丹连消痤散外用对痤疮模型兔耳组织IL-6 IL-8表达影响的实验研究

学研究进展[J].中国中医急症,2018,27(1)=178-
181,188.
[9]Mohsenikia M,Farhangi B,Alizadeh A M,et al.Thera­
peutic effects of dendrosomal solanine on a metastatic
breast tumor[J].Life Sci,2016,148(7)：260-267.
[10]Wang Q,Zhang L,Yuan X,et al.The Relationship be­tween the Bel-2/Bax proteins and the mitochondria-mediated apoptosis pathway in the differentiation of adi­pose-derived stromal cells into neurons[J].PLoS One, 2016,11(10):e0163327.
(收稿日期：2018-07-24)
丹连消座散外用对座疮模型兔耳组织IL-6 IL-8表达影响的实验研究
贾丽梅，谢碧
（黑龙江省中医药科学院•黑龙江哈尔滨150036）
摘要目的：观察丹连消痙散外用对痙疮模型兔耳组织病理变化及IL-6JL-8表达的影响。

方法：将48只兔随机分为6组，正常对照组，模型组，阳性对照组（克痙隐酮凝胶）和丹连消痙散高、中、低剂量组，每组8只；除正常对照组外其余5组造模成功后进行相应干预，连续给药14d。

观察兔耳局部皮肤病理变化及免疫组化法检测耳组织IL-6和IL-8的表达。

结果：各给药组兔耳局部病理变化较模型组均明显减轻。

与正常组相比，其余5组兔耳组织IL-6JL-8表达均显著提高；与模型组相比，阳性对照组与丹连消痙散3剂量组而组织IL-6JL-8表达显著降低，并且中剂量组效果最为显著,IL-8变化与阳性组比较差异有统计学意义（P<0.05）。

结论：丹连消痙散外用可有效减轻兔耳痙疮病理变化，降低IL -6.IL-8表达是其部分作用机制。

关键词痙疮;丹连消痙散;克痙隐酮凝胶;病理变化；白细胞介素6；白细胞介素8；兔
Experimental Study on Effects of Danlian Xiaocuo Powder(丹连消座散)External Application on IL-6and IL-8Expressions in Rabbits'Ears with Acne
JIA Limei,XIE Bi
(Heilongjiang Academy of Chinese Medical Sciences,Harbin,Heilongjiang150036)
ABSTRACT Objective:To observe the effects of Danlian Xiaocuo Powder on pathological changes of rabbits，ears with acne and IL-6,IL-8expressions in ears.Methods:48Rabbits were randomly divided into6 groups,normal,model,positive and Danlian Xiaocuo Powder low,middle,high dose groups,the other5 groups,except the normal group,were given intervention for14days after successful modeling.Observing the pathological changes of the models'ears and detected the expressions of IL-6and IL-8in rabbits'ears with acne by immunohistochemical method.Results:To compare with model group,the pathological changes of each medicating group rabbits'ears with acne were alleviated significantly.To compare with the normal group,the expressions of IL-6and IL-8in the other five groups rabbits'ears were significantly increased,compared with the model group,the expressions o£IL-6and IL-8in the three dose o£Danlian Xiaocuo Powder groups and the positive control group were significantly decreased,and the most significant was seen in the middle-dose group, there was significant difference between the middle dose group and positive group in IL-8expression(P< 0.05).Conclusion:Danlian Xiaocuo Powder external application can effectively reduce the pathological chan­ges o£rabbits'ears with acne,lowering the expressions of IL-6and IL-8in the part of mechanism.
Key words acne；Danlian Xiaocuo Powder；Keto Ketone Gel；pathological changes；11-6；IL-8；rabbit
座疮是皮肤科常见的慢性、炎症性疾病⑴，发病机制复杂，研究表明与多种炎症因子相关0。

丹
基金项目：哈尔滨市科学技术局研究项目（2017RAXQJ083）连消座散为黑龙江省中医药科学院皮肤科研制的治疗座疮的有效外用之剂，临床应用效果良好⑶。

本文观察丹连消座散外用对座疮模型兔耳IL-6JL -8表达的影响，探讨丹连消瘗散外用治疗瘗疮的
作用机制。

1实验材料
1.1实验动物健康12周龄雄性新西兰大白兔48只,体质量
2.5-3kg,由哈尔滨市松北区翔林养殖场购入,动物生产许可证编号SCXK（黑）2016-002。

单只分笼饲养，避免抓咬撕挠，损坏兔耳。

于黑龙江省中医药科学院宾西动物实验室适应性饲
养1周后开始进行实验，温度18-25湿度35% -40%，饲以兔粮、干草、干白菜叶，自由饮水，自由饮食。

1.2实验药物丹连消座散:丹参、黄苓、双花、天花粉、大黄、黄柏、黄连、苦参、姜黄、白芷、白及按4: 3：3：3：2：4：3：3：3：2：1比例，净选、水洗、烘干，经过超微粉碎，包装于闭封的铝箔袋中，每袋10g,钻60照射灭菌,即得；由黑龙江省中医药科学院制剂
室制备提供。

克座隐酮凝胶:安徽安科生物工程集团股份有限公司，国药准字Z20040150。

1.3主要试剂与仪器瘗疮丙酸杆菌:广东省微生物菌种保藏中心,GIM1.162；兔抗多克隆一抗:北京博奥森生物技术有限公司;二抗、DAB显色剂:北京中山生物技术有限公司。

苏木素、伊红溶液:北京中杉金桥生物技术有限公司。

厌氧培养袋:青岛高科技工业园海博生物技术有限公司;2135型切片机:德国莱卡;3000显微摄影成像系统;美国Moti-
cam；上海一恒电热恒温箱;医用微波炉。

2实验方法
2.1实验动物分组及造模给药48只实验兔在适应性饲养1周后将其随机分成6组，每组8只，分别为:正常组、模型组、阳性对照组（克座隐酮凝胶）、
丹连消座散外用高、中、低剂量组。

参照Kligman 法⑷复制兔耳座疮模型。

除正常对照组外的其余
5组进行造模,用玻璃棒蘸取50%油酸溶液涂抹兔双耳内侧凹口2cmx2cm范围，每日1次,每次约0.5mL,连续两周。

另外，从造模的第5天开始，在涂抹油酸溶液后,于兔耳皮下注射座疮丙酸杆菌菌液50|jiL/每单耳（浓度：6xl07个/mL）,隔日1次,直至造模结束。

造模第14天对兔耳瘗疮病变组织活检，镜下确认造模成功后开始给药干预。

模型组涂抹生理盐水；阳性对照组涂抹克座隐酮凝胶;丹连消座散外用中剂量组用量为0.62g/kg（按体质量70kg成人等效剂量折算），高剂量组用量为中剂量组的2倍，低剂量组用量为中剂量组1/2。

连续用药14d。

2.2观察指标及测定末次给药第2天，将兔耳耳背剃毛后，耳缘静脉一次性快速注射10mL空气处死实验动物，迅速剪下造模和给药范围的兔耳组织,保存于甲醛溶液中。

2.2.1座疮兔耳病理变化裸眼观察实验过程中兔耳毛囊口的扩张和向外突出的程度。

观察毛囊口的大小、毛细血管粗细;脂栓、丘疹和脓疱个数等变化并做详细记录。

取兔耳组织常规石蜡包埋，连续切片，片厚6“m,HE染色，显微镜下观察。

2.2.2座疮兔耳组织IL-6JL-8表达免疫组化法检测。

切片常规脱蜡至水,孵育、PBS洗涤后进行微波修复,修复完毕后自然冷却至室温;先滴加一抗,置于4T冰箱中过夜，再以PBS充分洗涤后滴加二抗，以37七孵育30min后充分洗涤。

使用DAB显色5min,以蒸馆水洗涤后苏木素复染1min。

常规脱水透明，以中性树胶封片,于镜下观察㈤。

影像图片由Motic3000显微摄影系统于400倍下摄片，病理图像由Image-pro plus6.0系统进行分析，并以积分光密度（I0D）代表蛋白相对表达量,其中积分光密度（I0D）=阳性面积X平均光密度，每组随机分析相同部位6个高倍镜视野，取其均值代表该照片的相对表达量。

2.3统计学乞析数据均采用SPSS22.0软件进行分析,数据以G±s）表示,组间数据采用t检验。

P <0.05提示组间差异具有统计学意义。

3实验结果
3.1各组兔耳病理变化观察
肉眼观察结果:正常组兔耳软而薄，兔耳内侧呈健康的淡粉红色，兔耳内毛细血管清晰可见，毛囊开口方向一致，毛囊口分布均匀、细密、平整;模型组兔耳毛囊开口增大，有明显堵塞的脂栓，皮肤表面粗糙隆起，高低不平，兼有散在丘疹、脓疱;其余各组较模型组的脂栓、丘疹、脓疱不同程度减少，毛囊口略缩小、变平。

组织学观察结果:正常组兔耳组织学未见明显异常，未见炎性细胞，表皮各层界限清晰、完整，角质层平滑;模型组兔耳角质层明显增生，毛囊开口过度角化，增大明显，周围略有水肿,伴有炎性细胞浸润；阳性对照组与模型组比较角质层增生减轻，毛囊口角化减轻,仅有少量炎性细胞浸润;丹连消座散外用高剂量组上皮增生与毛囊口角化减轻，水肿基本消退,炎性细胞浸润减轻;中剂量组上皮略见增厚，毛囊开口角化大幅减轻,周围未见明显炎性细胞浸润，未见水肿;低剂量组上皮增厚，毛囊、皮脂腺增粗，周围炎细胞浸润与水
肿仅较模型组轻微。

见图1
正常组 模型组 阳性对照组
斗斗-
丹连消瘗散高剂量组
各组兔耳组织病理变化的光镜观察（HE, x40）
丹连消瘗散低剂量组
图1
3.2 各组兔耳组织IL-6、IL-8表达的免疫组化
检测结果 与正常组比较，其余5组兔耳组织IL -
6JL-8表达均明显提高，且有极显著差异（P < 0.01）；与模型组比较，其余4组兔耳组织IL-6.IL
-8表达均明显下降，且有极显著差异（P < 0. 01）。

丹连消瘗散中剂量组IL-6下降明显，各给药组之 间均无显著差异。

（P>0.05）；中剂量组使IL _ 8 下降最显著，且与阳性对照组之间有显著差异（P <
0.05）,与低剂量组有极显著差异（P < 0. 01）,但与
高剂量组无显著差异（P > 0. 05）,见表1。

注:与正常组比较*F<0.05, * *F<0.01；与模型组比较,#F<0.05,##F<0.01；与
表1各组兔耳组织IL-6JL-8表达的免疫组化
测定结果的比较G±$,IOD 值）
组别动物数（只）
IL-6IL-8正常组8641.96 ±75.05
830.68 ±89.07
模型组81988.06 ±145.37 **2127.27 ±187.53 **
阳性对照组8964.59 ±128.80蟲1173.70±132.56^a
丹连消瘗散低剂量组81086.49 ±112.98蟲
1286.96 ±100.9仇
丹连消座散中剂量组8948.83 ±102.53蟲1012.88±80.51^a
丹连消座散高剂量组
8
983.79 ±117.71 蟲
1088.59±91.20品
中剂量组比较,AF <0.05
4讨论
外用药是治疗座疮的重要组成部分之一。

外
用药具有毒副作用小、方便携带、药物可直达病所、 依从性高等特点，长期以来广泛应用于皮肤科中。

本实验所选用的克座隐酮凝胶是临床治疗座疮的
常用药，其主要成分为丹参酮辅以甲氧节喘等，它 具有抗角化、溶解脂栓的作用，并具有一定的抗炎 效果,临床疗效确切、稳定同。

但部分患者使用后
出现皮肤敏感或刺痛等情况，且克瘗隐酮凝胶价格
较为昂贵，因此研究开发更为安全、有效、价格低廉 的外用药成为目前治疗座疮的主要任务之一。

中医学认为，座疮的病因病机多以风湿热邪内
外相合、气血凝滞肌肤所致，治疗应以清热利湿、解 毒消肿、凉血散结为法。

依照《理瀟骈文》中“外治 之药亦即内治之药，所异者法尔……”的记载，本院
皮肤科多年来以丹连消座散外用治疗座疮。

丹连 消瘗散由丹参、黄连、天花粉、黄柏、白芷、苦参、白
及等组成，其中君药丹参、黄连活血祛瘀、清热泻
火;其臣药黄柏、苦参泻火解毒、燥湿止痒;其佐药 白芷、天花粉消肿散结，燥湿敛疮，诸药共奏，以收
全功,临床应用多年,取得了良好的临床效果。

IL _6和IL-8主要由单核-巨噬细胞产生，可
以介导天然免疫，又被称为前炎症细胞因子，是启
动固有性免疫应答反应的关键。

其中IL-6广泛地 参与各类炎症反应，因其在急性炎症期可以显著升
高，也被认为是许多炎症性疾病的促发剂°】，而IL
-8作为一种趋化因子，在形成炎症损害中有重要 作用囘。

在I -IV 级瘗疮患者的血清中，均可发现 IL-6和IL-8含量显著上升⑼，显示两种炎症因
子参与了座疮的发生与皮损的形成，两者表达水平
的高低可反应座疮的严重程度。

本文实验结果显示丹连消座散外用高、中、低
剂量3组均可使瘗疮兔耳组织IL-6JL-8表达显 著下降，可有效减轻炎症。

IL-6表达3个剂量组 与阳性对照组克座隐酮凝胶效果相当，IL - 8表达
丹连消座散外用中剂量组下降程度显著优于克瘗
隐酮凝胶。

表明丹连消座散外用可明显降低瘗疮局部组织炎性因子的表达，为其治疗座疮提供了实验室依据。

参考文献
[1]赵辨.中国临床皮肤病学[M].南京:江苏科学技术出
版社,2010:1165.
[2]吴伊旋，沈惠风.细胞因子在座疮发病机制中的作
用[J].中国麻风皮肤病杂志,2007,33(6)：496-49& [3]贾丽梅，陈雨佳.丹连消瘗面膜联合中药内服治疗聚
合性瘗疮的临床观察[J].中国中医药科技,2016,23
(4)：478-479.
[4]苗明三，付珍娜，田硕.瘗疮动物模型制备规范(草
案)[J].中华中医药杂志,2018,33(1)：197-200. [5]张伟，周永梅,陈明城，等.快速石蜡切片法在免疫组
化染色中的应用[J].中国组织化学与细胞化学杂志,
2011,20(4):372-373.
[6]蒋兴宁.克座隐酮凝胶治疗寻常瘗疮疗效观察[J].世
界中西医结合杂志,2011,6(11):959-961.
[7]张小卿，顾炜，朴美淑，吴景东.瘗疮合剂对兔耳座疮
模型动物血清中IL-la、IL-6影响的实验研究[J].
中国美容医学,2016,25(8)：47-50.
[8]朱文元.瘗疮[M].南京：东南大学出版社,2004：
61,96.
[9]林新瑜，罗旭松，董巍，等.座疮患者血清IL-la.IL-
6、IL-8和TNF-a水平的检测分析[J].医学科技，
2002,28(3)：10-12,
(修回日期：2019-03-04)
茯苓多糖对db/db小鼠肾脏保护作用及其
对P38MAPK/PPAR-了信号通路的影响
李佳丹I,周迪夷2
(*浙江中医药大学第四临床医学院,杭州市第一人民医院•浙江杭州310053
2浙江省中西医结合医院•浙江杭州310003)
摘要目的:探讨茯苓多糖对db/db小鼠的肾脏保护作用及p38丝裂原活■化蛋白激酶(p38MAPK)/过氧化物酶体增殖物激活受体-y(PPAR-y)信号通路的调控作用。

方法：6只C57BL/KsJ-db/+小鼠作为正常对照组,28只db/db小鼠随机分为模型组、茯苓多糖低剂量组、茯苓多糖高剂量组、阳性药组(厄贝沙坦)，每组6只，连续给药8周。

每2周检测1次FBG；8周末，眼内眦取血，生化法检测血清肌肝(SCr)和尿素氮(BUN)；麻醉处死，取双肾，称重，计算肾脏指数；HE染色，光镜观察肾组织病理变化；
Western blot法检测肾组织p-p38MAPK、p38MAPK和PPAR-了的表达。

结果：与正常组相比，模型组小鼠FBG、血清SCr及BUN水平、肾脏指数升高(P<0.05)；与模型组相比，茯苓多糖组小鼠FBG水平显著降低、血清SCr及BUN水平、肾脏指数降低(P<0.05)；HE染色结果显示模型组小鼠肾脏出现明显病理损伤，茯苓多糖组能改善小鼠肾脏损伤；Western blot结果显示随着茯苓多糖浓度的升高，肾组织p-p38MAPK水平逐渐降低,PPAR-号水平逐渐升高。

结论:茯苓多糖能明显改善db/db小鼠肾脏损伤，其机制可能与p38MAPK磷酸化受到抑制及PPAR-y通路被激活有关。

关键词茯苓多糖;糖尿病肾病；血糖；肾功能；病理变化;p38丝裂原活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体-号信号通路;db/db小鼠
Renal Protection Action of Pachymaran and Effects on
p38MAPK/PPAR-y Signaling Pathway in db/db Mice
LI Jiadan1,ZHOU Diyi2
(1The Fourth Clinical Medical College of Zhejiang Chinese Medicine University,Hangzhou First People*s
Hospital,Hangzhou,Zhejiang310053Hangzhou Red Cross Hospital,Hangzhou,Zhejiang310003) ABSTRACT Objective:To observe the renal protection action of Pachymaran and regulation effects on p38 mitogen-activated protein kinase(p38MAPK)/peroxisome proliferator-activated receptor-gamma(PPAR-
7)signaling pathway in db/db mice.Methods:Six male 基金项目：国家自然科学基金(8170150267)C57BL/KsJ-db/+mice were used as normal control 通讯作者:周迪夷,E-mail：zdiyiredcross@ group.,28male db/db mice were randomly divided into。