贵州蔬菜病毒病主要病毒种类检测

贵州蔬菜病毒病主要病毒种类检测

王莉爽;陈小均;陈文;谭清群;杨学辉

【摘要】采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)法对采自贵州省3个蔬菜种植区的952份疑似蔬菜病毒病样品进行黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)、蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)和黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)等6种病毒毒原检测.结果检出阳性样品273份,占总样品数的28.68％,其中CMV阳性检出率最高,占总样品数的16.49％,其余5种病毒的阳性检出率依次为2.63％、2.10％、1.05％、1.58％和

0.53％,CMV为贵州省蔬菜上的主要病毒种类.就单一病毒侵染蔬菜的情况分析,供试12种蔬菜均检出CMV,TuMV在茄子、白菜、萝卜和甘蓝中检出较多,而TSWV 主要在番茄和辣椒样本中检出.存在CMV+TMV、CMV+TuMV、CMV+TSWV、CMV+BBWV、TuMV+BBWV和CMV+TuMV+BBWV等6种复合侵染类型,其中CMV+TMV阳性检出率相对最高,达2.52％.城市近郊正季蔬菜区茄科和豆科蔬菜病毒侵染类型较多,十字花科病毒侵染类型最少,葫芦科在冬春喜温蔬菜区病毒侵染类型最多,表明贵州中、高海拔温凉山区比低海拔温热河谷区适于多种病毒发生.【期刊名称】《广东农业科学》

【年(卷),期】2015(042)020

【总页数】5页(P63-67)

【关键词】蔬菜病毒病;种类;检测

【作者】王莉爽;陈小均;陈文;谭清群;杨学辉

【作者单位】贵州省植物保护研究所,贵州贵阳550006;贵州省植物保护研究所,贵

州贵阳550006;贵州省植物保护研究所,贵州贵阳550006;贵州省植物保护研究所,

贵州贵阳550006;贵州省植物保护研究所,贵州贵阳550006

【正文语种】中文

【中图分类】S432.4+1

蔬菜已经成为贵州部分贫困山区的主要支柱产业和农户现金收入的主要来源。贵州省具有低纬度、高海拔的特点，气候的区域差异和垂直差异较大，冬无严寒，夏无酷暑，无霜期长，逐渐形成了夏秋喜凉蔬菜优势区（重点构建大娄山区、乌蒙山区和苗岭山区产业带，辅以武陵山区）、冬春喜温蔬菜优势区（重点建设南北盘江、红水河河谷区、赤水河河谷区，辅以清水江、都柳江河谷区和乌江中下游河谷区）以及正季蔬菜种植区（黔中、黔北地区）。这些地区常年种植有番茄、辣椒、豇豆、四季豆、黄瓜、南瓜、白菜和萝卜等蔬菜，然而病毒病发生普遍，且日趋严重，影响蔬菜产量、品质和价格，给农民造成经济损失。李丽丽等对贵州织金蔬菜样品进行研究发现十字花科蔬菜病毒由芜菁花叶病毒以及该病毒与黄瓜花叶病毒和烟草普通花叶病毒复合侵染所致［1］。报道已有广西、北疆、天津、西安等省份对十字花科蔬菜进行病毒毒原检测［2-6］，也有云南、重庆、黑龙江等省份对南瓜病毒病等葫芦科蔬菜进行主要病毒病原鉴定［7-9］。由于贵州特殊的气候条件和生态环境，以及蔬菜种植品种的多样化，以致蔬菜病毒病发生严重，症状复杂多样，防治工作难以开展。目前，尚未有报道对贵州豆科、茄科、葫芦科和十字花科蔬菜病毒病的毒原种类进行系统研究。为此，本研究针对贵州省不同蔬菜种植区不同科目

蔬菜的病毒病病原种类进行检测，以期为贵州省蔬菜病毒病的防治、抗病育种提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品的采集在贵州省有代表性的蔬菜种植县市，选取1～2个乡镇，每个乡镇2块田，用对角线五点取样法，每块地至少采集茄科、豆科、葫芦科和十字花科蔬菜的疑似病毒病样品10份。2013—2014年，分别在贵阳市近郊蔬菜产区、夏秋喜凉蔬菜产区和冬春喜温蔬菜产区的清镇、修文、安顺西秀、平坝、绥阳、遵义、大方、金沙、罗甸等9个市、县（区）采集到蔬菜疑似病毒病样品952份。

1.1.2 病毒种类检测试剂黄瓜花叶病毒（CMV）、烟草普通花叶病毒（TMV）、黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）血清抗体由浙江大学谢艳教授赠送。蚕豆萎蔫病毒（BBWV）、番茄斑萎病毒（TSMV）和芜菁花叶病毒（TuMV）病毒的血清试剂盒购自美国Agdia公司。

1.2 试验方法

参照Zhou等［10］方法，并对DAS-ELISA方法进行改良。即在酶标板加入包被抗体100 μL/孔，4℃过夜，PBST洗板4次，每次浸泡3min；加入烟草病叶粗汁液100 μL/孔，并设阳性、阴性和空白对照，37℃放置3 h；PBST洗板4次，每次浸泡6 min，然后加入含5%脱脂奶粉的PBST封闭30 min；加单克隆抗体100 μL/孔，37℃放置 3 h。PBST洗板后加入羊抗鼠酶标抗体100 μL/孔，37℃放置3 h，PBST洗板。加对硝基苯磷酸盐室温显色15～30 min。读取405 nmOD值，每份样品重复2次。

2 结果与分析

2.1 不同蔬菜病毒种类检测

在番茄、辣椒、茄子、豇豆、四季豆、大豆、南瓜、丝瓜、黄瓜、白菜、甘蓝和萝

卜等12种蔬菜采集到952份疑似蔬菜病毒标样，经血清学检测结果表明：共有阳性样品273份，占总样品数的28.68%。单一侵染类型中CMV能侵染所有的蔬菜种类，且阳性检出率最高，占总样品数的16.49%；其次是TMV阳性检出率较高，为2.63%；然后是TuMV、BBWV、TSWV，阳性样品数占总样品数的2.10%、1.58%和1.05%；CGMMV阳性检测率最低，仅为0.53%。复合侵染类型中以CMV+TMV的阳性样品数较多，占总样品数的2.52%；CMV+BBWV和

CMV+TuMV阳性检出率相同，为0.53%；BBWV+TuMV阳性检出率为0.32%，CMV+TSWV和CMV+BBWV+TuMV的阳性样品数相同，阳性检出率均为

0.21%。从结果可知，无论是在单一侵染类型还是复合侵染类型中，均以CMV侵染为主，因此，黄瓜花叶病毒（CMV）是侵染贵州不同科蔬菜的重要病原（表1）。

不同病毒侵染后，甘蓝是阳性检出率最高的蔬菜，为61.54%；萝卜居第2位，阳性检出率为50.00%；再次是大豆阳性检出率为42.86%；辣椒、黄瓜、南瓜、丝

瓜和茄子的阳性检出率均在30%以上；番茄、豇豆、四季豆和白菜阳性检出率在20%以上。病毒侵染类型最多的蔬菜是辣椒，能检出5种单一侵染类型和4种复合侵染类型。其次是豇豆和番茄，能检出除CGMMV外的其他5种单一侵染类型以及CMV+BBWV和CMV+TMV这2种复合侵染类型，同时豇豆还能检测少量

的BBWV+TuMV复合病毒样品。四季豆、茄子、萝卜和白菜检出3种单一侵染

类型包括CMV、TuMV、BBWV，但是茄子、萝卜和白菜无复合侵染现象，四季

豆有CMV+BBWV、CMV+TMV和BBWV+TuMV 3种复合侵染类型。南瓜、黄瓜和丝瓜能检出CMV、CGMMV和CMV+TMV，然而丝瓜还能检出TuMV。病

毒侵染类型最少的是大豆，仅检出CMV和BBWV。由上述结果可知不同蔬菜的

病毒侵染类型不一样，但是CMV能侵染12种蔬菜，TuMV能侵染9种蔬菜，BBWV侵染8种，表明这3个病毒是侵染蔬菜的主要病毒。