pcr-ngs原理

pcr-ngs原理
PCR-NGS (Polymerase Chain Reaction - Next Generation Sequencing) 是一种结合了PCR技术和高通量测序技术的方法，用于对DNA或RNA样本进行大规模测序。

PCR-NGS的主要步骤如下：
1. DNA扩增：首先，使用PCR技术对DNA样本进行扩增。

PCR使用DNA聚合酶，引物和dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸盐）来选择性地扩增目标DNA序列。

PCR的扩增过程包括反复进
行变性（DNA双链解开），引物结合和扩增（DNA合成）。

2. DNA片段准备：扩增得到的DNA片段会被切割成短片段，通常长度为200-600碱基对。

这些片段之后会被连接到DNA
片段适配器上。

3. DNA库构建：将连接上适配器的DNA片段进行纯化和富集，以去除未连接的适配器和剩余的引物。

4. 测序：准备好的DNA库会被加载到测序平台上，如
Illumina或Ion Torrent等。

在测序过程中，DNA片段会通过序列化反应产生荧光信号，这些信号会被靶向测序仪器检测和记录。

5. 数据分析：测序仪器获得的原始序列数据将通过生物信息学分析进行处理，包括序列拼接、去除低质量碱基、去除适配器序列以及比对到参考基因组等步骤。

最后，通过与参考序列比
对，识别和注释样本中的基因变异。

PCR-NGS技术组合了PCR的高特异性和高敏感性以及NGS 的高通量测序能力，可以广泛应用于基因组学、转录组学、表观遗传学等领域的研究和疾病诊断中。