人参不同部位中人参皂苷成分的分析

人参不同部位中人参皂苷成分的分析
周卫松
【摘要】This study was aimed to measure the content of ginsenoside in ginseng extract by UV/HPLC. Through the approximate translation comparison of two different testing results with UV and HPLC in current market, and several typical HPLC peaks ratio analysis on contents of different ginsenoside extracted from the root, stem and leaves of ginseng, in order to establish identification method of ginsenoside from different sources. The results showed that the ratio for Re:Rb1:Rc:Rd in ginseng root extract was approximately 1:2.20:0.94:0.97. And the ratio for Re:Rb1:Rc:Rd
in ginseng leave extract was approximately
1:(0.05~0.07):(0.10~0.16):(0.32~0.37). Compared with the mixture of ginseng root and ginseng leave extract, the theoretical value of
Re:Rb1:Rc:Rd should between those two ratios. It was concluded that this method was simple, stable and reliable, which can be used as the identification method of ginsenoside from ginseng root, stem and leaves.%目的：建立UV/HPLC法测定人参不同部位中人参皂苷含量。

方法：通过对市场上通行的UV法和HPLC法测得含量进行近似折算比较，以及对根部提取物与茎叶提取物中各人参皂苷成分HPLC出峰比例的分析，建立鉴别不同来源人参皂苷的方法。

结果：人参根部提取物中，Re：Rb1：Rc：Rd皂苷比例近似为1：2.20：0.94：0.97；人参茎叶中，该比例近似为1：（0.05~0.07）：（0.10~0.16）：（0.32~0.37）；对比掺混后的人参根部和人参茎叶提取物，Re：Rb1：Rc：Rd
理论值在上述两比例之间。

结论：该方法简易、稳定、可靠，可作为人参根部和茎叶提取物中人参皂苷的鉴别方法。

【期刊名称】《世界科学技术-中医药现代化》
【年(卷),期】2014(000)004
【总页数】5页(P834-838)
【关键词】人参;不同部位;人参皂苷;UV/HPLC法
【作者】周卫松
【作者单位】宁波天宏生物科技有限公司宁波 315800
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
人参（Panax ginseng C.A.Mey.）主要分布在中国东北部的长白山区，为常用贵
重中药材。

研究表明人参皂苷是其主要活性物质，目前已有50余种人参皂苷类成分被报道。

人参皂苷属四环三萜类化合物，按其苷元部分的结构可分为3种类型，即原人参二醇型皂苷（Protopanaxadiol，PPD），如人参皂苷Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rc和 Rd；原人参三醇型皂苷（Protopanaxatriol，PPT），如人参皂苷Re、Rg1、Rf、Rg2和 Rh1等；齐墩果酸（Oleanolic acid），如人参皂苷
Ro[1]。

早期人参皂苷主要从人参根部提取，成本高，后期研究表明人参茎叶中含
有大量的人参皂苷，提取分离的原料成本相对低廉，故茎叶也作为人参皂苷的提取原料得到利用，但这两部位提取的人参皂苷在成分组成上有较大的不同。

本实验采用UV/ HPLC法，对目前市场流通的人参根部和人参茎叶提取物，进行含量关联
性检定分析，同时通过HPLC色谱成分特征峰高比例的分析，探索简便有效的方
法，以辨别人参根与人参茎叶提取物之间的差异，以期对人参提取物产品质量控制及市场定价提供参考借鉴依据。

岛津LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；岛津SPD-20A紫外检测器（日本岛津公司）；电子分析天平（Mettler-Toledo公司）；SK1200H型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；SY-5000型旋转蒸发仪、SHZ-Ⅲ型真空泵、SZ-97型自动纯水蒸馏器（上海亚荣仪器厂）；DHG-9070型数显恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；UV-1100紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）。

人参皂苷标准品（Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd，购于中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

五加科植物人参产地为吉林长白山地区，分别采其根部和茎叶部分，经过醇水提取分离，并大孔树脂纯化制成人参提取物，得人参根部和茎叶皂苷。

2.1 UV法测定
2.1.1 显色方法
皂苷与香草醛-冰醋酸-高氯酸或香草醛-乙醇-浓硫酸等组成的香草醛-强酸溶剂系统进行作用发生的明显显色反应，与标准对照溶液进行比较，测定样品中总皂苷的含量[2]。

2.1.2 对照品溶液制备
精密称取人参皂苷Re对照品适量，加甲醇溶解定容，制成1.0 mg·mL-1含人参皂苷Re溶液[3]。

2.1.3 供试品溶液
取供试品适量，精密称定，加甲醇溶解定容，称重，超声10 min，静置冷却，再次称重，用甲醇补充减失的重量，滤过，备用。

2.1.4 标准曲线绘制
精密吸取对照品溶液30、60、90、120、150、180 μL，分别置于具塞试管中，
水浴挥干，分别加入新鲜配制的5%香草醛-冰乙酸溶液0.2 mL，溶解，再加入
0.8 mL高氯酸，于60℃水浴上加热10 min，取出，冷却，精密加入冰乙酸10 mL，摇匀。

取0.5 mL置于试管，再加入10 mL冰乙酸稀释，摇匀，为待测液[4]。

以冰乙酸为空白溶液，于560 nm波长处测定吸光度，以人参皂苷Re浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得曲线方程Y=0.014 3X-0.004 1
（r=0.999 3），线性范围为10～70μg·mL-1。

2.1.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液60μL，共6份，按“2.1.1”项下显色法测定吸光度，RSD
为1.12%，表明仪器精密度良好。

2.1.6 稳定性试验
分别在 0、2、4、6、8 h取对照品溶液30 μL，按照“2.1.1”项下显色法测定吸光度，计算样品含量，RSD为1.65%～2.25%，表明样品在8 h内稳定。

2.1.7 重复性试验
精密吸取同一对照品溶液，重复进样6次，RSD为1.32%，表明方法的重复性良好。

2.1.8 样品含量测定
取人参根部提取物、人参茎叶提取物、人参根茎叶混合提取物，按上述方法操作，测定吸光度值。

2.2 HPLC法分析测定
2.2.1 色谱条件
色谱柱Shim-pack VP-ODS C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈（A）和0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱：0～30 min，19%A；30～35 min，19%～24%A；35～80 min，24%～40%A；柱温35℃；流速1.3 mL·min-1；
检测波长203 nm[4]。

2.2.2 对照品溶液制备
分别称取适量的人参皂苷对照品Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇制成人参皂苷标准溶液，备用。

2.2.3 供试品溶液制备
分别称取人参根皂苷和人参茎叶皂苷各0.2 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，
加甲醇超声使溶解并稀释至刻度，滤过，备用。

精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，按外标法计算样品的含量。

2.2.4 精密度试验
取供试品溶液，重复进样6次，按“2.2.1”项下条件进行测定，结果RSD为
1.36%，表明方法的精密度良好。

2.2.5 稳定性试验
取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10 h进样，按“2.2.1”项下条件进行测定，结果RSD为1.10%，表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.3 样品含量测定
取同一批次人参根部提取物、人参茎叶提取物、人参根茎叶混合提取物（根：茎叶=1：1和1：4），按上述方法操作，结果见图1～6。

测得皂苷百分比含量见表1。

3.1 UV/HPLC法测定结果比较
目前国内外市场对人参提取物中人参皂苷类成分含量的测定，通常采用UV和HPLC两种检查方法。

当前市场广为接受的商品化规格是人参茎叶提取物80%含
量（UV检查）和人参根提取物10%～40%含量（HPLC检查）。

实验结果表明，人参茎叶提取物80%规格含量（UV检查），如改用HPLC检查，人参皂苷类成
分含量大约在45%～46%范围。

同样，人参根提取物20%规格含量（HPLC检
查），如改用UV检查，人参皂苷类成分含量大约在25%左右。

根部提取物与茎
叶提取物混合部分的人参皂苷含量折算，与二者混合的比例有很大关联。

UV含量与HPLC含量之间存在一定的关联。

UV法仅以Re为标准品，计算所有皂苷的总
含量，其操作简单、快速，但除Re以外的其它皂苷成分，在特定波长下的吸光度与Re并不一致。

3.2 HPLC图谱鉴定人参根部提取物和人参茎叶提取物
本实验选取人参皂苷中Re：Rb1：Rc：Rd几个单体做特征峰，HPLC图谱定量其对应峰高的比例，从而实现对不同来源的人参茎叶和根部提取物进行鉴别的目的。

人参根部提取物中，Re：Rb1：Rc：Rd皂苷比例近似为1：2.20：0.94：0.97；人参茎叶中，该比例近似为 1：（0.05～0.07）：（0.10～0.16）：（0.32～
0.37），极容易辨别。

对比掺混后的人参根部和人参茎叶提取物，Re：Rb1：Rc：Rd理论值当在上述二比例之间，本试验选择的根茎叶混合物（根：茎叶=1：1和1：4），其比例在 1：（0.46～1.08）：（0.30～0.37）：0.47附近。

根据特征
峰比例之间的差异，可快速辨别人参提取物，为该产品质量控制评价及提取可靠依据。

【相关文献】
1 王玉堂.人参中人参皂苷的提取、分离和测定.长春：吉林大学博士学位论文，2008.
2 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范，2003：306～308.
3 曾庆荣，刘放，张振坤，等.从人参茎叶中提取人参皂甙的研究.化工时刊，2009,23(6)：26～28.
4 曹俊岭，李国辉，王艳梅，等.人参不同提取部位总皂苷的含量测定.世界中西医结合杂志，2011，6(12)：1035～1036.
5 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）.北京：中国医药科技出版社，2010：365～368.。