实验十一饮料中糖精钠的测定

实验十一饮料中糖精钠的测定
（薄层色谱法定性及半定量）
一、实验目的
1．掌握硅胶粘合薄板的制备方法及薄层分析的操作技术。

2．了解薄层层析法在混合样品分离、鉴定中的应用。

二、实验原理
在酸性条件下，食品中的糖精钠用乙醚提取、浓缩、薄层色谱分离、与标准比较，进行定性和半定量测定。

S N
C
Na O
O O 2H2
S
N
C
H
O
O O
+ 2H2O + NaCl
三、仪器和试剂
（一）仪器
薄层板：20×5 cm或20×10 cm，薄层展开槽，微量移液管或微量注射器，干燥箱，干燥器，253.7 nm紫外灯，5 ml具塞比色管，125 ml分液漏斗。

（二）试剂
（1）1:1 HCl（A. R）；无水硫酸钠；乙醚（不含过氧化物）；无水乙醇及95%乙醇；4%氢氧化钠。

（2）糖精钠标准溶液：精密称取0.0851 g以120℃干燥4 h后的糖精钠，加乙醇溶解，移入100 ml容量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度。

此溶液每毫升相当于 1 mg糖精钠（C6H4CONNaSO2⋅2H2O）。

使用时将此溶液稀释成每毫升含糖精钠0.3 mg。

（3）展开剂：苯-乙酸乙酯-36%乙酸（24:14:2）。

四、实验步骤
1. 薄层板的制备
称取市售硅胶G 3~5g，加3 ml水，于研钵中研磨片刻，调成糊状，涂成0.25～0.3 mm 厚，20⨯5 cm的薄层板，稍干后，于110℃活化l h．取出后置于干燥器内备用。

放置一周后要重新活化。

2. 样品提取
准确量取10.00 ml均匀试样（如样品中含有二氧化碳，先加热除去。

如样品中含有酒精，加4%氢氧化钠溶液使其呈碱性，在沸水浴中加热除去。

）置于100 m1分液漏斗中，加2 ml 1:1盐酸，用30、20、10 ml乙醚依次提取3次，合并乙醚提取液，用5 ml盐酸酸化水
洗涤一次，弃去水层。

乙醚通过无水硫酸钠脱水后，挥发乙醚，取2 ml 乙醇溶解残渣，密塞保存，备用。

3．点样
在薄层板下端2 cm 处，用微量注射器10 μl 和20 μl 样液点两个样品点，再取10 μl 和20 μl 标液点两个标准点（相当糖精钠3.0和6.0 g ，要求样点直径<3 mm ，而且圆点大小应尽量一致）。

4．展开与显色
将点好样的薄层板放入盛有展开剂的展开槽中（展开剂液层约0.5 cm ，并预先达到饱和状态），展开至10 cm ，取出薄层板，在通风橱中挥干，在253.7 nm 紫外灯下观察比较，进行定性及半定量。

五、定性及半定量
1．定性 根据样品点和标准点的比移值（R f ）进行定性。

2．半定量 根据斑点大小进行半定量。

计算：
100010001
2s ⨯⋅⨯=V V m m x 式中，x 为样品中糖精钠的含量，g/kg 或g/L ；m s 为样液中相当于标液中糖精钠的质量，mg ；m 为样品的质量（或体积），g （m1）；V 1为样品提取液残留物加入乙醇的体积，ml ；V 2点样体积，ml 。

六、注意事项
1．点样时注意不要面对风向，否则点样体积不准，影响结果的准确性。

2．显色前薄板一定要放在90℃烘箱中烤l0～15 min ，否则显色慢且降低灵敏度。

3．展开槽一定要洗净，晾干，展开前将展开剂预先饱和展开槽，以减少边缘效应。

4．点样量不宜太多，否则会分离不好，有拖尾现象。

5．起始线切勿浸入展开剂中。

6．在提取过程中，乙醚用量较大，因乙醚易燃，故必须严禁烟火。

苯因毒性较大，注意通风。

七、思考题
1．展开剂极性大小和比移值之间有什么关系?
2．展开剂的选择原则有哪些?
3．薄层色谱法的定性、半定量的依据是什么?为使结果正确，在操作中应注意什么?。