柠檬黄

添加剂（柠檬黄）的色谱分析法
摘要本文主要讲色素添加剂柠檬黄、日落黄等对于食品卫生的影响，以及如何检测食品中添加的色素的含量。

食品添加剂在一定安全剂量内食用，并无危害，但若违规超量和长期食用，则对人体有危害，甚至可能致癌。

本文讲述了一些色谱法来检测食品中柠檬黄的含量。

关键词：柠檬黄色素添加剂色谱法
引言
近些年来，食品安全问题已经成为我们持久不变的话题，越来越多的食品安全事故让我们触目惊心。

4月23日上午，中山市质监局在港口镇铺锦村偏僻鱼塘处查封一家粉条工厂，当场查获约1万斤假粉条成品。

令人惊讶的是，这家工厂证照齐全。

检查发现，该作坊的红薯粉是用普通玉米淀粉做原料。

现场还发现大量墨汁、柠檬黄60、果绿等添加剂，黑色液体也正是由这些添加剂兑成。

执法人员查获了1万多斤已包装好的“纯红薯粉条”成品，还有大量半成品在晾晒或浸泡。

执法人员称已经有很多市民吃了从市场上买的红薯粉后上吐下泻。

合成着色剂柠檬黄、日落黄是国
家批准使用的人工合成色素, 因其独
特的外观颜色, 作为食品添加剂已经
广泛地应用于果蔬汁中, 但是其添加必须在规定范围内按规定限量使用,
而且添加之后必须在食品标签上注明GB 2760- 1996[1]规定, 柠檬黄、日落黄用于果汁饮料的最大使用量为
0.1g/kg[2]。

据了解, 人体食用过量的柠檬黄、日落黄可引起过敏、腹泻、偏头痛、忧郁症、支气管哮喘等症状, 还可能对人体的肾脏、肝脏和神经系统造成危害。

因此对食品中的柠檬黄进行检测非常重要。

[3]
色谱检测方法
（1）高效液相色谱法
对液相色谱法测定果蔬汁中柠檬黄和日落黄进行了方法优化, 对色谱条件进行了调整, 采用ODS- C18型( 250 mm – 4.6 mm )色谱柱, 流动相甲醇- 0.02 mol/L乙酸铵(体积比40:60,
pH=4), 流速为0. 6 mL /min。

采用紫外检测器, 柠檬黄检测波长为430 nm,
日落黄检测波长为510 nm。

该方法测
定结果的相对标准偏差为柠檬黄1.3% ( n=4)、日落黄2.3% ( n=4) 。

柠檬
黄和日落黄的平均回收率分别为
84.17%、88.33%。

该法满足实验要求。

为了更准确地测定食品中的柠檬黄，
将样品前处理后，过0． 45 μm 膜，采用戴安高效液相色谱仪测定，色谱
柱为Luna 5 u C18( 2) 100 A，250 ×4.6 mm，柱温30.0℃，以甲醇+ 0.02 mol /L 乙酸铵为流动相，进样量为10 μL，检测波长为420 nm，并同时进行了回
收率的试验。

采用高效液相色谱条件
在波长230 nm 下，以0.02 mol/ L 乙酸铵：甲醇（85∶15）为流动相，快
速测定饮料中的柠檬黄、日落黄含量，样品处理简便快捷，方法添加标准回
收率分别是99.2%、99.4%，本法与国
家标准检验方法（GB/ T 5009.140- 2003）比较，经配对t 检验（p>0.05）无显著性差异。

[4]
（2）反向高效液相色谱
采用反相高效液相色谱法, Agilent HC - C18 柱( 250mm×4.6mm, 5μm ) 液相色谱柱分离, 乙酸铵缓冲溶液( 0.02mol/L) - 甲醇为流动相进行梯度洗脱, 二级管阵列检测器, 检
测波长448nm。

结果测定结果具有良
好的线( r=0.9996), 保留时间的RSD 为0.18% ( n=6) , 峰面积的RSD为0.85% ( n=6), 样品加标回收率为87.4% ~ 95.5%, 方法检出限为0.002g /kg。

该方法具有操作简便、快速, 重复性好、灵敏度高等优点。

柠檬黄对紫外光有
较强的吸收, 经二极管阵列检测器对
柠檬黄标准液从200nm ~ 800nm 进行
光谱扫描, 发现柠檬黄在258nm和
448nm 处有较强吸收( 见图3 )。

我们分别选258nm 和448nm 作为检测波长
进行实验,发现在448nm 处比258nm
波长下定的结果重现性较好, 色谱峰
对称, 干扰少。

本实验选定448nm 作
为检测波长。

[5]
（3）薄层色谱法
建立了利用薄层色谱和薄层色谱
扫描技术同时检测豆制品中碱性橙、
皂黄、柠檬黄、日落黄4 种色素和辣
椒粉中酸性橙Ⅱ、丽春红2R、罗丹明
B3 种非食用色素的方法。

豆制品经丙酮和乙醇2氨溶液提取, 辣椒粉经乙
醇2氨溶液提取, 采用硅胶G薄层板,
正丁醇2无水乙醇21 %氨水(6∶2∶2) 为展开剂上行展开。

利用双波长反射
锯齿薄层扫描方式, 碱性橙、皂黄、
柠檬黄、日落黄采用450 nm 为检测波长, 酸性橙Ⅱ、丽春红2R、罗丹明B 采用520 nm 为检测波长,参比波长均为700 nm。

7 种色素的线性范围在0104～
214μg 之间, 相关系数0.9954～
0.9994 之间。

碱性橙、皂黄、柠檬黄、日落黄、丽春红2R 的最低检出量为0102μg , 酸性橙Ⅱ为0108μg , 罗
丹明B 为0101μg。

辣椒面和豆皮样品的加标回收率为74.0 %～98.0 % , 相对标准偏差(RSD) 在1.1 %～4.5 %之间。

通过与高效液相色谱法的对比,
该方法可以有效的对辣椒面和豆制品
中的碱性橙等色素进行同时分析。

[6] 薄层色谱法原理上属吸附层析法。

以玻璃板、塑料板或铝基片为载体，在载体上涂布均匀的固定相，把
要分析或分离的样品点在薄层板上，
用展开剂展开，再用显色剂显色的分
配色谱。

将要分离的混合物点在用固
定相均匀涂布的薄层板上，用适当的
展开剂在密闭的层析缸中展开，被分
离的组分不随展开剂流动，而是选择
性地保留在原点和溶剂前沿之间，被
分离的化合物在薄层板上的位置用比
移值（Rf）表示，Rf=0，表示样品留
在原点，Rf=1，表示样品不被保留，
置紫外灯下或直接喷显色剂即可观察。

（4）各种色谱法的优缺点以及使用的广泛性
①高效液相色谱法：
优点：分离效率高，选择性好，检测
灵敏度高，操作自动化，应用范围广；与气相色谱法相比具有的优点：不受
试样的挥发性和热稳定性限制，应用
范围广；流动相种类多，可通过流动
相的优化达到高的分离效率；一般在
啊室温下分析即可，不需高柱温。

缺点：分析成本高，液相色谱仪价格
及日常维护费用贵，分析时间一般比
气相长。

②薄层色谱法：
优点：操作、显色比较方便，薄层色
谱法斑点集中，薄层板耐腐蚀。

方法
前处理操作简单方便,分析结果稳定
可靠, 填补了薄层色谱扫描技术在食
品中非食用色素同时分析方面的空白。

（5）色谱法的应用以及色谱发展前沿色谱法利用不同物质在不同相
态的选择性分配，以固定相对流动
相中的混合物进行洗脱，混合物中
不同的物质会以不同的速度沿固定
相移动，最终达到分离的效果。

色
谱法是分析化学中应用最广泛发展
最迅速的研究领域，新技术新方法
层出不穷。

固定相和流动相是色谱法的主角，新固定相的研究不断扩展着色
谱法的应用领域，如手性固定相使
色谱法能够分离和测定手性化合物；反相固定相没有死吸附，可以简单
地分离和测定血浆等生物药品。

检测方法也是色谱学研究的热
点之一，人们不断更新检测器的灵
敏度，使色谱分析能够更灵敏地进
行分析。

人们还将其他光谱的技术
引入色谱，如进行色谱－质谱连用、色谱－红外光谱连用、色谱－紫外
连用等，在分离化合物的同时即行
测定化合物的结构。

色谱新方法也是色谱研究热点
之一。

高效毛细管电泳法是目前研
究最多的色谱新方法，这种方法没
有流动相和固定相的区分，而是依
靠外加电场的驱动令带电离子在毛
细管中沿电场方向移动，由于离子
的带电状况、质量、形态等的差异
使不同离子相互分离。

高效毛细管
电泳法没有HPLC方法中存在的传质
阻抗、涡流扩散等降低柱效的因素，纵向扩散也因为毛细管壁的双电层
的存在而受到抑制，因而能够达到
很高的理论塔板数，有极好的分离
效果。

色谱法常见的方法有：柱色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高
效液相色谱法等。

色谱法由于其优
良的特性使其广泛运用于日常生活，各种蔬菜、水果、药品甚至废水等物体中很多种添加剂以及金属离子的检测都会用到色谱法。

参考文献
[1] GB 2760 - 1996 食品添加剂使用卫生标准
[2] GB 2760 - 2003 食品添加剂使用卫生标准
[3] 蔡增轩,黄百芬,王天娇,冯靓,任一平. HPLC法测定饮料中色素柠檬黄、日落黄前处理方法的比较[J]. 中国卫生检验杂志, 2011,(01)
[4] 巩强高效液相色谱法测定
饮料中柠檬黄、日落黄含量医学动物防制
[5] 夏立娅, 韩媛媛, 匡林鹤, 刘峥颢, 吴广臣. 薄层色谱扫描法同时检测豆制品中碱性橙、皂黄、柠檬黄和日落黄以及辣椒粉中酸性橙II、丽春红2R和罗丹明B,2010,(06)
[6] 夏立娅, 韩媛媛, 匡林鹤, 刘峥颢, 吴广臣. 薄层色谱扫描法同时检测豆制品中碱性橙、皂黄、柠檬黄和日落黄以及辣椒粉中酸性橙II、丽春红2R和罗丹明B,2010,(06)。