mir-141-3p对脑胶质瘤细胞生长和wnt信号通路的影响

殖ꎬ克隆形成实验检测细胞克隆形成能力ꎬ流式细胞术检测
为明确 ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 在脑胶质瘤发生中的作用提供
ｃ￣ｍｙｃ、生存蛋白( ｓｕｒｖｉｖｉｎ) 和活化型 Ｃａｓｐａｓｅ￣３( Ｃ￣ｃａｓｐａｓｅ￣３)
１ 材料与方法
ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 表达水平低于正常星形胶质细胞 ＨＡꎬ Ｕ￣８７ＭＧ
１. １ 材料 正常星形胶质细胞 ＨＡ 购自上海基免
作者简介:江源铭ꎬ男ꎬ硕士研究生ꎻ
盛宝英ꎬ女ꎬ主 任 医 师ꎬ 教 授ꎬ 硕 士 生 导 师ꎬ 责 任 作 者ꎬ Ｅ￣
ｍａｉｌ:ｓｈｅｎｇｂａｏｙｉｎｇ１２３＠ １６３. ｃｏｍ
１. ２ Ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ 检测 ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 在胶质瘤细
细胞 ＣＨＧ￣５、Ｕ￣８７ＭＧ、Ｕ２５１ꎬ按照每个 ２５ ｍｍ 的培
ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 对脑胶质瘤细胞生长和 Ｗｎｔ 信号通路的影响
江源铭１ ꎬ盛宝英２
摘要 目的 探讨 ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 对脑胶质瘤细胞生长的影响
瘤细胞的恶性表型 [４] ꎮ Ｗｎｔ 通路在胶质瘤等肿瘤组
质细胞 ＨＡ 和脑胶质瘤细胞 ＣＨＧ￣５、Ｕ￣８７ＭＧ、Ｕ２５１ 中 ｍｉＲ￣
增殖ꎬ从 而 发 挥 抗 肿 瘤 作 用 [５] ꎮ 该 实 验 探 讨 ｍｉＲ￣
染 ｍｉｍｉｃｓ ｃｏｎｔｒｏｌ 的细胞ꎮ ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 过表达后的 Ｕ￣８７ＭＧ
参考依据ꎮ
生物科技有限公司ꎻ脑胶质瘤细胞 ＣＨＧ￣５、Ｕ￣８７ＭＧ、
细胞增殖和克隆形成能力降低ꎬ细胞凋亡率升高ꎬ差异有统
ｔｒｏｌ、ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ ｍｉｍｉｃｓ 购自南通百奥迈科生物技术
细胞中 β￣ｃａｔｅｎｉｎ、ｃ￣ｍｙｃ、ｓｕｒｖｉｖｉｎ 蛋白水平降低ꎬＣ￣ｃａｓｐａｓｅ￣３
移液枪反复吹打ꎬ把裂解液转移到离心管内ꎬ添加
２００ μｌ 的氯仿ꎬ在室温下孵育 ３ ｍｉｎꎬ４ ℃ 、１２ ０００ ｒ /
ｍｉｎ 离心 １０ ｍｉｎꎮ ＲＮＡ 存在上层水相溶液中ꎬ收集
５００ μｌ 上层 ＲＮＡ 溶液ꎬ加入等体积异丙醇ꎬ于 ４ ℃
环境中孵育 ３０ ｍｉｎꎮ 离心后ꎬ将上清液吸除ꎬ添加
及机制ꎮ 方法 用表达水平ꎮ 在脑胶质瘤细胞中转染 ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ ｍｉｍ￣
ｉｃｓꎬＲｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ 检测过表达效果ꎮ ＭＴＴ 方法测定细胞增
织中过度激活ꎬ抑制其激活可以逆转肿瘤细胞恶性
１４１￣３ｐ 在脑胶质瘤细胞生长凋亡中的作用及机制ꎬ
蛋白( ｓｕｒｖｉｖｉｎ) 抗体和活化型 Ｃａｓｐａｓｅ￣３ ( Ｃ￣ｃａｓｐａｓｅ￣
１４１￣３ｐ 在脑胶质瘤细胞中表达下调ꎬ上调 ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 表达
３) 抗体购自美国 Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ 公司ꎮ
调 Ｗｎｔ 信号通路有关ꎮ
胞中的表达 取正常星形胶质细胞 ＨＡ 和脑胶质瘤
中图分类号 Ｒ ６５４ ２
１４１￣３ｐ 参与调控肿瘤细胞的生长ꎬ其对于不同的肿
瘤细胞作用不同ꎬｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 可以抑制食管癌等肿
２０１９ － ０７ － １６ 接收
基金项目:黑龙江省教育厅科学技术研究项目( 编号:１２５３１６９８)
作者单位:１ 佳木斯大学ꎬ佳木斯 １５４００３
２
佳木斯大学附属第一医院神经内科ꎬ佳木斯 １５４００３
ｍｉＲＮＡ 是一种单链 ＲＮＡꎬ其不能编码蛋白质ꎬ
ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 编 码 基 因 位 于 １４ 号 染 色 体 上ꎬ 属 于
ｍｉＲ￣２００ 家族ꎬ参与肿瘤的发生ꎬ其在不同肿瘤组织
中的表达水平不同ꎬ目前在胶质瘤、胰腺癌、食管癌
等肿瘤组织中发现 ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 低表达ꎬ而在乳腺癌
等肿瘤组织中发现 ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 高 表 达 [１ － ３] ꎮ ｍｉＲ￣
水平ꎬ内参为 Ｕ６ꎮ 实验重复 ３ 次ꎬ取均值ꎮ
１. ３ 细胞转染和过表达效果检测 取 Ｕ￣８７ＭＧ 细
胞ꎬ接种到 ２４ 孔细胞培养板中ꎬ按照 Ｌｉｐｏｔｅｃｔａｍｉｎｅ
２０００ 说明书将 ｍｉｍｉｃｓ ｃｏｎｔｒｏｌ、ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ ｍｉｍｉｃｓ 转
１５６２
安徽医科大学学报 Ａｃｔａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓ Ａｎｈｕｉ ２０１９ Ｏｃｔꎻ５４(１０)
网络出版时间:２０１９ － ９ － ３ １７:２６ 网络出版地址:ｈｔｔｐ: / / ｋｎｓ. ｃｎｋｉ. ｎｅｔ / ｋｃｍｓ / ｄｅｔａｉｌ / ３４. １０６５. ｒ. ２０１９０８３０. １４３４. ０１４. ｈｔｍｌ
７５％ 的乙醇洗涤沉淀ꎬ干燥后ꎬ以 ＤＥＰＣ 水溶解ꎮ 取
提取的 ＲＮＡ 样 品ꎬ 逆 转 录 合 成 ｃＤＮＡꎬ 进 行 Ｒｅａｌ￣
ｔｉｍｅ ＰＣＲꎬ程序为:９５ ℃ 、１５ ｍｉｎꎻ９５ ℃ 变性 １５ ｓꎻ５４
℃ 、６０ｓꎻ共 ５０ 个循环ꎮ 以 ２ － ΔΔＣｔ 法分析 ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ
后的 Ｕ￣８７ＭＧ 细胞中 ｍｉＲ￣１４１￣３ 表达水平高于没有转染及转
Ｕ２５１ 购自中国医学科学院肿瘤细胞库ꎻｍｉｍｉｃｓ ｃｏｎ￣
细胞凋亡ꎬＷｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测细胞中 β￣连环蛋白( β￣ｃａｔｅｎｉｎ) 、
蛋白水平ꎮ 结果 脑胶质瘤细胞 ＣＨＧ￣５、Ｕ￣８７ＭＧ、Ｕ２５１ 中
细胞中 ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ 表达水平最低ꎮ ｍｉＲ￣１４１￣３ｐ ｍｉｍｉｃｓ 转染
养瓶中加入 １ ｍｌ 的 ＴＲＩｚｏｌꎬ置于冰上裂解ꎬ期间用
抑制脑胶质瘤细胞生长并诱导细胞凋亡ꎬ作用机制可能与下
关键词 脑胶质瘤ꎻＷｎｔ 通路ꎻｍｉＲ￣１４１￣３ｐꎻ生长
文献标志码 Ａ 文章编号 １０００ － １４９２(２０１９)１０ － １５６２ － ０４
ｄｏｉ:１０. １９４０５ / ｊ. ｃｎｋｉ. ｉｓｓｎ１０００ － １４９２. ２０１９. １０. ０１３
司ꎻβ￣连环蛋白 ( β￣ｃａｔｅｎｉｎ) 抗体、 ｃ￣ｍｙｃ 抗体、 生存
计学意义( Ｐ < ０ ０５) ꎬｍｉＲ￣１４１￣３ｐ ｍｉｍｉｃｓ 转染后的 Ｕ￣８７ＭＧ
蛋白水平升高ꎬ差异有统计学意义( Ｐ < ０ ０５) ꎮ 结论 ｍｉＲ￣
有限公司ꎻＬｉｐｏｔｅｃｔａｍｉｎｅ２０００ 购自美国 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ 公