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秋茄多糖的提取及其组成的研究
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 秋茄多糖的提取及其组成的研究近年来,国际上对药用红树植物的化学成分及其药理研究表明，红树植物具有抗艾滋病、抗肿瘤、抗氧化等活性[1]。

秋茄为红树科秋茄属植物，本属只有一种，即为秋茄。

秋茄因其特殊的生长环境，在其化学成分和生理活性方面都具有很多特殊性。

至今为止的秋茄研究资料表明，对秋茄化学成分和生理活性的研究在世界范围内较为分散，缺乏较深入或系统地研究。

虽然人们现已从秋茄中分离出多个鞣质类化合物，但是关于其生物活性方面的研究并没有多少报道。

本实验对红树植物秋茄中的多糖进行提取并对其组成进行了研究。

 1 材料与仪器
 1.1 原料秋茄叶(采自湛江东海岛)，洗净剪碎，置于通风处阴干，备用。

 1.2 试剂95%乙醇;无水乙醇;氯仿;正丁醇;丙酮;无水乙醚;硫酸;碳酸钡;吡啶;盐酸羟胺;乙酸酐，以上试剂均为分析纯。

 1.3 仪器E-5299旋转蒸发仪(巩义市予华仪器有限责任公司);SHB-B95A型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);GCMS-QP2010气相色谱质谱连用仪(岛津制作所);HH-S2系列恒温水浴锅(江苏省全坛市环宇科学仪器厂);FTIR-8400S型红外光谱仪(日本岛津公司);ESJ120-4型电子天平(沈阳市龙腾电子有限公司);202-2型干燥箱(上海市实验仪器总厂);GSP-84-02型磁力恒温搅拌器(山东电讯七厂)。

 2 方法
 2.1 多糖提取称取粉碎、干燥好的秋茄叶150 g，加入1 500 ml蒸馏水，超声处理20 min后加热到90 ℃，热水浸提3次，过滤，合并，得棕色滤液。

用旋转蒸发仪浓缩滤液至50 ml，抽滤，滤液中加入3倍其体积的95%乙醇沉淀多糖，于冰箱放置过夜，得棕色絮状物，离心收集沉淀。

 2.2 Sevag法去蛋白[2]Sevag试剂的配制：用氯仿与正丁醇以4∶1混合。

上述沉淀加水溶解，即得棕色溶液，加入溶液1/3倍体积的Sevag试剂，剧烈振荡至无白色絮状物析出，然后离心，除去水相与有机相交界处的变性蛋白，剩余液体再加入200 ml无水
乙醇，充分振荡摇匀，于冰箱静置24 h，得棕色絮状物。

离心收集沉淀，沉淀经无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤两次脱去脂肪和色素，干燥，得棕色粗多糖1.1 g。

 2.3 红外光谱法(IR)鉴定多糖采用KBr压片制样，在4 000～400 cm-1区间内用红外光谱仪扫描IR吸收。

 2.4 多糖水解[3]称取30 mg粗多糖，加入5 ml 30 mmol/L的硫酸溶液，封管，超声片刻，至多糖完全溶解，100 ℃恒温水浴振荡2 h。

将试管置于烘箱中于110 ℃反应6 h后冷却至室温，加BaCO3粉末中和、离心、干燥得到水解后的淡黄色单糖混合物0.0103 g。

 2.5 糖腈乙酸酯衍生物的制备称取10 mg单糖样品和10 mg盐酸羟胺，用20 ml吡啶溶解，封管，95 ℃恒温水浴振荡40 min后冷却至室温，加入0.6 ml乙酸酐，封管，95 ℃恒温水浴振荡40 min，冷却至室温，得淡黄色单糖腈乙酸酯衍生物，待测。

 2.6 单糖衍生物的GC/MS分析色谱条件：RTX-5石英毛细管柱(30m 0.25 mm 0.25 m)，柱温：80 ℃，气化室温度：280 ℃，载气为高纯度氦气，进样量1 l，升温程序：起始温度80 ℃，保留时间2 min，每分钟5 ℃升温到260 ℃，保留1 min。

质谱条件：离子源为EI源，灯丝电流0.6 mA，离子源温度200 ℃，电离能量70 eV，接口温度250℃，电子倍增管电压1.20 kV，扫描周期0.5 s，扫描范围30.00～400.00 m/z，溶剂延迟3 min。

 3 结果与讨论
 3.1 多糖红外光谱分析结果秋茄多糖的红外光谱如图1所示，从图谱中可以看出秋茄多糖具有以下结构特征：在3 600～3 200 cm-1的一个强峰是O-H的伸缩振动。

1 665～1 625 cm-1间吸收峰是糖的水化物的吸收峰。

1 200～1 000 cm-1间比较大的吸收峰是由两种C-O伸缩振动所引起的，其中一种是属于C-O-H的，另一种是糖环的C-
O-C。

在3 000～2 800 cm-1的一组吸收峰是糖类C-H的伸缩振动引起的，1 400～1 200 cm-1的不太尖的吸收峰是C-H的变角振动，这两组吸收峰是糖类的特征吸收峰。

该样品具有典型的多糖特征峰。

图1 秋茄多糖的红外光谱图
 3.2 单糖衍生物GC-MS分析结果将糖腈乙酸酯衍生物进行GC-MS分析，经计算机内NIST02质谱数据库检索得到分析结果见表1。

表1 单糖衍生物GC/MS分析结果
 4 结论
 研究结果表明该多糖是一杂多糖，由D-阿拉伯糖和D-葡萄糖组成，它们的摩尔比为1∶2，该多糖为杂多糖。

 【参考文献】
 [1] 王友绍,何磊.药用红树植物的化学成分及其药理研究进展[J].中国海洋药物,2004,2:26.
 [2] 张晓静,刘会东.植物多糖提取分离及药理作用的研究[J].时珍国医国药，2003，14(8):495.
 [3] 季宇彬.中药多糖的化学与药理[M].北京:人民卫生出版社，2005：5
 医药卫生栏目
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