丁苯酞对血管性痴呆大鼠脑组织BDNF表达的影响

和嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）生长分化以及包括ＩｇＥ在内的免疫球蛋白生成。

其中ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４分别是Ｔｈ１和Ｔｈ２细胞的特征性细胞因子，Ｔｈ１和Ｔｈ２细胞因子可促进本亚群和抑制另一亚群的生长分化。

哮喘患者体内ＩＬ－４过度产生，ＩＦＮ－γ产生不足，使ＩＦＮ－γ／ＩＬ－４失衡，是哮喘发病的关键因素之一。

ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４在体内对哮喘的发病发挥调节作用。

本试验结果表明，定喘止哮颗粒可以使ＩＮＦ－γ水平明显升高，ＩＬ－４、ＩＬ－５水平明显降低。

定喘止哮颗粒可能通过调节Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞之间功能平衡，减轻ＥＯＳ对气道的浸润，降低气道炎症，从而达到治疗哮喘的作用。

４　参考文献
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ｒｅｇｕｌａｔｅａｌｌｅｒｇｉｃａｉｒｗａｙｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｍｕｃｕｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ〔Ｊ〕．ＪＥｘｐＭｅｄ，１９９９；１９０（９）：１３０９－１８畅
〔２０１２－０６－１３收稿　２０１２－１０－１０修回〕
（编辑　袁左鸣）
丁苯酞对血管性痴呆大鼠脑组织ＢＤＮＦ表达的影响
赵　俊　李　昕１
　孙玉华　（河南大学淮河医院神经内科，河南　开封　４７５０００）
〔摘　要〕　目的　研究血管性痴呆（ＶＤ）模型大鼠脑内源性神经营养因子的表达及丁苯酞对其的影响。

方法　１４～１５月龄的健康ＳＤ大鼠６０只，根据Ｏｌｓｓｏｎ方法结扎双侧颈总动脉。

假手术组分离但不结扎颈总动脉。

将造模成功的ＶＤ大鼠随机分为模型组（ＭＤＧ）、丁苯酞组（ＤＢＴ）、假手术组（ＳＯＧ），每组２０只。

ＤＢＴ组造模后第６１天开始治疗，每天灌服丁苯酞１２ｍｇ／１００ｇ；ＭＤＧ和ＳＯＧ以等量消毒花生油灌胃；各组均给药１次／ｄ，连续给药３０ｄ后取各组大鼠脑组织，制电镜标本及免疫组织化学染色。

结果　电镜下假手术组未见明显病理变化；模型组可见神经细胞高度水肿，海马ＣＡ１区细胞数减少，胞间距离增大；ＤＢＴ组皮质偶见小的软化灶，细胞数和形态接近正常对照组；与ＳＯＧ组相比，ＭＤＧ组与ＤＢＴ组大鼠脑中ＢＤＮＦ的含量差异有统计学意义（Ｐ＜０畅０５）。

结论　丁苯酞可明显改善ＶＤ大鼠的认知功能，显著上调脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）的表达，减轻脑缺血后脑组织的病理变化，具有确切的神经保护作用。

〔关键词〕　丁苯酞；血管性痴呆（ＶＤ）；脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）
〔中图分类号〕　Ｒ７４３ 〔文献标识码〕　Ａ 〔文章编号〕　１００５－９２０２（２０１４）１２－３３９５－０２；ｄｏｉ：１０畅３９６９／ｊ畅ｉｓｓｎ畅１００５－９２０２畅２０１４畅１２畅０８５
１　郑州大学第二附属医院神经内科
通讯作者：孙玉华（１９７１－），女，副主任医师，主要从事神经毒理学研究。

第一作者：赵　俊（１９７９－），女，主治医师，主要从事神经康复及神经毒
理学研究。

近年来，随着我国老龄化趋势的加重，老年痴呆的患者数量呈逐年增加的趋势。

而血管性痴呆（ＶＤ）主要由脑血管性病变引起，导致患者认知、学习和记忆障碍。

研究表明，早期干预及合理治疗，能够延缓病情的发展。

本实验旨在观察丁苯酞作用于ＶＤ大鼠后脑内源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）变化的影响，探讨丁苯酞对ＶＤ的作用机制。

１　材料和方法
１畅１　实验动物及主要试剂　１４～１５月龄的健康ＳＤ大鼠６０只，体重５５０～６５０ｇ。

由河南省郑州大学实验动物中心提供。

丁苯酞：批号：０５０１０６；兔抗鼠ＢＤＮＦ多克隆抗体、ＳＰ免疫组化试剂盒、ＢＤＮＦＥＬＩＳＡ检测试剂盒购自博士德公司，ＮＡＢ显色试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。

１畅２　动物模型、动物分组与给药
１畅２畅１　动物模型的建立：根据Ｏｌｓｓｏｎ方法〔１〕
结扎双侧颈总
动脉。

假手术组分离但不结扎颈总动脉。

１畅２畅２　动物分组与给药方法　将造模成功的ＶＤ大鼠随机分为模型组（ＭＤＧ）、丁苯酞组（ＤＢＴ）、假手术组（ＳＯＧ），每组２０只。

ＤＢＴ组造模后第６１天开始治疗，每灌服丁苯酞１２ｍｇ／１００ｇ；ＭＤＧ和ＳＯＧ以等量消毒花生油灌胃；各组均给药１次／ｄ，连续给药３０ｄ。

１畅３　痴呆标准　以ＳＯＧ组大鼠逃避潜伏期的平均值作为参考，计算结扎大鼠逃避潜伏期的平均值与参考值之差占该鼠逃避潜伏期的比值，若该值＞２０％为痴呆鼠。

１畅４　认知功能测试及病理学检测
１畅４畅１　大鼠认知能力测试　采用Ｙ型电迷宫法于模型制作６０ｄ后再三等分Ｙ型电迷宫内进行大鼠学习能力测试。

先将大鼠放入迷宫内适应５ｍｉｎ，使其对三臂均探索进入，然后从起步区臂出发，开始以随机次序变换测试。

设定电压４０Ｖ，延迟时间５ｓ。

电击后大鼠直接逃避至安全区为正确反应，否则为错误反应。

每测１次休息３０ｓ，测１０次休息５ｍｉｎ。

大鼠学习成绩以连续１０次测试中有９次（９／１０）正确反应时所需的电击次数（尝试次数）表示。

每次测试均在安静和光线稍暗的条件下进行。

６ｈ后进行记忆能力测试，对于上述达到９／１０
・
５９３３・赵　俊等　丁苯酞对血管性痴呆大鼠脑组织ＢＤＮＦ表达的影响　第１２期
标准的大鼠再次测试１０次，记录其中正确反应的次数。

１畅４畅２　电镜标本的制备　大鼠断头处死后，参照大鼠脑图谱，迅速切取右侧海马区组织块，迅速放入预冷４ｅ的４％的戊二醛中固定，常规脱水、Ｅｐｏｎ８１２环氧树脂包埋，ＬＫＢ超薄切片，醋酸双氧铀和柠檬酸铅双重染色，日立Ｈ－７５００型透射电镜观察。

１畅４畅３　免疫组化染色　采用ＳＰ法及定量分析计数方法。

在海马ＣＡ１区，分别选择３个相邻视野，在４００倍光镜下随机查１００个神经元计数阳性细胞数，结果取３个视野的平均值。

１畅５　ＢＤＮＦ含量测定　９０ｄ后快速处死动物后，取左侧大脑半球，匀浆，离心后取上清，采用ＢＤＮＦ的ＥＬＩＳＡ试剂盒，按说明书逐步操作，最后在酶标仪４５０ｎｍ处读出Ａ值，依照标准含量与Ａ值建立一元回归方程以及标准曲线，取在标准曲线范围内的测量值作方差分析。

１畅６　统计学处理　计量资料以ｘ±ｓ表示，使用ＳＰＳＳ１１畅０软件进行单因素方差分析和最小显著差异（ＬＳＤ）ｔ检验。

２　结　果
２畅１　病理学电镜结果　ＳＯＧ组未见明显病理变化；ＭＤＧ可见神经细胞高度水肿，皮质下和海马区有结构较松散的软化灶，胞体缩小，胞核固缩，胞浆致密，海马ＣＡ１区细胞数减少，胞间距离增大；ＤＢＴ组皮质偶见小的软化灶，细胞数和形态接近正常对照组。

见图１。

２畅２　各组大鼠学习记忆能力测试　见表１。

２畅３　各组海马内ＢＤＮＦ免疫反应阳性细胞数　ＭＤＧ组、ＤＢＴ组免疫反应阳性细胞数（７７畅８７５±２畅０３１，９２畅７５０±４畅７１３）显著高于ＳＯＧ组（６４畅２５０±３畅７７２）（Ｐ＜０畅０５）。

２畅４　各组动物大脑内ＢＤＮＦ的含量　ＭＤＧ组、ＤＢＴ组大鼠脑中ＢＤＮＦ含量〔（２８畅６９±２畅４８４）ｎｇ／ｇ，（３７畅１７４±３畅８７８）ｎｇ／ｇ〕显著高于ＳＯＧ组〔（１８畅８７５±３畅９０３）ｎｇ／ｇ〕（Ｐ＜０畅
０５）。

ＭＤＧ组
ＤＢＴ组ＳＯＧ组
图１　各组病理学电镜观察
表１　各组大鼠学习和记忆成绩（ｘ±ｓ）
组别尝试次数１０次正确数ＳＯＧ组
４４畅１±２畅２
８畅７５±１畅０６
ＭＤＧ组７９畅９±２畅１１）５畅１２±１畅１３１）ＤＢＴ组５５畅７±２畅６１）２）
７畅５１±１畅０７１）２）　与假手术组比较：１）Ｐ＜０畅０５，与ＭＤＧ组比较：２）Ｐ＜０畅０５
３　讨　论
随着我国老龄化趋势的加重，ＶＤ的发病率也逐年提高；缺血性损害已成为公认的造成ＶＤ的主要病因。

丁苯酞作为一种线粒体保护剂，其左旋体存在于芹菜籽中〔２〕。

其主要作用是
维护线粒体的结构和功能，从而达到改善缺血区微循环的目
的
〔３，４〕。

有动物实验表明
〔５〕
，在缺血性脑卒中治疗中丁苯酞具
有很好的作用。

近年来，一类种类较多的特殊蛋白质分子———神经营养因子，引起了学者的关注。

而ＢＤＮＦ作为其中的一种，对脑缺血有保护作用。

本实验结果发现丁苯酞能够明显提高缺血后大鼠的记忆和学习能力，并逐步改善认知功能。

作为大脑边缘系统重要组成部分的海马在学习和记忆等一系列高级神经活动中起着关键的作用，因此海马结构的损害可能是引发ＶＤ的重点之一。

本实验也表明丁苯酞确实能减少海马神经元在缺血状态下的坏死程度，从而减轻脑组织不可逆的损害，与近年来国内外专家的研究结果相一致
〔６〕。

神经营养因子是一类特异性的蛋白质。

ＢＤＮＦ是重要的神经营养因子家族成员，随着进一步的研究，人们发现ＢＤＮＦ具有明确的促进神经细胞生长、分化和存活作用；有研究表明
〔７〕
，
外源性ＢＤＮＦ的注入，可造成脑梗死体积缩小，同侧大脑新皮质神经元细胞核中广泛分布ＢＤＮＦ样免疫反应产物，说明ＢＤ－ＮＦ可以对抗缺血性脑病。

综上，丁苯酞通过内源性ＢＤＮＦ的表达实现对神经元的保护作用，但是关于丁苯酞如何启动了内源性ＢＤＮＦ表达，机制尚不十分清楚，有待今后进一步研究阐明。

４　参考文献
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〔２０１３－０１－１０收稿　２０１３－０２－１３修回〕
（编辑　徐　杰）
・６９３３・中国老年学杂志２０１４年６月第３４卷。