SOD酶活性测定方法
SOD(超氧化物歧化酶)活性测定
SOD(超氧化物歧化酶)活性测定氮蓝四唑法一、原理超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ，SOD)普遍存在动、植物的体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶，它催化下面的反应：o 2.-+H O 222+O H ＋反应产物H 2O 2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。
超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性的大小。
在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易被氧化而产生超氧阴离子，超氧阴离子可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm 处有最大吸收。
而SOD 可清除超氧阴离子，从而抑制了甲腙的形成。
于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶的活性愈低，反之酶的活性俞高。
据此可计算出酶活性的大小。
二、材料、仪器设备及试剂(一)材料植物器官(花瓣、叶片等)(二)仪器设备冰箱、低温高速离心机、微量加样器 (1mL 、20μL 、100μL)、移液管、精密电子天平、UV-752型紫外分光光度计、试管、研钵、剪刀、镊子、荧光灯(反应试管处照度为4000Lux 或Lx)(三)试剂(1) 0.05mol/L 磷酸缓冲液(PH7.8)。
(2) 130mmol/L 甲硫氨酸(Met)溶液：称1.9399gMet 用磷酸缓冲液定溶至100mL 。
(3)750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT 用磷酸缓冲液定溶至100mL ，避光保存。
(4)100μmol/LEDTA -Na 2溶液：称取0.03721g EDTA-Na 2，用磷酸缓冲液定溶1000mL 。
(5)20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g 核黄素用蒸馏水定溶到1000mL ，避光保存。
三、试验步骤(一)酶液的提取(1)称取植物材料(去叶脉)0.2g ，加1ml 预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使体积为5mL。
取2mL于1000r/min下离心20min，上清液即为SOD粗提液。
SOD活性的测定
SOD活性的测定一、酶液的制备：称取0.5g样品放入研钵中，加2毫升0.05M PH=7.8的磷酸缓冲液及少量石英砂，冰浴研磨，匀浆倒入10毫升离心管中，再加3毫升磷酸缓冲液冲洗研钵，4℃冷冻离心20分钟（若做可溶性蛋白，转速为4000转/分钟，若不做，则10000转/分钟），上清液（酶液）倒入试管中，置于0~40C下保存待用。
二、S OD的测定：1.SOD反应液的配制：母液的配制：（1）0.05M 磷酸缓冲液（PH=7.8）：A液21.25ml+B液228.25ml定容至1000ml;(2) 130mM Met(甲硫氨酸)：取1.9399克Met 用磷酸缓冲液定容至100ml；现配现用。
（3）750μM四氮唑蓝（NBT）：取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml；现配现用,避光保存。
(4) 100μM EDTA-Na2: 取0.0372g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml，同上(5) 20μM FD (核黄素): 0.00753gFD用蒸馏水定容至1000ml。
避光保存。
同上SOD反应混液：磷酸缓冲液：Met：NBT：EDTA-Na2：H2O的比例为1.5：0.3：0.3：0.3：0.25，按母液顺序配制，然后依次加入核黄素0.3ml和酶液50微升。
2.SOD的测定：取型号相同的试管，吸取50微升的酶液，4000Lux照光30分钟，同时取两支试管，一支做对照，一支做空白（对照、空白不加酶液，以缓冲液代替）；空白置暗处，对照（CK）与酶液同置于4000Lux条件下照光30分钟，反应后遮光保存，以空白调零，560nm比色。
每个试验重复三次（3试验+3空白+3对照）3.结果计算SOD总活性（吸光度/g·FW）=（A CK—A E）×V／（W×0.5 ×Vt×A CK）单位：NBT光还原50%为单位SOD 比活性（酶单位/mg蛋白）= SOD总活性/蛋白质浓度SOD总活性以鲜重酶单位每克表示（u/g FW）；比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示；A ck为照光对照管的吸光度；A E为样品管的吸光度；V为样品液总体积；Vt为测定时的酶液用量（ml，30ul）；W为样品鲜重（g）；蛋白质含量单位为mg/g。
SOD_测定方法
SOD_测定方法SOD（Superoxide Dismutase）是一种重要的抗氧化酶，它可以将有害的超氧自由基转化为氧和过氧化氢，从而保护细胞免受氧化损伤。
SOD的测定方法有多种，下面将介绍常用的几种方法。
1.超氧根自由基抑制法：该方法通过测定SOD对超氧自由基的抑制能力来测定SOD的活性。
超氧根自由基在存在特定底物的条件下，可以引起化学反应的颜色变化，通过测量这种变化的幅度可以得出样品中SOD的活性。
超氧根自由基抑制法具有可操作性强、结果可靠的特点，是常用的SOD活性测定方法之一2.X射线法：该方法利用X射线产生的自由基对辅酶A的氧化程度来测定SOD活性。
辅酶A在被氧化前后，有很大的吸收差别，可以通过比较吸收光谱来计算SOD活性。
3.含氮蓝法：含氮蓝为特定底物，可以在碱性条件下与还原型NBT（硝基蓝）产生紫色的还原型NBT。
SOD能够阻止NBT的还原反应，因此通过测量样品和对照组在一定时间内的吸光度差值，可以计算出SOD的活性。
4.电化学法：该方法利用电化学生物传感器对SOD的电化学反应进行测定。
在电极表面，SOD催化还原型O2为H2O2，而H2O2又在电极表面电催化为电流。
通过测量电流的大小，可以得出样品中SOD的活性。
这些方法各有优缺点，选择合适的测定方法应根据实验条件和目的来确定。
无论采用何种方法，都需要严格控制实验条件，如温度、时间、pH 值等，以确保测定结果的准确性和可重复性。
鉴于SOD活性在不同组织和物种之间有所差异，建议在研究中同时采用多个测定方法进行验证，以获得更可靠的结果。
抗氧化酶活性测定方法
抗氧化酶活性测定方法抗氧化酶是一类对抗氧化反应具有重要作用的酶。
其主要功能是清除体内的自由基，抑制过氧化物形成和脂质氧化反应，从而保护细胞免受氧化应激的伤害。
测定抗氧化酶活性有助于评估生物体内的氧化应激水平，为疾病的诊断和治疗提供重要的指导。
本文将介绍几种常见的抗氧化酶活性测定方法。
1.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定方法：SOD能够催化超氧阴离子（O2-）的还原反应，将其转化为较为稳定的氧气和过氧化氢。
常见的SOD活性测定方法有：-标准醛缩法：根据SOD催化的还原反应，利用NBT（硝基蓝盐）和醛缩剂的变色反应来测定SOD活性。
-自动化测定法：利用包含其中一种还原物质和pH染料的较为稳定的底物，通过测定底物的氧化程度来确定SOD活性。
-XTT法和WST-1法：由于SOD具有还原型的性质，可以通过测定细胞培养基中的还原型琼脂糖（XTT）或水溶性四硝基噻唑盐（WST-1）的还原动力学来测定其活性。
2.过氧化氢酶（CAT）活性测定方法：CAT主要参与还原过氧化氢（H2O2），将其转化为氧和水。
常见的CAT活性测定方法有：-色素法：利用黄曲霉素作为还原剂，观察黄曲霉素的消费量来测定CAT活性。
-光度法：通过测定样品中H2O2浓度的下降程度来间接测定CAT活性。
-氧化还原电极法：通过测定样品中H2O2浓度的下降速度来测定CAT活性。
3.过氧化物酶（POD）活性测定方法：POD主要参与氧气与还原型供体之间的氧化还原反应，转化为过氧化物（ROO-）。
常见的POD活性测定方法有：-色谱法：利用酚类底物的氧化反应，测定产生的醌类产物的含量来测定POD活性。
-酶标法：POD催化氧化反应会形成有色产物，通过测定产物的吸光度来测定POD活性。
4.谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性测定方法：GPx主要参与还原过氧化物，将其转化为相对稳定的醇和水。
常见的GPx活性测定方法有：-碳酸盐法：根据GPx还原底物中的碳酸盐，观察样品溶液pH值的变化来测定GPx活性。
SOD酶活性测定
SOD酶活测定方法（一）氮蓝四唑法1. 方法提要在电子供体如甲硫氨酸存在下，核黄素受光激发，与电子供体反应被还原。
在氧气中，还原的核黄素与氧化反应产生，将无色（或微黄）的氮蓝四唑还原为蓝色的不溶性僭，SOD 通过催化歧化反应，生成O2与H2O2，从而抑制蓝色形成。
按抑制蓝色特形成的50%为一酶活单位。
酶活力越高，抑制50%蓝色形成所需酶量越少。
2. 仪器荧光灯管。
离心机。
分光光度计。
pH计。
3. 试剂（1）磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O），磷酸二氢钾（KH2PO4），甲硫氨酸（Met），氮蓝四唑（NBT），核黄素，乙二胺四乙酸（EDTA），以上试剂均为分析纯级；所用水为离子水或同等纯度蒸馏水。
（2）pH7.8, 5.0×10-2mol/L的K2HPO4- KH2PO4缓冲液（于冰箱中保存）。
4. 测定步骤（1）酶液的制备：称取5~10g样品，加预先在冰箱中放置的上述K2HPO4- KH2PO4缓冲液，缓冲液的量为所用样品的10倍以上，在4℃条件下或冰浴中研磨成匀浆，四层纱布过滤，滤液经4000r/min离心20min，取上清液用于酶活测定。
（2）酶反应酬体系液的制备：取上述K2HPO4- KH2PO4缓冲液30ml，依次溶入Met，NBT，核黄素与EDTA，使它们的浓度分别为 1.3×10-2mol/L, 6.3×10-5mol/L, 1.3×10-6mol/L与1×10-4mol/L，放冰箱中避光保存。
（3）测酶活在暗光下，取上述酶反应体系液3mL，移入试管中，试管放在一反应小室中，反应小室壁上贴锡箔纸，应将每个试管摆放在照光后所接受光强一致的位置。
向每支试管加入25~30μL酶液。
在25~30℃下用光强4000lx的荧光灯管（可用15W荧光灯）进行光照，15~20min后，出现颜色变化。
停止光照。
在560nm波长下比色测量透光度。
SOD酶活力测定实验
摘要：通过对绿豆种子的研磨破碎获得SOD粗酶，经过硫酸铵分级分离、透析除盐和浓缩等过程，除去粗酶液中的杂质及干扰蛋白，采用葡聚糖（Sephadex G-100）凝胶层析得到纯化的SOD酶。
跟踪提纯过程活性的分布，并评价提取过程各步骤的效率。
实验结果证实随着不断的分离提纯，总活力以及总蛋白不断减小，比活力不断上升，最终得到的结果为总纯化倍数为0.68，活性得率为5.24%。
一、前言：超氧化物歧化酶简称SOD，是一种新型酶制剂，属金属酶。
分布很广，几乎从哺乳动物到细菌，以及植物中均存在。
在微生物中主存于需氧菌。
SOD是催化超氧阴离子（O2-）歧化反应的酶类，能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧自由基（O2.－），生成H2O2和O2.H2O2由过氧化氢酶（CAT）催化生成H2O 和O2，从而减少自由基对有机体的毒害。
它的存在与生物体内的解毒作用有关，也发现与机体的衰老、肿瘤及免疫性疾病等有关。
自1968 年发现SOD 后，立刻引起科学界的高度重视，近40 年来这方面的研究进展非常迅速，它的应用领域日益拓宽，SOD 也有了产品.国外从牛红细胞中制得的超氧化物歧化酶，其商品名为Orgotein.不少人研究Orgotein的药理性质，证明它无毒，无抗原性，能抗发炎、抗超氧离子、抗病毒感染。
二十世纪80 年代后期，我国关于SOD 的研究及应用也形成了热点，如今已在化妆品添加剂、饮料及医药方面显示了特殊效果。
SOD作为治因而受到医药界的关注。
目前中国国内已进入临床试验阶段。
本实验以绿豆为原料提取SOD，通过各步的分离提纯，应测得酶总活力逐渐减小，比活逐渐升高.通过本实验掌握物质分离纯化的实验设计过程，以及硫酸铵分离、透析除盐、浓缩和葡聚糖凝胶层析等物质分离技术。
二、实验材料与方法：<一>材料:绿豆种子,市售新鲜绿豆种子浸泡蒸馏水24小时备用.<二>试剂:葡聚糖（sephadexG-100）, NaCl（AP）, 磷酸氢二钠（AP）, 磷酸二氢钠（AP）, 三羟甲基氨基甲烷（Tris）, 盐酸（浓盐酸），硫酸铵（AP）, PEG6000 ，考马斯亮蓝G250 , 磷酸，乙醇（95%），牛血清蛋白BSA , 连苯三酚(焦性没食子酸), EDTA(钠盐) , 超氧化物歧化酶（sigma公司）。
SOD活性测定
SOD活性测定：SOD的测定方法很多，常见的有化学法，免疫法等电点聚焦法等，化学法测定的原理主要是利用有些化合物如邻苯三酚，在自氧化过程中会产生有色中间物降超氧游离基(O2)这样就可以利用SOD分例(O2)。
阻止中间物的积累而测定其酶活性。
1、试剂及仪器(1)邻苯三酚分析纯，用10mmol/LECL配成50mmol/L溶液。
(2)UV－754紫外分光光度计。
2、测定方法：(1)邻苯三酚自氧化速度的测定。
在25度、45ml`50mmol/L、PH值8.3、K2HPO4－KH2PO4缓冲液中加入10mmol/L的邻苯三酚，迅速摇匀，倒入光径1cm的比色杯内，在325mm波长下每隔30秒测A值一次，要求自氧化速度控制在0.0700d/mm 左右。
(2)SOD或粗酶抽提液活性测定：测定方法同测邻苯三酚自氧化速度，在加入邻苯三酚前加入待测SOD样液，测得数据按以下公式计算酶活性。
0.0700－A325mm/min----------------------------------------＊100％度0.70样液稀释倍数样液稀释倍数酶活性(u/m1)＝------------＊反应液总体积＊----------------50％样液体积3、蛋白浓度(mg/ml)和蛋白的计算：SOD或粗酶抽提液，经280mm紫外比色测定后，查牛轿清白蛋的标准曲线，由此算出每ml含ug蛋白的量。
蛋白浓度＝ug蛋白/ml＊样液稀释倍数＊10负3次方＝mg蛋白/ml总蛋白＝mg蛋白/ml＊原液总体积＝mg蛋白。
4、比活(u/mg蛋白)的计算：单位活力(u/ml) 总活力比活＝-----------------------＝-----------------＝u/mg蛋白蛋白的浓度(mg蛋白/ml) 总蛋白超氧化物歧化酶的活性测定超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase，简称 SOD)广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属类酶。
超氧化物歧化酶（SOD）活性测定方法
超氧化物歧化酶（SOD ）活性的测定方法
一、试剂
1. 0.1mol/L HCl
2. 10mmol/L HCl
3. 0.1mol/L Tris 标准溶液：12.114g 三羟甲基氨基甲烷溶于蒸馏水，并定容至1000ml.
4. 50mmol/LTris 缓冲溶液：50ml0.1mol/L Tris 标准溶液中加入0.1mol/L HCl 19.9～22.0ml,定容至100ml ，PH 为8.20。
5. 30mmol/L 邻苯三酚盐酸溶液：3.7833g 邻苯三酚溶于10mmol/LHCl 中，并用10mmol/LHCl 定容至1000ml.
二、仪器
1. 紫外分光光度计
2. 酸度计
3. 恒温水浴锅
三、操作方法
1.邻苯三酚自氧化速率测定
在试管中加入4.5ml 50mmol/LTris 缓冲溶液，于25℃保温20min,加入10～20ul 30mmol/L 邻苯三酚，立即计时并摇匀，倾于比色杯内，于325nm 下，每隔1min 测吸光值一次，空白以10mmol/L HCl 代替邻苯三酚，要求自氧化速率控制在0.070 OD/min 左右。
%1004
min 1min 5⨯值值－第第自氧化速率＝OD OD 2.SOD 活性测定
将样液加入到Tris 缓冲溶液中，其余步骤同自氧化速率测定方法。
活力单位定义：将一定条件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50%的酶量定义为一个单位（u ）。
样品质量样液体积样品稀释倍数自氧化速率速率自氧化速率－样液氧化＝活力（⨯⨯⨯⨯5.4%50%100)/SOD ml u。
SOD酶活性测定方法
SOD酶活性测定方法SOD（超氧化物歧化酶）是一种重要的抗氧化酶，通过催化O2.-的自动氧化为O2和H2O2来清除有害氧自由基。
SOD的活性能够反映生物体内清除氧自由基的能力，因此SOD活性的测定对于研究氧自由基相关疾病以及抗氧化剂的评价具有重要意义。
以下是目前常用的几种SOD活性的测定方法：1. Nitroblue tetrazolium (NBT)法：这是最早用于测定SOD活性的方法之一、该方法基于超氧自由基能够氧化NBT成为紫色的甲胺蓝（blue formazan）。
SOD能够阻止NBT的氧化过程，从而减少blue formazan的产生。
测定时，试样中的NBT和蛋白质混合后加入酶底物，通过测定产生的blue formazan的吸光度来评估SOD的活性。
2. epinephrine autoxidation法：该方法基于SOD能够催化抑制肾上腺素自动氧化反应，从而测定其活性。
肾上腺素在氧气存在下会自动氧化生成可见光吸收的产物，而SOD的存在能够阻止这个自动氧化过程，减少可见光吸收的产生。
通过测定反应体系中可见光吸收的变化来评估SOD的活性。
3. Pyrogallol autoxidation法：该方法与上述方法类似，基于SOD能够催化抑制邻二氧苯酚（pyrogallol）自动氧化反应，从而测定其活性。
邻二氧苯酚在氧气存在下会自动氧化生成氧的产物，而SOD的存在能够阻止这个自动氧化过程。
通过测定反应体系中氧的产生速率或者邻二氧苯酚消耗速率来评估SOD的活性。
4. Xanthine oxidase法：该方法基于SOD能够催化脲酶氧化邻位双黄嘌呤（xanthine）生成尿酸，而脲酶则通过XOD（xanthine oxidase）作用于氧气生成邻位双黄嘌呤的过程来实现。
由于SOD能够清除产生的超氧自由基，从而减少尿酸的生成。
通过测定尿酸产生的速率来评估SOD的活性。
这些方法各自具有一定的优缺点，研究者们需要根据实际需要选择合适的方法来测定SOD活性。
sod酶活标准
sod酶活标准
一、酶活定义
超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，简称SOD）的酶活定义为：在一定条件下，每分钟内能转化一定量的底物，生成一定量的产物所需的酶量，称为该酶的酶活。
通常以U/mL或U/g表示。
二、酶活单位
在SOD的测定中，常用的酶活单位是U/mL或U/g。
U/mL表示每毫升样品中含有的SOD酶活单位，而U/g表示每克样品中含有的SOD酶活单位。
三、酶活测定
SOD酶活的测定方法通常采用化学比色法。
该方法基于SOD对O2-的歧化反应，通过观察反应过程中O2-的变化来计算SOD的酶活。
具体步骤包括：
1.制备待测样品；
2.设立空白对照组；
3.在一定条件下，将待测样品与O2-反应；
4.观察反应过程中O2-的变化，记录数据；
5.计算SOD酶活。
四、影响因素
SOD酶活的测定结果受多种因素影响，包括：
1.温度：高温会加速反应，但过高的温度可能导致SOD失活。
2.pH值：pH值的变化会影响SOD的活性。
3.底物浓度：底物浓度过高或过低都会影响SOD酶活。
4.样品保存：样品的保存条件和时间也会影响SOD酶活。
五、酶活力保持
为了保持SOD酶活的稳定性，需要注意以下几点：
1.低温保存：将SOD样品保存在低温条件下，如0-4℃。
2.避免反复冻融：避免SOD样品反复冻融，以免影响酶活。
3.及时测定：尽量在提取后及时测定SOD酶活，以免因长时间保存而影响酶
活。
植物组织中超氧化物歧化酶活性测定
植物组织中超氧化物歧化酶活性测定植物组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定是一项重要的生物化学实验，它有助于了解植物体内抗氧化系统的运行机制及其在应对环境压力中的作用。
以下是测定植物组织中超氧化物歧化酶活性的实验步骤和注意事项。
一、实验材料1.实验植物：选择新鲜、健康的植物组织，如叶片、根或茎。
2.实验试剂：包括磷酸缓冲液（pH 7.8）、乙二胺四乙酸（EDTA）、氮蓝四唑（NBT）、核黄素、酶提取液等。
3.实验设备：包括分光光度计、离心机、研钵、试管、滴定管等。
二、实验步骤1.酶提取：将植物组织研碎，加入适量的酶提取液，充分研磨并混合均匀，然后置于离心机中以3000-4000 r/min的速度离心10-15分钟，得到清亮的上清液。
2.酶活性测定：取3毫升磷酸缓冲液、0.1毫升的EDTA、0.1毫升的氮蓝四唑（NBT）、0.1毫升的核黄素和0.002毫升的酶提取液，混合均匀后用分光光度计在560纳米处测定吸光度。
3.空白对照：取3毫升磷酸缓冲液、0.1毫升的EDTA、0.1毫升的氮蓝四唑（NBT）和0.1毫升的核黄素，混合均匀后用分光光度计在560纳米处测定吸光度。
4.数据记录：记录酶活性测定和空白对照的吸光度值，并计算超氧化物歧化酶活性。
三、注意事项1.实验过程中要保证所用试剂的纯度和新鲜度，避免影响实验结果。
2.离心机使用前应预热，保证离心的效果和效率。
3.在酶活性测定中，加入酶提取液时应十分小心，避免产生气泡，影响吸光度的测定。
4.在整个实验过程中要保证温度、光照等环境因素的一致性，以减小误差。
5.在数据处理时，应按照公式计算超氧化物歧化酶活性，并进行统计分析和比较。
四、结果分析通过对实验数据的分析，可以得出不同植物组织中超氧化物歧化酶活性的大小及其变化规律。
这些数据可以帮助我们了解植物体内抗氧化系统的运行机制及其在应对环境压力中的作用。
例如，当植物受到逆境条件的影响时，超氧化物歧化酶的活性可能会发生变化，通过比较不同植物组织的超氧化物歧化酶活性，可以筛选出抗逆性较强的植物品种，为农业生产提供参考。
SOD活性测定
SOD活性测定：SOD的测定方法很多，常见的有化学法，免疫法等电点聚焦法等，化学法测定的原理主要是利用有些化合物如邻苯三酚，在自氧化过程中会产生有色中间物降超氧游离基(O2)这样就可以利用SOD分例(O2)。
阻止中间物的积累而测定其酶活性。
1、试剂及仪器(1)邻苯三酚分析纯，用10mmol/LECL配成50mmol/L溶液。
(2)UV－754紫外分光光度计。
2、测定方法：(1)邻苯三酚自氧化速度的测定。
在25度、45ml`50mmol/L、PH值、K2HPO4－KH2PO4缓冲液中加入10mmol/L的邻苯三酚，迅速摇匀，倒入光径1cm的比色杯内，在325mm波长下每隔30秒测A值一次，要求自氧化速度控制在mm 左右。
(2)SOD或粗酶抽提液活性测定：测定方法同测邻苯三酚自氧化速度，在加入邻苯三酚前加入待测SOD样液，测得数据按以下公式计算酶活性。
－A325mm/min----------------------------------------＊100％度样液稀释倍数样液稀释倍数酶活性(u/m1)＝------------＊反应液总体积＊----------------50％样液体积3、蛋白浓度(mg/ml)和蛋白的计算：SOD或粗酶抽提液，经280mm紫外比色测定后，查牛轿清白蛋的标准曲线，由此算出每ml含ug蛋白的量。
蛋白浓度＝ug蛋白/ml＊样液稀释倍数＊10负3次方＝mg蛋白/ml总蛋白＝mg蛋白/ml＊原液总体积＝mg蛋白。
4、比活(u/mg蛋白)的计算：单位活力(u/ml) 总活力比活＝-----------------------＝-----------------＝u/mg蛋白蛋白的浓度(mg蛋白/ml) 总蛋白超氧化物歧化酶的活性测定超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase，简称 SOD)广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属类酶。
它作为生物体内重要的自由基清除剂，可以清除体内多余的超氧阴离子，在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。
SOD测定方法
SOD测定方法SOD（超氧化物歧化酶）是一种抗氧化酶，主要作用是通过催化超氧自由基（O2-）的歧化反应，将其转化为氧气（O2）和过氧化氢（H2O2），从而保护细胞免受氧化损伤。
由于SOD在生理病理过程中起着重要作用，因此测定SOD活性对于研究氧化应激反应及疾病机制具有重要意义。
下面将介绍几种常见的SOD测定方法。
1.氧化还原法氧化还原法是目前应用较广泛的SOD测定方法之一、该方法基于SOD活性的表现为它能阻止自由基与还原型化合物（如亚硝酸钠）之间的反应。
通过测定反应体系中亚硝酸钠的降解速率可计算出SOD的活性。
这种方法简单易行，但可能受到其他抗氧化酶和化合物的干扰。
2.锰硞合成法锰硞合成法是一种经典的SOD测定方法，它利用SOD对超氧自由基的清除作用而催化锰硞的合成。
反应结束后，通过测定合成的锰硞的吸光度变化来计算SOD的活性。
这种方法比较准确，但操作较繁琐，不适合大规模高通量实验。
3.硝苯蓝法硝苯蓝法基于硝苯蓝的还原能力受SOD活性影响的原理。
在碱性条件下，硝苯蓝与NADH反应生成可溶性复合物，其吸光度与SOD的活性成负相关关系。
通过测定反应体系的吸光度变化可以计算出SOD的活性。
该方法操作简便，但对于抗氧化剂和金属离子敏感，可能会引起误差。
4.含乙酰亚胺百日咳法该方法利用含乙酰亚胺的百日咳试剂来测定SOD活性。
该试剂在碱性条件下能与过氧化氢反应，生成已知稳定的有色化合物。
SOD活性越高，生成的有色化合物越少，通过测定反应体系的吸光度变化可以计算出SOD 的活性。
该方法操作简单，结果可重复性好，但对于有机溶剂和金属离子敏感。
5.X-射线发射荧光法X-射线发射荧光法是一种新型的SOD测定方法。
该方法通过测定SOD 催化超氧自由基与荧光染料之间的作用，计算出SOD的活性。
这种方法灵敏度高，精度好，同时能够快速高效地测定多个样品，适用于大规模高通量实验。
综上所述，SOD的测定方法有很多种，选择适合自己研究的方法需要综合考虑测定条件、样本的特点以及所需的准确度和灵敏度等因素。
抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法
抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法抗氧化酶SOD（超氧化物歧化酶）、POD（过氧化物酶）和CAT（过氧化氢酶）是植物体内重要的抗氧化酶，在植物的抗逆境应对中起着重要的作用。
因此，对这些抗氧化酶的活性进行测定和分析是研究植物生理生化过程的重要方面之一测定抗氧化酶活性的方法一般分为两类：直接法和间接法。
直接法是通过测定一些特定底物的降解速率来反映酶的活性；间接法是通过测定酶催化底物形成的产物的生成速率来间接反映酶的活性。
下面将分别介绍抗氧化酶SOD、POD和CAT活性的测定方法。
1.SOD活性测定方法：SOD活性测定方法主要分为NBT法和EPX法两种。
（1）NBT法：这是一种直接法，其基本原理是SOD将还原型的NBT 还原成穆尔蓝染色形成具有最大吸收峰值的NBT离子。
实验步骤如下：a.首先准备SOD底物溶液，其组成为：50mM磷酸缓冲液（pH7.8）+13mML-甲硫氨酸+75μM硝基蓝硝酸盐（NBT）。
b.将样品加入上述的SOD底物溶液中，混匀。
c.加入适量的酶抑制剂，使停止酶的活性，并将其放在冰上。
d.使上述反应在37℃下进行10分钟。
e.加入已经冷却的硝酸亚铁和磷酸以停止反应，并将其放在冰上10分钟。
f. 测定变色液的吸收光谱在560 nm波长处的吸光度。
（2）EPX法：这也是一种直接法，其基本原理是SOD将乙酸型形成的4-无水乙烯甲基-3-硝基噻吩染色。
实验步骤如下：a. 首先在试管中加入1 ml乙酸型测定液。
b.分别加入适量的SOD样品。
c.在30分钟内使试管中乙酸型完全消除。
d. 测定出试管中产生的4-乙烯基-3-硝基-5-硝基噻吩的吸收光谱在260 nm波长处的吸光度。
2.POD活性测定方法：POD活性测定方法可分为直接法和间接法。
（1）直接法：这种方法基于过氧化反应的特点，利用dianisidine 与过氧化氢在催化剂POD作用下形成有色产物的现象来测定POD的活性。
实验步骤如下：a.在试管中加入0.1M磷酸盐缓冲液（pH6.0）。
实验五植物组织中SOD活性测定
实验五SOD 活性的测定一、实验目的学习并掌握氮蓝四唑（NBT）法测定植物体内超氧化物歧化酶（SOD）活性的基本原理和操作方法。
二、实验原理超氧物歧化酶（superoxidedismutase SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。
测定SOD 活性的方法很多，简便且常用的是NBT （氮蓝四唑）光还原法。
该方法的原理是超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT ）在光下的还原作用来确定酶活性大小。
当反应体系中有可被氧化的物质存在时，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生氧气，氧气被单电子还原产生氧自由基，氧自由基则可将氮蓝四唑还原为蓝色的化合物，后者在560nm 处有最大吸收。
而SOD 可清除氧自由基，当反应体系中有SOD 存在时可抑制NBT 的还原，于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。
因此可通过测定A560 来计算SOD 的活性，以抑制NBT 光还原反应50%所需的酶量为一个酶活性单位。
三、实验材料、试剂与仪器1. 实验材料：小白菜叶片。
2. 实验试剂：（1）0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）；（2）130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml；（3）750卩mol/L氮蓝四唑（NBT）溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存；（4）100 卩mol/LEDTA-Na2 溶液：称取0.03721g EDTA-Na2 用磷酸缓冲液定容至1000ml；（5）20卩mol/L核黄素溶液：100卩mol/L核黄素溶液稀释5倍即实验所需的20卩mol/L核黄素溶液；（6）SOD提取介质：50mmol/L磷酸缓冲液（pH7.8）内含1%的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、3. 实验仪器：高速台式离心机，可见分光光度计，光照培养箱，专用试管，研钵等。
四、实验步骤1 、粗酶液提取将小白菜叶片放置在冰箱中冷处理3min，用作胁迫对照。
SOD酶活性测定方法
SOD酶活性测定方法SOD酶是一种重要的抗氧化酶，在许多生命体中都有着非常重要的作用。
SOD酶能够对细胞内的超氧自由基进行清除，保护细胞免受氧化应激的损害。
因此，SOD酶活性的测定是很多研究人员关注的焦点。
本文将介绍SOD酶活性测定的方法。
SOD酶活性测定的原理主要是通过测定样品中SOD酶对脱氧核糖酸（XOD）和尼群胺试剂产生的还原性物质的分解作用，来计算出SOD酶的活性。
测定方法分为以下几个步骤：第一步，SOD酶通过去除XOD产生的超氧自由基，阻止其与尼群胺试剂生成的有色产物，使产物浓度降低。
第二步，根据剩余的尼群胺的吸光度，来计算SOD酶活性。
（1）样品处理在SOD酶活性测定中，样品的预处理是非常关键的一步。
需要先收集待测样品，然后用磷酸盐缓冲液进行稀释。
在处理样品时，需要避免样品受到氧化应激的影响。
（2）制备反应体系制备反应体系时，需要将缓冲液、XOD和尼群胺试剂混合均匀，制成成分均匀的混合试剂。
（3）干预试验可以分别加入干预物处理组和对照组。
在干预试验组中添加抑制SOD酶活性的干预物，如受体拮抗剂、抗氧剂、树脂酶等，观察加入干预物前后尼群胺吸光度的变化。
（4）添加待测样品和对照组将先前处理好的待测样品和对照组加入准备好的反应体系中。
将混合样品放入莫耳隔水器中，设定温度为37℃，反应30分钟左右。
（6）吸光度测定在反应结束后，对每个样品分别进行吸光度测定，以获取尼群胺吸光度。
比较不同样品的吸光度，用相应的计算公式进行计算，得出SOD酶活性值。
3. 结论通过以上步骤，可以测定出待测样品中SOD酶的活性。
建议在进行实验时，需按照实验操作规程严谨操作，做好内、外参照品的对比，能最大程度保证数据真实准确，为后续的实验提供有力的支持。
wst8法测定sod原理
WST8法测定SOD原理超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）是一种重要的抗氧化酶，它能够催化超氧阴离子（O2·-）的还原，将其转化为氧气（O2）和过氧化氢（H2O2），从而保护细胞免受氧化应激的损伤。
WST-8法是一种常用的测定SOD活性的方法，其基本原理如下：1.原理介绍： WST-8是一种水溶性的四磺基偶氮盐化合物，它可以通过酶促反应被还原为可溶性的有色产物。
WST-8法测定SOD活性的原理是，利用超氧阴离子的还原能力将WST-8还原为有色产物，通过测量产物的吸光度来间接测定SOD的活性。
该方法的优点是简便、灵敏、重复性好，适用于多种生物体系。
2.SOD活性测定步骤：（1）制备反应液：将WST-8溶液与辣根过氧化物酶（HRP）溶液按一定比例混合，得到WST-8/HRP工作液。
（2）制备样品：将待测的SOD样品进行适当的稀释，使其浓度在测定范围内。
（3）反应体系组装：将适量的WST-8/HRP工作液、稀释后的SOD样品和超氧化物发生剂（例如黄嘌呤核苷酸）按一定比例混合，得到反应混合液。
（4）反应过程：将反应混合液孵育在适宜的温度下，一定时间后终止反应。
（5）测定吸光度：使用分光光度计测定反应液的吸光度，一般在450 nm波长处测量。
吸光度的变化与SOD活性成正比。
3.原理解析： WST-8法测定SOD活性的关键在于超氧化物发生剂的选择和反应液中WST-8的还原反应。
超氧化物发生剂能够产生超氧阴离子，它们与SOD样品中的SOD发生反应，将超氧阴离子转化为氧气。
反应液中的WST-8分子能够被超氧阴离子还原为有色产物，产物的吸光度与WST-8的还原程度成正比，从而间接测定SOD的活性。
4.反应机理：超氧化物发生剂黄嘌呤核苷酸（Xanthine），在存在黄嘌呤氧化酶（XOD）的催化下，被氧气氧化生成尿酸和超氧阴离子。
超氧阴离子与WST-8反应，将WST-8还原为可溶性的有色产物。
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法79498
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。
参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。
（2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取2.1637g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至1000ml。
（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。
（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。
（5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。
酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。
2、酶活性测定（1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液0.6ml，磷酸缓冲液5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀；（2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中（3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min；同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。
sod测定原理
sod测定原理
SOD测定原理是通过测量超氧化物岐化酶（SOD）的活性来
评估细胞内抗氧化能力的一种方法。
SOD是细胞中一种重要
的抗氧化酶，能够将有害的超氧自由基转化为较为稳定的过氧化氢和氧气，从而保护细胞免受氧化损伤。
测定SOD活性的方法有多种，其中最常用的是基于SOD能够催化黄嘌呤（pyrogallol）的氧化反应。
在碱性条件下，黄嘌
呤可以被超氧自由基氧化为紫色产物。
SOD的活性越高，产
生的紫色产物越少。
为了测定SOD活性，首先需要制备一定浓度的黄嘌呤溶液，
通常是0.1%的黄嘌呤溶液。
将样品（如细胞提取物）与黄嘌
呤溶液混合，然后加入稍微碱性的缓冲液，使整个混合物的
pH在9-10之间。
接下来，需要在适当的温度下孵育一段时间（通常是37°C），以使SOD与黄嘌呤发生反应。
在孵育过程中，黄嘌呤将被氧化，产生紫色产物。
孵育结束后，加入醋酸停止反应。
最后，通过分光光度计测量溶液的吸光度值。
SOD活性高的
样品，反应过程中产生的紫色产物较少，吸光度值较低；而SOD活性低的样品，反应过程中产生的紫色产物较多，吸光
度值较高。
根据吸光度值的差异，可以计算出样品中SOD的活性。
通常
会与一个已知活性的SOD标准品进行比较，从而得出样品中
SOD的相对活性。
这样就可以评估细胞内的抗氧化能力及SOD活性的变化情况。
总的来说，SOD测定原理是基于黄嘌呤的氧化反应，通过测量产生的紫色产物的吸光度值来评估SOD的活性。
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SOD酶活性测定
所需药品：（1）0.1mol/l pH7.8 的磷酸钠缓冲液：
A 液：0.1mol/l 磷酸氢二钠液
B 液：0.1mol/l 磷酸二氢钠液
1 毫升B+10.76 毫升A
（2）0.026mol/l 蛋氨酸液（Met）：
现用现配
称取0.3879克蛋氨酸，用 1 号液定容至100毫升。
-5
（3）75*10mol/l氯化硝基四氮唑蓝（NBT）液：现
用现配
称取0.1533克NBT,先用少量蒸馏水溶解，然后定容至
250 毫升-5
（4）1umol/IEDTA-2 钠和2*10mol/l 核黄素混合液
（5）0.05mol/l pH7.8 的磷酸钠缓冲液
（6）xx
实验步骤：
1. 酶液制备：
称取0.5克鲜叶，放入研钵中，加入 3 毫升 5 号液和少量石英砂，于冰浴中研成匀浆。
然后用5号液定容至8毫升，于0〜4C、13000g时离心15分钟，
上清液即为酶提取液。
酶液可在低于
0C下的环境中保存
2. 按下表加入试剂：反应各系统
中试剂用量试剂杯号 2 号液(ml)
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.53 号液(ml)
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.34 号液(ml)
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3 酶液(ul)00025
35
45
55
655号液(ul)45835试剂摇匀后，迅速遮光处理1号杯，其余杯在25C、光强为4000勒克司的条件下照光处理15分钟，然后立即遮光。
接着在560nm 下，以1 号杯作为空白测定其余杯中溶液的光密度。
假定
2、3号杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率为100%,然后按下式分别计算其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率。
M/N=100/X
M——
2、3 号杯中溶液的光密度的平均值
N――其余杯中溶液的光密度值
X——其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率
然后以酶液量为横坐标，以其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率
（X）为纵坐标制作曲线，根据线性好的曲线所得出的函数关系计算抑制NBT光还原的相对百分率为50%时所加入的酶液量，以该酶液量作为 1 个酶活单位。
结果计算：
SOD活力按下式计算：
A=V*1000*60/ （B*W*T）
A――酶活力（酶活力单位gF Wh）
V――酶提取液体积（毫升）
B――一个酶活力单位的酶液量（微升）
W――样品鲜重（克）
T――反应时间（分）
因测定样品数量多时也可用下列简式计算：
A=（D
1-D
2）*V*1000*60/ （D
1*B*W*T*50% ）D1——
2、3号杯光密度的平均值D2――测定样品的光密度值-1-1。