C18反相硅胶柱的使用
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老光头2007-03-28 18:20 1. 使用HPLC C18 柱摸出来的条件,走C18反相硅胶常压柱,发现HPLC在某一浓度梯度洗脱下来的东西,恰恰在同一梯度条件下,用反相硅胶常压柱却洗脱不下来,存在很严重的滞后现象,这样一来用HPLC C18 柱摸出来的条件走反相硅胶常压柱根本起不到多大的分离作用.不知大家在走反相常压柱时,其洗脱梯度是如何摸的?怎样解决HPLC 和一般常压柱之间滞后问题?
我们一般用反相C18层析板来摸条件的,。
用液相来摸条件太慢了。
而且有一定的差别。
可以找绿百草买。
2. 在走反相硅胶常压柱时,如何判断某一浓度梯度样品是否完全洗脱完呢?有没有既方便快捷,又有效的方法?可否用正相TLC板来检测呢?
呵呵。
只能点板拉。
没别的办法,又不能单纯看颜色的判断。
可以用正相板来检测的。
但如果你的东西是正相一个点,反相几个点的时候一定要小心注意拉。
别判断错了。
3. 在使用反相硅胶常压柱分离皂苷类化合物时,怎样才能使柱子的柱效比较高,不知大家有没有一些小技巧?
柱效高是你装柱的问题,要尽量装紧点,用甲醇冲一段时间,让它压紧。
你的是常压柱?那可能会很慢的阿。
干嘛不买个蠕动泵加点压阿?
4.上样量和反相硅胶的比例为多少时,分离效果较好?
一般上样量200-300mg,柱长约50-60cm。
不过我认为这看你的样品斑点的多少来
老光头2007-03-28 18:20
1、HPLC的柱效在10万以上,不过用的填料粒径在5um,而常用的反相常压柱,粒径40~60um,柱效只有1000,并且速度要慢很多,这就造成楼主说的滞后。
解决办法只能靠走反相板,或者根据经验来。
Merck的反相板是比较贵,不过你可以每次用甲醇反复展开清洗几次,然后拿来重新用啊。
摸条件和走正相板子一样,多尝试一下。
2、判断是否走完,点板就可以了。
3、装柱最好加压,能加多大压力加多大压力,我们装柱用的是耐压的玻璃柱,装柱压力可以达到7bar,柱效比常压沉降的好很多。
4、上样量跟你的柱体积,柱床高度很有关系。
如果能加压,反相柱床高度40cm就足够了,上样量根据柱内径来算,原则是摸条件时不超过柱体积的1%,如果分离度很好,可以过载加大上样量。
其实皂苷类的化合物用Sephadex LH-20分效果也不错,能够使用的溶剂很宽,不同的溶剂洗脱行为差异很大,而且算下来使用成本比反相硅胶还是要少的,毕竟Sephadex LH -20耐酸碱,在甲醇中能溶胀4倍。