携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定

携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定
携带人TGF-β1腺病毒载体的构建及鉴定
目的构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础.方法应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,并通过脂质体Fugene 6介导腺病毒DNA转染293细胞.结果重组hTGF-β1腺病毒DNA经限制性内切酶XhoⅠ酶切后,得到14.5、8.1、4.2、4.0、2.5、1.4、0.6 kb片段.与空白腺病毒相比,5.6 kb的片段已被置换成4.2 kb 和4.0 kb片段;经PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切后,得到32.6 kb和2.6 kb 含目的基因片段,片段大小无误,表明重组Adeno-hTGF-β1腺病毒表达系统构建成功.以重组Adeno-hTGF-β1DNA为模板的PCR产物中出现1.35 kb hTGF-β1目的基因片段,表明hTGF-β1基因成功连接至adeno-X腺病毒表达载体中.重组hTGF-β1腺病毒表达载体通过Fugene 6 介导转染293 包装细胞出现细胞病变效应(CPE).采用PCR 反应鉴定293细胞包装的腺病毒,证实扩增出247 bp的hTGF-β1目的基因片断和312 bp的腺病毒骨架基因片断.结论携带人hTGF-β1的腺病毒载体的构建成功,并能在293细胞包装,为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础.
作者：夏万尧刘伟王丹茹丁文龙钟梅芳刘德莉周广东崔磊曹谊林XIA Wan-yao LIU Wei WANG Dan-ru DING Wen-long ZHONG Mei-fang LIU De-li ZHOU Guang-dong CUI Lei CAO Yi-lin 作者单位：夏万尧,刘伟,王丹茹,刘德莉,周广东,崔磊,曹谊林,XIA Wan-yao,LIU Wei,WANG Dan-ru,LIU De-li,ZHOU Guang-dong,CUI Lei,CAO Yi-lin(上海交通大学医学院第九人民医院整复外科,上海市组织工程重点实验室,上海,200011)
丁文龙,钟梅芳,DING Wen-long,ZHONG Mei-fang(上海交通大学,基础医学院人体解剖学教研室,上海,200011)
刊名：上海交通大学学报（医学版）ISTIC PKU 英文刊名：
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE) 年，卷(期)： 2006 26(10) 分类号： Q78 关键词：基因重组腺病毒转化生长因子β1。