儿的早期诊断：感染HIV的母亲所生婴儿小于18个月时，不能按照常规检测程序进行抗体检测来确证是否感染了HIV。这种情况下，采集婴儿不同时间的样本进行HIV核酸检测。也可使用集合法对采供血机构的原料血浆及 HIV抗体阴性的高危人群样品进行核酸检测，及时发现窗口期感染者，降低“残余危险度”，预防传播。

指导抗病毒治疗及疗效判定
通常在病毒载量达到一定水平后（如>3500050000拷贝/毫升）抗病毒治疗才显示良好的治疗效果。治疗后通过病毒水平的检测能够确定治疗是否有效。理想的结果是治疗24周后，病毒水平会控制在检测线以下。
.耐药性监测
可用于HIV耐药性检测和监测。治疗后病毒载量得不到有效控制时被认为治疗失败。引起治疗失败的原因之一是病毒对治疗药物的敏感性降低或不敏感，也就是产生了耐药。对病毒载量>1000拷贝/毫升的样本进行耐药性检测对临床医生修改治疗方案有一定的帮助。
Roche
Simens(Bayer)
RT-PCR bDNA 产物为DNA，易发生污染，不对目标进行扩增，只进对实验室区域划分严格行信号放大
检测
辣根过氧化物酶标记检测探针，TMB底物显色用样品OD值和定标物OD 值的比值计算结果，需要稀释扩增产物，检测范围小，并且受酶活性、底物氧化显色的影响每次检测12或24个标本需要设一个阴性、一个弱阳性和一个强阳性对照 48人份/盒每次试验12人份分装一旦打开试剂盒，需要在 1个月内使用完48人份，否则试剂失效 8小时24份标本
标记的探针与该复合体杂交结合。与化学发光底物共同孵育，所产生的光强度与

包病毒载量试剂梅里艾

包4-病毒载量试剂（梅里艾）
生物梅里埃HIV病毒载量试剂技术参数
全自动技术指标
HIV病毒载量检测
生产厂家：生物梅里埃公司
品牌： NucliSens
型号： EasyQ HIV-1
原产国：荷兰
招标要求
1、用于定量检测HIV病毒载量
2、原理：实时NASBA扩增检测
3、线性范围：至少4个数量级（不需要稀释检测）
4、线性动力学范围50 - 10,000,000 IU/mL, 用国际单位/毫升(IU/mL)报告结果
5、特异性：99.7%（95%可信区间98.5-100%）
6、精密度：50 - 3,000,000 IU/mL，0.12 log，≤1,000 IU/mL，0.28 log
7、样品体积：10-2000微升
8、样品处理能力：可以同时提取24个样品中的核酸，可以同时检测48个样品
9、核酸提取速度：24个样品的核酸提取时间约40分钟，一个操作员配合一部提纯仪于8小时内能完成168个标本的提取
10、检测速度： 48个标本扩增检测时间约1小时
11、试剂盒包装规格：扩增检测试剂48人份/盒，核酸提取试剂384人份/盒
12、检测亚型：HIV-1 M组 A-J亚型
13、仪器和HIV病毒载量试剂必须通过国家食品药品监督管理局进口注册
14、供货计划：按用户要求数量分批次供货，到货试剂有效期大于10个月。

艾滋病检测试剂技术参数和要求

艾滋病检测试剂技术参数和要求一、人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）参数和要求▲1、原理：用双抗原夹心法检测标本中的HlV抗体，同时用双抗体夹心法检测标本中的HIVp24抗原；2、方法：酶联免疫试验（ELISA）;3、有效期：到用户指定地点有效期为8个月（含）以上；★4、2017-2019年在全国艾滋病病毒抗体诊断试剂临床质量评估中敏感性均达到100%,特异性不低于99.6%,功效性不低于99.7%;提供评估报告复印件5、获得食品药品监督管理局颁发的医疗器械注册证（提供复印件）；6、HIV-1/2抗体国家阳性参考品（+/+）为20/20;HIV-1P24抗原国家阳性参考品（+/+）为10/10;▲7.可检测样品：人血清或血浆二、HIV/HCV/HBV/梅毒四合一快检试剂参数和要求1、单人份包装；★2、试剂可同时检测血液中的梅毒抗体、艾滋抗体、乙肝表面抗原和丙肝抗体★3、统一加样，全血标本加样总量不超过150μL;4、加样后15分钟内出结果;5、有效期≥24个月，到货后有效期≥15个月；★6、可以检测血清、血浆和全血样品；7、试剂性能可靠，近三年参加过全国HlV抗体诊断试剂临床质量评估：敏感度、特异性、功效率均≥99.0%（须提供报告）★8、具有中国国家食品药品监督管理部门颁发的医疗器械注册证；注：★为必须达到三、人类免疫缺陷病毒I型尿液抗体检测试剂盒（胶体金法）.产品要求：经国家药品监督管理局批准，获得产品注册证；派2.预期用途：可用于体外定性检测人尿液样本中的HIV-1抗体，可用于消费者自检。

（以注册证具体描述为准）3.检测原理：间接法。

▲4.检测方法：胶体金法；5.储存条件及有效期：2・30。

C干造处保存，有效期不少于（可包含）12个月；▲6.包装规格:1人份/盒，单人份包装▲7.判定时间：15min内可以进行结果判定；（以说明书为主）8.灵敏度和特异度：均大于98%（参考说明书临床试验结果）注▲为关键条款，※为必须项。

《中国药典》2020版—乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒 1 型核酸检测试剂盒

附件 3：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒 1 型核酸检测试剂盒Yixing Ganyan Bingdu, Bingxing Ganyan Bingdu, Renlei Mianyi Quexian Bingdu 1 Xing HesuanJiance ShijiheNucleic Acid Testing Kit for HBV DNA, HCV RNA and HIV-1 RNA 本品系由核酸提取试剂、乙型肝炎病毒（HBV）/丙型肝炎病毒（HCV）/人类免疫缺陷病毒1 型（HIV-1）的核酸检测试剂、阴性对照、阳性对照及其他试剂制成，采用核酸扩增和检测技术（如实时荧光-PCR 法、转录介导的扩增（TMA）-化学发光法等）检测人血清或血浆中的HBV DNA、HCV RNA 和HIV-1 RNA。

1基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具等应符合“凡例”的有关要求；生产与检定严格区分在不同的环境区域。

2制造2.1专用原材料2.1.1引物包括扩增HBV DNA、HCV RNA 和HIV-1 RNA 及内标的引物。

引物合成后经HPLC、聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜的方法纯化。

引物序列应与批准的一致，除另有规定外，纯度应达到90%以上，并符合功能性试验的要求。

2.1.2探针包括检测HBV DNA、HCV RNA 和HIV-1 RNA 及内标的探针。

探针合成后经HPLC、聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜的方法纯化，在相应的末端标记适宜的基团（如荧光基团、荧光淬灭基团、吖啶酯或其他基团），再经HPLC、聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜的方法纯化。

探针序列应与批准的一致，除另有规定外，纯度应达到90%以上，并符合功能性试验的要求。

2.1.3扩增用酶根据核酸扩增检测方法，可选用不同的酶或酶的组合，如使用以下的酶，应符合规定。

2.1.3.1逆转录酶应具有逆转录酶活性，无核酸内切酶活性。

cDNA 合成试验、DNase 试验和RNase 试验合格。

HIV-1病毒载量实时荧光定量PCR检测特异性引物对、试剂盒[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010558549.8(22)申请日 2020.06.18(71)申请人北京良芯生物科技发展有限公司地址 102600 北京市大兴区中关村科技园区大兴生物医药产业基地永大路38号6幢4层435室(72)发明人于斌　姜淼　(74)专利代理机构北京国昊天诚知识产权代理有限公司 11315代理人李潇(51)Int.Cl.C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称HIV-1病毒载量实时荧光定量PCR检测特异性引物对、试剂盒(57)摘要本发明涉及生物分子检测领域，具体涉及HIV -1病毒载量实时荧光定量PCR检测特异性引物对、试剂盒。

本发明提供了精确、简便的用于人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV -1)RNA定量检测的特异性引物对。

利用一步法荧光定量RT -PCR技术检测HIV -1病毒载量。

该操作既确保了扩增结果的准确性，灵敏度，又缩短了时间、减少了污染，提高了荧光定量PCR检测方法的简便性，可用于HIV -1定量检测，并且作为临床对HIV -1感染的辅助诊断方法和临床治疗效果的监测手段。

权利要求书1页说明书7页序列表4页附图5页CN 111705164 A 2020.09.25C N 111705164A1.HIV -1病毒载量实时荧光定量PCR检测特异性引物对，其特征在于，所述引物对包括引物对1和引物对2，其中，引物对1包括以下引物：引物1：5’AGTGGGGGGACAYCARGCAGC3’，引物2：5’TACTAGTAGTTCCTGCTATRTCACTTCC3’；引物对2包括以下引物：引物3：5’GACAGCAGAGAYCCAMTTTGG3’引物4：5’TGCCCCTTCACCTTTCCA3’。

人类免疫缺陷病毒1型p24抗原(HIV-1P24)ELISA检测试剂盒简介

人类免疫缺陷病毒1型p24抗原(HIV-1P24)ELISA检测试剂盒简介人类免疫缺陷病毒1型p24抗原(HIV1P24)ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被免疫缺陷病毒1型p24抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUT OFF值相比较，从而判定标本中人类免疫缺陷病毒1型p24抗原（HIV1 P24）的存在与否。

样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的的最佳检测效果。

严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称 96孔配置 48孔配置备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条无阴性对照 0.5mL 0.5mL 无阳性对照 0.5mL 0.5mL 无检测抗原HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释样本稀释液 6mL 3mL 无底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张无说明书 1份 1份无自封袋 1个 1个无试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

病毒载量检测对1型艾滋病病毒的诊断价值分析

Mod Diagn Treat现代诊断与治疗2021Jan32（1）艾滋病是由于感染人类免疫缺陷病毒（HIV）而引发的全身性疾病，该疾病可导致人体出现不同程度的免疫缺陷，且随着病程越长，免疫缺陷越严重，因此应早诊断早治疗，以降低疾病损伤［1］。

HIV分为HIV-1型和HIV-2型，以HIV-1为主。

目前临床多采用免疫印迹实验（WB）确诊艾滋患者，但诊断过程中，仍会出现部分不确定感染患者［2］。

根据技术要求，HIV抗体不确定的样本需要结合同时期流行病学资料，并于4周后进行随访检测，且在随访期间，带型患者有进展但是检测结果并不满足阳性标准的患者，仍需随访至第8周，再次检测，整体耗时2个月，时间较长，可能会增加病毒传播风险，同时可能延误患者早期治疗。

当人体被HIV-1感染后，病毒载量随之增加，且会对淋巴系统进行攻击，从而对机体免疫系统造成损伤，而有部分研究学者认为，病毒载量检测可提高HIV-1的检出率［3］。

基于此，本研究选取我院治疗的128例疑似艾滋病患者作为研究对象，旨在分析病毒载量检测对1型艾滋病病毒的诊断价值。

报道如下。

1资料与方法1.1一般资料选取2018年8月~2020年3月我院收治的128例疑似艾滋病患者，所有患者均进行酶联免疫吸附试验、WB检测，不确定患者进行病毒载量检测。

其中男82例、女46例；年龄26~39（32.31±5.80）岁。

1.2纳入与排除标准纳入标准：（1）近3个月内未服用免疫抑制剂等药物；（2）首次检查；（3）患者同意翻阅病历资料。

排除标准：（1）抗病毒药物治疗史；（2）依从性差、无法完全配合检查；（3）无其他免疫系统疾病。

1.3方法HIV抗体检测程序和方法根据《全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版）》［4］进行。

1.3.1筛查阳性复试实验分别使用北京金豪公司HIV-1+2抗体和珠海丽珠公司HIV-1+2抗原抗体进行两种不同酶联免疫吸附试验。

操作严格按照试剂盒说明书进行。

东北制药HIV病毒载量检测试剂技术参数

东北制药HIV病毒载量检测试剂技术参数
包3-病毒载量试剂（东北制药）
东北制药HIV病毒载量检测试剂技术参数
1.原理和方法：采用磁珠法提取血清或血浆样本中病毒RNA，采用Taqman探针法进行HIV-1的实时荧光定量RT-PCR检测。

2.定量方法：外部标准品定量
3.检测项目：HIV－1RNA定量检测
4.最低检出限：≤50IU/mL（约28copies/mL,置信度≥95%。

）
5.线性范围：2×102~1×109IU/mL
6.特异性：100%。

7.性能指标：Ct值的变异系数＜10%，浓度变异系数＜50%
8.样品类型：血清或血浆
9.样品体积和规格：可选0.2mL、0.4mL；48T/盒
10.样品处理能力：可以同时进行检测8~96个样品
11.检测效率：96个样品的检测时间约为4小时
12.检测亚型：HIV-1A，B，C，D，AE，F，G，AG-GH和O组，共9个亚型
13.抗污染方案：核酸提取及反应体系建立设备：Hamilton Microlab STAR，TECAN EVO全自动液体工作站；核酸扩增设备：ABI7500荧光定量PCR仪。

14.检测平台：核酸提取及反应体系建立设备：Hamilton Microlab STAR，TECAN EVO全自动液体工作站；核酸扩增设备：ABI7500荧光定量PCR仪。

15.注册资格：须提供国食药监械（准）字号注册证。

16.供货计划：按用户要求数量准时分批次供货，到货试剂有效期大于10个月。

HIV-1病毒载量测定及质量保证指南

HIV-1病毒载量测定及质量保证指南HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南（2013 版）Guideline for HIV-1 Viral Load Testing and QualityAssurance中国疾病预防控制中心2013年1月前言随着HIV-1 病毒载量检测在艾滋病临床辅助诊断、抗病毒治疗监测及相关科研工作中的广泛应用，我国开展该项检测工作的实验室日益增多。

自1997 年艾滋病实验室首次引进HIV-1 病毒载量检测技术以来，截至2012 年底全国已经配备115 台HIV-1 病毒载量检测仪，覆盖疾控、医院、检疫、军队等系统，艾滋病流行重点地区及少数县级实验室均已配备HIV-1 病毒载量检测仪，每年检测量已达13 万人份以上。

由于HIV-1 病毒载量检测质量对艾滋病的早期诊断及治疗有重要影响，因此急需加强该领域的培训和质量控制，规范实验室操作，以保证检测结果的准确性和可靠性。

自2008 年开始实施《HIV-1 病毒载量测定及质量保证指南》（试行，以下简称《指南》）以来，参与HIV-1 病毒载量能力验证工作的实验室从2007 年的29家增加到2012年的107 家，占已开展工作实验室的百分之九十以上。

通过综合分析近几年能力验证发现的问题与检测技术发展的实际情况，考虑各种试剂的检测要求，结合专家意见和一线实验室工作人员的经验与需求，对本指南进行了适当修改、调整和补充，主要修改内容包括：（1）增加“人员要求”章节；（2）修改“常用HIV-1 病毒载量检测方法”；（3）修改“ HIV-1 病毒载量检测能力验证（PT）”；（4）补充常见问题分析和处理等内容。

修订后的《指南》共分八章，包括：总则，人员要求，实验室环境与设施，样品的采集、处理保存运输，常用检测方法简介，室内质量控制，实验室检测能力验证（PT），实验室生物安全，以及四个附表。

本指南在修改过程中，接纳了国内专家、同行的意见和建议，经过多次修改编写成《指南》（2013）版。

艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范

艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范1 范围本章规定了HIV-1核酸定性和定量检测（病毒载量）的意义、实验室要求、检测方法、质量控制及结果判定标准，适用于HIV-1核酸的定性检测和定量的测定。

2 核酸检测的意义核酸检测可用于HIV感染诊断、血液筛查、病程评估及抗病毒治疗效果监测。

2.1 感染诊断2.1.1 作为补充试验：用于筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性样本的判定；对筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性的疑似艾滋病晚期患者需将核酸检测、临床病史和CD4+T淋巴细胞计数检测结果综合判断。

对于抗体筛查试验阴性但免疫功能低下者，也可进行核酸检测，结合临床综合判断。

2.1.2 急性期诊断：对近期有明确流行病学史的个体，包括患有性病或有性病史，有同性和异性性接触不安全性行为，有共用注射器吸毒史，有医源性暴露史，有职业暴露史，HIV/AIDS 患者的配偶或性伴侣，HIV/AIDS 母亲所生子女等，如抗体筛查试验无反应，可通过核酸检测判定是否为急性期感染。

核酸检测结果阴性或低于最低检测限不能排除HIV-1感染。

2.1.3 HIV-1暴露婴儿感染早期诊断HIV-1感染母亲所生小于18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV-1核酸检测均为阳性即可作出诊断。

18个月龄以上儿童诊断与成人相同。

2.2 血液筛查：对献血者及采供血机构的原料血浆进行核酸检测，可及时发现窗口期感染，降低输血的“残余危险度”，减少二代传播。

2.3 抗病毒治疗效果监测HIV感染者和艾滋病病人经抗病毒药物治疗后，定期进行HIV-1病毒载量检测，可判断抗病毒药物治疗的疗效。

病毒载量结果动态分析，对决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要更改治疗方案起到重要作用。

一般启动抗病毒治疗6个月后应进行病毒载量检测，以监测治疗效果，每年应检测一次。

治疗前进行检测可了解病人的病毒载量基线，有助于评价治疗后效果。

如适时重复检测病毒载量，没有低于检测限，需要考虑治疗是否失败。

HIV-1 p24抗原ELISA试剂盒说明书

Microwell 人类免疫缺陷病毒1型p24抗原酶联免疫试剂盒说明书【产品名称】通用名：人类免疫缺陷病毒1型p24抗原酶联免疫试剂盒英文名：ENZYME IMMUNOASSAY FOR DETECTION OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS TYPE I P24 ANTIGEN IN HUMAN SERUM, PLASMA AND CELL CULTURESUPERNA TANT【包装规格】96人份/盒。

【预期用途】本试剂盒用于人类免疫缺陷病毒1型p24抗原（Human Immunodeficiency V irus Type 1 p24 Antigen）的定量检测，适用于人血清（或血浆）及细胞培养上清液等标本，仅供研究使用。

【检验原理】本产品采用固相酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）检测人血清（或血浆）中的游离HIV-1 p24抗原和细胞培养上清液等标本中的HIV-1 p24抗原。

本分析方法是基于双抗体夹心的非竞争性免疫分析。

校准品和样品中HIV-1 p24抗原与固相抗- p24单克隆抗体和生物素标记的抗-p24多克隆抗体通过免疫反应，形成固相抗-p24单克隆抗体—p24抗原—抗-p24多克隆抗体-生物素复合物；温育后洗涤，洗去非特异或多余的抗原和多余的生物素标记的抗- p24多克隆抗体；然后加入HRP （Horseradish Peroxidase，辣根过氧化物酶）标记的链亲和素，形成固相抗- p24单克隆抗体—p24抗原—抗-p24多克隆抗体-生物素—链亲和素-HRP复合物；温育后洗涤，洗去多余的HRP标记的链亲和素。

加入TMB-H2O2底物溶液，HRP催化H2O2氧化TMB生成蓝色的产物（最大吸收峰655nm），加入终止液终止酶催化反应，生成黄色产物（最大吸收峰450nm）。

其吸光度与校准品和样品中的HIV-1 p24抗原浓度成正相关。