第四章 药物定量分析与分析方法验证

1、含卤素有机药物
含卤素有机药物是指分子结构中所含卤素直接与芳环
如果测得理论板数低于规定的最小理论板数， 应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色 谱柱填充的优劣等），使理论板数达到要求。
(2)分离度(R)
在定量分析时，要求定量峰与其他峰 或内标峰之间有较好的分离度。除另有规定 外，分离度应大于1.5。
分离度（R）的计算公式见下式：
R 2 t R2 t R1
含量（CX）= f
AX AS / CS

式中，AX为供试品峰面积或峰高；CX为供
试品的浓度 。
丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品 对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成 每lmL中约含1mg的溶液。精密量取该溶液 和内标溶液（1．6mg/ml苯丙酸诺龙甲醇溶 液）各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀，取10μl注入液相色谱仪，记录
例
取盐酸麻黄碱0.1532g，精密称定， 加冰醋酸10ml溶解后，加醋酸汞试液 2ml与结晶紫指示液1滴，用HClO4滴 定至绿色，用去0.1022mol/L的高氯 酸滴定液7.50m1，空白试验消耗高氯 酸滴定液0.08ml。已知每1ml高氯酸 滴定液（0.1mol/L）当于20.17mg的 C10H15ON·HCl。试计算盐酸麻黄碱 的百分含量？（99.80％）
1.分离原理
吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱
吸附色谱
根据填充剂吸附活性 对样品的吸收系数不 同而分离
充填剂：硅胶
分配色谱
根据固定相与流动相的极性不同而分为 正相分配色谱和反相分配色谱 两者的区别如下图所示：
固定相
流动相
正相分配
极性
非极性
反相分配
非极性
度，AR为对照品的峰面积或峰高。
中国药典规定紫外测定中，溶液 的吸收度应控制在
A、0.00~2.00范围 B、0.3~1.0范围 C．0.2~0.8范围 D．0.1~1.0范围 E．0.3~0.7范围
高效液相色谱法用于含量测定时， 对系统性能的要求
A 理论板数越高越好 B 依法测定相邻两峰分离度一般须
精 密 称 定 本 品 0.0992g ， 置 250ml 碘 瓶 中，加水10m1，振摇使溶解，精密加溴 滴 定 液 （ 0.05mol/L ） 25ml ， 再 加 盐 酸 5m1，立即密塞并振摇1min，在暗处静置 15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液 10m1，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸 钠滴定液（ 0.1mol/L，F＝0.981）滴定， 消耗14.76ml。另做空白试验，消耗硫代 硫酸钠滴定液22.84ml。已知司可巴比妥 钠分子量为260.23.，计算司可巴比妥钠的 百分含量？
L VC 100 % 5 2.0 10 5 100 % 0.1%
S
0.1
含量计算公式：
含量%
E1% 1cm
A l 100

D
100%
W
对乙酰氨基酚的含量测定：取本品 40mg，精密称定，置250mg量瓶中， 加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后，加 水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置 100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液 10ml，加水至刻度，摇匀，照分光光 度法，在257nm的波长处测定吸收度 为0.572，按C8H9NO2的吸收系数为 715计算，求其百分含量？
（2）对照法
A供 E11c%mc供l
A对
E11c%m c对l
A供 c供 A对 c对
c供Βιβλιοθήκη c对 A供 A对
含量计算公式：
含量% C供 D 100% W
例： 维生素B12的含量测定 精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀
释至50mL，精密量取10ml，加水稀释 至50mL ；另配制对照液，精密称定对 照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在 361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸 光度为0.508和0.518，求B12注射液的浓 度
B.回滴定法(剩余滴定法)

做空白试验时的计算方法

不做空白试验时的计算方法
滴定度（T）：指每1ml某摩尔浓度的 滴定液所相当的被测药物的重量。
滴定度的计算：
被测药物（B）与滴定液（A）之间 按一定的摩尔比进行反应：
aA bB cC dD
T

C
b a

MB (mg/ml)
原料药含量测定结果的计算 A、直接滴定法

W1 W2
分离度图
(3)重复性
取对照品溶液，连续进样5次，除另有规 定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不 大于2.0%。
也可按各品种校正因子测定项下，制备 相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入 规定量的内标溶液，制成3种不同浓度的溶液， 分别进样3次，计算平均校正因子，其相对标 准偏差也应不大于2.0%。
(4)拖尾因子(T)
为保证测量精度，特别是采用峰高法测量时，应检查待
测峰的拖尾因子（T）是否符合规定，或不同浓度进样的校 正因子误差是否符合要求。除另有规定外，T应在 0.95~1.05之间。 拖尾因子计算公式为：
式中，W0.05h为0.05峰高处的峰宽；d1为峰极大值至峰前
沿之间的距离。
一、容量分析法
1.特点
容量分析法是药物分析中最为常用的一 种分析方法。其优点是精密度好、准确度高、 操作简单快速，是原料药含量测定的首选方 法。
它的缺点是专属性不强、灵敏度不高。
2.计算
(1)滴定度(T)
(2)滴定液浓度校正因素(F)
(3)原料药百分含量计算
A.直接滴定法
CH2 CHCH2 CO N C ONa +Br2（定量过量）
CH3(CH2)2CH CO NH
CH3
Br Br
CH2 CHCH2 CO N C ONa
CH3(CH2)2CH CO NH
CH3
Br2＋2KI＝2KBr＋I2
I2＋2Na2S2O3＝2NaI＋Na2S4O6
二、光谱分析法
按能量交换方向分 按作用结果不同分

拖尾因子图
4.色谱定量分析方法
用色谱法定量分析时，可根据供试
品的具体情况采用峰面积法或峰高法。 测定主成分含量时，常采用以下两种方 法：

(1)内标法加校正因子测定供试
品中主成 分含量
按规定的方法，精密称（量）取对照品和 内标物质，分别制成溶液，精密量取各溶液， 制成校正因子测定用的对照品溶液。量取一定 量注入色谱仪，记录色谱图，测量对照品和内 标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：
>1 C 柱长尽可能长 D 理论板数，分离度等须符合系统适
用性的各项要求，分离度一般须>1.5 E 由于采用内标法，对照品法，系统
的性能无须严格要求
第二节 定量分析样品的前处理方法
一、分子结构式特点与前处理关系
在分析含卤素或含金属有机药物时，通常要
进行适当前处理，使卤素或金属元素转变为适于分 析的状态。由于卤素或金属原子在药物分子中的结 合状态不同，因而其预处理方法也不同。下面分别 介绍；
色谱图。另取本品适量，同法测定，内标法 计算含量。已知对照品溶液为1．052mg/ml， 样品溶液为1．032mg／mL，测得对照液中 丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为54678和 61258，样品液中丙酸睾酮和内标准的峰面 积分别为52213和61228．计算丙酸睾酮的含 量
(2)外标法测定供试品中主成分含量
②外标一点法
按各品种项下的规定，精密称（量） 取对照品和供试品，分别制备对照品溶液 和供试品溶液。分别精密取一定量，注入 色谱仪，记录色谱图，测量对照品和供试 品中待测成分的峰面积（或峰高），按下 式计算含量：

含量（CX）= CR
AX AR

式中， CX为供试品的浓度，AX为供
试品的峰面积或峰高；CR为对照品的浓
第四章
药物定量分析 与分析方法验证
基本要求
熟悉含卤素与含金属药物的结构特点与前处理 方法之间的关系
掌握有机破坏方法(氧瓶燃烧法、湿法破坏及干 法破坏）的特点及应用
掌握定量分析方法(容量分析、光谱分析及色谱 分析）的特点及其应用
熟悉药品质量标准分析方法的验证
第一节 定量分析方法特点
校正因子（f）= AS / CS AR / CR
式中AS为内标物质的峰面积或峰高， AR为药物对照品峰面积或峰高：CS为内标 物质的浓度 ；CR为药物对照品的浓度。
再取含有内标物质的供试品溶液，注入色 谱仪，记录色谱图，测量供试品中待测成分和 内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：
极性
分配色谱
充填剂：多孔聚合物
离子交换色谱
是根据固定相的离子交换基和样品成分中的 离子性基进行交换来分离的
凝胶色谱
凝胶色谱分离方法是 利用分子振动效应， 根据样品分子的大小 而进行分离。所以又 称为排斥色谱
充填剂多采用：一定 孔径的多孔性聚合物
2.高效液相色谱系统条件
(1) 固定相
3.色谱系统适用性试验
色谱系统适用性试验系指用规定的对 照品或原料药的精制品（纯度≥99.5%）对 仪器进行试验和调整，应达到规定的要求； 或在规定的分析状态下色谱柱的最小理论板 数、分离度、重复性和拖尾因子应达到规定 的要求。
(1)色谱柱的理论板数（n）
在选定的色谱条件下，注入供试品溶液或规定 的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分 或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下 同，但应取相同单位）和半峰高宽（Wh/2），按 n=5.54（tR/Wh/2）2 计算色谱柱的理论板数。
B、剩余滴定法
含量% （V0 Vb )T F 100% W
T——滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的 mg 数
V——滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml）
V0——滴定时，空白消耗滴定液的体积（ml）
F——浓度校正因子 w——供试品的质量
F c实测 c标准
司可巴比妥钠的含量测定：
外标法可分为标准曲线法和外标一点法： ①标准曲线法 取纯物质配制成一系列不同浓度的标准溶液，
分别取一定量注入色谱仪，测量峰面积或峰高，以 峰面积或峰高对浓度作标准曲线。得回归方程或回 归曲线。然后在同样条件下，注入供试品溶液，测 得待量组分的峰面积或峰高。根据标准曲线或回归 方程，计算出待测物的含量。
3．比色法——标准曲线法
示例
芦丁含量测定
0.710mg/25mL
三、色谱分析法
色谱法由于其具有很强的分离能力，因 而在药物分析中占有越来越重要的地位。它 主要用于制剂及复方制剂的含量测定，特别 适合那些结构类似，有相关杂质或附加成分 干扰或各组分之间互相干扰的品种，其中以 高效液相色谱法应用最为广泛。

常用的固定相有硅胶和化学鍵合相，
首选十八烷基硅烷键合硅胶（ODS）、辛
基硅烷键合硅胶(C8)，氰基或氨基键合硅
胶也有使用。
（2）流动相
首选甲醇-水系统。
（3）检测器
多用紫外检测器，并应注意考察溶剂的 紫外吸收对待测组分吸收度的影响。
用内标法定量时，内标物质应选择容易 获得并对测定方法不产生干扰的物质。
含量% V T F 100% W
V——滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml） F——浓度校正因子
例
取苯巴比妥0.4045g，加入新制的 碳酸钠试液16ml使溶解，加丙酮 12ml与水90ml，用硝酸银滴定液 （0.1025mol/L）滴定至终点，消 耗硝酸银滴定液16.88 ml，求苯巴 比妥的百分含量（每1ml0.1mol/L 硝酸银相当于23.22mg的 C12H22N2O3）？（99.3%）
吸收光谱法 发射光谱法 原子光谱→线状光谱 分子光谱→带状光谱
1.紫外-可见分光光度法
（1）特点
①灵敏度较高 ②准确度较好 ③仪器价格较低 ④应用较广泛（主要用于制剂的含量测定
以及含量均匀度和溶出度的检查）
（2）计算公式
定量依据：朗伯-比尔定律

A = ELC
A适宜范围0.3～0.7
含量测定方法：
①对照品比较法（ 美国药典多用该法）
②吸收系数法（ 中国药典多用该法） ③计算分光光度法 (用于复杂及有干扰的多组分测定)
2. 紫外分光光度法 （1）吸收系数法
A E11c%mcl
c(g/100ml) A E11c%ml
c(g/ml)
A
E11c%ml 100