UV 法和HPLC 法测定盐酸左氧氟沙星注射液及滴眼液的含量

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UV法和HPLC法测定盐酸左氧氟沙星注射液
及滴眼液的含量
韩保萍钱雪李金泉贺艳丽
盐酸左氧氟沙星(LVFX-HCl)为喹诺酮类抗菌药,其有效成分为左氧氟沙星(LVFX)。

LVFX系氧氟沙星(ofloxacin)的光学活性S-(-)异构体,其体外抗菌活性是氧氟沙星的两倍,为右旋体的8~128倍,具有抗菌谱广,高效低毒等特点。

盐酸左氧氟沙星的片剂、胶囊剂和注射剂已在国内上市,其滴眼剂正在研制中,本文对LVFX-HCl注射液(100ml:100mg)及滴眼液(5ml:15mg)的含量测定方法进行了探讨。

1 仪器与试药
岛津UV-265FW紫外可见分光光度计,Waters高效液相色谱仪,Waters-996PAD检测器,Waters-Millennium-32色谱数据处理机。

LVFX-HCl对照品(自行精制,纯度>99.5%);LVFX-HCl注射液(100ml:100mg,市售);LVFX-HCl滴眼液(5ml:15mg,自行配制);乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果
2.1 紫外分光光度法
2.1.1 溶液的配制
标准溶液:精密称取经105℃干燥至恒重的LVFX-HCl对照品适量(约相当于LVFX10mg),置50ml量瓶中,加入0.1mol/L盐酸溶液至刻度,摇匀。

样品溶液:按处方比例分别配制出注射液和滴眼液的样品溶液。

空白辅料液:按处方比例,不加LVFX-HCl,配制注射液和滴眼液空白辅料液。

2.1.2 测定波长的选择
精密量取标准溶液和样品溶液适量,分别加0.1mol/L盐酸溶液使成含LVFX 约6μg/ml的溶液,同法稀释其相应的空白辅料液。

以0.1mol/L盐酸溶液作参比,在400nm~200nm波长范围内扫描,对照品与样品均在293nm波长处有最大吸
收峰,空白溶液无吸收,故选择293nm为测定波长。

2.1.3标准曲线的绘制
精密量取标准溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml,分别置100ml 量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,以0.1mol/L盐酸溶液作参比,在293nm 波长处测定吸收度。

将吸收度(A)与波长(C)进行线性回归,回归方程为A=0.07313C-0.0082,r=0.9999(n=5)。

LVFX在1.03μg/ml~20.6μg/ml范围内吸收度与浓度的线性关系良好。

2.1.4 稳定性试验
将2.1.3项下的溶液置避光处,分别在0h、12 h、24h测定吸收度,结果基本无变化。

2.1.5 回收率试验
精密称取经105℃干燥至恒重的对照品适量,置100ml量瓶中,按处方比例加入空白辅料,加水溶解至刻度,摇匀。

取本品适量,加0.1mol/L盐酸溶液稀释使成含LVFX约6μg/ml的溶液,按2.1.2的方法操作并计算,求得平均回收率为100.10%,RSD=0.49%。

2.1.6 精密度
准确量取注射液和滴眼液的样品溶液适量,加0.1mol/L盐酸溶液使成含LVFX约6μg/ml的溶液,各配制6份,按上述方法操作,测定其含量,测定RSD 分别为0.53%和0.47%。

2.1.7 样品测定
取注射液和滴眼液的样品溶液适量,精密量取。

用0.1mol/L盐酸溶液稀释成含LVFX约6μg/ml的溶液,按上法操作并计算含量,结果见表。

表LVFX注射液及滴眼液含量测定结果(标示量%)(n=3)
编号UV法HPLC法
注射液1 100.2 99.98
注射液2 99.47 99.79
注射液3 98.91 99.16
滴眼液1 101.5 100.8
滴眼液2 99.85 99.57
滴眼液2 100.13 99.82
2.2 高效液相色谱法
2.2.1 溶液的配制
同2.1.1。

2.2.2 色谱条件
色谱柱:Waters Symmetry C18柱(150mm×3.9mm、5μm);流动相:0.05mol/L 枸橼酸(用三乙胺调节pH至4.0)-乙腈(79:21);流速:1ml/min;检测波长293nm;柱温:35℃。

理论塔板数按LVFX峰计算应不低于2500。

2.2.3标准曲线
精密量取标准溶液0.1ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml分别置25ml量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,制成不同浓度的溶液。

分别量取20μl,注入液相色谱仪。

以LVFX峰面积(S)对浓度(C)进行线性回归,得回归方程为S=103727.64C+4693.8,r=0.9999(n=5)。

表明LVFX 在0.8μg/ml~80μg/ml浓度范围内呈良好线性关系。

2.2.4 稳定性试验
将2.2.3项下的溶液置避光处,分别在0h、12h、24h测定峰面积,结果基本不变。

2.2.5 回收率试验
取LVFX-HCl对照品适量,精密称定,置100ml量瓶中,按处方比例加入空白辅料,加水至刻度,摇匀。

取供试品适量,加0.1mol/L盐酸溶液使成含LVFX 约30μg/ml的溶液,按上述方法操作并计算,其平均回收率为99.34%,RSD为0.63%。

取辅料同法测定,实验结果表明辅料对测定无干扰。

2.2.6样品测定
精密量取注射液及滴眼液的样品溶液适量,置100ml量瓶中,加0.1mol/L 盐酸溶液至刻度使成含LVFX约30μg/ml的溶液。

取20μl溶液注入液相色谱仪,记录峰面积,按外标法计算含量。

结果见表。

3 讨论
由UV法和HPLC法测定盐酸左氧氟沙星注射液及滴眼液含量的结果可知:
二种方法测定结果基本一致。

HPLC法在实际工作中应用繁琐,并易受客观条件的限制,而UV法具有经济、方便、快速的特点,尤其适用于制药企业进行内控质量检测。

[原文发表于:山东医药工业,2000,19(6):5~7]。

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