吉姆萨染色液 - 360文档中心

瑞氏吉姆萨染色法的原理

瑞氏吉姆萨染色法的原理
瑞氏吉姆萨染色法是一种常用的细胞核染色方法，其原理基于不同染色剂对细胞核的亲和性不同。

瑞氏吉姆萨染色法主要由三种染色液：甲醛液、吉姆萨液和洗涤液组成。

1. 甲醛液
甲醛液用于杀死和固定细胞；它可以凝固细胞质和细胞核，使它们不会破裂或丢失。

2. 吉姆萨液
吉姆萨液中含有三种染色剂：墨绿、甲基蓝和伊红。

这些染料具有亲和力，可以区别染色细胞核和细胞质的颜色，从而突出细胞核的结构。

甲基蓝能够染色DNA，使细胞核显现出蓝色；伊红则能够染色RNA，使胞质显现出红色；墨绿则可以同时显现出细胞核和细胞质的形态。

3. 洗涤液
洗涤液用于清除余下的染料和细胞残留物，使细胞刚刚染过的颜色更加鲜艳。

总之，瑞氏吉姆萨染色法是一种利用染色剂的亲和力不同来突出细胞核和细胞质结构颜色区别的染色方法，对于细胞学和组织学研究等领域具有重要意义。

吉姆萨染色液Giemsa stain

吉姆萨/姬姆萨染色液(Giemsa stain,1:9)产品简介：吉姆萨染液由天青2与伊红混合而成。

染色原理和结果与瑞氏染色法基本相同，姬姆萨染色液对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳，常与故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。

嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

Leagene Giemsa stain以进口的吉姆萨/姬姆萨色素为主要原料，通过研磨配制而成，能呈现出清晰的细胞染色效果。

经常用于组织切片、血液和细胞涂片、细菌、染色体显带、原生动物寄生虫等染色。

Giemsa stain(1:9)的特点在于，由Giemsa stain储存液(10×)和磷酸盐缓冲液组成，1:9混合成工作液后使用；亦可以分开使用，即先用Giemsa stain染色液染色，再经磷酸盐缓冲液处理，亦可以得到满意的染色效果。

产品组成：主要成分：试剂(A): 主要由吉姆萨色素、甲醇等组成。

试剂(B): 主要由磷酸盐等组成。

自备材料：1、载玻片2、蒸馏水或去离子水3、甲醇4、染色架5、显微镜6、0.1～0.5%的乙酸操作步骤（仅供参考）：(一)一步法涂片染色1、Giemsa stain工作液的配制：按试剂(A):试剂(B)=1:9混合，即取1份的Giemsa stain储存液(10×)加入到9份的磷酸盐缓冲液中充分混匀，即为Giemsa stain工作液。

配制后Giemsastain的工作液为即用型试剂，不易保存，即用即配。

2、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定1～3min。

3、将血液涂片或骨髓涂片放置染色架上，滴加Giemsa stain工作液覆盖涂片，室温滴染15～30min。

瑞士-染色方法

瑞士-吉姆萨染色液使用方法
磷酸缓冲液1ml,蒸馏水9ml混匀即可使用。

工作液一般临时配置。

1：玻片上血膜下面过酒精灯几次干透后，加染色液2-3滴覆盖全膜；
2：约30-120秒钟，滴加缓冲液（染液与缓冲液的比例，血片为1:1.5）；
3：混匀后染色3-5分钟；
4：自来水冲洗数秒钟，静置待玻片干后滴香柏油镜检。

检查标准：
淋巴母细胞的形态：胞体比正常细胞大3～4倍，呈圆形或椭圆形，胞浆常有伪足突出，染色淡蓝，常有空泡，泡核增大，核质疏松，常呈细丝网状结构，可见核分裂现象；过渡型淋巴细胞的形态：介于上述母细胞与正常淋巴细胞之间，体积稍大，多在12～15μm，胞浆稍多，淡蓝色，核大于正常细胞，核质疏松。

注意和正常淋巴细胞的区别：淋巴细胞呈球形，平均直径10μm。

小淋巴细胞核大，呈圆形或卵圆形，有时核的一侧有缺陷，呈豆形，染色质粗大，细胞质很少，嗜碱性，核周围的细胞质常有淡染晕。

试验数据处理淋巴细胞的转化率以百分率计算，即：
转化率=活化细胞数/（活化细胞数+未转化细胞数）×100%。

吉姆萨染色原理

吉姆萨染色的原理吉姆萨〔Giemsa〕染色法：吉姆萨染液由天青，伊红构成。

染色原理和结果与瑞特染色法根真同样。

嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青联合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可联合，染淡紫色，称为中性物质。

PH对细胞染色有影响。

细胞各样成分均不蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增加，易与伊红联合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青联合，染色偏蓝。

所以细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片一定洁净，无酸碱污染。

配制顼特液一定用优良甲醇，稀释染色一定用缓冲液，冲刷用水应近中性，否那么可致使各样细胞染色反应异样，致使辨别困难，甚至造成错误。

一般性操作技术血涂片制备；细胞染色；显微检查；血液病诊疗；染色不良；瑞特〔Wright〕染色法；酸性染料；伊红；碱性染料；亚甲蓝；吸附作用；PH 对细胞染色的影响；甲醇；吉姆〔Giemsa〕染色法春季要常用润肤剂，它含有松香油脂酸和丰富维生素a，常用可加速皮肤血液循环，剌激面部细胞分泌，有效改良皮肤生理环境，减少天气对皮肤的危害。

第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的根本方法，临床上应用极为宽泛，特别是关于各样血液病的诊疗拥有重要的价值，最近几年来血细胞剖析仪的宽泛应用，血涂片的察看也可作为判断仪器结果的简略方法。

比台察看10个高倍视线血涂片中白细胞和血小板数大概预计血内这些细胞的数目，借以作为仪器结果剖析后质控的参照。

但积压涂片制备和染色不良，常使细胞鉴识发生困难，甚至致使错误结论。

比如，血膜过厚细胞重叠减小，血膜太薄白细胞多集中于边沿，细胞散布不匀；染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异样。

因皮制备厚薄适合，散布平均，染色优秀的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。

吉姆萨染色的原理

吉姆萨染色的原理吉姆萨（Giemsa）染色法：吉姆萨染液由天青，伊红组成。

染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。

嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

PH对细胞染色有影响。

细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。

因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。

配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。

一般性操作技术血涂片制备；细胞染色；显微检查；血液病诊断；染色不良；瑞特（Wright）染色法；酸性染料；伊红；碱性染料；亚甲蓝；吸附作用；PH对细胞染色的影响；甲醇；吉姆（Giemsa）染色法春天要常用润肤剂，它含有松香油脂酸和丰富维生素a，常用可加快皮肤血液循环，剌激面部细胞分泌，有效改善皮肤生理环境，减少气候对皮肤的危害。

第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。

比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量，借以作为仪器结果分析后质控的参考。

但积压涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。

例如，血膜过厚细胞重叠缩小，血膜太薄白细胞多集中于边缘，细胞分布不匀；染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。

因皮制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。

血涂片制备方法及注意事项将在实习指导中详细介绍。

吉姆萨配方

吉姆萨染色方法显示X染色质结构吉姆萨粉1 g ,甘油(AR) 66 mL ,甲醇(AR) 66 mL 。

先将吉姆萨粉溶于少量甘油中,用研钵研磨成匀浆,再将全部甘油倒入。

放入56 ℃温箱中2 h ,取出将甲醇加入混匀,即配成原液,于棕色瓶中密封保存备用。

临用时加入pH为6. 8 的磷酸缓冲液( V∶V = 9∶1) 配成吉姆萨染色剂。

（二）吉姆萨染色法此法可将细胞核与胞质同时染色，故便捷快速；但染液配制技术不易准确掌握，效果常不如HE染色稳定。

1.吉姆萨(Giemsa)染液的配制（1）取1.5g吉姆萨粉末放入50ml甘油，置于60℃温箱，约3h后溶解。

（2）取出后倒入50ml中性甲醇，即为母液。

于棕色瓶可长久保存。

需要注意的是，有的甲醇内含醋酸，会使染液中的伊红沉淀出来，不利染色。

（3）将母液与0.1 mol／LPBS(Ph6.9～7.2)按1:9混合即成工作液。

吉姆萨染液对pH极敏感，偏酸时染色过红，偏碱时则过蓝。

所以，工作液宜现用现配，保存时间不超过48h以免被CO2酸化。

瑞氏－姬姆萨染色方法1、试剂配制：原料:A:瑞氏染粉0.8--1克；吉姆萨染粉0.5克B:甘油33mlC：甲醇500ml配法：将A放入研钵中，加入少量B研磨，再加入少量B磨，再加入少量B磨……倒出，将未溶部分，继续加入B磨……>全溶，加入C，或中间加入C 亦可。

2、染色步骤：滴数滴入玻片盖满标本，30秒，再加入双蒸水或PBS2-3倍染1-3分中，倾去染液，水洗……封片。

吉姆萨染色液贮备液配制：吉姆萨粉1g，加甘油60ml，加热并搅拌，待溶解冷却至室温，再加甲醇33ml吉姆萨(Giemsa)氏母液将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66mL)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。

然后再加入甲醇(66mL)，搅匀后保存于棕色瓶中。

母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。

吉姆萨染色的原理

吉姆萨染色的原理吉姆萨（Giemsa）染色法：吉姆萨染液由天青，伊红组成。

染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。

嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

PH对细胞染色有影响。

细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。

因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。

配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。

一般性操作技术血涂片制备；细胞染色；显微检查；血液病诊断；染色不良；瑞特（Wright）染色法；酸性染料；伊红；碱性染料；亚甲蓝；吸附作用；PH对细胞染色的影响；甲醇；吉姆（Giemsa）染色法春天要常用润肤剂，它含有松香油脂酸和丰富维生素a，常用可加快皮肤血液循环，剌激面部细胞分泌，有效改善皮肤生理环境，减少气候对皮肤的危害。

第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。

比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量，借以作为仪器结果分析后质控的参考。

但积压涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。

例如，血膜过厚细胞重叠缩小，血膜太薄白细胞多集中于边缘，细胞分布不匀；染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。

因皮制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。

血涂片制备方法及注意事项将在实习指导中详细介绍。

瑞氏-吉姆萨染液配法

英文拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇。

后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

使用方法瑞氏（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染色：1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。

2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。

甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

甲醇ME（瑞氏染料）----→M+ + E-在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

染液配制(1) 瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm或1g甲醇（AR）500ml或600ml○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。

○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。

○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

(2) 缓冲液：●缓冲液作用：○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。

○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH 一般在6.4~6.8，○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。

瑞氏-吉姆萨染液配法

瑞⽒-吉姆萨染液配法英⽂拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇。

后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离⼦。

使⽤⽅法瑞⽒（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染⾊：1．瑞⽒染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄⾊伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞⽒（美蓝－伊红Ｙ）染料。

2．⽤甲醇作瑞⽒染料溶剂，即成瑞⽒染液。

甲醇是瑞⽒染料良好溶剂，有两种作⽤：（1）甲醇使瑞⽒染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有⾊物质⽽着⾊。

甲醇ME（瑞⽒染料）----→M+ + E-在配制的瑞⽒染液中美蓝如放置过久即可氧化⽽含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红⾊，但不能使胞浆染为蓝⾊，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝⾊，染⾊主要是化学作⽤，是离⼦彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强⼤的脱⽔⼒，可将细胞固定在⼀定形态及增加细胞结构的表⾯积，提⾼细胞对染料吸收作⽤，同时由于甲醇吸附染⾊液中的⽔，使染⾊液升温，加速染⾊反应。

染液配制(1) 瑞⽒染液配制：瑞⽒染料 830gm或1g甲醇（AR）500ml或600ml○先称⼲燥（事先放⼊温箱⼲燥过夜）瑞⽒染料放置乳钵内，⽤乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再⾏研磨⾄听不到研芝⿇声即呈细粉末，加少许⽢油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“⼀⾯镜”光泽，⽽⽆染料粉粒沉着。

○再加较多量甲醇研磨呈⼀⾯镜光亮，静置⽚刻，将上层液体倒⼊⼀清洁储存瓶内（最好⽤甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，⾄乳钵内染料及甲醇⽤完为⽌，摇匀，密封瓶⼝。

○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，⼀般储存3个⽉以上为佳。

(2) 缓冲液：●缓冲液作⽤：○染⾊对氢离⼦浓度是⼗分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋⽩质与染料形成的化合物重新离解。

○缓冲液须保持⼀定的pH使染⾊稳定，PBS的pH ⼀般在6.4~6.8，○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作⽤，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作⽤，使pH恒定。

碧云天改良吉姆萨染色液(20X)说明书

改良吉姆萨染色液(20X)产品编号产品名称包装 C0131-100ml 改良吉姆萨染色液(20X) 100ml C0131-500ml改良吉姆萨染色液(20X)500ml产品简介：碧云天生产的改良吉姆萨染色液(Modified Giemsa Staining Solution)，也称瑞氏-吉姆萨染色液(Wright-Giemsa Staining Solution)，是用于细胞、血液、骨髓涂片或组织切片等样品染色的染色液。

根据细胞成分的化学性质，改良吉姆萨染色液可将细胞质染成粉红色或蓝色，将细胞核染成紫红色或蓝紫色。

在光学显微镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像，便于对细胞内部结构的观察及异常变化的识别。

吉姆萨染色(Giemsa stain)，又称姬姆萨染色，是以德国化学家、细菌学家Gustav Giemsa 的名字来命名的，最初是用于疟疾病人体内寄生虫的诊断，后由于对染色质和细胞核膜的高质量染色而用于组织病理学和细胞遗传学。

吉姆萨染色对细胞质着色较好，结构显示清晰，但细胞核着色较深，核结构显示不佳。

吉姆萨染色原理和结果与瑞氏染色基本相同，而改良吉姆萨染色法是将吉姆萨染色法与瑞氏染色法结合，兼顾二者之长，使细胞质和细胞核均能获得满意的染色效果。

碧云天的改良吉姆萨染色液、吉姆萨染色液和瑞氏染色液三种染色液的比较如下：产品名称改良吉姆萨染色液(20X) 吉姆萨染色液(10X) 瑞氏染色液产品编号C0131 C0133 C0135 主要成分天青B 、天青II-伊红、亚甲基蓝天青II 和伊红亚甲基蓝和伊红细胞质颜色粉红色或蓝色粉红色或蓝色粉红色或蓝色细胞核颜色紫红色或蓝紫色紫红色或蓝紫色紫红色特点将吉姆萨染色和瑞氏染色结合起来，弥补了两者各自的缺点对细胞质着色力较强，但细胞核着色较深，细胞核结构显示不佳细胞质及其中颗粒染色较好，但细胞核染色质及核膜的结构不是很清晰用途主要用于细胞、血液、骨髓涂片或组织切片的染色主要用于染色体显带、寄生虫和血细胞的染色主要用于血细胞的染色改良吉姆萨染色液的主要成分是天青B (azure B)、天青II-伊红(azure II-eosin)和亚甲基蓝(methylene blue)。

吉姆萨染色的原理

吉姆萨染色的原理之答禄夫天创作吉姆萨（Giemsa）染色法：吉姆萨染液由天青，伊红组成。

染色原理和结果与瑞特染色法基底细同。

嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

PH对细胞染色有影响。

细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。

因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。

配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。

一般性操纵技术血涂片制备；细胞染色；显微检查；血液病诊断；染色不良；瑞特（Wright）染色法；酸性染料；伊红；碱性染料；亚甲蓝；吸附作用；PH对细胞染色的影响；甲醇；吉姆（Giemsa）染色法春天要经常使用润肤剂，它含有松香油脂酸和丰富维生素a，经常使用可加快皮肤血液循环，剌激面部细胞分泌，有效改善皮肤生理环境，减少气候对皮肤的危害。

第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。

比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量，借以作为仪器结果分析后质控的参考。

但积压涂片制备和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。

例如，血膜过厚细胞重叠缩小，血膜太薄白细胞多集中于边沿，细胞分布不匀；染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常。

因皮制备厚薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一。

瑞氏-吉姆萨染液配法

英文拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇。

后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

使用方法瑞氏（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染色：1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。

2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。

甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

甲醇ME（瑞氏染料）----→M+ + E-在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

染液配制(1) 瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm或1g甲醇（AR）500ml或600ml○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。

○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。

○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

(2) 缓冲液：●缓冲液作用：○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。

○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH 一般在6.4~6.8，○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。

吉姆萨染色实验步骤及注意事项

吉姆萨染色实验步骤及注意事项实验步骤1.将显影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盘中。

（1）1个盘：pH6.8 10 mmol/l 磷酸钠缓冲液，所配的25倍稀释的吉姆萨染液。

（2）3个盘：水。

（3）脱水系列溶液：①3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇。

②2个盘：盛有100%乙醇。

③3个盘：盛有二甲苯。

2.在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s（依染色时间决定染色的强弱），将玻片在水中浸泡3次，每次2 min。

3.连续用乙醇脱水系列溶液处理，每盘中浸泡2 min，将玻片移至二甲苯盘中，毎次浸泡2 min，共3次。

4.在通风橱中，按如下操作压片固定：用一平头镊（拿在左手），从二甲苯中取出一块玻片，夹住磨面端置水平。

加4滴Permount 的于另一端（切片所处位置），左手拿一干净的盖玻片，很缓慢地放在载玻片上（在加压片固定介质和盖玻片前，勿使玻片变干，因微小气泡会造成人为假象）。

5.用3MM 滤纸，沿盖玻片边缘，小心吸去多余固片介质/二甲苯，并擦拭载玻片背面（勿擦拭盖玻片）。

6.将玻片平放于一硬纸盒盘上，置42℃温孵箱2天使之凝固。

7.以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳，染料及固片介质。

用镜头纸或普通棉纸擦去尘埃。

放入玻片盒，必要时，载玻片上再注明标签。

8.显微镜观察玻片，观察时可依信号强弱，调节光亮。

注意事项▲1.勿将玻片直立存放于玻片中，因此时固片介质尚未凝结。

▲2.细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片一定清洁，要无酸碱污染。

▲3.配制顼特液一定用优质甲醇，稀释染色一定用缓冲液，冲洗一定用水应近中性，不然可导致各种细胞染色反应异常，以致于识别困难，甚至造成错误的。

吉姆萨染色实验是什么？

吉姆萨染色实验是什么？
吉姆萨染液由天青，伊红组成。

染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。

嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质。

对细胞着色后便于观察，方便对凋亡细胞做出检测判断。

PH对细胞染色有一些影响。

细胞里各种成分均不蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境里正电荷增多，易和伊红结合，染色为偏红；在偏碱性环境里负电荷增多，易和美蓝或天青结合，染色偏蓝。

姬姆萨染色法

吉姆萨染色液说明书【产品名称】吉姆萨染色液【包装规格】货号：DM0002单瓶包装规格分别为：A液吉姆萨染液：20ml、100ml、250ml、500ml；B液磷酸盐缓冲液：250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：A液20ml+B液250ml/盒、A液100ml+B液4×250ml/盒、A液250ml+B液5×500ml/盒、A液500ml+B液5000ml/盒。

【预期用途】用于组织细胞学染色从而鉴别骨髓和其他造血组织（淋巴结）中的白细胞，还可用于鉴定某些微生物。

【检验原理】吉姆萨染色原理及结果与瑞氏染色基本相同，吉姆萨染色液(Giemsa stain，又称姬姆萨染色液)对胞浆着色力较强，能较好的显示胞浆的嗜碱性程度，特别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒，着色清晰，但是对胞核着色偏深,核结构显色不佳，故吉姆萨染色常与瑞氏染色联合使用。

嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

血细胞染色：吉姆萨染料中含有美蓝和伊红两种染料，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，从而使其呈现出不同的色调，以便于辨认。

染色体染色：也称G显带，染色体上富舍A-T碱基对的DNA和组蛋白结合紧密，胰酶处理时不易高度抽提，和染料亲和力较强，呈深带；而富含G-C碱基对的区段结合的蛋白质被胰酶抽提，和染料亲和力降低，呈浅带。

【主要组成成分】试剂组成主要成分1、A液吉姆萨染液吉姆萨染料2、B液磷酸盐缓冲液磷酸盐【储存条件及有效期】5℃～35℃环境保存，原包装未开封染色液的有效期为24个月，在有效期内的已开封染色液应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

瑞氏-吉姆萨染液配法

英文拼写 Wright's stain是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇。

后解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。

使用方法瑞氏（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染色：1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。

2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。

甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

甲醇ME（瑞氏染料）----→M+ + E-在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

染液配制(1) 瑞氏染液配制：瑞氏染料 830gm或1g甲醇（AR）500ml或600ml○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。

○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。

○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

(2) 缓冲液：●缓冲液作用：○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。

○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH 一般在6.4~6.8，○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。

吉姆萨染色的原理

吉姆萨染色的原理吉姆萨Giemsa染色法：吉姆萨染液由天青,伊红组成;染色原理和结果与瑞特染色法基本相同;嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质;PH对细胞染色有影响;细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH 而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝;因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染;配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误;一般性操作技术血涂片制备；细胞染色；显微检查；血液病诊断；染色不良；瑞特Wright染色法；酸性染料；伊红；碱性染料；亚甲蓝；吸附作用；PH对细胞染色的影响；甲醇；吉姆Giemsa染色法春天要常用润肤剂,它含有松香油脂酸和丰富维生素a,常用可加快皮肤血液循环,剌激面部细胞分泌,有效改善皮肤生理环境,减少气候对皮肤的危害;第二节血涂片的制备和细胞染色血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法,临床上应用极为广泛,特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值,近年来血细胞分析仪的广泛应用,血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法;比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量,借以作为仪器结果分析后质控的参考;但积压涂片制备和染色不良,常使细胞鉴别发生困难,甚至导致错误结论;例如,血膜过厚细胞重叠缩小,血膜太薄白细胞多集中于边缘,细胞分布不匀；染色偏酸或偏碱均可使细胞染色反应异常;因皮制备厚薄适宜,分布均匀,染色良好的血涂片是血液学检查的重要革本技术之一;血涂片制备方法及注意事项将在实习指导中详细介绍;1．瑞特Wright染色法：为发观察细胞内部结构,识别各种细胞及其异常变化,血涂片必须嘲行染色;血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的;目前常用瑞特染色法;1瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料;亚甲蓝为四甲基硫堇染料,有对醌型和邻醌型两种结构;通常为氯盐,即氯化美蓝;美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料;市售美蓝中部分已被氧化为天青;伊红通常为钠盐;即伊红和伊混合后,产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀,即瑞特染料;2细胞的染色既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用,各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样;因此,用本染料液染色后,在同一血片上,可以看到各种不同的色彩,例如血红蛋白,嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质;3PH对细胞染色有影响;细胞各种成分均不蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH 而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝;因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用正经片必须清洁,无酸碱污染;配制顼特液必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误;新鲜配制的染料偏碱,须在室温或是37℃下贮存一定时间,待染料成熟,主要是美蓝逐渐转变为天青B后才能使用,贮存时愈久,染色效果愈好;EAM GILLILAND等采用吸光度比值作为顼特染液的质量规格;rA测定方法如下：取瑞特染液15-25μl视染液浓度而定,加甲醇10ml稀释,混匀后以甲醇为空折管,分别以波长650nm和25nm比色;Ra=a650/a525.因为美蓝吸收峰小组长为650nm,伊红吸收峰波长为525nm ;天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半;所以新配染料rA接近2,随着美蓝逐渐氧化为天青B,RA也相应下降;RA下降到±时即可使用;瑞特染液贮存过程中,必须塞严,以防止甲醇挥发和被氧化成甲酸;有人主张在配方中加入甘油30ml,防止甲醇挥发,关可合细胞染色清晰;甲醇必须纯净,如甲醇中丙酮含量过多,染色偏酸,使白细胞着色不良;2．吉姆萨Giemsa染色法：吉姆萨染液由天青,伊红组成;染色原理和结果与瑞特染色法基本相同;但本法对细胞核和寄生虫着色较好,结构显示更不清晰,而胞质和中性颗粒则着色较差;为兼顾二者之长,可用复合染色法;即以稀释吉姆萨液代替缓冲液,按瑞特染色法染10min;或先用瑞特染色法染色后,再用稀释吉姆萨复染;。