RP-HPLC测定都梁丸中欧前胡素的含量

·药剂·
RP2HPL C测定都梁丸中欧前胡素的含量
谭生建　胡文祥　卢嘉琪3　王建社　常良才3
(中国人民解放军国防科工委药品检验所　北京100101)
摘要　目的:建立反相高效液相色谱测定都梁丸中欧前胡素含量的方法。

方法:采用乙醇作溶剂,水浴加热回流提取。

LUNA2C18色谱柱分离测定,流动相为甲醇2水(70∶30),流速0.6ml·min-1,检测波长264nm。

结果:欧前胡素与其相邻峰的分离度是2.0;理论板数按欧前胡素峰计算是15173;欧前胡素对照品线性范围是9.750～48.75μg·ml-1,r=0.9999;平均回收率101.3%。

结论:用高效液相色谱法测定都梁丸中欧前胡素的含量,操作简便,结果准确。

关键词　反相高效液相色谱　都梁丸　欧前胡素
都梁丸由白芷、川芎等药材组成,收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》第1册(1989年),能祛风散寒,活血通络,用于风寒之邪引起的鼻塞不通,偏正头痛,或伴寒热。

白芷为都梁丸君药,香豆素衍生物欧前胡素是白芷中重要有效成分,具有兴奋交感神经,抗炎镇痛等作用[1]。

部颁标准中仅以性状、显微鉴别和丸剂通则项下的检查方法检定都梁丸的质量。

曾有文献报道用色谱法测定白芷或某些成药中欧前胡素的含量[2,3],但都梁丸中欧前胡素含量测定方法未见报道。

本文建立了反相高效液相色谱测定都梁丸中欧前胡素含量的方法。

1　仪器、药材与试剂
LC26A液相色谱泵,SIL26B自动进样器, SPD26AV紫外2可见分光光度检测器,C2R6A 色谱数据处理机均为岛津公司产品。

试验用药材购自北京药材公司并经谭生建副主任药师鉴定,符合药典品种,其中白芷为伞形科植物白芷A ngelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f的干燥根。

欧前胡素对照品(中国药品生物制品检定所)。

都梁丸由解放军第二炮兵药品器械检修所及本所按照卫生部药品标准制备。

对照品贮备液为97.50μg·ml-1,欧前胡素对照品乙醇溶液,甲醇为色谱纯,乙醇为分析纯。

2　方法与结果
2.1　色谱条件　L UNAC18分析色谱柱(4.6 mm ID×250mm,粒径5μm),北京分析仪器厂ODS保护柱(5mm ID×50mm,粒径5μm),柱温35℃;流动相甲醇2水(70∶30),流速0.6ml·min-1;检测波长264nm,进样体积10μl,记录纸速1mm·min-1。

212　可行性　量取对照品贮备液3ml,置10ml 量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,取10μl注入液相色谱仪。

按都梁丸处方制备不含白芷的都梁丸阴性样品。

取都梁丸1.5g,阴性样品0.5g,分别按样品测定项下方法提取,进样,绘制色谱图,结果见图1。

t/min
图1　样品色谱图
A1欧前胡素　B1阴性样品　C1都梁丸　a1欧前胡素
3中国人民解放军第二炮兵药品器械检修所　北京100073
由图可知,在本实验条件下都梁丸中其他成分对欧前胡素含量测定没有影响。

欧前胡素保留时间约为16min;欧前胡素与其相邻峰的分离度是2.0;以欧前胡素峰计算理论板数是15173。

上述色谱条件可用于都梁丸中欧前胡素含量测定。

2.3　线性关系与最低检出浓度　分别精密量取对照品储备液1,2,3,4,5ml,分别置10ml量瓶中,用乙醇稀释成5个等差浓度(9.750～48.75μg·ml-1),各取10μl重复进样(n=3),记录峰面积。

欧前胡素峰面积均值X对进样浓度Y(μg·ml-1)线性回归,得回归方程Y= 0.000061385X+1.2784,r=0.9999(n=5)。

以基线噪音3倍计算,最低检出浓度取0.05μg·ml-1。

2.4　仪器精密度和方法重现性　以一样品溶液置自动进样器中,每1h重复进样1次(n= 5),记录积分面积,以面积积分值计算RS D 0.92%。

同一样品按含量测定方法重复取样测定(n =5),求算含量,RS D0.60%。

2.5　稳定性　取同一样品溶液分别于24,48h 测定含量,x=1.645mg·g-1,RS D0.73%(n= 3),表明样品溶液在试验温度下(18℃)置棕色量瓶中,欧前胡素含量至少在48h内稳定。

2.6　提取方法　乙醇作溶剂,进行了不同时间超声和水浴加热回流提取试验,以水浴加热回流60min提取率为100%计算,超声60min提取率是98.2%,回流20,40,90min提取率分别是99.2%,99.6%,98.1%,确定水浴加热回流40min后测定。

2.7　样品测定　取都梁丸3丸,剪碎,混匀。

取1.5g(约相当于白芷1g)精密称定,加硅藻土1g,乙醇适量,研匀。

定量转移至100ml磨口三角瓶中,加乙醇至约50ml,水浴加热回流提取40min,滤入100ml量瓶中,滤渣用约40ml乙醇洗滤3次,洗滤液并入同一量瓶中,放冷至室温,加乙醇至刻度,摇匀,取少量用微孔滤膜(0.45μm)滤过,进样10μl,记录欧前胡素色谱峰面积,外标法计算含量。

测定3批样品,结果分别是1.631,1.656,1.254mg·g-1。

2.8　加样回收　按样品测定项下方法,精密称取同一批号都梁丸6份。

其中5份分别精密加入欧前胡素对照品,另外1份做空白。

各份均依样品测定项下方法操作,测定含量,计算平均回收率,结果见表1。

表1　样品中欧前胡素的回收率测定结果
空白含量
μg·ml-1
加入量
μg·ml-1
测得量
μg·ml-1
回收率
%
x
%
RSD
%
42.5497.35
43.77102.4
18.8124.37543.82102.6101.3 2.2
43.80102.5
43.55101.5
3　讨论及结论
3.1　样品测定时加硅藻土、乙醇研磨,便于蜜丸团块离散,充分提取。

加乙醇研磨要少量多次,一次加入大量乙醇不利于研磨离散。

3.2　样品水浴回流90min测得欧前胡素含量低于回流20,40,60min,可能是欧前胡素分子中脂键水解所致,提示欧前胡素对热不稳定。

3.3　本法操作简便,结果准确,可用于都梁丸中欧前胡素的含量测定。

4　参考文献
1　阴建,郭力弓.中药现代研究与临床应用1第一卷.北京:学苑出版社,1995,257
2　陈燕祥,沈安华1白芷中欧前胡素的薄层扫描测定1中成药研究,1991,11(6):26
3　黄新生1高效液相色谱法定量测定辛芩冲剂中欧前胡素的含量1中草药,1988,(6):19
1998204213收稿。