东莞市H1N1亚型猪流感抗体血清学调查

2018年第7期猪流感（Swine influenza，SI）是由猪流感病毒(Swine in-
fluenza virus，SIV)引起猪的急性呼吸道传染病，是一种人畜
共患传染病。

猪流感病毒属于正黏病毒科，A型流感病毒属。

猪群中流行的猪流感毒株主要是经典型H1N1、类人型
H3N2、类禽型H1N1，另外H1N2、H1N7、H3N6等亚型的毒株
也有报道。

目前，世界广泛流行的猪流感血清型主要是
H1N1、H1N2和H3N2，其中，猪群中H1N1亚型猪流感流行
最为普遍，全球有25%的猪群受到过H1N1亚型猪流感病毒
的感染。

猪感染猪流感病毒以后主要的临床特征是突发、高
热、咳嗽、呼吸困
难、
高发病率、低死亡率。

猪流感在单独感染
的情况下，死亡率很低，如果是继发或混合感染其他呼吸道
细菌、病毒感染可以使猪的病情加重，死亡率增加，从而引起
养猪业的重大经济损失。

世界动物卫生组织（OIE）将猪流感
列为法定报告动物疫病，我国
将其
列为三类动物疫病。

1918
年首先在美国报告了猪流感的疫情，随后世界各大洲均有本
病的发生和流行。

2009年3月，墨西哥发生了人感染H1N1
亚型猪流感疫情，并很快传入多个国家，刚开始世界卫生组
织（WHO）称为人感染猪流感，后来我国将其更名为“甲型
H1N1流感”。

由于猪是猪流感、禽流感和人流感病毒的“混合
器”，猪流感也可以传染给人，在A型流感的流行、传播和病
毒遗传变异中起到很特殊的作用，因此猪流感在公共卫生中
具有很重要的意义。

为了掌握H1N1亚型猪流感在东莞市的
流行情况，在2015~2017年在东莞市猪养殖场采集猪血清进
行调查，现将调查结果报告如下。

1材料与方法
1.1.1被检血清2015~2017年采自东莞市猪养殖场，共
937份。

采用猪前腔静脉采血，3000r/min,分离出血清，-20℃
保存，备检。

1.1.2试剂H1N1亚型猪流感抗体ELISA试剂盒，购自加
拿大Biovet公司。

1.1.3仪器设备Sunrise酶标仪购自奥地利Tecan公司，移
液器购自eppendorf公司。

1.2.1用洗涤液1:10稀释待检血清。

按照顺序依次加入
50μL的阳性、阴性对照血清和稀释的血清，封板，室温
（23±2℃）下孵育1h。

1.2.2弃去孔内所有液体，每孔加入300μL的洗涤液进行
泡洗，重复洗板4次，最后一次在吸水纸上拍干孔内液体。

1.2.3每孔加入50μL工作浓度的单克隆抗体，封板，室温
（23±2℃）下孵育15min。

弃去孔内所有液体，上述方法洗
板。

1.2.4每孔加入50μL工作浓度的HRP酶标二抗，封板，室
温（23±2℃）下孵育1h。

弃去孔内所有液体，弃去孔内所有
液体，上述方法洗板。

1.2.5每孔加入100μL的底物显色剂，室温（23±2℃）下避
光孵育10min。

1.2.6每孔加入100μL的终止液，15min内在450nm波长
下读取吸光度值。

1.2.7抑制率的计算：抑制率（%）=[1-(样品OD值÷阴性对
照平均值)]×100
1.2.8结果判定
阴性标准对照血清的OD平均值必须大于0.8，而且阳
性标准对照血清的抑制率必须大于85%，试验结果成立。

当
样品的抑制率大于或者等于30%，判为H1N1亚型猪流感病
毒抗体阳性；当样品的抑制率小于30%，判为H1N1亚型猪
流感病毒抗体阴性。

2结果
2015~2017年共检测猪养殖场点个次68个，937份猪
血清，抗体阳性数411份，抗体阳性率为43.86%，其中
2015~2017年的抗体阳性率分别为62.83%、57.08%、
26.06%，详细结果见表1。

年度抗体阳性率，有显著的差异，东莞市H1N1亚型猪流感抗体血清学调查陈盛文1，潘杰2，陈丽萍1，柳小强1，王自强2，张险朋2★
（1.广东省东莞市长安镇农业技术服务中心，广东东莞523846；2.东莞市动物疫病预防控制中心，广东东莞523086）摘要：为了解东莞市猪群感染H1N1亚型猪流感病毒的情况，2015~2017年在东莞市猪养殖场采集猪血清937份，采用ELISA方法进行H1N1亚型猪流感抗体检测，抗体阳性数411份，抗体阳性率为43.86%，其中2015~2017年的抗体阳性率分别为62.83%、57.08%、26.06%。

结果表明，东莞市养殖场的猪群普遍存在H1N1亚型猪流感病毒的感染，分析3年的感染抗体阳性率，2015~2017年有下降的趋势可能与猪流感流行的毒株有关。

关键词：H1N1亚型猪流感；血清学；抗体；ELISA
DOI:10.3969/J.ISSN.1671-6027.2018.07.022
作者简介:陈盛文(1979~),女,广东省云浮市人,兽医师,从事动
物疫病防控工作。

★通讯作者
试验研究
33
2018年第7期从2015~2017年，H1N1亚型猪流感病毒抗体有下降的趋势，趋势图（见图1）。

表12015-2017年东莞市H1N1亚型猪流感病毒抗体
检测结果
图12015~2017年东莞市H1N1猪流感抗体阳性率趋势图3讨
论
根据试验结果，2015~2017年东莞市H1N1亚型猪流感抗体的阳性率为43.86%，由于东莞市猪养殖场的猪群均未免疫猪流感疫苗，所以试验结果表明东莞市的猪群存在H1N1亚型猪流感的感染或曾经感染。

陈樱等在2009~2013年对广西11个地级市的猪群进行血清学调查，H1N1亚型猪流感的抗体阳性为20.68%；黄秉政等在2012年2月至2013年5月，对来自山东省规模化猪场进行H1N1亚型猪流感血清学调查，抗体阳性率为33.31%；施蔡培等在2011~2013年对上海崇明地区规模猪场猪流感血清学调查，H1N1亚型猪流感抗体阳性分别为40.13%、40.24%和48.91%。

上述地区的调查结果H1N1亚型猪流感的抗体阳性率有所差异，但结果都表明，猪群普遍存在H1N1亚型猪流感病的感染或曾经感染。

猪的上呼吸道上皮细胞同时具有α-2,3和α-2,6的唾液酸受体分子，其中α-2,3是人流感病毒的受体，α-2,6是禽流感病毒的受体，所以猪是人、猪、禽流感病毒的共同宿主，是不同流感病毒的“混合器”，很多新型的流感病毒都是在猪体内混合产生。

所以，做好猪流感的防控不仅在降低畜牧业中经济损失具有很大作用，
在公共卫生中也具有很重要的意义。

做好猪流感的防控，（1）改善猪场的养殖环境，降低饲养密度，做好猪舍的通风，定期对环境进行消毒，提高猪群的免疫力；（2）生猪进行调运时加强检疫，发现猪群有流感症状，禁止猪群的调运；（3）加强猪流感的公共卫生的宣传，发现猪群有流感症状的发生及时上报，
做好监测，同时，饲养员或养殖场人员出现流感症状也禁入猪舍，
防止人的流感传给猪；（4）猪养殖场禁止同时饲养家禽，防止禽流感病毒传给猪。

目前，检测猪流感抗体的方法主要是酶联免疫吸附试验和血凝抑制试验，研究表明这两种方法的符合性较高。

血凝
抑制试验操作比较复杂，试验过程需要去除非特异性的物质，试验时间较长，抗原的效价和结果的判定受人为因素的影响，优点是血凝抑制的检测成本较低，不需要贵重仪器，适合基层的推广。

此次试验采用的是酶联免疫吸附试验方法，适合大规模样品的监测，用酶标仪读数，人为主观因素影响小，操作简便，试验时间短，缺点是采用商品化试剂盒，检测的成本较高。

自从2009年暴发甲型H1N1流感以来，猪流感的研究已经得到研究人员的关注，由于猪流感在在猪体内可能会发生重组的现象，出现新型病毒。

猪群的流感和人的流感密切相关，人群中流行的甲型H1N1流感，在猪群也能很快的就能检测H1N1亚型猪流感抗体的阳性率大幅上升，猪群中流行的猪流感毒株也可能很快就传给人。

试验结果显示，3年来H1N1亚型猪流
感抗
体是呈下降趋势，
根据从卫生部门了解到，这两年来东莞市人流行的甲型流感是以H3N2为主，阳性率下降可能是因为流感流行的优势毒株在转变，
猪流感和人流感的相关性还有待进一步的研究。

因此，加强猪流感的监测，可以及时发现新型的毒株，为动物流感和人的流感流行做好预警和预测，为猪流感的防控提供可靠的数据。

参考文献
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试验研究
34。