维生素B12注射液的定性鉴定及含量

实验步骤
3. 依据在361nm处测得的吸光度值，计算 试样中维生素B12的质量浓度。
思考题
1. 紫外—可见分光光度计测定维生素B12含量及定性鉴 定的原理是什么？
2. 称取0.0500g维生素C，溶于0.01mol/L H2SO4溶液中， 然后转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度。吸取该溶 液2.00mL，准确稀释至100.0mL。取此溶液在1cm厚的 吸收池中用245nm波长的单色光测其吸光度为0.551， 试求维生素C的质量分数。已知 (245nm)标= 560。
2. 按药典方法，取维生素B12注射液1支（1mL），倒入 25mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，充分混匀，置于 1cm石英吸收池中以蒸馏水作参比溶液，在波长 230nm～580nm的范围内，每间隔20nm测定一次吸光 度，在最大吸收峰278nm、361nm、550nm附近，每间 隔2nm测量一次，然后绘制A—λ吸收曲线图，确定最 大吸收峰位置，并计算吸光度之比值，进行定性鉴定。
维生素B12注射液的定性鉴 定及含量的测定
实验目的
了解紫外—可见分光光度计的构造及正确 使用方法。
掌握吸收曲线的绘制方法。 掌握紫外—可见分光光度法对物质的定性
鉴定和含量测定。
实验原理
紫外分光光度法仍然是基于Lambert—Beer 定律
A = k·c·b
其中k为吸光系数。在条件改nm
E1% 1cm
278nm

A361 A278
1.70 ~ 1.88
E1% 1cm
361nm
E1% 1cm
550nm

A361 A550
3.15 ~
3.45
实验原理
维生素B12注射液含量测定是依据标准维生素
B12的
E1% 1cm
361nm

207
样

A样 10
系数k可以用摩尔吸光系数ε或比吸光系数 所E11c%m
代替。
实验原理
维生素B12是含有Co的有机化合物，为深红色 结晶或结晶性粉末。其注射液在278±1nm、 361±1nm、550±1nm波长处有最大吸收。
实验原理
通过对最大吸收峰处吸光度比值的计算，可对 其进行实性鉴定。中华人民共和国药典2000版 规定维生素B12的定性鉴定标准为：
E1% 1cm
361nm

A样 207
10
✓ 即为本试样稀释液1L中含维生素B12多少克。
✓ 将此值乘以稀释倍数，即得1L原注射液含维 生素B12多少克（g/L）。
实验步骤
1. 参看紫外—可见分光光度计仪器简介和
使用操作部分，熟悉其性能和操作方法。
接通电源，打开仪器，预热20min。
实验步骤