C18反相硅胶柱的使用

老光头2007-03-28 18:20 1. 使用HPLC C18 柱摸出来的条件，走C18反相硅胶常压柱，发现HPLC在某一浓度梯度洗脱下来的东西，恰恰在同一梯度条件下，用反相硅胶常压柱却洗脱不下来，存在很严重的滞后现象，这样一来用HPLC C18 柱摸出来的条件走反相硅胶常压柱根本起不到多大的分离作用．不知大家在走反相常压柱时，其洗脱梯度是如何摸的？怎样解决HPLC 和一般常压柱之间滞后问题？
我们一般用反相C18层析板来摸条件的，。

用液相来摸条件太慢了。

而且有一定的差别。

可以找绿百草买。

2. 在走反相硅胶常压柱时，如何判断某一浓度梯度样品是否完全洗脱完呢？有没有既方便快捷，又有效的方法？可否用正相TLC板来检测呢？
呵呵。

只能点板拉。

没别的办法，又不能单纯看颜色的判断。

可以用正相板来检测的。

但如果你的东西是正相一个点，反相几个点的时候一定要小心注意拉。

别判断错了。

3. 在使用反相硅胶常压柱分离皂苷类化合物时，怎样才能使柱子的柱效比较高，不知大家有没有一些小技巧？
柱效高是你装柱的问题，要尽量装紧点，用甲醇冲一段时间，让它压紧。

你的是常压柱？那可能会很慢的阿。

干嘛不买个蠕动泵加点压阿？
4.上样量和反相硅胶的比例为多少时，分离效果较好？
一般上样量200-300mg，柱长约50-60cm。

不过我认为这看你的样品斑点的多少来
老光头2007-03-28 18:20
1、HPLC的柱效在10万以上，不过用的填料粒径在5um，而常用的反相常压柱，粒径40～60um，柱效只有1000，并且速度要慢很多，这就造成楼主说的滞后。

解决办法只能靠走反相板，或者根据经验来。

Merck的反相板是比较贵，不过你可以每次用甲醇反复展开清洗几次，然后拿来重新用啊。

摸条件和走正相板子一样，多尝试一下。

2、判断是否走完，点板就可以了。

3、装柱最好加压，能加多大压力加多大压力，我们装柱用的是耐压的玻璃柱，装柱压力可以达到7bar，柱效比常压沉降的好很多。

4、上样量跟你的柱体积，柱床高度很有关系。

如果能加压，反相柱床高度40cm就足够了，上样量根据柱内径来算，原则是摸条件时不超过柱体积的1％，如果分离度很好，可以过载加大上样量。

其实皂苷类的化合物用Sephadex LH－20分效果也不错，能够使用的溶剂很宽，不同的溶剂洗脱行为差异很大，而且算下来使用成本比反相硅胶还是要少的，毕竟Sephadex LH －20耐酸碱，在甲醇中能溶胀4倍。