如意珍宝丸质量标准研究

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如意珍宝丸质量标准研究
孙绪丁;任松鹏;刘玉芹
【摘要】Objective: To establish a method for qualitative and quantitative analysis of RuYi ZhenBaoWan. Method: Thin-layer chromatography (TLC) was used to identify MuXiang (common vladimiria root), JiangXiang (lignum dalbergiae odoriferae), DingXiang (syzygium aromaticum), BiBa (fructus piperis longi), HongHua (flos carthnmi), JueMingZi(catsia tora linn), MoShiZiSuan (gallic acid) contained in RuYi ZhenBaoWan; high performance liquid chromatography (HPLC) was applied to determine the contents of piperine, hydroxysafflor yellow A and cholic acid. Result: MuXiang (common vladimiria root), JiangXiang (lignum dalbergiae odoriferae), DingXiang (syzygium aromaticum), BiBa (fructus piperis longi), HongHua (flos carthnmi) were identified with TLC; the results of HPLC suggested piperine had a good linear relationship between the range of 4.015~40.15 礸/mL and peak area, the average recovery rate was 98.80%, RSD was 1.45%; hydroxysafflor yellow A showed a good linear relathionship between the range of 27.1~271 礸/mL and peak area, the average recovery rate was 98.78%, RSD was 1.10%; cholic acid demonstrated a good linear relationship between the range of 26.0~260 礸/mL and peak area, the average recovery rate was 98.22%, RSD was
1.36%. Conclusion: The method is specific, accurate, reproducible, which is feasible for quality control of RuYi ZhenBaoWan.%目的:建立如意珍宝丸的定性定量分析方法.方法:采用薄层色谱法(TLC)对如意珍宝丸中木香、降香、丁香、荜
茇、红花、决明子、没食子酸等进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)测定如意珍宝丸中胡椒碱、羟基红花黄色素A、胆酸的含量.结果:薄层色谱法均能检出木香、降香、丁香、荜茇、红花、决明子、没食子酸;胡椒碱在4.015~40.15
μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.80%,RSD为1.45%;羟基红花黄色素A 在27.1~271μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.78%,RSD 为1.10%;胆酸在26.0~260μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.22%,RSD 为1.36%.结论:所建立的质量分析方法专属性强,准确,重复性好,可作为如意珍宝丸的质量标准.
【期刊名称】《西部中医药》
【年(卷),期】2013(026)001
【总页数】7页(P24-30)
【关键词】如意珍宝丸;薄层色谱;高效液相色谱;质量标准
【作者】孙绪丁;任松鹏;刘玉芹
【作者单位】山东阿如拉药物研究开发有限公司,山东济南250101;山东阿如拉药物研究开发有限公司,山东济南250101;山东阿如拉药物研究开发有限公司,山东济南250101
【正文语种】中文
【中图分类】R917
如意珍宝丸由木香、降香、丁香、荜茇、红花、决明子、诃子、毛诃子、余甘子、人工牛黄等30味药材组成,具有清热,醒脑开窍,舒筋通络等作用;主要用于瘟热、陈旧热证、白脉病、四肢麻木、瘫痪、口眼歪斜、神志不清、痹症、痛风、肢
体强直、关节不利等病证[1]。

如意珍宝丸是藏族传统经验方,处方源自第司·桑结嘉措著的《藏医医诀补遗》,是藏医用来治疗各种神经疾病的首选药物。

如意珍宝丸为大处方复方制剂,成分复杂,原标准质量检测方法只有显微鉴别,无药材的鉴别及含量测定项,该标准要求偏低,不能有效的控制该制剂的质量。

因此本实验对如意珍宝丸中木香、降香、丁香、荜茇、红花、决明子、没食子酸进行薄层色谱法(TLC)鉴别,对胡椒碱、羟基红花黄色素A、胆酸进行高效液相色谱法(HPLC)含量测定,建立了该产品的质量检测方法。

L-2100型日立高效液相色谱仪(日立公司生产),包括日立L-2100泵,日立L-2400紫外检测器;Al l tech ELSD 2000ES蒸发光散射检测器(美国GRACE公司
生产);岛津AUW220D电子天平(岛津公司生产);KQ-300B超声波清洗器(昆山
市超声仪器有限公司生产);HH-4数显恒温水浴锅(常州荣冠实验仪器分析厂生产)。

去氢木香内酯对照品(批号:111525-201008)、丁香酚对照品(批号:110725-200711)、胡椒碱对照品(批号:0775-200203)、大黄素对照品(批号:110756-200100)、大黄酚对照品(批号:110796-201017)、没食子酸对照品(批号:110831-200803)、羟基红花黄色素A对照品(批号:111637-200905)、胡椒碱
对照品(批号:0775-200203)、胆酸对照品(批号:100078-200414)、木香对照
药材(批号:120921-201008)、降香对照药材(批号:120952-201007)、丁香对
照药材(批号:121039-200503)、红花对照药材(批号:120907-201010)、荜茇
对照药材(批号:121023-200202)均购自中国药品生物制品检定所;薄层色谱用
硅胶G、硅胶H(青岛海洋化工厂生产);如意珍宝丸(青海金诃藏药药业股份有限
公司生产,0.5 g/丸,批号:090501、090502、090503);甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。

2.1 木香的薄层色谱鉴别取本品1.5 g,研细,加甲醇10mL,超声处理30分钟,滤过,取滤液作为供试品溶液[2];取按处方比例及制法制备的缺木香阴性样品,
按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液;另取木香对照药材0.5 g,按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液;另取去氢木香内酯对照品,加甲醇制成每1m L含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。

参照《中国药典》2010年版一部附录VIB进行试验,吸取供试品溶液、阴性对照溶液各10μL,对照药材溶液、对照品溶液各
5μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以二甲苯∶乙酸乙酯∶二氯甲烷(10∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸
溶液,加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的紫红色斑点,阴性对照在色谱相应的位置上没有干扰。

结果见图1。

2.2 降香的薄层色谱鉴别取本品2 g,研细,加甲醇10m L,超声处理30分钟,滤过,取滤液作为供试品溶液[3];取按处方比例及制法制备缺降香的阴性样品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液;另取降香对照药材1 g,按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。

参照《中国药典》2010年版一部附录VIB进行试验,吸取上述3种溶液各5μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄
层板上,以三氯甲烷∶甲醇(20∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中,在与对照药材色谱相
应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照在色谱相应的位置上没有干扰。

结果见图1。

2.3 丁香的薄层色谱鉴别取本品2.5 g,研细,加二氯甲烷10mL,超声处理30
分钟,滤过,滤液浓缩至1mL,作为供试品溶液;取按处方比例及制法制备缺丁
香的阴性样品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液;另取丁香对照药材
0.1g,按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液;另取丁香酚对照品适量,加二
氯甲烷制成每1mL含5μL的溶液,作为对照品溶液。

参照《中国药典》2010年
版一部附录VIB进行试验,吸取上述4种溶液各15μL,分别点于同一以羧甲基纤
维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-石油醚(60~90℃)(1∶9)为展开
剂[4],展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的黄色斑点,阴性对照在色谱相应的位置上没有干扰。

结果见图1。

2.4 荜茇的薄层色谱鉴别取本品2.5 g,研细,加乙醇10mL,超声处理20分钟,滤过,滤液作为供试品溶液[5];取按处方比例及制法制备缺荜茇的阴性样品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液;另取荜茇对照药材0.5 g,按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液;另取胡椒碱对照品适量,置棕色量瓶中,加无水乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。

参照《中国药典》2010年版一部附录VI B进行试验,吸取上述4种溶液各8μL,分别点于同一以羧甲基纤维
素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(7∶5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%的硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,置紫外光灯365 nm下检视。

供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性对照在色谱相应的位置上没有干扰。

结果见图1。

2.5 红花的薄层色谱鉴别取本品2.5 g,研细,加乙醚10mL,密塞,冷浸30分钟,时时振摇,滤过,药渣加80%的丙酮水溶液10mL,超声处理20分钟,静置,取上清液作为供试品溶液[6];取按处方比例及制法制备缺红花的阴性样品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液;另取红花对照药材0.4 g,按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。

参照《中国药典》2010年版一部附录VIB进行试验,吸取供试品溶液、阴性对照溶液各10μL,对照药材溶液5μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯∶甲酸∶水∶甲醇
(10∶2∶2∶0.5)上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干。

供试品色谱中,在与对
照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的红色斑点,阴性对照在色谱相应的位置上没有干扰。

结果见图1。

2.6 决明子的薄层色谱鉴别取本品4 g,研细,加甲醇25mL,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水10mL使溶解,再加1mL盐酸,置水浴上加热30分钟,立即冷却,用乙醚提取2次,20mL/次,合并乙醚液,挥干,残渣加甲醇
1mL使溶解,作为供试品溶液[7];取按处方比例及制法制备缺决明子的阴性样品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液;另取决明子对照药材0.5 g,按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液;另取大黄素、大黄酚对照品适量,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。

参照《中国药典》2010年版一部附录VIB进行试验,吸取供试品溶液、阴性对照溶液各10μL,对照药材溶液、对照品溶液各2μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上,以
石油醚(60~90℃)∶甲酸乙酯∶甲酸(15∶5∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置
紫外光灯365 nm下检视。

供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位
置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性对照在色谱相应的位置上没有干扰。

结果见图1。

2.7 没食子酸的薄层色谱鉴别取本品2.5 g,研细,加无水乙醇10mL,超声处理20分钟,滤过,滤液作为供试品溶液[8];另取没食子酸对照品适量,加甲醇
制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。

参照《中国药典》2010年版一部附录VIB进行试验,吸取上述2种溶液各5μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠
为黏合剂的硅胶G薄层板上,以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸(6∶4∶1)为展开剂,
展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液,加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的蓝色斑点。

结果见图1。

3.1 胡椒碱的含量测定
3.1.1 液相色谱条件 Waters C18色谱柱(250 mm×
4.6 mm,5μm);以甲醇∶水(70∶30)为流动相;检测波长为343 nm;流速为1.0mL/min;柱温为25℃;进
样量为10μL。

3.1.2 溶液的制备
3.1.2.1 对照品溶液的制备取胡椒碱对照品适量,精密称定,置棕色瓶中,加无水乙醇制成每1mL含20μg的溶液,即得。

3.1.2.2 供试品溶液的制备本品研细后,取粉末3 g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,精密加入无水乙醇50mL,密塞,称定重量,超声处理40分钟,放冷,用无水乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

3.1.2.3 阴性对照溶液的制备取按处方比例及制法制备缺荜茇的阴性样品,按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

3.1.3 系统适用性试验及阴性干扰的考察分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL,注入液相色谱仪,按“3.1.1”项下的液相色谱条件进行测定,记录色谱图。

结果表明:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上检出色谱峰,胡椒碱与其相邻色谱峰的分离度大于1.5,且阴性对照在与对照品色谱相应的位置上没有干扰。

见图2。

3.1.4 标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取胡椒碱对照品贮备溶液
(40.15μg/mL)1、2、3、5、8、10mL,分别置10mL容量瓶中,无水乙醇稀释
至刻度,摇匀,各精密进样10μL,按“3.1.1”项下的液相色谱条件进行测定,以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归。

试验结果:胡椒碱的线性回归方程为
A=44933C-12 366,相关系数r=0.999 7。

结果表明:在4.015~40.15μg/mL
浓度范围内,胡椒碱的峰面积(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。

3.1.5 精密度试验精密吸取胡椒碱对照品溶液10μL,注入液相色谱仪,按“3.1.1”项下的液相色谱条件进行测定,各连续测定6次,记录峰面积并计算相对标准偏
差RSD。

试验结果:胡椒碱对照品溶液峰面积的平均值为514 603,RSD=1.54%。

结果表明:仪器精密度良好。

3.1.6 稳定性试验供试品溶液制备完成后,精密吸取10μL,注入液相色谱仪,按
“3.1.1”项下的液相色谱条件进行测定,记录峰面积,以后每隔2小时测定1次,考察8小时,计算峰面积的相对标准偏差RSD。

试验结果:供试品溶液中胡椒碱
峰面积的平均值为605 562,RSD=0.49%。

结果表明:供试品溶液中胡椒碱在8
小时内测定结果稳定。

3.1.7 重复性试验取同一批如意珍宝丸样品(生产批号:090501)3 g,精密称定,共6份,按照“3.1.2”项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,精密吸取
10μL,注入液相色谱仪,按“3.1.1”项下的液相色谱条件进行测定,计算样品中胡椒碱的含量及相对标准偏差RSD。

试验结果:样品中胡椒碱的平均含量为
0.163mg/丸,RSD=0.93%。

结果表明:该分析方法重复性良好。

3.1.8 加样回收率试验精密称取已知含量的同一批如意珍宝丸样品(生产批号:090501,胡椒碱含量为0.163mg/丸)1.5 g,共6份,精密加入胡椒碱对照品溶
液12mL(40.15μg/mL),按照“3.1.2”项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,精密吸取10μL,注入液相色谱仪,按“3.1.1”项下的液相色谱条件进行测定,计算样品中胡椒碱的回收率及相对标准偏差RSD。

试验结果:胡椒碱的平均回收
率为98.80%,RSD=1.45%。

结果表明:该测定方法测定结果准确。

3.1.9 样品含量测定按照“3.1.2”项下供试品溶液的制备方法制备批号分别为090501、090502、090503的3批如意珍宝丸供试品溶液(每批3份)。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,按“3.1.1”项下的液相色谱条件进行测定,记录峰面积,按照外标法计算供试品中胡椒碱的含量。

试验结果:批号分别为090501、090502、090503的如意珍宝丸中胡椒碱的平均含量分别
为0.162、0.158、0.159mg/丸(n=3)。

3.2 羟基红花黄色素A的含量测定
3.2.1 液相色谱条件 Waters C18色谱柱(250mm×
4.6mm,5μm);以甲醇∶1%
冰醋酸(24∶76)为流动相;检测波长为403 nm;流速为1.0mL/min;柱温为
25℃;进样量为10μL。

3.2.2 溶液的制备
3.2.2.1 对照品溶液的制备取羟基红花花色素A对照品适量,精密称定,置棕色瓶中,加水制成每1mL含0.13mg的溶液,即得。

3.2.2.2 供试品溶液的制备本品研细后,取粉末4 g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,精密加入水25mL,密塞,称定重量,超声30分钟,放冷,用水补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

3.2.2.3 阴性对照溶液的制备取按处方比例及制法制备缺红花的阴性样品,按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

3.2.3 系统适用性试验及阴性干扰的考察分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL,注入液相色谱仪,按“3.2.1”项下的液相色谱条件进行测定,记录色谱图。

结果表明:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上检出色谱峰,羟基红花花色素A与其相邻色谱峰的分离度大于1.5,且阴性对照在与对照品色谱相应的位置上没有干扰。

结果见图3。

3.2.4 标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取羟基红花黄色素A对照品贮备
溶液(0.271mg/mL)1、3、5、8、10mL,分别置10mL容量瓶中,加水稀释定容至刻度,摇匀,各精密进样10μL,按“3.2.1”项下的液相色谱条件进行测定,以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归。

试验结果:羟基红花黄色素A的线性回归方程为A=5 176.4C+15 072,相关系数r=0.9999。

结果表明:在27.1~
271μg/mL浓度范围内,羟基红花黄色素A的峰面积(A)与对照品浓度(C)线性关
系良好。

3.2.5 精密度试验精密吸取胡椒碱对照品溶液10μL,注入液相色谱仪,按“3.2.1”项下的液相色谱条件进行测定,各连续测定6次,记录峰面积并计算相对标准偏
差RSD。

试验结果:羟基红花黄色素A对照品溶液峰面积的平均值为713 555,
RSD=1.00%。

结果表明:仪器精密度良好。

3.2.6 稳定性试验供试品溶液制备完成后,精密吸取10μL,注入液相色谱仪,按“3.2.1”项下的液相色谱条件进行测定,记录峰面积,以后每隔2小时测定1次,考察8小时,计算峰面积的相对标准偏差RSD。

试验结果:供试品溶液中羟基红
花黄色素A峰面积的平均值为705562,RSD=0.42%。

结果表明:供试品溶液中羟基红花黄色素A在8小时内测定结果稳定。

3.2.7 重复性试验取同一批如意珍宝丸样品(批号:090501)4 g,精密称定,共6份,按照“3.2.2”项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,精密吸取10μL
注入液相色谱仪,按“3.2.1”项下的液相色谱条件进行测定,计算样品中羟基红
花黄色素A的含量及相对标准偏差RSD。

试验结果:样品中羟基红花黄色素A的平均含量为0.212mg/丸,RSD=0.81%。

结果表明:该分析方法重复性良好。

3.2.8 加样回收率试验精密称取已知含量的同一批如意珍宝丸样品(批号:090501,羟基红花黄色素A含量为0.212mg/丸)2 g,共6份,精密加入羟基红花黄色素A 对照品溶液3mL(0.271 mg/mL),按照“3.2.2”项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,精密吸取10μL,注入液相色谱仪,按“3.2.1”项下的液相色谱条件进行测定,计算样品中羟基红花黄色素A的回收率及相对标准偏差RSD。

试验结果:羟基红花黄色素A的平均回收率为98.78%,RSD=1.10%。

结果表明:该测定方法测定结果准确。

3.2.9 样品含量测定按照“3.2.2”项下供试品溶液的制备方法制备批号分别为090501、090502、090503的3批如意珍宝丸供试品溶液(每批3份)。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,按“3.2.1”项下的液相色谱条件进行测定,记录峰面积,按照外标法计算供试品中胡椒碱的含量。

试验结果:批号分别为090501、090502、090503的如意珍宝丸中羟基红花黄色素A的平
均含量分别为0.212、0.220、0.217mg/丸(n=3)。

3.3 胆酸的含量测定
3.3.1 液相色谱条件 Boston C18色谱柱(250mm×
4.6mm,5μm);以甲醇∶1%冰醋酸(75∶25)为流动相;用蒸发光散射检测器;流速为1.0mL/min;柱温为25℃。

3.3.2 溶液的制备
3.3.2.1 对照品溶液的制备精密称取胆酸对照品适量,加甲醇制成每1mL含
0.2mg的溶液,即得。

3.3.2.2 供试品溶液的制备本品研细后,取粉末16 g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,密塞,称定重量,超声30分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25mL,40℃以下减压回收,转移至5mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,滤过,去续滤液,即得。

3.3.2.3 阴性对照溶液的制备取按处方比例及制法制备缺人工牛黄的阴性样品,按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

3.3.3 系统适用性试验及阴性干扰的考察分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL,注入液相色谱仪,按“3.3.1”项下的液相色谱条件进行测定,记录色谱图。

结果表明:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上检出色谱峰,胆酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5,且阴性对照在与对照品色谱相应的位置上没有干扰。

结果见图4。

3.3.4 标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取胆酸对照品贮备溶液
(260μg/mL)1、3、5、8、10mL,分别置10mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,各精密进样10μL,按“3.3.1”项下的液相色谱条件进行测定,以峰面积的对数(Log A)对对照品浓度的对数(Log C)进行线性回归。

试验结果:胆酸的线性回归方程为:Log A=1.257 7 Log C+4.260 9,相关系数r=0.999 4。

结果表明:在26.0~260μg/ml浓度范围内,胆酸峰面积的对数(Log A)与对照品浓度的对数
(Log C)线性关系良好。

3.3.5 精密度试验精密吸取胆酸对照品溶液10μL,注入液相色谱仪,按“3.3.1”项下的液相色谱条件进行测定,各连续测定6次,记录峰面积并计算相对标准偏
差RSD。

试验结果:胆酸对照品溶液峰面积的平均值为7 060 127,RSD=0.66%。

结果表明:仪器精密度良好。

3.3.6 稳定性试验供试品溶液制备完成后,精密吸取10μL,注入液相色谱仪,按“3.3.1”项下的液相色谱条件进行测定,记录峰面积,以后每隔2小时测定1次,考察8小时,计算峰面积的相对标准偏差RSD。

试验结果:供试品溶液中胆酸峰
面积的平均值为7 137 948,RSD=0.92%。

结果表明:供试品溶液中胆酸在8小时内测定结果稳定。

3.3.7 重复性试验取同一批如意珍宝丸样品(生产批号:090501)16 g,精密称定,共6份,按照“3.3.2”项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,精密吸取
10μL,注入液相色谱仪,按“3.3.1”项下的液相色谱条件进行测定,计算样品中胆酸的含量及相对标准偏差RSD。

试验结果:样品中胆酸的平均含量为0.063
5mg/丸,RSD=2.39%。

结果表明:该分析方法重复性良好。

3.3.8 加样回收率试验精密称取已知含量的同一批如意珍宝丸样品(生产批号:090501,胆酸含量为0.063 5mg/丸)8 g,共6份,精密加入胆酸对照品溶液
4mL(260μg/mL),按照“3.3.2”项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,精密吸取10μL,注入液相色谱仪,按“3.3.1”项下的液相色谱条件进行测定,计算样品中胆酸的回收率及相对标准偏差RSD。

试验结果:胆酸的平均回收率为
98.22%,RSD=1.36%。

结果表明:该测定方法测定结果准确。

3.3.9 样品含量测定按照“3.3.2”项下供试品溶液的制备方法制备批号分别为090501、090502、090503的3批如意珍宝丸供试品溶液(每批3份)。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μL,注入液相色谱仪,按“3.3.1”项下的液相色
谱条件进行测定,记录峰面积,按照外标法计算供试品中胆酸的含量。

试验结果:批号分别为090501、090502、090503的如意珍宝丸中胆酸的平均含量分别为0.062 9、0.074 5、0.068 3mg/丸(n=3)。

4.1 检测波长的选择分别取胡椒碱、羟基红花黄色素A,在200~500 nm范围内进行波长扫描。

结果胡椒碱、羟基红花黄色素A分别在343nm、403nm波长处有最大吸收。

因此选用343 nm、403 nm分别作为胡椒碱、羟基红花黄色素A的检测波长,这与与《中国药典》2010年版一部中荜茇[9]219、红花[9]141-142测定项下的测定波长一致。

胆酸在紫外区域吸收很弱,而且如意珍宝丸处方中人工牛黄的添加量很低,采用常规的HPLC测定方法很难有效检测样品中胆酸的含量。

蒸发光散射检测器具有无论化合物是否具有紫外、荧光或者电活性的基团都能进行检测的特点[10-11],因此选择蒸发光散射检测器可实现如意珍宝丸中胆酸的精确含量测定。

4.2 供试品的处理胡椒碱是如意珍宝丸处方中荜茇的主要活性成分,药理研究表明,荜茇中胡椒碱具有解热、抗炎、止痛作用[12]。

如意珍宝丸处方中的红花具有活血通经、散瘀止痛的功效,其中羟基红花黄色素A是红花药理功效的最有效水溶性部位[13]。

人工牛黄具有清心,豁痰,开窍,凉肝,熄风,解毒的功效[14]。

为保证如意珍宝丸供试品中有效成分胡椒碱、羟基红花黄色素A、胆酸提取完全,试验中分别以胡椒碱、羟基红花黄色素A、胆酸为考察指标,对供试品溶液的制备进行了方法学研究:考察了不同提取溶剂,不同提取方法,不同提取时间的提取效率。

结果采用无水乙醇超声提取40分钟能够将如意珍宝丸中的胡椒碱完全提取;采用水超声提取30分钟能够将如意珍宝丸中的羟基红花黄色素A完全提取;采用甲醇超声提取30分钟能够将如意珍宝丸中的胆酸完全提取。

4.3 流动相的选择文献报道中胡椒碱多以甲醇-水体系[15-16]、乙腈-盐体系[17]、四氢呋喃-盐体系[18]分离胡椒碱,其中甲醇-水体系最为简单。

经过
研究发现以流动相甲醇∶水(80∶20)(相对保留时间6分钟)至甲醇∶水(60∶40)(相对保留时间30分钟)均能达到含量检测要求,其中甲醇∶水(70∶30)主峰相对保留时间为10分钟左右,胡椒碱与其他相邻色谱峰的分离度大于1.5,分离效果最好。

有文献报道[19-20],可选用甲醇∶酸体系分离羟基红花黄色素A。

研究发现,以甲醇∶1%冰醋酸体系适宜比例为流动相,均能达到很好的色谱分离效果。

其中
以甲醇∶1%冰醋酸(24∶76)为流动相分离效果为最优,羟基红花黄色素A相对保
留时间13分钟左右。

胆酸的含量测定多采用甲醇∶冰醋酸体系[21-23],本试验经过研究发现以流动相甲醇∶1%冰醋酸水溶液(90∶10~60∶40)均能达到含量检查要求,其中甲醇∶
体1%冰醋酸水溶液(75∶25)分离效果最好,相对保留时间15分钟左右。

本研究建立了如意珍宝丸中木香、降香、丁香、荜茇、红花、决明子、没食子酸的薄层色谱定性鉴别方法和胡椒碱、羟基红花黄色素A、胆酸的高效液相色谱定量测定方法。

所建立的薄层鉴别方法特征斑点清晰,专属性强,重复性好,阴性对照没有干扰,能够有效控制如意珍宝丸的质量;所采用的高效液相色谱含量测定方法简便、准确、精密度、重复性、回收率均较好,可以用于如意珍宝丸的质量控制。

【相关文献】
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