九华黄精九蒸九晒炮制过程中总多糖的含量变化研究

第37卷第6期佛山科学技术学院学报（自然科学版）V o l.37N o.6 2019年11月Journal of Foshan University（Natural Sciences Edition）Nov.2019文章编号：1008-0171（2019）06-0058-05
九华黄精九蒸九晒炮制过程中总多糖
的含量变化研究
胡叶青1，胡云飞2，吴其国1
（1.安庆医药高等专科学校药学系，安徽安庆246052；
2.合肥市食品药品检验中心，安徽合肥230000）
摘要：目的测定九华黄精九蒸九晒过程中总多糖的含量。

方法以0.2%蒽酮-硫酸溶液为显色剂，测定波长为635nm，采用紫外-可见分光光度法测定吸光度，计算样品中总多糖含量。

结果野生和栽培九华黄精的总多糖随着蒸制次数的增加，总多糖的含量均是先增加后减少，最终测得野生和栽培九华黄精九蒸九晒后总多糖含量为12.67%、10.84%。

结论测定结果为九蒸九晒法炮制九华黄精的质量标准控制提供一定的科学依据。

关键词：九华黄精；九蒸九晒；总多糖
中图分类号：R283.3文献标志码：A
黄精为百合科植物滇黄精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）、黄精（Polygonatum sibiricum Red.）或多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua）的干燥根茎。

安徽九华山地区的黄精品种为多花黄精，该植物在九华山地区生长范围广泛，在云南、贵州、浙江、山东也有分布，常见于阴湿山坡和沟谷处，但药材质量都不如九华山地区，为突出其地方特色，取名为九华黄精［1］。

安徽的九华黄精品种更是获批国家地理标志保护产品［2］。

从古至今黄精的炮制方法有很多，对黄精的炮制历史沿革总结，传统的炮制方法以九蒸九晒法为主，九华黄精作为一个地方特色品种，当地很多企业结合九华山旅游资源通过古法九蒸九晒炮制九华黄精，将其加工成具有地方特色的药食两用品种，在市场上比较受欢迎，基于此，对其质量标准研究已显得比较重要。

多糖是黄精的主要功能性物质［3］，现代研究表明黄精多糖具有多种药理作用。

主要包括以下几个方面的内容。

（1）有研究表明黄精多糖可提高免疫功能，傅圣斌等［4］通过实验研究表明黄精多糖可以提高免疫抑制模型小鼠的免疫力，肖小妹等［5］研究表明黄精多糖可呈剂量依耐性的提高肾病综合征患儿红细胞免疫功能。

（2）在神经系统方面，黄精多糖可以呈浓度依耐性抑制多巴胺神经元凋亡、促进多巴胺神经元再生作用［6］，黄芳等［7］通过大鼠迷宫实验证明黄精多糖可提高大鼠的记忆和学习能力，陈辰等［8］研究表明黄
收稿日期：2019-02-25
基金项目：安徽省高校自然科学研究重点资助项目（KJ2017A886）；安庆医药高等专科学校校级质量工程项目（2019JXYJ005）作者简介：胡叶青（1989-），女，安微宣城人，安庆医药高等专科学校助教。

通信作者：吴其国（1986-），男，安微宣城人，安庆医药高等专科学校讲师。

第6期
胡叶青等：九华黄精九蒸九晒炮制过程中总多糖的含量变化研究59精多糖可通过提高抑郁小鼠脑内单胺类神经递质的含量来改善抑郁症模型小鼠的行为学。

（3）黄精多糖具有心肌细胞保护作用，雷升萍等［6］研究表明黄精多糖对H/R诱导的H9c2心肌细胞具有保护作用，其作用可能与抑制心肌细胞凋亡有关。

（4）黄精多糖对肝肾有保护作用，韩春杨等［10］研究表明黄精多糖对CCl4诱导的大鼠肝损伤有良好的保护保护，李超彦等［11］研究表明黄精多糖能改善顺铂（DDP）所致大鼠肾功能损害。

（5）黄精多糖还具有降血糖、抗肿瘤以及抗菌等作用，王艺等［12］研究表明黄精多糖能改善STZ诱导的糖尿病大鼠胰岛素抵抗和症状，段华等［13］研究表明黄精多糖通过激活Caspase系统诱导肝癌H22移植瘤细胞凋亡，李志涛等［14］提取的黄精多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄球菌均具有明显的抑制作用。

本研究通过测定九华黄精九蒸九晒炮制过程中总多糖的含量变化，为九蒸九晒法炮制九华黄精的质量控制提供依据。

1仪器与试药
1.1仪器
T90+型紫外可见分光光度计（英国PG INSTRUMENTS公司），XP26型分析天平（德国Mettler toledo公司，精度0.001mg），HH-4型数显恒温水浴锅（山东鄄城创新仪器有限公司）。

1.2试药
葡萄糖对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110833-201707，纯度：99.9%），蒽酮（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号20170222），硫酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），水为超纯水（屈臣氏公司）。

九华黄精栽培品购自池州市大王洞中药材种植专业合作社，九华黄精野生品购于池州市九华府金莲智慧农业有限公司。

2方法与结果
2.1九蒸九晒九华黄精的制备
取野生和栽培九华黄精生药材，除去杂质，洗净，每100kg黄精，用黄酒20kg。

（1）第1次蒸制、晒干。

将黄酒总量的20%，与净选好的生品九华黄精搅拌均匀，并闷润至黄酒被药材吸尽，再蒸制8h，取出，放在太阳下晒至药材外皮微干》
（2）第2次至第8次蒸制、晒干。

均是将上一步的半成品拌入黄酒总量的10%，闷润至黄酒被药材吸尽，再取出，放在太阳下晒至药材外皮微干，反复操作7次。

（3）第9次蒸制、晒干。

将剩余10%黄酒拌入上述经8次蒸制、晒干的半成品中，蒸至表面黑漆色且发亮，取出，晒至表面干燥，即得九华黄精的九蒸九晒炮制品。

2.2对照品溶液的制备
取经105°C干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33mg，精密称定，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得（每1mL中含无水葡萄糖0.33mg）。

2.3测定波长的选择
精密吸取多糖溶液适量，置10mL具塞刻度试管中，加水至2.0mL，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10min，取出，立即置冰水浴中冷却10min，取出，以未加葡萄糖溶液为空白对照，然后于450~700nm波长范围内扫描，结果如图1所示。

由图1可知，黄精多糖与蒽酮-浓硫酸反应后在635nm处有最大吸收峰，由此可以确定635nm为测定波长。

佛山科学技术学院学报（自然科学版）第37卷
图1蒽酮-硫酸分光光度法的紫外扫描图谱
2.4标准曲线绘制
精密量取对照品溶液0.l 、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL ，分别置10mL 具塞刻度试管中，
各加水至2.0mL ，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10min ，取出，立即置冰水浴中冷却10min ，取出，以相应试剂为空白。

参照紫外-可见分光光度法（通则0401)，在635nm 波长处测定吸光度。

以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线如图2所示，得线性回归方程：y =0.0031x +0.1767
（r =0.9990）。

由图2可知，葡萄糖浓度在16.5~198.0μg/mL 范围内线性关系良好。

图2葡萄糖的标准曲线
2.5供试品溶液的制备
取60℃干燥至恒重的本品细粉约0.20g ，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇60mL ，置水浴中
加热回流1h ，趁热滤过，残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10mL ，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水60mL ，置沸水浴中加热回流1h ，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次8mL ，合并滤液与洗液，
放冷，转移至100mL 量瓶中，加水至刻度，摇匀，
即得供试品溶液。

2.6稳定性试验
精密吸取供试品溶液1mL ，置10mL 具塞干燥试管中，
照2.4项标准曲线绘制的方法，自“加水至2.0mL ”起，显色后，分别于0、0.5、1、2、4、8、12、24h 依法测定吸光度，RSD 为1.97%，结果表明样品溶液在24h 内稳定性良好。

2.7精密度试验
精密吸取对照品溶液0.5mL 于10mL 具塞干燥试管中，照2.4项标准曲线绘制的方法，自“加水至
2.0mL ”起，依法测定吸光度，重复测定6次，RSD 为0.62%，结果表明仪器精密度良好。

0.7500.5870.4250.2620.100400.00
500.00
600.00700.00760.00
波长/nm
0.90.80.70.60.50.40.30.20.10
0.00
50.00
100.00
150.00
200.00
浓度/（μg ·mL -1）
250.00
60
第6期2.8重复性试验
取60℃干燥至恒重的九晒九晒九华黄精粉约0.2g ，精密称定，按2.5项供试品溶液的制备方法制
备供试品溶液，平行制备6份供试品溶液，分别精密量取供试品溶液1mL ，置10mL 具塞干燥试管中，照2.4项标准曲线绘制的方法，自“加水至2.0mL ”起，依法测定吸光度。

经计算6份供试品溶液的RSD 为1.77%，结果表明该方法重复性良好。

2.9加样回收率试验
取6份经60℃干燥至恒重的九晒九晒九华黄精粉约0.2g ，精密称定，
置100mL 圆底烧瓶中，精密加入对照品溶液适量，按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别精密量取供试品溶液1mL ，置10mL 具塞干燥试管中，照2.4项标准曲线绘制的方法，自“加水至2.0mL ”起，依法测定吸光度。

计算平均回收率为98.23%，RSD 为2.05%，表明该方法回收率良好。

2.10样品溶液的测定
精密量取供试品溶液1mL ，置10mL 具塞干燥试管中，照2.4项标准曲线绘制的方法，自
“加水至2.0mL ”起，依法测定吸光度，计算多糖含量，
结果如表1所示。

表1九华黄精九蒸九晒过程中总多糖含量的变化
3
总结与讨论
3.1结论
通过对九华黄精的九蒸九晒炮制过程中总多糖的含量测定可以得出以下结论。

（1）野生和栽培九华黄精的总多糖随着蒸制次数的增加，总多糖的含量均是先增加后减少，栽培九华黄精的总多糖含量由一蒸一晒的18.68%降为九蒸九晒的10.84%，四蒸四晒时达到最高31.51%》。

（2）野生九华黄精的总多糖含量由一蒸一晒的22.18%降为九蒸九晒的12.67%，五蒸五晒时达到最高32.81%。

3.2讨论
目前，九华黄精炮制多要反复蒸制，且以“反复蒸至滋润黑色”为经验指标［15］，九蒸九晒这种炮制方
法虽然会导致多糖含量降低，但却是传统的经典炮制方法，而2015年版《中国药典》仅规定了黄精多糖作为其含量限度，这种方法的专属性不够，难以反映黄精的质量特点［16］。

因此，在九华黄精炮制过程中，如何控制蒸制次数、时间等，并结合炮制过程中其它成分的变化，来制定其质量控制标准，需要进行更深入的研究。

参考文献：
［1］乐观,吴平平,陈龙胜.九华黄精高产栽培技术研究进展［J ］.安徽科技,2013（11）:24-25.
［2］吴其国,胡叶青,陈帅帅,等.安徽不同产地野生与栽培多花黄精中黄精多糖含量比较［J ］.甘肃中医药大学学报,2018,
35（1）:47-50.
蒸晒次数一蒸一晒两蒸两晒三蒸三晒四蒸四晒五蒸五晒六蒸六晒七蒸七晒八蒸八晒九蒸九晒
样品123456789
野生总多糖含量
22.1821.7226.6830.5932.8128.2824.3113.5212.67
栽培总多糖含量
18.6822.7227.4631.5127.9222.4720.5410.2510.84
（%）
胡叶青等：九华黄精九蒸九晒炮制过程中总多糖的含量变化研究61
佛山科学技术学院学报（自然科学版）第37卷
［3］陆建平,张静,张艳贞,等.黄精多糖的功能活性及应用前景［J ］.食品安全质量检测学报,2013,4（1）:273-278.［4］傅圣斌,钱建鸿,陈乐意,等.黄精多糖的提取及其对小鼠免疫活性的影响［J ］.中国食品学报,2013,13（1）:68-72.［5］肖小妹,沈小雄,张桂生,等.黄精多糖对儿童肾病综合征红细胞免疫功能影响的研究［J ］.赣南医学院学报,2018,38
（2）:134-136.
［6］陈娟,李友元,田伟,等.黄精多糖对帕金森病大鼠脑组织中PPAR-Y 表达的影响［J ］.现代生物医学进展,2010,10
（5）:814-818.
［7］黄芳,陈桃林,蒙义文,等.黄精多糖对老龄大鼠记忆获得和记忆再现的影响［J ］.应用与环境生物学报,1999,5（1）:
36-39.
［8］陈辰,徐维平,魏伟,等.黄精多糖对慢性应激抑郁小鼠模型行为学及脑内5-HT 的影响［J ］.山东医药,2009,49（4）:
39-41.
［9］雷升萍,龙子江,施慧,等.黄精多糖对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用［J ］.中药药理与临床,2017,33
（1）:102-106.
［10］韩春杨,杨明川,杨孜生,等.黄精多糖的提取及其对CCl4致大鼠肝损伤的保护作用［J ］.浙江农业学报,2018,30（4）:
537-547.
［11］李超彦,周媛媛,赵克芳,等.黄精多糖对顺铂致肾损害大鼠的肾功能和抗氧化指标的影响［J ］.中国老年学杂志,
2014,11（34）:6120-6121.
［12］王艺,彭国庆,江新泉,等.黄精多糖对糖尿病大鼠模型的保护机制研究［J ］.中医药导报,2017,23（2）:8-16.
［13］段华,王保奇,张跃文.黄精多糖对肝癌H_（22）移植瘤小鼠的抑瘤作用及机制研究［J ］.中药新药与临床药理,2014,
25（1）:5-7.
［14］李志涛,孙金旭,朱会霞,等.黄精多糖的提取及其抑菌性研究［J ］.食品研究与开发,2017,38（15）:36-38.［15］秦宇雯,袁玮,陆兔林,等.九华黄精的炮制工艺沿革及现代研究［J ］.中草药,2018,49（18）:4436.［16］姜程曦,张铁军,陈常青,等.黄精的研究进展及其质量标志物的预测分析［J ］.中草药,2017,48（1）:10.
Study on the total polysaccharides content of
Jiuhua Rhizoma polygnoati in nine-steam
-nine-bask processing
【责任编辑：任小平renxp90@
】
Determination of total polysaccharide of Jiuhua Rhizoma polygnoati in nine-steam-nine-bask
processing.
0.2%anthrone-sulfuric acid solution is used as chromogenic agent.The wavelength is
582nm.The content of polysaccharide was determined by UV visible
spectrophotometry.
The total
polysaccharides of wild and cultivated Jiuhua Rhizoma polygnoati increased first and then decreased with the increase of steaming times.The total polysaccharide content of wild and cultivated Jiuhua Rhizoma polygnoati nine steamed and dried was 12.67%and
10.84%.
The measurement results provide a scientific
basis for the quality control of Jiuhua Rhizoma polygnoati in nine-steam-nine-bask
processing.
Jiuhua Rhizoma polygnoati;nine-steam-nine-bask;total polysaccharides
HU Ye-qing 1,HU Yun-fei 2,WU Qi-guo 1
（1.Department of Pharmacy,Anqing Medical and Pharmaceutical College,Anqing 246052,China ；
2.Hefei Food and Drug Inspection Center,Hefei 230000,China ）
62。