探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药突变

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熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药性测定中的临床价值探究

熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药性测定中的临床价值探究

熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药性测定中的临床价值探究【摘要】目的:分析评价溶解曲线法检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平耐药的临床应用价值。

方法:收集结核病患者痰液、胸腹腔积液、脑脊液、灌洗液、脓液等经培养证实为结核分枝杆菌的阳性标本70例,对分离的结核分枝杆菌菌株同时用溶解曲线法和培养法进行异烟肼和利福平耐药性检测。

结果:溶解曲线法检测异烟肼的灵敏度为94.44%,特异度为96.15%,与培养法检测的符合率为97.14%;检测利福平的灵敏度为100%,特异度为92.16%,与培养法检测的符合率为94.29%。

结论:溶解曲线法检测在快速检测结核患者异烟肼、利福平耐药方面具有较高的临床应用价值。

【关键词】结核分枝杆菌;耐药;溶解曲线法世界卫生组织在1992年将同时耐异烟肼和利福平的结核病定义为耐多药结核病,耐多药结核病存在治疗周期长、高治疗成本和低治愈率等问题[1]。

快速地对分枝杆菌异烟肼及利福平耐药性测定,对治疗方案的制定和结核病流行非常重要的意义。

随着分子生物学的发展,开发出了多种快速、客观、准确的耐药基因检测新诊断方法,如线性探针技术、基因芯片技术及探针熔解曲线技术等[2]。

近年来已有一些实验室的研究分析熔解曲线技术对结核分枝杆菌耐药性的测定。

本文从临床应用角度观察,对PCR熔解曲线法结果总结,以培养法药敏试验作为金标准,分析熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性的敏感度和特异度,探讨其在耐药结核病的诊断意义和应用价值。

1资料与方法1.1一般资料收集我院2017年1-2018年12月结核病患者痰液、胸腹腔积液、脑脊液、灌洗液、脓液等经培养证实为结核分枝杆菌的阳性标本70例,对分离的结核分枝杆菌菌株同时用溶解曲线法和培养法进行异烟肼和利福平耐药性检测。

1.2方法研究设计:以传统培养法为金标准,通过计算灵敏度、特异度、符合率等指标评价溶解曲线法检测异烟肼、利福平耐药的临床价值。

检测方法:培养法药敏试验是采用世界卫生组织/国际防痨和肺病联合会(WHO/IUATLD)推荐的比例法,所用对照和基础培养基为无淀粉改良罗氏培养基,分别对异烟肼(isoniazid,INH)和利福平(rifampin,RFP)开展药物敏感性试验。

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、喹诺酮及卡那霉素耐药性的评价

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、喹诺酮及卡那霉素耐药性的评价

肺结核专题荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、喹诺酮及卡那霉素耐药性的评价$刘春平\谭耀驹2,苏碧仪2,马品云2^广州医科大学附属第一医院广州呼吸健康研究院呼吸病理中心(广东广州510180); 2广州市胸科医院医学检验科(广东广州510095)【摘要】目的利用荧光PC R探针熔解曲线方法检测涂阳患者痰标本中结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、喹诺酮及卡那霉素耐药性,并与表型药敏试验结果比较,评价其应用价值,:方法收集216株痰涂片阳性患者的痰标本,行BACTEC MGIT960液体培养、菌种鉴定、DNA提取及荧光PC R探针熔解曲线检测。

经菌种鉴定的182例结核杆菌临床分离株行表型药敏试验。

其中174份标本同时获得表型药敏试验和荧光PC R探针熔解曲线方法检测利福平、异烟肼、喹诺酮及卡那霉素耐药性的结果,以表型药敏试验结果为标准,评价荧光PC R探针熔解曲线检测方法检验效能t结果174份标本中,以表型药敏试验结果为标准,PC R探针熔解曲线法检测利福平敏感度、特异度和符合率分别为93. 75%(95%C/:79.丨9%~99. 23%)、97. 18%(95%C7:92.94%~99.23%)和96. 55%;对异烟肼敏感度、特异度和符合率分别为76.00%(95%C/:61.83%~86.94% )、W. 19%(95%C/:95. :59% ~ 98% )和91 «% ;对喹诺酮敏感度、特异度和符合率分别为85.00%(95%(:/:62.11%〜96.79%)、100.00%(95%(:/:97.63%~100.00%)和98.28%;对卡那霉素敏感度、特异性和符合率分别为 50.00%(95%(:/:6.76%〜93.24%)、100.00%(95%(:/:97.85%〜100.00%)和98. 85%。

荧光P C R探针熔解曲线法与表型药物敏感度试验检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的值为0. 89,对异烟肼耐药性的AVippa值为0. 81,对查诺自同耐药性的尺值为0. 91,对卡那霉素耐药性的尺appa值为0.66。

211176199_多色探针熔解曲线分析技术检测准广泛耐药肺结核的应用价值

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熔解曲线技术在结核分枝杆菌耐药检测中的临床应用研究

熔解曲线技术在结核分枝杆菌耐药检测中的临床应用研究

熔解曲线技术在结核分枝杆菌耐药检测中的临床应用研究发布时间:2022-01-03T07:11:23.592Z 来源:《医师在线》2021年10月19期作者:王金会1 张志学1 郑伊雄[导读]王金会1 张志学1 郑伊雄2(1齐齐哈尔市结核病防治院;2齐齐哈尔市建华医院;黑龙江齐齐哈尔161000)【摘要】目的:研究对结核分枝杆菌的耐药性检测中应用熔解曲线技术的临床应用效果。

方法:选取我院2020年1月-2021年12月拟诊为初治菌阴性肺结核患者52例做为研究对象,分别留取痰标本2份,其中一份痰标本应用熔解曲线技术检测,另一份痰标本应用痰涂片及固体培养药敏实验,并以固体培法做为金标准比较熔解曲线检测的结果的准确性。

结果:熔解曲线检测的阳性率为69.20%(36/52),固体培法的阳性率为73.10%(38/52),以固体培法做为金标准,熔解曲线检测的敏感度为92.10%,特异度为91.70%,阳性预测值为97.20%,阴性预测值为78.60%,Kappa=0.81;熔解曲线检测的阳性率明显高于痰液TB菌涂片检测,(P<0.05)。

结论:在结核分枝杆菌耐药检测中应用熔解曲线技术特异度、敏感度均较高,能够在短时间内对结核分枝杆菌耐药性做出判断。

【关键词】熔解曲线技术;结核分枝杆菌;耐药性;敏感度;特异度目前,如何提高耐药结核病的治疗效果并有效控制其传播是结核病防控工作的重点。

此类患者的早期诊断难度较大,而且治疗时效果慢,痰菌检验时阳性持续时间相对较长。

对于此类患者来讲通过常规的抗结核病治疗方案不能够将患者体内的病菌完全杀死,部分患者甚至至死时而具有传染性。

对于此病目前的主要诊断方案仍依赖传统的药敏试验方法,但是在进行药敏试验时其生长速度过慢导致试验的时效性不佳,一般需要长达3个月的时间才能够得到检验结果,不利于及时对患者开展治疗[1];液体药敏技术的面市则大幅度提升了检验的速度,但是仍需要2个月的时间,依然不能满足临床上对于此病快速诊断并制定治疗方案的需求。

探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药突变

探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药突变

了解感染 控制情 况 。引流 管通 畅的标 准是 引流 管 中可见 连续移 动 的 引 流液 或水泡 ,并且 敷料 一直处 于塌 陷状 况 。对 于新 鲜创 面坏 死组 织 较多和 并发 感染 的创面 ,虽 不主 张局部 用药 ,但在 引 流器件 冲洗 引 流管 管腔 时用 少量 敏感 抗生 素有 时会 达到 事半 功倍 的效 果 。该 】
r cur t ma sv on nd sf t s ee ta u ei e to fa t ewi sieb ea o sued f c d s p rnfcin h ti n
较多有的甚至形成耐药,增加了临床治疗难度。在抗生索冲洗液持
续 灌洗 的情况 下 ,抗 生素 可直达 创面 即可通 畅 引流又 可持续 杀菌 ,
【 摘要 】 目的 对 采用探针 熔解 分析 法对 结核 分枝 杆 菌的链 霉素 耐药 突 变情况进 行快速 检 测的应 用价 值进行 研 究分析 。方法 抽取 7 0 结核 4株
分枝杆 菌 的临床 分 离菌株 ,采 用探 针熔 解 分析 法 ,对链 霉 素耐 药 突 变情 况进行 检 测 。结果 70 结核 分枝杆 菌 中有 8 株 发 生 突 变,9 4株 6 份 标 本 中发现 杂合 信号 ,8 标 本 中没有任 何 信号 。2 份 存 在药敏 性 的标 本 的检 测 结果 均显 示 为野 生型 ,有耐 药性 的 1 份 标 本 中仅 有 5 份 9 3 份 存 在 突 变现 象 ,另 外的 8 份标 本检 测 结果 显示 为野生 型。结 论 采用探针 熔 解分析 法对 结核 分枝杆 菌的链 霉素耐 药 突 变情况进 行 快速检 测 , 其特 异性 非 常明显 ,且具 有快 速、 准确 的特点 。 【 关键 词】 探针 熔 解分析 法 ;结核 分枝杆 菌 ;链 霉素 ;耐 药 突 变

几种常见的结核分枝杆菌快速检测方法

几种常见的结核分枝杆菌快速检测方法

肺结核属于肺部慢性传染疾病,临床发病率高,该病的主要致病菌为结核分枝杆菌,病程相对较长,会向全身多个脏器累及。

菌阴肺结核指的是通过一次结核杆菌培养以及三次痰涂片检查,结果均显示为阴性的肺结核患者,具有较低的传染性。

大多数患者不了解菌阴肺结核的相关性知识,如果没有采取及时有效的诊断、治疗,患者的病情就会延误,继而转变为阳性,对患者的预后造成不利影响。

目前,临床中对于菌阴肺结核的特异性诊断措施相对缺乏,最常用的方法就是痰或呼吸道采集标本中结核分枝杆菌的检验。

近年来,结核病的发病率及死亡率呈现逐年上升的趋势。

筛选出一种能有效确诊早期结核病的检验方法十分重要。

目前临床上应用于辅助结核病诊断的检验方法以结核分枝杆菌培养和抗酸染色涂片为主,其中培养法作为结核疾病诊断的金标准具有准确性高、特异性高的优势。

结核分枝杆菌痰的分离培养,消耗时间较长,如果利用固体改良罗氏培养基进行培养,一般会需要至少20d,最长可需要60d,如果使用先进的全自动分枝杆菌进行检测,至少需要7d,至多需要20d。

实验室一般会通过痰涂片法进行检测,该方法的操作相对简单,价格较低,但是,操作费时,在基层痰检实验室涂片量过大的时候,一天内无法得到实验结果,这种现象无法满足目前的结核病防治工作。

近些年来,随着染色技术的逐渐先进,荧光染色技术作为新型的实验手段,已经在医学科学领域中广泛应用。

目前,涂片染色法已经成为无菌体液的主要检查方法,但是,通过传统制片以及染色法的检出率相对较低,误诊率以及漏诊率较高。

主要是因为染色时制片以及标本固定环节容易出现误差,而细胞沉淀仪法、改良的抗酸染色法、萋-尼氏抗酸染色法、金胺O荧光染色法、PCR等技术的应用越来越多。

传统方法:获取痰标本后,排除口水痰,然后纳入研究范围,确认纳入的当天,需要在每份痰标本相同位置,取两份,制成痰涂片。

离心处理标本,再在洁净的玻片上涂抹沉渣,涂完一层之后,使其自然干燥,再次涂抹,形成厚涂片,先使用萋尼抗酸染色法进行染色,随后使用石炭酸复红溶液初染,再使用盐酸酒精脱色,然后用美兰复染,寻找红色区域,待涂片干燥后置于显微镜镜检,于蓝色背景中寻找红色的杆状、分枝状细菌。

高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测

高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测

高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测杨彩虹;杨敏;于璐;包海洋;吴长新;曹旭东;陈创夫【摘要】目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟胼耐药性的应用价值.方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析.2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点.3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率.结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株.2)测序分析结果显示:①KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变.②inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位.3)①对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55%;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30%;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10%;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5%.通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95%、特异性为100%.②用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7%、特异性为80%.③以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株.以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95%、特异性为82.76%.结论高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的检测具有较好的灵敏度,耗时短,在异烟肼耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值.%We detected the isoniazid resistance in clinical Mycobacterium tuberculosis isolates by high-resolution melting (HRM) curve analysis and assessed the application value of the assay.The isoniazid resistance of 49 M.tuberculosis isolates preserved in laboratory was analyzed by the drug sensitivity test (traditional proportionmethod).Further analysis was made on the sequencing of the isoniazid resistance determining region in these test strains,and their mutation sites were screened.Specific primers used in the HRM curve analysis were designed based on the screened mutation sites,DNA mutations were assayed in the isoniazid-resistant gene determining region by the HRM curve analysis,and an assessment was made of the detection efficiency of the assay in isoniazid resistance in M.tuberculosis.Results of the drug sensitivity test (proportion method) showed that,of the 49 test strains,there were 20 isoniazid-resistant strains,29 isoniazid-sensitive strains.Results of the sequencing analysis showed that:1) KatG gene had four mutation patterns,i.e.,point mutations at site 234,at sites 234 and 315,at sites 234 and 463,and at sites 234,315 and 463;2) there were three mutations were detected in inhA gene,i.e.,mutations in inhA-8,-15 and-152.Analysis of gene mutation in drug-resistant strains found that of the 20 isoniazid-resistant strains,11 (55 %) were mutated at codon 315 of KatG gene;6 (30%) were mutated in inhA-15 (4/20),-8 (1/20) and-153 (1/20) of inhA gene;two (10%) were mutated at codon 315 of KatG gene and in inhA-15;in one strain (5%),no mutation was detected in KatG and inhA genes.Through the gene mutation detection,the sensitivity and specificity of isoniazid resistance in M.tuberculosis were 95 % and100 %,respectively.Results of HRM curve analysis of drug-resistance gene mutations in test strains showed gene mutations were present in 18 strains and absent in 24 ones;referring to DNA sequencing results,the sensitivity and specificity of the assay were 94.7% and 80%,respectively.Judged by mutations as drug-resistance via the HRM curve analysis,19 resistant and 24 sensitive strains were tested.With the drug sensitivity test results by the proportion method as controls,the sensitivity and specificity of the assay were 95 % and 82.76 %,e of the HRM curve in the detection of resistance of M.tuberculosis to isoniazid is characterized by good sensitivity and short time consuming,and has certain value in the rapid diagnosis of isoniazid-resistant tuberculosis.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2017(033)005【总页数】10页(P403-412)【关键词】结核分枝杆菌;高分辨率熔解曲线(HRM);DNA测序;耐药性;异烟肼【作者】杨彩虹;杨敏;于璐;包海洋;吴长新;曹旭东;陈创夫【作者单位】石河子大学动物科技学院,石河子 832003;石河子大学生命科学学院,石河子832003;石河子大学医学院,石河子832002;石河子大学动物科技学院,石河子 832003;石河子大学医学院,石河子832002;石河子大学医学院,石河子832002;石河子大学动物科技学院,石河子 832003【正文语种】中文【中图分类】S855.2结核病是感染结核分枝杆菌引起的传染病。

荧光聚合酶链反应熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌及异烟肼耐药突变的临床应用价值

荧光聚合酶链反应熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌及异烟肼耐药突变的临床应用价值

荧光聚合酶链反应熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌及异烟肼耐药突变的临床应用价值阳央;冯智;侯欢;李芳芹【摘要】目的探讨荧光聚合酶链反应(PCR)熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)及异烟肼耐药突变的临床价值.方法对延安市传染病医院2018年4-12月住院的370例肺结核患者痰标本采用MGIT320进行MTBC培养及药敏试验,同时应用荧光PCR熔解曲线法进行MTBC和异烟肼耐药突变检测,对检出MTBC 的差异进行分析,以培养法药敏为金标准,评估熔解曲线法耐药突变检测的灵敏度、特异度、一致性等.结果 370例患者培养法检出MTBC 175株,阳性率47.3%,熔解曲线法检出157株,阳性率42.4%,两种方法检测的结果差异无统计学意义(P=0.073),一致性中等(Kappa=0.510);同时与有异烟肼药敏结果的115株进行比较,熔解曲线法灵敏度95.0%,特异度93.7%,与培养法结果比较差异无统计学意义(P=0.125),具有高度一致性(Kappa=0.807).结论熔解曲线法试剂盒可用于结核菌快速筛查及耐药突变检测,对异烟肼耐药突变检测具有高灵敏度和特异度,有助于缩短耐药结核病诊断时间.【期刊名称】《中国感染与化疗杂志》【年(卷),期】2019(019)004【总页数】5页(P405-409)【关键词】结核分枝杆菌;熔解曲线法;快速检测;异烟肼耐药突变【作者】阳央;冯智;侯欢;李芳芹【作者单位】延安大学医学院研究生系,陕西延安716000;延安市传染病医院检验科;延安市传染病医院检验科;延安大学附属医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R378.911;R978.3结核病是危害人类健康的古老疾病,至今仍是全球十大死亡原因之一。

据世界卫生组织2018年全球结核病控制报告,2017年中国新发结核病患者占世界的9%,平均感染人数63/100 000,位居全球第二,也是耐药结核病发生最多的三大国家之一;耐多药/利福平(RIF)耐药结核病平均发生数5.2/100 000 [1],一例未治疗的耐药结核菌感染患者每年可以传染10~15个人,耐药结核病已成为全球结核病死灰复燃的重要原因,严重威胁公共卫生健康 [2]。

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究马艳艳;李辉;赵东阳;李庆阁【摘要】目的对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价其检测效能及在国境口岸应用价值.方法应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离标本,与传统药物敏感性试验对比,衡量该方法的灵敏度、特异性.结果对347例结核病人临床分离培养样本,药敏试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本;荧光PCR熔解曲线法检出269例利福平敏感标本,78例利福平耐药标本,灵敏度为93.42%,特异性为97.42%,符合率为96.54%.结论荧光PCR熔解曲线法检测速度快速、灵敏度高、特异性强,可用于结核分枝杆菌利福平耐药突变的快速检测,适于国境口岸对耐多药结核病的快速筛查.【期刊名称】《口岸卫生控制》【年(卷),期】2011(016)005【总页数】4页(P21-24)【关键词】结核分枝杆菌;熔解曲线法;利福平;检测【作者】马艳艳;李辉;赵东阳;李庆阁【作者单位】河南国际旅行卫生保健中心河南,郑州,450046;河南省疾病预防控制中心河南,郑州,450016;河南省疾病预防控制中心河南,郑州,450016;厦门大学福建,厦门,361012【正文语种】中文【中图分类】R52结核病是一种由结核菌感染引起的传染病,据估计全球约有三分之一的人感染,约10%的感染者成为结核病人。

随抗结核药物的使用,耐药结核病人逐渐增加,其中耐多药结核病(MDR-TB)[1]即至少同时耐异烟肼和利福平两种一线抗结核药物的结核病人也逐年增加,MDR-TB病人治疗的治愈率最高仅为63%,治疗周期是普通结核病治疗6-8个月的3倍(18-24个月),高治疗成本、长治疗周期、低治愈率是 MDR-TB 的特点[2,3]。

2009年世界卫生组织报告统计,全球目前有49万耐多药结核病患者,占结核病总患病人数的5%[4],而中国每年新发耐多药患者约12万人[5]。

结核分枝杆菌耐异烟肼突变基因及分子检测方法研究进展

结核分枝杆菌耐异烟肼突变基因及分子检测方法研究进展

结核分枝杆菌耐异烟肼突变基因及分子检测方法研究进展李芊璘;冯福民;戴二黑【摘要】结核病是一种慢性感染性疾病.我国作为结核病的高负担国家,其高发率已成为严峻的公共卫生问题.异烟肼作为治疗结核病的重要一线药物之一,由于其治疗管理不规范等原因导致临床患者耐药日益严重.目前已知异烟肼最主要的耐药机制是基因突变,如何准确有效地检出耐药基因,是控制结核病的关键.本文从分子角度分别阐述了异烟肼常见耐药基因katG、inhA、ndh、ahpC、oxyR,以及罕见突变基因kasA、sigI、furA、mabA、iniABC、efpA,并针对其检测方法作了概述.%Tuberculosis is a chronic infection caused by Mycobacterium tuberculosis. The high financial burden and high incidence rate of tuberculosis have become a critical public health problem in China. Isoniazid, as one of the important first-line drugs in the treatment of clinical patients, drug resistance is becoming increasingly serious because of the lack of standard treatment. At present, the main mechanism of isoniazid resistance is known as gene mutation. How to detect drug resistance gene effectively and accurately is the key to control tuberculosis. In this article, we analyzed the frequent genes (katG, inhA, ndh, ahpC and oxyR) and novel genes (kasA, sigI, furA, mabA, iniABC and efpA) from the perspective of molecular biology, and summarized their diagnostic methods.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2017(045)012【总页数】4页(P1341-1344)【关键词】分枝杆菌,结核;异烟肼;耐药基因;分子检测;综述【作者】李芊璘;冯福民;戴二黑【作者单位】华北理工大学公共卫生学院 063210;华北理工大学公共卫生学院063210;华北理工大学附属石家庄市第五医院【正文语种】中文【中图分类】R378.91+1结核病(TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的一种具有潜在致命性的慢性传染病,其中以肺结核最为常见。

结核分枝杆菌耐药性检测

结核分枝杆菌耐药性检测

四、MTB DST检测结果的判读
初治TB患者的耐药性检测与结果判读
(1)初治TB患者1次分子DST检测为对RFP、INH和FQs耐药时可判断为 耐药,并同时进行表型DST,以了解耐药水平及对其他药物的耐药情况, 以供临床医生进行综合分析。
(2)初治TB患者1次分子DST检测为对RFP、INH和FQs以外抗结核药物 耐药时,建议复查,并同时进行表型DST;如果复查分子DST或表型DST 仍为耐药时,DR-TB的结论成立;如果分子DST复查结果为对被检测药 物敏感,则建议等待表型DST结果;若表型DST结果为耐药,则判断为 耐药;若表型DST结果为敏感,应结合临床资料进行综合判断。
二、常用的MTB DST检测方法
(五)基因测序技术
采用PCR-Sanger测序方法检测MTB对 RFP和INH耐药的常见基因型,可 了解突变的位点和性质,但目前尚未在临床广泛开展。
三、MTB耐药性检测策略
目前,采用任何单一形式的DST方法均无法完全满足临床需求,而采用 多种方法联合检测虽能提高耐药MTB的检出率、缩短诊断时间,但同时 也增加了TB患者的检测费用,而且若不同检测方法的结果不一致,也给 医生的诊断和化疗方案的制定带来许多困扰。
二、常用的MTB DST检测方法
(三)基因芯片技术
采用基因芯片技术较简便、快速地检测MTB对 RFP和INH耐药的常见基 因型,可了解突变的位点和性质,辅助诊断MDR-TB,整个检测过程只 需24~48 h;其缺点是杂交、检测过程较繁琐。
二、常用的MTB DST检测方法
(四)反向杂交技术
采用反向杂交技术可同时快速检测对RFP、INH、EMB、FQs、Am、Km 和Cm耐药的常见基因型,可了解突变的位点和性质,辅助诊断MDR-TB 和pre-XDR-TB、XDR-TB,整个检测过程只需1~2 d时间;但其为开放 性检测,可能会污染扩增产物而导致假耐药的报告,并且杂交、显色过 程较繁琐。

荧光PCR探针熔解曲线法与微孔板法检测MTB耐药性的临床应用比较

荧光PCR探针熔解曲线法与微孔板法检测MTB耐药性的临床应用比较

• 132 •中国防痨杂志 2021 年 2 月第 43 卷第 2 期 Chin J Am ituberc ,Fc»bruary 2021,V 〇U 3,N 〇. 2•论著•荧光P C R 探针熔解曲线法与微孔板法检测M T B 耐药性的临床应用比较王佩赵国连雷倩郑丹崔晓利周俊【摘要】目的分析荧光P C K 探针熔解曲线法与微孔板法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)检测结核分枝 杆菌(M TB )对抗结核药品耐药性结果的一致性及M T B 基因突变与耐药的相关性,为临床诊疗优化提供参考。

方法搜集2019年1 -12月分离自西安市胸科医院就诊患者并经鉴定确认的343株M T B 临床分离株,菌株均进 行了微孔板法药敏试验和荧光P C R 探针熔解曲线法检测。

以微孔板法药敏试验结果为参照.评价荧光P C R 探针 熔解曲线法检测M T B 对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、莫西沙星和左氧氟沙星耐药性的检测效能,并分析荧 光P C R 探针培解曲线法检测的M T B 基因突变与微孔板法药敏试验最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentre - tio n ,M IC )的相关性。

结果以微孔板法药敏试验结果为参照,荧光P C R 探针熔解曲线法检测M T B 对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、莫西沙星和左氧氟沙星耐药性的敏感度、特异度、沖《值分别为:96. 20% (76/79)、 95. 28%(242/254)、0. 88:93. 62%(44/47)、94. 58% (279/295)、0. 79; 96. 88% (62/64 )、94. 96% (264/278)、0. 86; 93. 33%(14/15),95. 37% (309/324 ),0. 61;92. 31%(24/26),97. 16%(308/317),0. 80s 91. 18% (31/34) ,99. 35% (307/309)、0. 92。

结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rpsL基因突变特征分析

结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rpsL基因突变特征分析

ABS TRACT: eo jciewa o u d r tn h h rce itc fr s e emu aini te t my i e itn l ia — Th be t st n e sa d t ec aa trsiso p L g n tt lS r po cn rssa tci cli Байду номын сангаас o l n
Ana y i n t e c r c e itc fr s g ne m u a i ns l ss o h ha a t r s i s o p L e t to
i t e t m y i e i t nc s l t s o yc b c e i m ub r ul s s nSrpo c n r s s a e i o a e fM o a t r u t e c o i
魏 淑 贞 , 秀芹 刘志 广 万康林 赵 , ,
摘 要 : 的 了解 我 国结 核 分 枝 杆 菌 ( cb c ru tbruoi,MTB r s 基 因突 变 特 征 及 其 与链 霉 素耐 药 的 相 关 目 My oat im u ec ls e s )p L 性, 并评 价 其 应 用 价 值 。方 法 对 3 2株 结 核 分 枝 杆 菌 临 床 分 离株 的 r s 基 因采 用 聚 合 酶 链 反 应 直 接 测 序 ( C - S 进 行 0 pL P RD ) 检 测 。 结 果 5 9株 对 I NH、 P S 、 MB 和 P RF 、 M E AS全 部 敏 感 ,pL 基 因 没 有 突 变 , 1株 对 S 敏 感 的 耐 药 株 有 6株 突 变 , rs 6 M S 敏 感 菌 株 突 变 率 为 5O ( / 2 ) 8 M . 0 6 1 0 。1 2株 S 耐 药 MT r s 基 因突 变 率 为 7 . 3 , 中 4 M B,p L 0 3 其 3位 密 码 子 赖 氨 酸 转 变 为 精 氨 酸 ( y4 Ar) 变 率 为 5 . O ; 8位 密 码 子 有 4种 突 变 类 型 , 变 率 为 1 . 8 ;6位 密 码 子 精 氨 酸 转 变 为 谷 氨 酰 胺 L s3 g 突 22 8 突 7 5 8 ( g 6 l) 变 率 为 0 5 。S 耐 药株 的 r s 基 因突 变 率 明 显 高 于 S 敏 感 株 的基 因突 变 率 , 者 之 间 的 差 异 有 统 计 学 Ar8 G n 突 .5 M pL M 两 意 义 , z 2 . 5 P< 00 。 结 论 r s 基 因突 变 与结 核 分 枝 杆 菌链 霉 素 耐 药 高度 相 关 , 中 L s3 g突 变是 主 要 突 变 类 Y :1 5 0 , .5 pL 其 y4 Ar

多色探针熔解曲线分析法评估结核分枝杆菌阳性患者对不同抗结核药物

多色探针熔解曲线分析法评估结核分枝杆菌阳性患者对不同抗结核药物

- 82 -31(5):1172-1175.[6] GU H,WANG Y,DU M,et al. Effectiveness of using mean corpuscular volume and mean corpuscular hemoglobin for beta-thalassemia carrier screening in the guangdong population of China[J]. Biomedical and Environmental Sciences,2021,34(8):667-671.[7] MANTHEI D M,HARRO D M,KEREN D F. Incorrect migration of hemoglobin after capillary electrophoresis software update complicates diagnosis of an infant with hemoglobin S/Beta+thalassemia[J]. The Journal of Applied Laboratory Medicine,2021,6(5):1371-1375.[8]宋琪玲,郭杨柳,何勇均,等. RDW 筛查地中海贫血诊断界值的建立及其与MCV、MCH、HbA 2联合筛查的价值[J].中国实验血液学杂志,2021,29(3):847-852.[9] MAJI S K,DOLAI T K,PRADHAN S,et al. Implications of population screening for thalassemias and hemoglobinopathies in rural areas of West Bengal, India: report of a 10-year study of 287,258 cases[J]. Hemoglobin: International Journal for Hemoglobin Research,2020,44(6):432-437.[10]刘利,余楚壬,李珊珊,等. α地中海贫血基因携带者709例红细胞参数、血红蛋白A 2及基因检测结果分析[J].广东医学,2021,42(8):1006-1008.[11]宋琪玲,郭杨柳,何勇均,等. RDW 筛查地中海贫血诊断界值的建立及其与MCV、MCH、HbA 2联合筛查的价值[J].中国实验血液学杂志,2021,29(3):847-852.[12]周亚丽,李平萍,杨焜,等.临界血红蛋白A 2人群的β地中海贫血检出情况[J].广西医学,2021,43(5):587-589.(收稿日期:2023-11-09) (本文编辑:冯乐乐)①泉州市疾病预防控制中心 福建 泉州 362000多色探针熔解曲线分析法评估结核分枝杆菌阳性患者对不同抗结核药物耐药性的诊断效能陈李晓①【摘要】 目的:分析多色探针熔解曲线分析法(MMCA)评估结核分枝杆菌阳性患者对利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼、喹诺酮耐药性的诊断效能。

探针熔解曲线技术检测结核杆菌耐药的研究

探针熔解曲线技术检测结核杆菌耐药的研究
s e q — F: 5 ’ - CGTTTC ACATCGCACGGG一 3 ’ ,I NH— i n h A9 4 - s e q — R: 5 ' - GGCTCGGGTCGAAGTCC一 3 ’ l I NH・ k a t G- s e q — F: 5 ’ 一 CGAGACGT T TC GGCGC 3 ’ ,I NH— k a t G— s e q R: ’5 ' - C CGT CCT T GGC GGT G ̄3 ’ }R F P ・ s e q — F l 5 ' - C GGGAGC GGA T GAC CAC - 3,R - F P —
实验数据采用S P S S 1 3 . 0 软件进行统计分析,以绝对浓度法检测结
果为判断标准,计算高分辨率探针熔解 曲线法的敏感度和特异度,两 种方法检测结果的差异性卡方检验判别,两种方法检测结果的一致性
用K a p p d  ̄验判别 。 2结 果
培养基斜面,每管接种量为1 0 。 。 m g 。异烟肼和利福平药物浓度分低高
两种浓度 ,分别是0 . 2 、1 r t g / m L I 5 0 、2 5 0  ̄ g / m L 。
1 I 3样本 制备及核酸提取 取罗 氏培养基上 生长的结核分枝杆 菌 ,用2 2 S WG 标准接种环 收集 细菌 1 环 ,并悬在2 5 0 p . L 结核杆 菌D N 取液中 。封 口膜封 口,9 9℃
I NH— a h p C— s e q - R: 5 ’ - CGTCA CTGGTGATAGTGGTGA一 3 ’ l I NH— i n h A・ s e q - F: 5 ’ 一 AGCGCGACAT ACCTGCTG一 3 ’ ,I NH —
i n h A・ s e q ・ R :5 CCGATCCCCCGGTTTCC一 3 l I NH— i n h A9 4 -

探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变

探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变

探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变张婷;付军;王国治;陈保文;杨蕾;卢锦标;许晔;李庆阁【摘要】目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MehProTB/SL的分析性能以及临床性能.方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以及含常见耐药突变的质粒以不同突变比例混合考察试剂盒检测不均一耐药样本的能力,并使用23株非结核分枝杆菌标准株考察试剂盒的分析特异性,最后使用241份临床分离株对试剂盒进行临床评价.结果该试剂盒可以将9种耐药相关突变与1种野生型多态性与野生型进行区分.可以检测到低至5个拷贝的野生型基因组DNA.当突变比例为30%或更高时,试剂盒可以将其与野生型进行区分.23种非结核分枝杆菌的结果显示该试剂盒有良好的特异性.和比例法药敏试验进行对比,该试剂盒的临床灵敏度为卡那霉素90.0%(9/10),阿米卡星80.0%(8/10),卷曲霉素85.7%(6/7);特异性为卡那霉素98.8%(85/86),阿米卡星98.8%(85/86),卷曲霉素96.6%(86/89).试剂盒检测结果与测序结果一致.结论该试剂盒灵敏度高、特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌注射类二线药常见的耐药突变,有望应用于临床.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2015(031)005【总页数】6页(P412-417)【关键词】结核分枝杆菌;注射类二线药;耐药突变;探针熔解曲线法【作者】张婷;付军;王国治;陈保文;杨蕾;卢锦标;许晔;李庆阁【作者单位】厦门大学生命科学学院“细胞应激生物学”国家重点实验室,分子诊断教育部工程研究中心,厦门 361105;厦门大学生命科学学院“细胞应激生物学”国家重点实验室,分子诊断教育部工程研究中心,厦门 361105;中国食品药品检定研究院结核病疫苗室,北京 100050;中国食品药品检定研究院结核病疫苗室,北京100050;中国食品药品检定研究院结核病疫苗室,北京 100050;中国食品药品检定研究院结核病疫苗室,北京 100050;厦门大学生命科学学院“细胞应激生物学”国家重点实验室,分子诊断教育部工程研究中心,厦门 361105;厦门大学生命科学学院“细胞应激生物学”国家重点实验室,分子诊断教育部工程研究中心,厦门 361105【正文语种】中文【中图分类】R378我国结核分枝杆菌的耐药情况严重,耐药率高,给结核病的预防和治疗带来严峻挑战。

探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用研究

探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用研究

探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用研究宋戎;缪家文;孙春红;朱亮;王捷婷【期刊名称】《系统医学》【年(卷),期】2024(9)1【摘要】目的研究探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用价值。

方法选取2020年1月—2021年3月镇江市第三人民医院收治的378例肺结核患者为研究对象,依次完成传统罗氏固体药物敏感性检测(比例法)、探针熔解曲线技术检测常用的6种药物耐药结果,包含利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星、阿米卡星,和比例法进行对比,计算探针熔解曲线技术检测6种药物的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率与约登指数。

结果与比例法作比较,熔解曲线技术检测利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、约登指数分别为91.70%、98.10%、61.10%、99.70%、97.90%、0.898;异烟肼是87.90%、94.20%、59.20%、98.80%、93.65%、0.821;乙胺丁醇是87.50%、97.03%、38.89%、99.72%、96.83%、0.845;链霉素是91.30%、98.19%、87.50%、98.79%、97.35%、0.895;氧氟沙星是94.74%、98.89%、81.82%、99.72%、98.68%、0.936;阿米卡星是80.00%、99.46%、66.67%、99.73%、99.21%、0.795。

结论探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中应用,具有较高敏感度及特异度,有利于临床早期识别耐药现象。

【总页数】4页(P87-90)【作者】宋戎;缪家文;孙春红;朱亮;王捷婷【作者单位】镇江市第三人民医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R4【相关文献】1.探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变2.结核病Gene Xpert快速诊断及利福平耐药菌株筛查的临床应用研究3.探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素耐药突变4.荧光PCR探针熔解曲线法与微孔板法检测MTB耐药性的临床应用比较5.高分辨熔解曲线技术在筛查21羟化酶缺乏症患者热点基因突变中的临床应用价值因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

实时PCR探针熔解曲线技术在检查耐多药结核的临床应用价值探讨

实时PCR探针熔解曲线技术在检查耐多药结核的临床应用价值探讨

实时PCR探针熔解曲线技术在检查耐多药结核的临床应用价值探讨摘要】目的研究实时PCR探针熔解曲线技术在检查耐多药结核的临床应用方法,并与传统的结核菌培养及药敏试验作对比分析,从而得出其应用价值评价。

方法回顾性分析我科2012年1月至2016年4月收治的50例耐多药结核病人的药敏检查结果。

51例病人均做了实时PCR探针熔解曲线技术的药敏试验,其中11例病人还同时作了传统的结核菌培养及药敏试验。

以结核菌培养及药敏试验作为金标准,并对两种检查方法作对比分析,得出其应用价值评价。

结果耐INH、RFP、EMB、SM、OFX共12例,耐INH、RFP共21例,耐INH、RFP、EMB共15例、单耐INH者2例,单耐RFP者1例。

11例作两种检测方法的药敏结果符合率为97.22%。

结论实时PCR探针熔解曲线技术可快速、灵敏、特异检测结核耐药。

【关键词】结核杆菌;耐药;PCR;探针熔解曲线技术Real time PCR probe melting technology in multi drug resistant tuberculosis in the clinical value of examinationIANG Tai, YANG Ren-huiThe Third Affiliated Hospital of Guizhou Medical University in Guizhou Province, Tuyun City: 558004[Abstract]ObjectiveTo study real-time PCR probe melting curves in check resistantmulti drug tuberculosis clinical application method, and the results were comparedwith the traditional bacterial culture and drug sensitivity test, then draws a conclusion that the application of value evaluation.Methodsthe results of drug sensitivity test in50 patients with multi drug resistant tuberculosis were retrospectively analyzed in our department from January 2012 to April 2016. 51 patients per capita do the drug sensitivity test of real-time PCR probe melting curves, which 11 patients also for the traditional bacterial culture and drug sensitivity test. To bacterial culture and drug sensitive test was used as the gold standard and on the two kinds of inspection methods as comparative analysis, it is concluded that the application of value evaluation. Resultsresistant to INH, RFP, EMB, SM, OFX a total of 12 cases, 21 cases of INH, RFP,, INH, RFP, EMB a total of 15 cases, 2 cases of single INH, 1 cases of single resistant RFP cases. The results of drug sensitivity test of 11 cases were 97.22% and two. Conclusionreal time PCR probe melting curve technology is fast, sensitive and specific detection of drug resistant tuberculosis.[Key words] Mycobacterium tuberculosis; drug resistance; PCR; probe melting technology【中图分类号】R473 【文献标识码】A 【文章编号】2096-0867(2016)08-145-022010年全世界新发肺结核880万,每年死亡约300万人;我国结核病发病人数约130万,每年约死亡25万人。

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ZHANG a g d n Z Xin — o g, HANG n , U in j n, EN i i , Ti g NI Ja —u W Hu— n HU iy I Qi g g x S — u,A n — e
( ime ne o sa eC n r la d Pr v nin,Xi re 6 0 5.Ch n ) X a nCe trf rDie s o to n e e to an n 3 1 0 ia
中 ,0 13份 标 本 发 生 突 变 且 与测 序 结 果 一 致 ,8份 标 本 存 在 杂 合 信 号 ,7份 标 本 无信 号 。3 1 1 7份 有 药敏 结 果 的标 本 中 , 感 的标 敏
本用探针熔解 分析法所得结果均 为野生型 , 药的 1 耐 6份 标 本 仅 检 测 到 7份 突 变 , 有 9份 耐 药 的 标 本 实 时检 测 为 野 生 型 , 另 与 测 序 结 果 相 符 。结 论 探针 熔 解 分 析 技 术 特 异 性 好 , 以 快速 、 确 地 检 测 结 核 分 枝 杆 菌 链 霉 素 耐 药 常 见 突 变 , 望 直 接 用 可 准 有
H3 R 7 v基 因 组 DNA 梯 度 稀 释 进 行 灵 敏 度 考 察 , 后 对 9 6 结 核 分 枝 杆 菌 临 床 分 离株 ( 中 3 最 0株 其 7份 有 药物 敏 感 性 试 验 结 果 )
的链 霉 素 耐 药 相 关 基 因进 行 检 测 , 对 突 变 菌 株 、 药敏 结 果 的 菌 株 以及 疑 似 杂 合 的 菌 株 进 行 测 序 分 析 。结 果 标 准 盘 评 价 并 有 结 果 证 实该 体 系 特 异 检 测 H3 R 7 v结 核 分 枝 杆 菌 。分 析 灵 敏 度 为 5 5 ~ 0拷 贝 每 反 应 。在 所 有 的 9 6份 结 核 分 枝 杆 菌 培 养 标 本 0
中 国 人 兽 共 患 病 学 报
2 1, 2 ( ) 01 7 1
Ch ne e J ur alo o s s i s o n f Zo no e 5 3
文章 编 号 :0 2—2 9 2 1 0 —0 5 —0 10 6 4( 01 ) 1 0 3 5
探 针 熔 解 分 析 法 快 速 检 测 结 核 分枝 杆 菌 链 霉 素 耐 药 突 变 *
ABS TRACT : h T e pur s hepr s nts udy was o e a u e t iiy ofp o etn n l i ( po e oft e e t t v l at he utlt r be m li g a a yss PM A ) i a d d t c n r pi e e — ton ofs r pt m y i ess a tm u a i ns i yc b t r u ub r ul ss ( TB) T hem ehod w a is v l at d by a a y i i te o cn r it n t to n M o ace i m t e c o i M . t sfr te a u e n l zng a r f r nc ne o a n n t nd r n—ube c ou yc e e e e pa 1c nt i i g 37 s a a d no t r ul s m oba t ru (NT M ) iolt s T h e uls ho e ha PM A c l ceim s ae e r s t s w d t t ou d
张 向 东 , 张 婷 。 牛 建 军 , 慧 欣 胡 思 玉 。 李 庆 阁。 , 温 , ,
摘 要 : 的 评 价 探 针 熔 解 分 析 法 快 速 检 测 结 核 分 枝 杆 菌链 霉 素 耐 药 突 变 的应 用 价 值 , 临 床 应 用 提 供 依 据 。方 法 目 为
首 先 用 中 国药 品生 物制 品检 定 所 提 供 的含 3 7份 标 准 非 结 核 分 枝 杆 菌 的 标 准 盘进 行 特 异 性 评 价 , 后 将 野 生 型 结 核 分 枝 杆 菌 然
于临床标本链霉 素耐药性检测。
关键词 : 针熔解分析 ; 核分枝杆菌 ; 霉素 Байду номын сангаас 药突变 探 结 链 耐
中国分类号 : 1 R15 文 献标 识 码 : A
Pr be m e tng a a y i o a d d t c i n o t e t m y i — e it nt o li n l ss f r r pi e e to f s r p o c n r ss a m u a i ns i y o a t r u t b r u o i lni a s l t s t to n M c b c e i m u e c l ss c i c lio a e

s cfc ly d t c pe iia l e e tTB c p ne NT M tan,w he e st sha m pa ton is s cfct . T hea l ia e stviy wass u ex e to sri r a hi d no i c t pe iiiy naytc ls n ii t t d— id b pu iid ge om i N A e e e e s r i 37 d t e u t ho e ha w n t - 0 c pis pe e c i T B e y rfe n cD ofa r f r nc t an H Rv an her s lss w d t tdo o 5 5 o e rr a ton ofM ge m i N A ou d be r pe t dl e e t d. T hec i c lp r o m a c a v u e nayzn 06 ln c liolt s f ps no cD c l e ae y d tce lnia e f r n e w s e alat d by a l i g 9 ci ia s a e or r L a r ut tons The r ulss w e 0 s m p e v ut ntr s t nd r sm a i . es t ho d 1 3 a l sga e m a e uls,w hih we ei o o d nc t e ue ig a l i c r n c nc r a e wih s q ncn nayss
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