红茶茶多酚及抗氧化性能测定

红茶茶多酚及抗氧化性能测定
侯冬岩1,2，回瑞华1,2，刘晓媛3，唐蕊2 ，朱永强
3
(1.鞍山师范学院化学系，辽宁鞍山114005；2.辽宁师范大学化学系，辽宁大连116029；
3.辽宁龙兴生物科技股份有限公司，辽宁鞍山114014)
摘要：采用三波长－光谱法测定红茶中茶多酚的含量。

本法的回收率为 94%～105%，变异系数小于1.00%。

用流动注射化学发光法研究了红茶的抗氧化性能，实验结果表明：红茶具有较高的茶多酚含量和较强的抗
氧化性能。

关键词：红茶；茶多酚；流动注射化学发
光；抗氧化性
Deter mina tio nof Cat echi ni nBla ckT easandItsAnti oxid ation E ffec t HOU Dong-yan1,2，HUI Rui-hua1,2，LIOU Xiao-yuan3，TANG Rui2，ZHU Yong-qiang3
(1.Department of Chemistry,Anshan Normal University,Anshan
2.Department of Chemistry,Liaoning Normal University,Dalian
3. Liaoning Longxing Biologe Science and Technology Co. Ltd., Aashan 114005,China；116029,China；
114014,China)
Ab st r ac t：Determinationofcatechininblackteas by three wavelength spectrophotometry,The recovery is94%～105%and thecoefficientofvariationis1.00%.Antioxygenicactivityofblackteasteaswasstudiedbytheflow-injectionchemiluminescence. Theresults showthatblackteasareabundantinthecatechincompoundsand strongantioxidativeeffect.
Ke y w or ds：black teas；catechin；flow-injection chemiluminescence m ethod；antioxidation effect
中图分类号：O657文献标识码：A文章编号：1002-6630(2005)08-0367-04
茶多酚是红茶生物活性成分中的一类重要的化合物，茶多酚具有很强的抗氧化能力，其抗氧化能力可达L-抗坏血酸的100倍。

现代科学研究认为人体衰老的原因在于人体的细胞在代谢过程中连续不断地产生具有高度活性的自由基和细胞自身的抗氧化酶及超氧化物歧化酶(SOD)不断消除作用的失衡，使自由基浓度过剩.人体内的自由基是一些强氧化性的物质，自由基及其诱导的氧化反应会引起膜脂的氧化损伤和交联键的形成，其结果降低了上述两种酶的活性，使核酸代谢受到影响，溶酶体内衰老色素和脂褐素堆积，致使细胞衰老。

茶多酚具有很强的清除人体自由基的作用，茶多酚是极强的消除有害自由基的天然物质。

红茶中含有丰富的茶多酚,因而引起国内外有关专家的关注，已有不少研究结果发表[1]，对于茶多酚的定量分析通常采用光谱法[2]，但由于吸收峰不对称，给定量分析造成影响。

本文采用三波长光谱法测定红茶中茶多酚的含量[3]，用流动注射化学发光法测定了红茶的抗氧化性能。

实验结果表明，红茶能有效的抑制超氧阴离子自由基诱导的鲁米诺化学发光，并且随着发光体系中红茶浓度的升高，发光强度呈现下降趋势。

该实验结果显示红茶具有较强的抗氧化性能。

这将为进一步开发利用红茶提供了科学依据。

1村料与方法
1.1仪器与材料
TU036紫外可见分光光度计VAR IA N；旋转蒸发仪R E52CS型
HH S21-4型
上海亚荣生化仪器厂；电热恒温水浴锅
上海医疗器械五厂；旋片式真空泵2X Z-4型临海市精工真空设备厂；中华牌加热器Z HQ
型
巩
巩义
西安义市英峪仪器一厂；电子节能控温仪D K W-I II
型
英峪仪器一厂；I FFM-D型流动注射化学发光仪
瑞迈电子科技有限公司；pHS-3C 精密p H计
科学仪器有限公司。

上海精密
茶多酚标样：由鞍山师范学院化学系回瑞华教授等人研制[4] ，经高压液相色谱，红外光谱，质谱法鉴定为茶多酚。

红茶样品：由辽宁生物技术科学股份有限公司提供。

收稿日期：2005-05-26
基金项目：辽宁省教育厅科学技术基金资助课题(2024201050)
作者简介：侯冬岩(1962-)，男，教授，主要从事有机分析及天然产物化学教学与研究。

P
a
b V H V R
c d
P M T
A M P
W W
P-蠕动泵(peristalticpump);V-进样阀(injectionvalve)； C-流通池(flowingcell);PMT-光电倍增管(photomultiplier
tube)；AMP-放大器(amplifer)；HV-负高压(negative high voltage):800V ；R-记录仪(recorder)；W-废液(waste)；
a-样品(sample)；b-邻苯三酚(pyrogallol);c-H O ；
2
d-Na CO -NaHCO 缓冲溶液 (加入Luminol)(buffer solution addedluminol) 2 3 3
食品科学 ※营养卫生
368 2005, V ol. 26, No. 8
酒石酸亚铁溶液：称取 1.000g 七水硫酸铁和5.000g 四水酒石酸钾钠，用水溶解后定至 1L ；pH7.5 的磷酸盐 缓冲液；茶多酚标准储备液：称取 0.06g ( 准确至 0. 0001g)，置于 100ml 的容量瓶中，加水使其溶解稀释至 刻度，摇匀备用；邻苯三酚(A R 级，贵州遵义市第二 化工厂)用0.01mol/L HCl 配成储备液，使用前用水稀释浓
度为 5 × 10-5
mol/L ；0.01mol/LNa 2CO 3-NaHCO 3 缓冲溶液(AR 级) ，用前新鲜配制，pH 值用酸度计准确调至 9.95 ； Luminol(AR 级，陕西师范大学)用 0.05mol/L NaOH 配成 0.05mol/L ，在避光处保存。

(所用试剂均为分析纯，水 为二次蒸馏水) 。

1.2 红茶中茶多酚含量的测定
酸盐缓冲液，分别测定其吸光度值并且给出Δ A 值，结 果说明显色剂用量在4.0～6.0.0ml 范围，吸光光度基本不 变，因此选定显色剂用量在 5m l 条件下进行测定。

1.2.5 回收率及方法精密度
根据前面确定的测试条件，按上述实验方法制备 5 个不同浓度的样品，按标准加入标准物，在测定波长 下测定Δ A ，求得其平均回收率，标准偏差及变异系 数，结果列于表 2 。

1.2.6 样品分析
取不同产地的红茶制备样品溶液，按操作条件， 在测定波长处测其吸光度，分析结果为 1# 红茶含茶多酚 14.20%，2# 红茶含茶多酚 15.00%。

1.2.1 吸收曲线的绘制及三波长的确定
准确吸取茶多酚标准储备液 1ml ，注入 25ml 容量瓶 表2 回收率及方法精密度
Table 2 E x perimen t o f th e p recisio n an d th e reco v ery 中，加水 4ml 和酒石酸亚铁溶液 5ml ，充分混合后再加 pH7.5 的磷酸盐缓冲液至刻度，用 1cm 的比色皿在波长 200～900nm 范围内扫描，绘制出其吸收曲线(图 1)，用 作图法确定出三个测定波长分别为λ1=882nm ，λ2=546nm ， λ3=439nm 。

表 1 ΔA 值与茶多酚浓度的关系
Tab le 1
Δ A valu e s o f d i ff e rent con cent ratio n catech in
样品
浓度 (μg/ml) 加标
量
(μg) 测定值
(n=9) (μg/ml) 测定平 均值
(μg/ml) 平均回
收率
(%) 标准 偏差 10-3 μg/ml 变异 系数 (%) 240.0 288.0 336.0 384.0 432.0
7.2 7.2 7.2 7.2
7.2
246.9～248.8 293.6～297.2 341.2～344.8 388.7～393.0 435.9～441.6
247.6 295.3 343.0 391.1 438.8
105 102 97 98 94
0.719 1.260 1.347 1.523 4.395
0.29 0.43 0.39 0.39 1.00
标样浓度
(μg/ml)
1.3 抗氧化性能的测定
192.00 240.00 288.00 336.00 384.00 432.00 480.00
Δ
A 0.0940 0.1272 0.1598 0.1911 0.2228 0.2590 0.2888
1.3.1 其测定
邻苯三酚
-碳酸盐缓冲溶液-Luminol 发光体系及 求得Δ A 与浓度关系的回归方程为Δ A= － 0.0195 ＋
6.32 × 10-4
C ，根据Δ A 与浓度关系可绘制出线性很好的 标准曲线。

求得相关系数γ =0.9964，经查表得临界相 关系数γ(99%,n-2)=0.9170，γ＞γ(99%,n-2)，说明茶多 酚浓度在 0～480(μg/ml)范围内，分别在波长为λ1=879nm ， λ2 =544nm ，λ3=427n m 处测吸光度时，则Δ A 与浓度 C 之间呈良好的线性关系，可按标准曲线法进行定量 分 析。

在比色管中分别加入 5 × 10-5 mol/L 的邻苯三酚溶 液、pH 为9.95 的碳酸盐缓冲溶液(含浓度为 0.2mmol/L 的 Luminol)，启动 IFFM-D 型流动注射化学发光仪 ，按 [5] 图 3 连接流路，流速均为 2.5ml/min ，测出邻苯三酚 - 碳 酸盐缓冲溶液 -Lumino l 发光体系的发光，测三次，取 峰值平均值进行定量，发光强度以计数表示。

1.2.2 稳定性实验
用与绘制吸收曲线配制相同的方法配制的样品进行 稳定性实验，结果表明：样品放置 4h 以上，测得其吸 光度值不变。

1.2.3 酸度影响
同时吸取 1ml 茶多酚标准溶液，分别置 7 只 25ml 容 量瓶中，再依次加入水 4ml 和酒石酸亚铁溶液 5ml 和不 同量的 NaOH(0.1mol/L)，在不同 pH 值条件下，分别测 定其吸光度值并且给出Δ A 值，结果说明在 pH7.0～8.0 之间吸光度值稳定，因此选定在 p H7.5 条件下进行测定。

图 1 流动注射化学发光分析流路图
F i g . 1 S ch ematic o f f lo w -in ject io n ch emilu min e sc en ce
1.2.4 显色剂用量的影响
吸取 1ml 茶多酚标准液于 10 只 25ml 容量瓶中，加 1.3.2 氧化性测定及抑制率计算 按 1.3.1 所采用的发光体系，测定一系列浓度红茶
入不同量的显色剂(酒石酸亚铁溶液)，再加 pH7.5 的磷
※营养卫生 食品科学
2005, Vol. 26, No. 8 369
抑制后的发光，分别测定三次，同样取峰值平均值进
行定量。

发光强度以计数表示。

以邻苯三酚—碳酸盐 缓冲溶液— Luminol 发光体系的发光强度为空白发光峰 值，可计算出加入红茶后抑制发光的程度。

η(%)=(I 0- I )/ I 0×100%
×10-5m o l/L 为适宜条件进行实验.
由以上实验可得出测定红茶的抗氧化性能的最佳条 件为：Luminol 的浓度 0.2mmol/L ，缓冲溶液的 pH 值 9.95，邻苯三酚的浓度 5 × 10-5 mol/L 。

1.3.6
红茶抗氧化性能的测定 在选定的最佳条件下，分别取浓度为 0.005、0.050、 式中：η(%)- 抑制率； I 0- 空白发光峰值
I- 加红茶后的发光峰值。

Lu mi no l 浓度对抑制率的影响
； 0.100、0.160、0.200、0.400、0.500、1.00、5.00m g /m l 一系列浓度的茶溶液进行实验，实验结果如图 3、图 4。

1.3.3
浓度(mg/ml)
红茶1# 抗氧化性测定 浓度(mg/ml)
红茶2# 抗氧化性测定 图 2
图 3
F ig . 2
Determin a tion o f an t io x i d atio n effect f o r black tea1 #
F ig . 3
Determin ation o f an tio x id atio n effect f o r black tea2 #
取浓度为 2.5 × 10-4mo l /L 的邻苯三酚溶液，p H 值为
9.95 的 Na 2CO 3-NaHCO 3 缓冲溶液，抑制实验中红茶的浓 度为 5mg/ml ，改变 Luminol 的用量，分别取 50、100、 150、200、250、500μl 、1ml 的 Luminol 用缓冲溶液 将其稀释至 25ml 进行实验。

Luminol 的加入量对抑制率 有一定的影响。

当L um in o l 的浓度为0.2m m ol /L 时红茶的抑制率达到 最大值。

因此本实验选 L u mi no l 的浓度为 0.2m mo l/L 时为 适宜的测定条件。

由图 2 和图 3 可以看出，随着浓度的逐渐增加，化
学发光强度呈现逐渐降低的趋势，而抑制率则呈现逐渐 增强的趋势，说明红茶具有较强的抗氧化性能，1# 红茶 的 I C 50(抑制率为 50% 时的溶液的浓度)为 0.18m g/ml ，同 样测得 2 红茶的 IC 50(抑制率为 50% 时的溶液的浓度) 为 0.13mg /ml 。

#
2
结果与讨论
实验结果由表 2 可以看出三波长光谱法测定红茶及 红茶饮料中茶多酚的含量的回收率为 94%～105%，变异 系数小于 1.00%，方法的准确度与精密度均较高，因此 三波长－光谱法为测定红茶及其饮料中茶多酚的含量提 供了更准确更可行的方法。

1# 、2# 红茶分别为不同产地红茶中茶多酚含量分别 为 14.20% 和 15.00%。

即含有较丰富的茶多酚。

茶多酚 是一种天然的抗氧化剂，由红茶抗氧化性能的测定可以 看出红茶具有较强的抗氧化性能，1# 、2# 红茶的 IC 50(抑 制率为 50% 时的溶液的浓度) 分别为 0.18m g /m l 和 0.13， 当红茶的浓度为 5.00m g/m l 时，抗氧化性分别为 98.25% 和 99.02%。

红茶中茶多酚含量和抗氧化性都随着红茶浓 度的逐渐增加而增加即红茶中茶多酚含量与抗氧化性能 呈现明显的构效关系。

1.3.4 缓冲溶液的 pH 值对抑制率的影响 取浓度为
2.5 × 10-4 mol/L 的邻苯三酚溶液，浓度 为 0.2mmol/L 的 Luminol 溶液，抑制实验中红茶的浓度 为 2mg/ml ，仅改变 Na 2CO 3-NaHCO 3 缓冲溶液的 pH 值进 行实验。

pH 值对抑制率有一定的影响，当 pH 值为 9. 62 时抑制率达到最大值，但是其发光强度很低，灵敏 度不好；当 pH 值为 9.95 时，抑制率和 pH 值为 9.62 时 的抑制率仅差 2% ，而且发光强度适宜，灵敏度也比较 好，便于准确读数。

故本实验选 pH 值 9.95 为适宜的测 定条件。

1.3.5 邻苯三酚浓度对抑制率的影响 取 pH 值为 9.95 的 Na 2CO 3-NaHC O 3 缓冲溶液，浓度 为 0.2m mo l /L 的 L um i no l 溶液，抑制实验中红茶的浓度为 2mg/ml ，仅改变邻苯三酚的浓度，分别取浓度为 0.01m o l /L 邻苯三酚 0.25、0.125、0.1、0.025ml 稀释至 25m l ，即 得浓度为 1 × 10-4 、5 × 10-5 、4 × 10-5 、1 × 10-5 mol /L 的邻苯三酚溶液进行实验.邻苯三酚的浓度对抑制率也有 一定的影响，当邻苯三酚的浓度为 5 × 10-5 m ol/L 时红茶 的抑制率达到最大值。

因此本实验选邻苯三酚浓度为 5
参考文献： [1] 于新蕊,曲军,丛月珠.茶叶的化学成分及药理作用研究
进展[J].中草药,1995,26(4):219-221. 中华人民共和国国家标准[S]. GB/T8313-87.
[2]
抑制率(%)
抑制率(%)
食品科学※营养卫生3702005, V ol. 26, No. 8
二氢杨梅素—铁螯合产物的抗氧化性质
郭清泉1 ，林淑英2 ，李大光1 ，周立清1 ，黄惠民1
(1.广东工业大学轻工化工学院，广东广州
2.广东省食品药品监督管理局，广东广州
510006；510080)
摘要：二氢杨梅素抗氧化活性优异，其作用机制是通过螯合金属离子，从而消除其对自由基氧化的催化作用。

本文测定二氢杨梅素—铁螯合物在油脂体系中的抗氧化活性，通过与原物质活性的比较，发现此制备过程对其抗氧
化活性影响很小，认为此螯合产物作为铁强化因子在油脂体系中有实际应用价值。

关键词：二氢杨梅素；铁；螯合物；抗氧化
DMY—FeChelateandItsInoxidizability
GUO Qing-quan1，LIN Shu-ying2，LI Da-guang1，ZHOU Li-qing1，HUANG Hui-min1
(1.Faculty of Chemical Engineering and Light Industry, Guangdong University of Technology,Guangzhou
510006,Chian;2.Guangdong Food and Drug Administration，Guangzhou510080,China)
Abstr act：Dihydromyricetinhasexcellentantioxidantactivity.Itsantioxidantactivityembodiesbychelatingmetalionand clearthecatalysistofreeradicaloxidation.Inthepaper,antioxidantactivityofDMY-FeChelateinoilsystemisdetermined.It draws an conclusion that the antioxidant activity of DMY-Fe Chelate is similar with DMY itself. DMY-Fe Chelate as Fe supplierusedingreasesystemhasrealisticvalue.
K e y w o r d s：dihydromyricetin；Fe；chelate；antioxidant
中图分类号：TS202.3文献标识码：A文章编号：1002-6630(2005)-08-0370-03
随着人类健康意识的增强，对天然抗氧化剂的开发和应用是当前研究热点。

二氢杨梅素是一种优良的天然抗氧化剂，在蛇葡萄属植物中含量极高，具备大规模工业化开发生产的条件[1]。

林淑英在其博士学位论文中认为二氢杨梅素可以螯合金属离子，并且螯合作用发生在3-羟基-4-羰基上或3'、4'酚羟基上，从而消除金属离子对自由基氧化的催化作用[2] 。

铁是一种重要的微量元素，人体缺铁容易导致出现缺铁性贫血等一系列并发症。

改善缺铁状况主要是通过膳食营养补充剂(主要是富含铁或维生素C的食品)和食品营养强化剂(主要是铁强化等保健食品)等途径来加以预防和起到辅助治疗的作用[3]。

本研究利用二氢杨梅素螯合金属离子的特性，制备
二氢杨梅素—铁的螯合物，作为铁强化食品的主要功效成分，起到补充和强化人体铁元素含量的目的。

同时测定此螯合物在动物油脂体系中的抗氧化活性，讨论其抗氧化活性的变化规律。

1 材料与方法
1.1材料和设备
收稿日期：2005-06-09
作者简介：郭清泉(1975-)，男，讲师，博士，从事植物天然产物研究与开发。

[3]Hui R H, Hou D Y, Hui Y L.Quantitave determination of
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山师范学院学报,2002,4(1):42-45.
Song Zheng-Hua, Zhang Ni.Flow-injection chemilumines- cencedeterminationofreserpineinmidicineandbiological
fluidswithControlled-Reagent-Releasetechnology[J].Chi-
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