HPLC法测定止咳橘红颗粒中柚皮苷的含量

[检验技术] y HPLC法测定止咳橘红颗粒中柚皮苷的含量Determination of the content of naringin by using high performance liquid chromatography1LIN yi-xing1(Hainan Provincial Institute for Drug Inspection,Haikou570216,Hainan,P1R1China)
林一星
摘要:目的研究止咳橘红颗粒中柚皮苷的含量测定方法。

方法采用HPLC法以乙腈-磷酸盐缓冲液(p H311)为流动相,色谱柱为依利特C18柱,流速为110ml/min,检测波长283nm。

结果线性范围为01162L g~ 11944L g,r=019999;加样回收率为103174%,RSD=0186%(n=6)。

结论本法重现性好,灵敏度高,分离度好。

关键词:止咳橘红颗粒;柚皮苷;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R38411文献标识码:B文章编号:1009-9727(2005)07-1529-02
止咳橘红颗粒是治疗因痰热阻肺引起的咳嗽痰多,胸满气短,咽干喉痒的常见病有效药物,化橘红为君药,药性辛、苦、温,能理气化痰、健脾止咳。

5别录6载其/下气,止呕咳0。

5药性论6称其/能治上气咳嗽0。

其指标成分为柚皮苷,原试行质量标准测定柚皮苷含量方法采用高效液相色谱法测定,流动相为甲醇-水(43:57),其中水用醋酸调节pH3,检测波长283nm,但重现性差,分离度达不到要求。

现采用反相HPLC法,通过对流动相的改变,提高了含量测定的准确率。

具有方法简便、专属性强、分离度高、重现性好的特点。

1材料与方法
111仪器SHI MADZU LC-10AT高效液相色谱仪, SHIMADZ U SPD-10A紫外检测器,SHI MADZU SI L-10AD自动进样器,浙大2010色谱工作站,ME TTLER AE240型电子天平。

112色谱条件色谱柱:依利特C18柱(416m m@ 200mm,10L m),流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液(pH311)(20:85),流速为110ml/min,检测波长283nm。

磷酸盐缓冲液的配置:磷酸二氢钠3810g,磷酸氢二钠5104g,加水1000ml使溶解,用磷酸调pH值至311。

113对照品柚皮苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(722-200006含量测定用)。

114药品止咳橘红颗粒(批号:010901、010806、010501、010401)海南中瑞康芝制药有限公司提供。

115试剂乙腈为色谱纯,磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸均为市售分析纯。

116供试品溶液及对照液的制备¹取止咳橘红颗粒(010901)研细,精密称取1g,置于250ml三角瓶中,加入甲醇50ml,后精密称其重量,然后置水浴加热回流1h,放置至室温,再次精密称其重量,并用甲醇补足损失的重量,以干燥滤器滤过。

精密量取续滤液5ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。

º精密称取于110e干燥至恒重的柚皮苷对照品20125mg,置于125ml的容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,制成对照品储备液(162L g/ml)。

精密吸取310ml于10ml容量瓶中,配制成4816L g/ml的溶液作为对照品溶液。

2结果
211系统适用性试验精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20L l进样,测得色谱图1及色谱图2,理论板数以柚皮苷峰计不低于3000,柚皮苷峰与相邻未知色谱峰的分离度大于2。

图1柚皮苷对照品HPLC
色谱图
图2供试品的HPLC色谱图
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中国热带医学2005年第5卷第7期CHIN A TROPICA L MED ICINE Vol15No17October2005 y作者单位:海南省药品检验所,海南海口5702161
212 干扰实验 取缺少化橘红的阴性对照样品,按供试液制备方法制备阴性对照样品溶液,进样20L l,测得HPLC T 图(图略)表明阴性对照无干扰。

213 线性关系
[1]
取对照品储备液(162L g/ml)分别
配制成811L g/ml 、1612L g/ml 、3214L g/ml 、4816L g/ml 、6418L g/ml 、81L g/ml 、9712L g/ml 的系列对照品溶液,分别进样20L l 测定,以对照品浓度对峰面积进行线性回归,柚皮苷在01162L g~11944L g 范围内呈现良好的线
性关系,回归方程为Y=610784@104X-113033@104,r=019999。

结果见表1。

214 精密度试验 取供试品溶液20L l 注入液相色谱仪,重复5次,柚皮苷峰面积积分值的RSD=0121%。

见表2。

215 重现性试验 取同一批样品(010901)5份,分别制成供试品溶液,按含量测定法测定,结果柚皮苷平均含量为01435%(g/g),RSD=1158%。

见表3。

表1 柚皮苷对照品线性关系试验
No 11234567柚皮苷(L g/ml)
8111612321448166418819712峰面积
484832
983983
1941753
2948183
3884601
4938112
5898423
表2 精密度试验结果
No 112345x
RSD(%)柚皮苷峰面积
2552570
2546569
2551988
2539513
2546965
2547521
0121
表3 重现性试验结果
样品序号取样量(g)峰面积柚皮苷含量%(g)平均值%
(g)RSD (%)
111008225815100143421102532670928014423110189265608301442014351158
41100062550722014325
110075
2528779
01426
216 稳定性试验 精密吸取新配制的供试品溶液(010901),按样品含量测定法进样20L l 检验,结果
RSD=0171%,表明样品溶液在24h 内保持稳定。

结果见表4。

217 加样回收率试验精密称取于110e 干燥至恒重的柚皮苷对照品28175mg,置于25ml 容量瓶中,加甲
醇至刻度,摇匀,作为标准加样储备液。

另精密称取止咳橘红颗粒(010901)015g 6份,分别加入上述标准加样储备液210ml 及310ml 各3份,按供试品溶液制备方法制成加样回收样品液。

取20L l 进样,计算加样回收率。

结果见表5。

表4 稳定性试验结果
No 10h 1h 2h 4h 8h 12h 24h RSD(%)峰面积
2541384
2563337
2571496
2553010
2564986
2586931
2593275
0171
表5 加样回收率试验结果
样品序号
取样量(g)样品量(mg)加入量(mg)
测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)
RSD(%)
101506121202213041586103165201518921257213041652104113301525521286213041689104148103174
0186
4015121212283145518381041645015048211963145517601031306
015099
21218
3145
51745
102123
218 样品含量测定 取4个批次的止咳橘红颗粒,每个批次平行4份,测定含量,结果见表6。

表6 样品测定结果
批号测定结果(%)(g/g )
1234平均值RSD%
(n =4)010401
014370143201444014310143611360105010138901382013740138701383117401080601364013590136601369013641115
3 讨论
311 供试品溶液制备方法比较本品供试品溶液原制备方法为取样置于索氏提取器中,先以石油醚Ò回流提取脂性成分并弃去,而后以甲醇回流提取至提取液无色,提取液经滤过定容50ml 作为供试品溶液,经试验此方法提取率低[0133%(g/g)]。

通过实验,未经石油醚处理的样品溶液并无干扰,故用甲醇直接提取[0144%(g/g)]。

(下转第1564页)
2.3虽然有了规范和制度,但是没有专项报告经费,导致经费投入严重不足,公共卫生信息报告经费转嫁给了各报告单位,加重了报告单位的经济负担,特别是基层医疗单位压力更大,使整个公共卫生信息报告网络建设滞后。

2.4部门协作机制不健全,由于部门间缺乏协作机制,系统内单位间责任和分工不明确,一旦出现突发公共卫生事件时,处置过程中没有形成协同作战的优势。

3对策
鉴于目前玉溪市突发公共卫生事件的多发现状,各级党委、政府要切实加强对处置突发公共卫生事件的领导,协调和解决处理突发公共卫生事件中存在的困难和问题。

各相关部门在处突工作中既要做到责任明确,做到分工负责,更要注重加强部门间相互协作,形成合力,才能高效有序的应对和处置突发公共卫生事件,确保群众的生命安全,最大限度的降低危害程度。

3.1加强领导,各级党委、政府要加强对突发公共卫生事件处置的领导工作,切实解决处理突发公共卫生事件中存在的实际困难。

3.2有章可循、科学应对,根据玉溪市实际,应尽快出台5玉溪市突发公共卫生事件应急预案6,为切实可行地应对和处置各种突发公共卫生事件提供科学依据,保证突发公共卫生事件处置有章可循、科学有序、迅速高效。

此外,应进一步完善玉溪市现行的5玉溪市救灾防病预案65王溪市非典防治预案6、5玉溪市鼠疫防治预案6、5玉溪市霍乱防治预案6、5玉溪市伤寒防治预案6等技术性规范文本,有针对性地开展各项防控工作。

3.3健全应急队伍、提高人员素质,进一步完善处置突发公共卫生事件队伍的建设工作,不断充实队伍人员,优化队伍的配置,积极为队伍创造良好的政策环境及工作条件,只有建立健全反应灵敏、训练有数、配置合理且有较强调查处理能力的应急组织和队伍,才能高效有序的处置各种突发公共卫生事件。

为适应不断出现的新情况,尤其是针对当前国际上频繁发生的生物、生化、放射恐怖事件,要及时了解和掌握防范知识,调查处理方法、技能和各种传染病诊断标准[2]。

3.4建立高效信息网络、保障信息畅通,进一步完善市、县、乡、村疫情网络功能,充分利用国家疫情和公共卫生信息系统,规范事件的报告及管理工作,确保信息畅通,切实加强疫情网络村级质量体系建设,提高信息系统监测灵敏性和特异性。

3.5强化实验室建设、增强快速反应能力,实验室监测、检验检测技术能力的高低,在很大程度上是制约突发公共卫生事件能否成功处理的关键。

因此,必须加强实验室建设,一方面,要加大应急现场采样和检验设备的投入,另一方面,要深入研究,开发和应用突发公共卫生事件现场快速检验、检测方法,提高实验室检测的灵敏性和快速反应的时效性。

此外,还要配备相应的防护、交通、通讯设备,提高快速反应能力。

3.6提高突发公共卫生事件报告质量,明确责任报告人的法律责任,充分发挥义务报告人的主观能动性,加快报告网络的建设工作,避免迟报、盲报、漏报、误报等现象的出现。

规范突发公共卫生事件报告程序,实行突发公共卫生事件对外发布准许制度[3]。

3.7积极开展突发公共卫生事件的预测、预报工作,并不断加大科技含量,建立科学合理的参数集合,使预测、预报工作更好地服务于社会。

参考文献:
[1]曹康泰1突发公共卫生事件应急条例释义[M]1北京:中国法制出
版社,2003.
[2]卫生部卫生监督中心卫生标准处1传染病诊断标准及相关法规汇
编[M]1北京:中国标准出版社,20031
[3]张雅娟,李凤1学校内暴发疫情的防制对策[J]1中华流行病学杂
志,2002,9(增刊):232.
收稿日期:2005-03-01
(上接第1530页)
312测定波长的选择通过查找资料[2]及参照原标准规定,并用柚皮苷对照品的甲醇溶液,按分光光度法试验,在200~800nm波长范围进行扫描,结果在波长283nm处有最大吸收,故波长选择为283nm。

313流动相的选择曾比较了下列几种流动相:¹甲醇-水;º甲醇-36%醋酸-水;»乙腈-磷酸盐缓冲液(pH311)(20:85)。

¼所得到的色谱图柚皮苷与其他杂质峰,在室温即能得到最佳分离(R>2)。

4小结
通过上述的试验研究可见,本文所建立的方法简便、专属性强、重现性好,适用于该制剂的质量控制。

参考文献:
[1]王宝琴1中成药质量标准与标准物质研究[M]1北京:中国医药科
技出版社,1994,28~291
[2]陈发奎1常用中草药有效成分含量测定[M]1北京:人民卫生出版
社,1997,4791
收稿日期:2005-03-10。