基于核转录因子-κB信号通路探讨铁包金巴布膏治疗腰椎间盘突出症的作用机制

环球中医药2023年6月第16卷第6期　Global Traditional Chinese Medicine,June 2023,Vol.16,No.6
1091
　㊃基础研究㊃
基金项目:湖南省卫生健康委科研计划(202204074273);湖南创新型省份建设专项(2022JJ60076);长沙市科技计划(KH2201063);国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作室建设项目(国中医药人教发[2016]42号);湖南中医药大学研究生科研创新项目(2022CX191)
作者单位:410208　长沙,湖南中医药大学中医药研究院[安娟(硕士研究生)㊁李振宇(硕士研究生)㊁常裕绅(硕士研究生)㊁张子鸣(硕士研究生)㊁叶子丰(硕士研究生)㊁匡浩铭(硕士研究生)];湖南省中医药研究院中医临
床研究所(匡建军);湖南省中医药研究院附属医院骨伤科(戎宽)作者简介:安娟(1997-),2020级在读硕士研究生㊂研究方向:中医药防治骨关节病㊂E⁃mail:2368975897@
通信作者:戎宽(1986-),硕士,助理研究员㊂研究方向:中医药防治骨关节病㊂E⁃mail:87048174@
基于核转录因子⁃κB 信号通路探讨铁包金巴布膏治疗腰椎间盘突出症的作用机制
安娟　李振宇　常裕绅　张子鸣　叶子丰　匡浩铭　匡建军　戎宽
【摘要】　目的　基于核转录因子⁃κB(nuclear factor κB,NF⁃κB)信号通路探讨铁包金巴布膏治疗腰椎间盘突出症的作用机制㊂方法　SPF 级3月龄雄性大鼠40只中随机取10只设为正常组,其余的大鼠用自体髓核移植法建立腰椎间盘突出症(lumber disc herniation,LDH)大鼠模型,造模成功后随机分为模型组㊁铁包金巴布膏组㊁阳性药物组,每组10只㊂正常组及模型组以适量生理盐水涂抹L5椎旁,每日1次,连续30天㊂铁包金巴布膏组贴敷1.54cm×2.09cm 铁包金巴布膏,每日1次,连续30天㊂阳性药物组以扶他林软膏外涂,每日1次,连续30天㊂给药30天后,禁食12小时,麻醉大鼠,腹主动脉采血,并暴露右侧L5神经根,冷冻台上取受压神经根后处死大鼠㊂检测大鼠的神经功能评分;苏木精-伊红(hematoxylin ⁃eosin,HE)染色法观察大鼠背根神经节组织形态学变化;酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测量大鼠血清白细胞介素⁃1β
(interleukin⁃1β,IL⁃1β)㊁肿瘤坏死因子⁃α(tumour necrosis factor⁃α,TNF⁃α)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(real⁃time quantitative PCR,qRT⁃PCR)检测髓样细胞分化因子88(myeloid differentiation
factor88,MyD88)㊁NF⁃κB p65的mRNA 表达水平㊂结果　(1)神经功能评分结果显示,与模型组相比,在干预第10天㊁20天和30天,铁包金巴布膏组㊁阳性药物组的评分均下降(P <0.05);(2)HE 染
色结果显示,与模型组相比,铁包金巴布膏组㊁阳性药物组大鼠背根神经节的结构形态较规则,细胞核较均匀,胞浆空泡状数量较少,尼氏小体排列均匀;(3)ELISA 检测结果显示,与正常组相比,模型组的大鼠血清中炎性因子IL⁃1β㊁TNF⁃α含量水平显著升高(P <0.05),与模型组相比,铁包金巴布膏组㊁阳性药物组的IL⁃1β㊁TNF⁃α含量水平显著降低(P <0.05);(4)qRT⁃PCR 结果显示,与正常组相比,模型组㊁铁包金巴布膏组㊁阳性药物组NF⁃κB p65及MyD88mRNA 的表达水平均升高
(P <0.05);与模型组相比,铁包金巴布膏组和阳性药物组NF⁃κB p65及MyD88mRNA 的表达水平均降低(P <0.05)㊂结论　铁包金巴布膏可能通过抑制NF⁃κB 信号通路,下调p65㊁MyD88的mRNA
表达,减少炎症因子IL⁃1β㊁TNF⁃α的释放,起到消炎镇痛缓解LDH 症状的作用㊂
【关键词】　腰椎间盘突出症;　铁包金巴布膏;　核转录因子⁃κB;　炎症因子;　髓样分化因子88
【中图分类号】　R285.5　【文献标识码】　A　doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2023.06.005To study the intervention mechanism of Tiebaojin Cataplasm based on NF⁃κB signaling pathway AN Juan ,LI Zhenyu ,CHANG Yushen ,ZHANG Ziming ,YE Zifeng ,KUANG Haoming ,KUANG Jianjun ,RONG Kuan
Hunan University of Chinese Medicine ,Changsha 410208,China
1092　环球中医药2023年6月第16卷第6期　Global Traditional Chinese Medicine,June2023,Vol.16,No.6 Corresponding author:RONG Kuan,E⁃mail:87048174@
【Abstract】　Objective　Explore the mechanism of Tiebaojin cataplasm in the treatment of lumbar
disc herniation based on the signal pathway of nuclear factorκB(NF⁃κB).Methods　Ten of40SPF3⁃
month⁃old male rats were randomly selected as the normal group.The other were used to establish the LDH
rat model by Autologous nucleus pulposus transplantation.After successful modeling,the rats were
randomly divided into model group,Tiebaojin cataplasm group,positive drug group,10rats in each group.
The normal group and the model group were smeared L5paravertebral with normal saline,once a day for30
days.The rats in the Tiebaojin cataplasm group were treated with1.54cm×2.09cm plaster,once a day for
30days.The positive drug group was treated with voltaren ointment,once a day for30days.After30
days,fasting for12hours,anesthetized rats,abdominal aorta blood collection.The right L5nerve root was exposed,and the compressed nerve root was harvested from the cryopreserved platform and the rats were
killed.The nerve function score of rats were determined.The histomorphological changes of dorsal root
ganglion(DRG)were detected by hematoxylin eosin(HE)staining.The levels of interleukin⁃1β(IL⁃1β)
and tumor necrosis factor⁃α(TNF⁃α)were detected by enzyme⁃linked immunosorbent assay(ELISA).The
mRNA levels of MYD88and NF⁃κB p65were detected by real⁃time quantitative polymerase chain reaction
(real⁃time PCR).Results　(1)The results of nerve function score showed that compared with the model
group,the scores of the Tiebaojin cataplasm group and the positive drug group were decreased at the10th,
20th and30th day after intervention(P<0.05).(2)According to HE staining,compared with model
group,the edge and nucleolus of nucleus were clearer in the Tiebaojin cataplasm group and the positive
drug group.Nissl bodies in cytoplasm were arranged more evenly,and vacuoles in cytoplasm were reduced
in the Tiebaojin cataplasm group and the positive drug group,and the positive drug group showed more significant improvement.(3)As revealed by ELISA results,compared with the normal group,the model
group showed serum levels of IL⁃1β㊁TNF⁃α(P<0.05)were pared with the model group,all
the groups with drug intervention showed that the levels of IL⁃1βand TNF⁃α(P<0.05)were decreased.
(4)Realtime PCR results showed that compared with the normal group,the model group showed that
mRNA of MYD88and NF⁃κB p65(P<0.05)were pared with the model group,all the
groups with drug intervention showed mRNA of MYD88and NF⁃κB p65(P<0.05)were decreased.
Conclusion　Tiebaojin cataplasm may inhibit NF⁃κB signal pathway,down⁃regulate the expression of p65
and myd88mRNA,and down⁃regulate the release of inflammatory factors IL⁃1βand TNF⁃α,then play the
role of anti⁃inflammatory analgesic relief LDH symptoms.
【Key words】　Lumbar disc herniation;　Tiebaojin cataplasm;　NF⁃κB;　Inflammatory factor;
　MyD88
腰椎间盘突出症(lumber disc herniation,LDH)是指由于椎间盘组织在外力或退行性病变的作用下,纤维环破裂,髓核向外突出,导致单侧或双侧坐骨神经受压或受刺激而引起的腰背痛㊁下肢放射性疼痛㊁麻木等为主要症状的一种疾病[1]㊂相关研究发现[2],疼痛是由于髓核突出诱导自身免疫介导所产生的炎症反应而引发的㊂大部分患者的腰部疼痛呈自限性,所以临床上多以保守治疗作为本病的首选方法[3]㊂中医学外治法具有操作方便㊁毒副作用小㊁疗效确切等优点,患者易于接受[4]㊂‘理瀹骈文“指出: 外治之理,即内治之理;外治之药,即内治之药㊂”药膏外贴属于体表给药,经皮肤吸收后,能让药效直至病所㊂铁包金巴布膏为湖南省中医药研究院匡建军教授经过长期临床实践而得出的
经验膏方,在临床上能有效缓解腰椎间盘突出症患
者的症状[5],前期也有实验[6]表明此中药药膏有确切的抑制炎症的作用,但其对LDH的作用机制尚未
研究㊂故本研究采用自体髓核移植法制备大鼠LDH模型,探讨铁包金巴布膏的治疗作用机制㊂
1　材料与方法
1.1　实验动物及实验环境
SPF级3月龄雄性SD大鼠40只,体质量200~ 250g,购自湖南中医药大学实验动物中心,合格证号:SYXK(湘)2019⁃0009㊂所有大鼠均饲养于湖南中医药大学动物房大鼠实验室,室温23~25℃,湿度
环球中医药2023年6月第16卷第6期　Global Traditional Chinese Medicine,June2023,Vol.16,No.61093
50%~60%,12小时交替明暗周期,标准饲养㊂本实验通过湖南中医药大学动物实验伦理委员会批准㊂1.2　实验药物
铁包金巴布膏由湖南省中医药研究院制剂室制备,组成:铁包金10g㊁生川乌6g㊁生草乌6g㊁肉桂8g㊁木瓜4g㊁三棱4g㊁莪术4g㊁木鳖子4g㊁木通4g㊁当归4g㊁白蔹4g㊁赤芍4g㊁透骨草4g㊁血竭2g㊂将本处方药物浓缩后水提,在水域恒温中加热搅拌均匀,再涂至无纺布上,盖衬㊂规格7cm×9.5 cm每片,每10g药膜中含2g生药材㊂
双氯芬酸二乙胺乳胶剂(扶他林软膏)(北京诺华制药有限公司,批号:VP2727,规格20g/支)㊂1.3　主要实验试剂与仪器
苏木素㊁伊红(珠海贝索细胞科学技术有限公司,货号分别为BA4097㊁BA4098);大鼠肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor⁃α,TNF⁃α)㊁大鼠白细胞介素1β(interleukin⁃1β,IL⁃1β)试剂盒(睿信生物科技有限公司,货号分别为RX302058R㊁RX302869R);超纯总RNA提取试剂盒㊁mRNA逆转录试剂盒(上海近岸生物科技有限公司,货号分别为E096⁃01A㊁E047⁃01B)㊂PW⁃812型全自动酶标洗板机㊁MB⁃530型多功能酶标分析仪(深圳市汇松科技发展有限公司),GL⁃88B型旋涡混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司),5810R型台式高速离心机(Eppendorf艾本德公司),HS50型病理切片扫描仪,CFX96型Real⁃Time PCR检测仪(美国BIO⁃RAD伯乐公司)㊂
1.4　实验方法
所有大鼠适应性喂养7天后,采用随机数字表法从40只大鼠中抽取10只作为正常组㊂剩余30只建立LDH大鼠模型:参照Cho HK等[7]自体髓核移植法建立动物模型,术后切口处理:手术部位涂抹少量红霉素,避免术后伤口愈合过程中瘙痒大鼠自行撕咬;伤口清洁敷料包扎后用网套固定,避免大鼠过度活动导致伤口暴露感染㊂术后3天内所有大鼠均左侧臀部肌肉注射青霉素,400000IU/kg,1次/日,以预防感染㊂正常组不做处理㊂术后观察大鼠情况,若存在右下肢肿胀,行走时无力代偿性拖动或出现跛行即表明造模成功㊂造模成功后第3天,采用随机数字表法将其分为模型组㊁铁包金巴布膏组㊁阳性药物组3组,每组10只,进行给药㊂按照体表面积比换算出铁包金巴布膏的大小为1.54 cm×2.09cm[8],外贴L5椎旁,每日上午1次,6小时后蘸生理盐水擦净;阳性药物组以扶他林软膏外涂L5椎旁,每日上午1次,6小时后蘸生理盐水擦净;正常组及模型组均以生理盐水涂抹,每日上午1次,共给药30天㊂
1.5　神经功能测定
神经功能评分依照Siegal的方法[9],分别观察大鼠干预前㊁干预第10天㊁干预第20天㊁干预第30天右侧后肢的神经功能情况㊂该功能评分共有6级:0级,运动正常,记2分;1级,甩尾无力,记4分; 2级,后肢无力,行走有轻度困难,记6分;3级,后肢无力,行走时存在明显不稳定性,记8分;4级,站立不稳,但后肢可移动,记10分;5级,瘫痪,后肢无自主移动,记12分㊂
1.6　取材
各组大鼠给药干预30天后,禁食1小时,麻醉大鼠,腹主动脉采集血液,每只采取6mL左右,并暴露右侧L5神经根,冷冻台上取受压神经根后处死大鼠㊂所取血液常温静置45分钟后,4℃, 3000r/min离心15分钟取上清,通过液氮转移到-80℃冰箱保存用于酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)㊂再取L5神经根组织,分为2份,一份存放在冻存管中,-80℃冰箱保存用于实时荧光定量PCR(real⁃time quantitative PCR,qRT⁃PCR)检测,另外一份用多聚甲醛固定用于苏木精⁃伊红(hematoxylin⁃eosin, HE)染色检测㊂
1.7　指标检测
1.7.1　HE染色观察神经根的形态学　先将取下的L5神经根组织放入4%多聚甲醛中固定2天后脱钙,再进行石蜡包埋,切片(5μm),脱蜡后HE染色㊂每张切片均按要求严格进行,最后中性树胶封片,常温晾干后在显微镜下观察大鼠L5神经根形态的变化㊂
1.7.2　ELISA检测血清炎症因子IL⁃1β及TNF⁃α含量　取待测血清,冰上解冻,按照说明书进行操作,不同浓度标准品和血清样品各加50μL,设空白孔及待测样品孔,将板放置37℃温箱孵育后,加底物A㊁底物B各50μL,显色后再加终止液50μL,终止反应,在酶标仪中读取并记录OD值㊂
1.7.3　qRT⁃PCR检测髓样细胞分化因子88 (myeloid differentiation factor88,MyD88)㊁核转录因子⁃κB(nuclear factorκB,NF⁃κB)P65的mRNA表达水平　将冻存的大鼠神经根组织快速剪断后转移
1094
　环球中医药2023年6月第16卷第6期　Global Traditional Chinese Medicine,June 2023,Vol.16,No.6
到一个干净的1.5mL 离心管中,加入500μL Buffer
TL,用研磨棒研磨,再加500μL Buffer TL㊁200μL
lBuffer EX 及70%无水乙醇等混匀搅拌,取混合液
600μL 加入至核酸纯化柱中,反复离心后,弃纯化柱,留洗脱的RNA㊂提取总RNA 后,将纯化的RNA 逆转录成cDNA,均按说明书的步骤进行㊂最后在
荧光定量器中设置反应时间:95℃1分钟,95℃20秒,60℃20秒,72℃30秒㊂查看溶解曲线图,统计Ct 值,采用2-△△Ct 计算法计算各组基因的相对表达量㊂以β⁃actin 为内参引物,所有引物均在上海生工生物股份有限公司合成,详见表1㊂
1.8　统计学方法
实验所得数据为计量资料,使用SPSS 25.0软件进行处理㊂各组大鼠干预前后的神经功能评分比较采用重复测量方差分析,满足正态性㊁方差齐性后进行多重比较;各组大鼠IL⁃1β㊁TNF⁃α含量数据及NF⁃κBp65㊁MyD88mRNA 表达数据均满足正态分布及方差齐,采用单因素方差分析,用LSD⁃t 进行两两比较,以均数±标准差(x ±s )表示,P <0.05表示差异有统计学意义㊂2　结果
2.1　各组大鼠神经功能评分比较
干预前,与模型组比较,铁包金巴布膏组㊁阳性药物组神经功能评分无统计学差异(P >0.05)㊂在干预第10㊁20和30天,铁包金巴布膏组㊁阳性药物组神经功能评分较模型组下降(P <0.05)㊂铁包金巴布膏组㊁阳性药物组在治疗第10㊁20和30天的神经功能评分均较干预前下降(P <0.05)㊂提示干预前大鼠LDH 模型神经功能评分升高,经铁包金巴布膏干预后,神经功能评分下降㊂见表2㊂
2.2　各组大鼠神经根形态观察HE 染色结果显示,正常组大鼠神经根结构形
态规则,细胞核均匀,核仁清晰,胞浆内的尼氏小体均匀排列;模型组结构形状不规则,细胞肿胀,细胞浆内存在较多的空泡状改变,尼氏小体排列不均;与模型组相比,铁包金巴布膏组㊁阳性药物组结构形态较规则,细胞核较均匀,胞浆空泡状数量较少,尼氏小体排列较均㊂见图1㊂
2.3　各组大鼠血清IL⁃1β㊁TNF⁃α含量比较
与正常组比较,模型组㊁铁包金巴布膏组㊁阳性药物组大鼠血清IL⁃1β及TNF⁃α含量水平均升高,差异有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,铁包金巴布膏组㊁阳性药物组的大鼠血清IL⁃1β及TNF⁃α含量水平均降低,差异有统计学意义(P <0.05);与铁包金巴布膏组比较,阳性药物组的大鼠血清IL⁃1β及TNF⁃α含量水平均降低,差异有统计学意义(P <0.05)㊂见表3㊂表1　qRT⁃PCR 引物序列
名称上游(5'→3')
下游(5'→3')
MYD88
GTCTCCAGGTGTCCAACAGAAGC
GTCGCAGATAGTGATGAACCGTAGG NF⁃κB P65GGACGCTCGGCTGAATGAATCTAC AGGTGTGGGTGCTTGATGTAAATCC β⁃actin CGCAGAAACGAGACGAGATT CTCCAACGACTGCTGTCACCT
表2　各组LDH 模型大鼠干预前后的神经功能评分比较(x ±s ,分)
组别鼠只干预前第10天第20天第30天模型组108.05±1.388.20±1.348.50±1.338.90±1.45铁包金巴布膏组108.20±1.777.15±1.58ab 6.05±1.48ab 4.35±1.40ab 阳性药物组
10
8.10±1.47
7.15±1.67ab
5.55±1.55ab
3.90±1.51ab
注:与同组干预前比较,a P <0.05;与模型组比较,b P <0.
05㊂
注:A 正常组;B 模型组;C 铁包金巴布膏组;D 阳性药物组㊂
图1　各组LDH 模型大鼠神经根病理组织形态(HE 染色,×400)
环球中医药2023年6月第16卷第6期　Global Traditional Chinese Medicine,June2023,Vol.16,No.61095
表3　各组LDH模型大鼠血清中IL⁃1β㊁
TNF⁃α含量比较(x±s,ng/L)
组别鼠只IL⁃1βTNF⁃α
正常组10 2.82±0.5437.25±4.07
模型组108.87±0.92a87.33±6.09a 铁包金巴布膏组10 5.93±0.58ab54.15±5.66ab 阳性药物组10 4.71±0.43abc46.87±5.96abc 注:与正常组比较,a P<0.05;与模型组比较,b P<0.05;与铁包金巴布膏组比较,c P<0.05㊂
2.4　各组大鼠神经根组织NF⁃κB p65及MyD88的mRNA表达比较
与正常组比较,模型组㊁铁包金巴布膏组㊁阳性药物组NF⁃κB p65及MyD88的mRNA表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,铁包金巴布膏组㊁阳性药物组NF⁃κB p65及MyD88的mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与铁包金巴布膏组比较,阳性药物组NF⁃κB p65及MyD88的mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)㊂见表4㊂
表4　各组LDH模型大鼠神经根组织NF⁃κB p65㊁
MyD88的mRNA表达比较(x±s)
组别鼠只NF⁃κB p65mRNA MyD88mRNA
正常组100.19±0.060.20±0.05
模型组10 1.78±0.24a 1.92±0.20a 铁包金巴布膏组100.66±0.20ab0.86±0.17ab 阳性药物组100.48±0.18abc0.58±0.16abc 注:与正常组比较,a P<0.05;与模型组比较,b P<0.05;与铁包金巴布膏组比较,c P<0.05㊂
3　讨论
中医学将LDH归属于 腰痛” 痹证”范畴,是由于受风寒湿之邪困阻经络导致经气不行,气滞而血瘀,加之正气不足,邪气乘虚而入引发的腰痛㊂本病的治疗以祛风除湿㊁扶正祛瘀为主㊂铁包金巴布膏主要的药物包括铁包金㊁生川乌㊁生草乌㊁肉桂㊁三棱㊁莪术㊁木瓜等,方中铁包金又名多花勾儿茶,始载于‘岭南采药录“,其性平,味苦㊁涩,具有益气固肾㊁消肿解毒㊁化瘀止血等功效㊂药理学研究表明其具有镇痛抗炎㊁抗氧化的作用,这和铁包金内含有黄酮类和多酚类成份密切相关[10]㊂生川乌㊁生草乌性热㊁味苦,具有祛风除湿㊁温经散寒止痛等功效㊂有学者研究发现,这两味药能降低炎性因子IL⁃1β㊁IL⁃18㊁TNF⁃α的表达,抗炎效果明显[11⁃12]㊂肉桂,味辛㊁甘,性大热,具有温经通脉㊁散寒止痛等
功效㊂有研究者应用数据挖掘技术,发现肉桂通过
正调控一氧化氮生物合成过程㊁细胞迁移㊁褐色脂
肪细胞分化等治疗LDH,与其抗氧化㊁抗炎抗菌的
药理作用一致[13]㊂三棱味苦,性平;莪术味苦,性温,均具有行气止痛等功效,是常用的药对㊂三棱
乙酸乙酯萃取物的镇痛效果最明显,三棱莪术复方
的抗炎活性更显著[14]㊂木瓜味酸,性温,具有舒筋活络等功效,有药理研究显示木瓜的提取物木瓜苷有较强的镇痛抗炎及提高免疫力的作用[15]㊂扶他林软膏是常用的外搽药,其通过抑制环氧酶,阻断前列腺素的合成,减少外周痛觉感受器刺激而发挥镇痛作用,是恰当的阳性药物㊂
NF⁃κB信号通路是一种经典的炎症调节通路,当NF⁃κB信号通路激活后,可诱导炎症因子TNF⁃α和IL⁃1β的表达,加重靶器官炎症反应[16]㊂有学者的研究证实,NF⁃κB信号传导在调节慢性炎症和压力诱导的椎间盘退变中起重要作用[17]㊂NF⁃κB p65似乎是激活促炎介质表达的主要途径,因此阻断此种途径特有的p65亚基可能是抑制炎性的最佳策略[18]㊂MyD88是Toll样受体和1L⁃1R成员炎症信号中经典的衔接蛋白[19],Liu等[20]研究者使用MyD88条件性敲除小鼠,建立慢性压迫性神经痛模型,发现慢性压迫损伤诱导背根神经节神经元中MyD88和趋化因子C⁃C基序配体2表达的上调,巨噬细胞浸润到背根神经节中,以及野生型小鼠脊髓背角中的小胶质细胞活化,但在条件性基因敲除小鼠中未见明显变化,说明MyD88能上调外周和中枢神经系统的炎症反应,并维持持续的神经病理性疼痛㊂
此前的实验研究显示,铁包金巴布膏可降低LDH大鼠模型的脊背根神经根的炎性细胞因子磷脂酶A2的活性,减缓腰椎间盘突出症大鼠的症状[6],但未具体研究作用机制㊂磷脂酶A2是一种炎症介质和致痛物质,炎症作为一种正常的防御反应,能应对病原微生物及外部损伤,而炎症应答为机体识别受体识别病原微生物分子模式及外部损伤分子模式,通过启动相关的信号传导,可激活转录因子,调控基因表达,最后引发炎症,NF⁃κB就为参与炎症反应相关表达的重要转录因子之一[21]㊂故此次研究以NF⁃κB为切入点,更深入的探讨铁包金巴布膏治疗LDH大鼠的作用机制是否与调节NF⁃κB信号通路有关㊂
1096　环球中医药2023年6月第16卷第6期　Global Traditional Chinese Medicine,June2023,Vol.16,No.6
本实验结果表明,干预前后各时间点模型组㊁铁包金巴布膏组和阳性药物组大鼠神经功能评分依次降低,提示经铁包金巴布膏和阳性药物治疗后大鼠损伤的神经组织逐渐修复;HE染色结果显示,模型组大鼠神经根结构不规则,神经元细胞肿胀,胞浆内存在较多空泡状改变,经铁包金巴布膏和阳性药物治疗后此类病理改变较少,提示铁包金巴布膏可减轻大鼠受损腰部神经根病理变化;铁包金巴布膏组大鼠血清IL⁃1β㊁TNF⁃α含量及神经根组织中的NF⁃κB p65㊁MyD88的mRNA相对表达量显著下降,提示铁包金巴布膏通过下调NF⁃κB信号通路中相关分子的表达水平,减少炎症因子的释放,起到镇痛的作用㊂
综上所述,铁包金巴布膏治疗LDH可能与抑制NF⁃κB信号通路相关,这可能是铁包金巴布膏起到治疗作用的机制之一㊂本实验应用的是中药复方,其膏药成分复杂,作用机制存在多样性,且仅验证了铁包金巴布膏对NF⁃κB信号通路的调节作用,无法全面系统地揭示铁包金巴布膏治疗LDH的科学内涵㊂因此,今后将进一步探讨铁包金巴布膏治疗LDH的其它参与调节的信号通路,并探索出其治疗LDH的主要活性成分㊂
参考文献
[1]　中华医学会疼痛学分会脊柱源性疼痛学组.腰椎间盘突出症
诊疗中国疼痛专家共识[J].中国疼痛医学杂志,2020,26
(1):2⁃6.
[2]　Jonsson D,Finskas O,Fujioka Y,et al.Experimental disc
herniation in the rat causes downregulation of serotonin receptor
2c in a TNF⁃dependentmanner[J].Clin Orthop Relat Res,
2015,473(6):1913⁃1919.
[3]　Deyo R A,Mirza S K.Herniated lumbar intervertebraldisk[J].
New England Journal of Medicine,2016,374(18):1763⁃1772.
[4]　覃书颖,雷龙鸣,陈广辉,等.中医外治法治疗腰椎间盘突出
症的实验研究进展[J].广西医学,2022,44(5):543⁃547. [5]　赵腾飞,蔡萍,戎宽,等.铁包金巴布膏治疗气滞血瘀型腰椎
间盘突出症60例临床观察[J].湖南中医杂志,2017,33(5):
82⁃84.
[6]　蔡萍,戎宽,杨惠,等.铁包金按摩膏对腰椎间盘突出症大鼠
腰背脊神经根中PLA2影响的实验研究[J].新中医,2015,47
(11):194⁃196.
[7]　Cho H K,Cho Y W,Kim E H,et al.Changes in pain behavior
and glial activation in the spinal dorsal horn after pulsed
radiofrequency current administration to the dorsal root ganglion
in a rat model of lumbar disc herniation:laboratory investigation
[J].Neurosurg Spine,2013,19:256⁃263.
[8]　徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京:人民卫生
出版社,2002.
[9]　赵彩萍,朱美玲,王婷婷,等.化学神经根炎症模型大鼠的制
备及评价[J].中国组织工程研究,2019,23(7):1030⁃1034.
[10]　荆英珊,谢国勇,顾卫卫,等.铁包金的化学成分及药理作用
研究进展[J].中国野生植物资源,2017,36(1):49⁃53,61. [11]　支美汝,韩舒,刘凯洋,等.生草乌和诃子制草乌细胞毒性及
抗炎作用的比较研究[J].中国药房,2020,31(22):
2701⁃2705.
[12]　叶协滔,钟凌云,杨明,等.不同炮制方法对川乌抗痛风性关
节炎及心脏毒性作用的影响[J].中国实验方剂学杂志,
2021,27(18):121⁃127.
[13]　海云翔,宋敏,杨秀娟,等.基于网络药理学的肉桂治疗腰椎
间盘突出症分子机制研究[J].风湿病与关节炎,2021,10
(1):6⁃11.
[14]　谭静,林红强,王亚茹,等.三棱的化学成分㊁药理作用及临床
应用研究进展[J].特产研究,2018,40(4):109⁃113. [15]　蒋毅萍,徐江平.木瓜提取物抗炎镇痛作用的实验研究[J].
热带医学杂志,2012,12(11):1335⁃1337,1384. [16]　Khalfallah M,Allaithy A,Maria D A.Incidence,predictors and
outcomes of contrast induced nephropathy in patients with ST
elevation myocardial infarction undergoing primary percutaneous
coronary intervention[J].Glob Heart,2021,16(1):57. [17]　Tisherman R,Coelho P,Phillibert D,et al.NF⁃κB signaling
pathway in controlling intervertebral disk cell response to
inflammatory and mechanical stressors[J].Physical Therapy,
2016,96(5):704⁃711.
[18]　Chiara G,Marc F.NF⁃κB as a target for modulating
inflammatory responses[J].Current Pharmaceutical Design,
2012,18(35):5735⁃5745.
[19]　胡玉懿,陈朴,郭玮,等.髓样分化因子88多态性的研究进展
[J].检验医学,2020,35(4):380⁃386.
[20]　LIU X J,LIU T,CHEN G,et al.TLR signaling adaptor protein
MyD88in primary sensory neurons contributes to persistent
inflammatory and neuropathic pain and neuroinflammation[J].
Sci Rep,2016,6:28188.
[21]　NI H,WANG Y G,AN K,et al.Crosstalk between NFκB⁃
dependent astrocytic CXCL1and neuron CXCR2plays a role in
descending pain facilitation[J].J Neuroinflammation,2019,16
(1):1⁃16.
(收稿日期:2022⁃10⁃22)
(本文编辑:张楠)。