抗Doppel蛋白(叠朊蛋白)单克隆抗体细胞系的建立及其初步鉴定

以后每周相 同剂量腹腔注射 追加免疫 １次 ， 取尾血检删免疫
效果 ：融合前 ３ｄ再腹腔 加 强免疫 １次。取 免疫 小 鼠脾
Ａａｉ Ｐｉ ｔ ｉ ＰＰ ． ｆｉ ｔ ｉ ｒｒＰ ｎ（ｒ Ｉ ｅ… … ｏ ￣ｅ ｄｔ １
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２ ２ ｍＡ ． ｂ的初步鉴定 ① ｎ， ｒｂ的效价测定 ： ｋ 杂交瘤细胞 培养 上清效 价在 ｌ 至 １ ０ 之间．Ｈ ．／ 、Ｈ １ ｘ ０一 １ ｘ １ ８３ ５３ ９和４ ４的嚏 ３ Ｆ
水 ｍ ｂ鼓价分别 为 １ｘ１ １ｘ１ 、 Ａ ０ ０ １×１ 、 １ｘ１ ② ０ 和 ０ Ⅱ ｂ的 亚娄鉴定 ：Ｈ Ｄ Ｈ １ ８３ ５ ３ ９和 ４４均为 Ｉ Ｆ ｇ Ｍ：
Ｄ ｐ ｅ 蛋白的 ｍ ｂ杂交瘤细胞系， ｏｐ ｌ Ａ 分别命名 为 ｌ ８ ３） 、Ｈ Ｈ 、１ ３ ９ ５
和 ４４ Ｆ
鼠 Ｄ ｐ ｅ 蛋 白（ ｏｐｌ 叠朊蛋 白） 是一种新发现 的朊蛋 白样糖 蛋 白（ ｒ ｉ ｒｔ ｎ ， ＰＰ—ｌｅｐｏ ｉ） 糖基化前 的分子质 量 （ ） ｋ ｅ Ｍｒ 约为 １ ５ ００， ０ 在幼年动物的小脑与成 年动物 的睾 丸和心脏 有高 水平
抗 Ｉ ｐ， 蛋 白 【 ） ｔｌ ｏ ｅ 叠朊 蛋 白） 单克 隆抗体细胞 系的建 立及 其初 步鉴定
丁天兵 肖 毅。 任君萍 昊玉水。 杨 ， ， ， ， 敬。 胡 ，
玲 郭振 英 ， ，宋建华 ‘ ，马文 煜 秦 克锋 。 ， 。
（ 第四军医大学 ‘ 微生物学教研室 ． 学员旅一大队，陕西 西安 ７０３ ； Ｃ ｎ ｒ ｅｅｒｈｉ Ｎ ｕｏｅｅｅ ｔｅＤｓ ｓｓ １ ２ ｅｔ ｆ ｓ ｃ ｅｒ：ｇｒｒ ｉ ｉ ａｅ ０ ｍ ｏＲ ａ ｎ ｌ ＊ａ ｖ ｅ
取 ３ 点在硝酸纤维 素 （ Ｃ） 上 ， ０ Ｎ 膜 干燥后 进行 小 鼠腹 股
淘皮下包埋 免疫 ．４ ｄ后再行另－ ０１ １ － ， 腹股沟皮下 包埋免疫 ． 参考文献 ：
［］ ｏ Ｒ ｅ ， ｉｅ １ ｕ Ｌｅｌ Ｓｖ￣ｍ ，ｔ ｌ Ｇ ｅ ｍ ｂ＾
Ｊ
，
３讨
论
已可以肯定 它与朊 蛋白疾病 （ 染性 海绵状 脑病 ，Ｓ ） 传 Ｔ Ｅ 的发 生有密 切关 系” 。由于 目前实验 中采用 的是兔抗 Ｄ ｐ ｅ 蛋 ｏｐ ｌ 白多克隆抗体 ． 使研究工作受到很大影响 ， 为此 ， 我们采用杂 交瘤 技术 ， 制备了抗 Ｄ ｐｅ 蛋 白的单 克隆抗体 （ Ａ ） 以期 ｏ ｐｌ ｍ ｂ．
维普资讯
ＩＳ Ｉ０ ． ７ ８细胞 与 分 子 免 疫 学 杂 志 （ ｈｎＪＣ ｌ Ｍ ｌ ｍ ｕ ｏ）０ ２ １ （ Ｓ Ｎ Ｏ ７ ８３ Ｃ ｉ ｅｌ ｏ ｌ ｍ ｎ １２０ ．８ ２
文章编 号 ：１ ．７８ ２０）２ 封 ３０ １３ ８３（０２ｏ － （７
为 Ｄ ｐｅ 蛋 白的研究 工作 提供 更有力的研 究工具 。 ｏ ｐｌ
我们用大肠杆菌表达的 Ｄ ｐｅ 蛋 白对 ／ ｌ ｏｐｌ ］ Ｗｅ小 鼠进 行 ａ
腹股 淘皮下包埋免疫 ． 筛选 、 经 克隆化， 到了 ４株能稳定 分 得
泌抗 Ｄｐｅ蛋 白的单克隆抗体杂交瘤 细胞系 ． 中以 ３ ５ ｏｐｌ 其 Ｄ 的
本校动 物中心提供 。小 鼠骨髓瘤细胞 Ｓ ２ ０由本 室保存 。 ｐ／
ｌ２ 方 法
白的哪些抗 原决定簇 ， 以及能否在 Ｗｅｔ 印迹 中取代兔抗 ｓｒ ｅ ｎ
Ｄ ｐ ｅ蛋 白多克制备 将冻 干的 Ｄ ｐ ｅ蛋 白溶 于 Ｐ Ｓ溶液中 ， ｏ ｐｌ Ｂ
Ｕ ｉｅｓｙ ｏ ｏ ￣． ｏｏｔ ．Ｏ ｔｒ Ｓ ３ ２ Ｃ ｎ ｄ ） ｎｖｒｉ ｆ ｍｎ Ｔ ｒｎｏ ｎａｉ Ｍ５ Ｈ ａ ａ ａ ｔ Ｔ ｏ
关键词 ：叠朊蛋 白；单克隆抗体 ；杂交瘤
中国分类号 ： ３ ２ ｌ Ｒ ９ １ 文献标识码 ： Ｂ
２结
果
２ １分船 ｍＡｂ杂交瘤细胞系的建立 细胞 融合率达 ８ ％ ， ３３ 抗体阳性率 为 ６２ ％：克隆化后共 获得 ４株能稳 定分 泌抗 ５
活性为最高 并对这些 ｎ ｂ进行 了初 步的鉴定 ， ４株 ｍ ｂ的 Ａ Ｉ 亚类均为 ｌＭ， ｇ ｇ 可能与筛选方法有关 ， 也可能与 其特殊 的生 理功能 （ 包括抗原性 ） 有关：另外． 免疫 结果显示 Ｎ Ｃ膜皮下 包埋免疫的效果 良好 ， 可以简化并取代传统的佐剂 免疫方法。 鉴 于 Ｄ ｐｅ 是小 鼠 自身功能正 常的蛋 白质 ， ｏｐｌ 所以我们使用 丁
较 大的免疫剂量。如能获得 Ｐｎ ｒｄ基因缺陷 的小 鼠品 系， 该 应 可以得到更多的 ｎ， ｒｂ细胞系。至于这些 ｎ， ｋ ｒｂ识别 Ｄ ｐ￣ 蛋 ｋ ｏｐｌ
１材 料和方 法
１ 材料 １ 大 肠 杆 菌 表 达 的 鼠 Ｄｐｅ ｏ ｐｌ蛋 白 （ ｎ ｐ ２ — Ｍ Ｄ ｌ ７ １４ 由秦克锋博 士提供 ：Ｂ ｌ／ ５） ａｂ ｃ小 鼠（ ｋ龄 、 性 ） ６ｗ 雌 由
的表 达 ． 其编码 基 因 （ ） 于相应 朊 蛋 白基 因 （ ｍ 位 竹 ） 下
游 ｌ ｋ） 人的则在下游 ２ ｈ ） 与 尸 ６ Ｉ处（ ７ ｋ 处 ， Ｐ编码 蛋 白 ＰＰ ｒ 的 Ｃ端 ２ ３序列有 ２ ％的 同源性 ． 编码 １９个 氨基酸 Ｊ ／ ４ 共 ７ ． 含 ２个糖基 化位点 ． 并由糖基 磷脂酰 肌醇 （ Ｐ ） Ｇ Ｉ 锚定 于细胞 膜 表面 。虽然 Ｄ ｐｅ 蛋 白的功能 目前 尚不 十分 清楚 ． ｏｐ］ 但