西藏栽培天麻和野生天麻中天麻素和柠檬酸的含量测定

西藏栽培天麻和野生天麻中天麻素和柠檬酸的含量测定
李永莲;刘文锋;阳元娥;龚盛昭
【摘要】[目的]测定西藏的普通栽培天麻、有机肥栽培天麻与野生天麻中天麻素和柠檬酸的含量.[方法]采用RP-HPLC法.色谱柱Hypersil C18(4.6 mm×250 mm,5μm);柱温:25℃;检测波长分别为:220 nm和214 nm;流动相分别为:乙腈-0.05%磷酸溶液(3:97)和0.8%NH4H2PO4水溶液.对西藏的普通栽培天麻、有机肥栽培天麻与野生天麻中的天麻素和柠檬酸进行含量测定.[结果]不同栽培方式得到的天麻中天麻素含量分别为:0.12%,0.14%和0.24%;柠檬酸的含量分别
为:0.0234%,0.0298%和0.0266%:野生天麻中天麻素的平均回收率为
98.20%(n=6);柠檬酸的平均回收率为95.49%(n=5).[结论]不同的栽培方式对天麻中天麻素和柠檬酸的含量影响较大,其中野生天麻样品中天麻素含量最高,柠檬酸的含量仅次于普通栽培天麻.
【期刊名称】《顺德职业技术学院学报》
【年(卷),期】2016(014)003
【总页数】5页(P23-27)
【关键词】天麻;天麻素;柠檬酸;HPLC
【作者】李永莲;刘文锋;阳元娥;龚盛昭
【作者单位】广东轻工职业技术学院科研处,广东广州 510300;五邑大学化学与环境工程学院,广东江门 529020;广东轻工职业技术学院科研处,广东广州510300;广东轻工职业技术学院科研处,广东广州 510300
【正文语种】中文
【中图分类】R282.5
天麻（Gastrodia elata）为我国传统的名贵中药，主产于我国西藏、贵州、四川
及云南等地［1］，可用于治疗头痛、头晕、失眠、偏头疼、手足抽搐、小儿惊风、高血压和神经衰弱等等［2］。

天麻含有多种活性成分［3-4］，其中主要成分为
天麻素和柠檬酸［5］等。

天麻素具有滋肾补脑、提神益气、降低血管血压、抗自由基和保护细胞膜等药理作用；而柠檬酸具有抗氧化、抗癌、保肝、免疫调节、抑菌、抗病毒等药理作用，在药物治疗的过程中起着重要的作用［6］。

自20世纪70年代以来，野生天麻由于种植地域的局限性，不能满足日益增长的用药需求，
因此人工种植天麻逐渐扩大规模以满足市场的需求量。

然而，不同地域、不同栽培方式种植的天麻质量参差不齐，主要活性成分含量（如天麻素和柠檬酸）相差很大，所以评价野生天麻与不同栽培方式（普通栽培和有机肥栽培）的天麻品质，在药用价值与食用价值上均有着重要的意义。

目前天麻品质的评价主要集中于天麻素的含量和活性研究，而对天麻中柠檬酸的含量研究较少，因此本文通过HPLC法测定
和比较西藏地区普通栽培、有机肥栽培天麻与野生天麻的天麻素和柠檬酸含量，对不同栽培方式得到的天麻与野生天麻进行研究，为天麻品质的鉴定提供可靠的测试方法和理论依据。

1.1 药材
天麻样品：1号天麻（普通栽培），2号天麻（有机肥栽培），3号天麻（野生），均采自西藏，以上药材烘干，磨碎成粉，过筛，保存备用。

天麻素标准品（批号：080729903），购自中国药品生物制品检定所。

1.2 仪器
电热恒温水温箱（上海悦丰仪器仪表有限公司，型号：HH.W21-420S），
KH2200B型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司），高效液相色谱仪（UV230+紫外-可见检测器，P230高压恒流泵）（广州广一科学仪器有限公司），EC2000色谱数据处理工作站（大连依利特分析仪器有限公司，型号：
D3204S00）。

1.3 试剂
乙腈和甲醇（广州试剂厂）为色谱纯溶剂，水为自制二次蒸馏水，其它试剂均为分析纯溶剂。

2.1 样品制备
1）天麻素样品的制备。

准确称取恒重的天麻样品约0.100 0 g，加入50%乙醇
6.0 mL，称重。

调节水浴温度为70℃，加热回流提取3 h，冷却后再称重。

减失
的重量用50%乙醇补足，滤过，将滤液浓缩至近干，得残渣，用流动相溶解，转
移至10 mL容量瓶中，并用流动相稀释至刻度线，摇匀。

使用直径为0.45 μm微孔滤膜过滤溶液2次，目的是为了滤去溶液中的不溶性残渣，然后将过滤所得的
滤液经超声脱气后以备后续使用，即得待测天麻素样品。

2）柠檬酸样品的制备。

称取恒重的天麻粉末样品约0.100 0 g，置于25 mL圆底烧瓶中，准确加入甲醇25 mL，称重。

于70℃水浴加热回流提取3次，每次1 h，冷却后再称重，减失的重量用甲醇补足，摇匀，过滤，取滤液，浓缩至近干，用流动相溶解残渣，待溶解后将其转移至10 mL容量瓶中，并用流动相稀释至刻度线，摇匀。

使用直径为0.45 μm微孔滤膜过滤溶液2次，目的是为了滤去溶液中的不
溶性残渣，然后将过滤所得的滤液经超声脱气后以备后续使用，即得待测柠檬酸样品。

2.2 标准品制备
1）天麻素标准品的制备。

准确称取不同量的天麻素标准品，置于10 mL容量瓶中，加入流动相溶解并定容至刻度，摇匀，分别配制成浓度为25、50、75、100、
125 mg/mL天麻素标准液。

2）柠檬酸标准品的制备。

称取不同量的柠檬酸，置于10 mL容量瓶中，加入流动相溶解并定容至刻度，摇匀，分别配制浓度为0、2.0、5.0、7.0、10.0 g/L柠檬酸标准溶液。

2.3 色谱条件
1）天麻素含量测定的色谱条件［7］。

色谱柱：Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5μm），柱温：25℃；检测波长：220 nm；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97），流速：1 mL/min；进样量：10 μL。

2）柠檬酸含量测定的色谱条件［8］。

色谱柱：Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5μm），检测波长：214 nm；柱温：25℃；流动相：0.8%NH4H2PO4水溶液，流速：0.6 mL/min；进样量：10 μL。

3.1 标准曲线的绘制
分别准确吸取10 μL天麻素标准液和柠檬酸标准液注入，按上述色谱条件测定峰面积。

分别以天麻素进样量和柠檬酸进样量为X坐标，峰面积值为Y坐标，绘制标准曲线，如图1（天麻素标准品色谱图）和图2（柠檬酸标准品色谱图）所示。

天麻素标准品的回归方程为：Y=1 816.6X-18.533，R=0.999 1，结果表明天麻素在0.20～0.80 μg范围内峰面积Y与进样量X呈良好的线性关系；而柠檬酸的回归方程为：Y=678.35X+13.007，R=0.999，同样表明在2.0～10.0 g/L范围内峰面积Y与浓度X的线性关系良好。

3.2 样品的含量测定
分别精确称取天麻样品1、2和3，按照前述步骤处理、制备并进行色谱分析，每个样品进样量为10 μL，按上述色谱条件测定峰面积，见表1和表2，根据标准曲线分别计算样品中天麻素和柠檬酸的含量。

结果表明：1）3个天麻样品中，只有西藏野生天麻的天麻素含量高于0.20%，符合中国药典对天麻药材中对于天麻素
含量的规定（≥0.20%）［9］。

2）有机肥栽培的天麻中柠檬酸的含量最高，野生天麻中柠檬酸的含量次之，而普通方法栽培的天麻中柠檬酸的含量最低。

由此可进一步得出结论：柠檬酸的含量与天麻的种植条件密切相关。

3.3 HPLC方法考察
1）精密度实验。

准确吸取标准液10 μL，进样若干次（n=6或5），测得天麻素峰面积的RSD为0.75%，柠檬酸峰面积的RSD为1.31%，实验表明该方法精密度较好。

2）稳定性实验。

准确吸取同一天麻样品溶液10 μL，每隔4 h进样1次，进样若干次（n=6或5），测得天麻素峰面积的相对标准偏差RSD为0.59%，柠檬酸峰面积的相对标准偏差RSD为0.73%，结果表明样品在24 h内稳定。

3）重现性实验。

取同一批天麻样品，平行制作，测得天麻素含量的RSD为1.66%～2.06%，柠檬
酸含量的RSD为 1.31%～2.11%，测试结果表明此方法对测定天麻素和柠檬酸含量的重复性较好。

4）加样回收率试验。

在平行的若干份（n=6或5）天麻样品1中，加入一定量的对照品，制成待测样品，测定天麻素和柠檬酸的含量，其中测得天麻素的平均回收率为98.20%（表3）；而柠檬酸的平均回收率为95.49%（表4）。

这些结果显示本实验的回收率
良好。

从采用HPLC对西藏普通栽培天麻、有机肥栽培天麻与野生天麻中的天麻素检测
结果来看，三者有明显的差异，可有效地加以区分。

从普通栽培天麻、有机肥栽培天麻与野生天麻中的柠檬酸的检测结果看，差异较小，但是可有效地区分。

结果表明，野生天麻中天麻素含量最高，柠檬酸的含量仅次于普通栽培天麻。

综合上述结
果可知野生天麻的品质最高，比普通栽培以及有机肥栽培的天麻更具药用价值和食用价值。

本方法分辨力强，精密度、稳定性、重现性以及回收率良好，因此通过HPLC对天麻中的天麻素和柠檬酸的含量进行测定是科学可行的方法。

【相关文献】
［1］刘小琴，汪鋆植，袁琴，等.天麻不同品种及不同组织中天麻素的含量比较［J］.时珍国医国药，2009，20（4）：908-909.
［2］国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草：第8卷［M］.上海：上海科学技术出版社，1999:716.
［3］周俊，杨雁宾，杨崇仁.天麻的化学研究Ⅰ：天麻化学成分的分离和鉴定［J］.化学学报，1979，37（3）: 183-189.
［4］王亚男，林生，陈明华，等.天麻水提取物的化学成分研究［J］.中国中药杂志，2012，37（12）：1775-1781.
［5］岑信钊.天麻的化学成分与药理作用研究进展［J］.中药材，2005，28（10）：958-962. ［6］汤喜兰，刘建勋，李磊.中药有机酸类成分的药理作用及在心血管疾病的应用［J］.中国实验
方剂学杂志，2012，18（5）：243-246.
［7］程芬，张焜，赵肃清，等.波密栽培天麻与野生天麻中三种有效成分的含量测定［J］.中药材，2009，32（7）：1028-1030.
［8］唐慧慧，蔡清宇，毛翼.HPLC法测定净乌梅及乌梅炭中柠檬酸和苹果酸的含量［J］.中药材，2007，30（1）：52-54.
［9］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中药医药科技出版社，2010.。