定心藤中的一种生物碱成分在制备治疗缺血性心脏病药物的应用[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010914268.1
(22)申请日 2020.09.03
(71)申请人 江西中医药大学
地址 330000 江西省南昌市湾里区梅岭大
道1688号
(72)发明人 权赫秀　张普照　邵峰　韩英　
杨小琪　朱穆峰　李传峰　唐芳瑞　
谢永艳　王曾涛　
(74)专利代理机构 深圳市鼎浩知识产权代理有
限公司 44544
代理人 张炬杰
(51)Int.Cl.
A61K 31/4375(2006.01)
A61P 9/10(2006.01)
(54)发明名称
定心藤中的一种生物碱成分在制备治疗缺
血性心脏病药物的应用
(57)摘要
本发明公开了定心藤中的一种生物碱成分
在制备治疗缺血性心脏病药物的应用。

发明人前
期研究发现定心藤中含有生物碱成分，在此基础
上进一步证明其中一种名称为3α,5α‑四氢氧
皮质乙二苯内酰胺(3α,5α‑
tetrahydrodeoxycordifoline
lactam)的生物碱能够明显减轻心肌缺血后的心肌细胞损伤，从
而起到治疗缺血性心脏病的作用，可为今后开发
抗缺血性心脏病药物提供依据。

权利要求书1页 说明书5页CN 111920808 A 2020.11.13
C N 111920808
A
1.定心藤中的一种生物碱成分在制备治疗缺血性心脏病药物的应用，其特征在于，所述生物碱的化学式为
权　利　要　求　书1/1页CN 111920808 A
定心藤中的一种生物碱成分在制备治疗缺血性心脏病药物的
应用
技术领域
[0001]本发明涉及医药技术领域，具体涉及定心藤中的一种生物碱成分在制备治疗缺血性心脏病药物的应用。

背景技术
[0002]冠心病、心绞痛、急性心肌梗死及心律失常等缺血性心脏病已成为我国发病率和死亡率非常高的疾病。

缺血性心脏病的发病过程中往往伴有心肌细胞氧化应激损伤、坏死和凋亡等，这些都会引起心脏功能紊乱。

定心藤(铜钻)为瑶族和傣族经典的民族药，古代用来治疗心悸。

本发明前期研究发现定心藤(铜钻)中含有生物碱成分，在此基础上进一步证明其中一种名称为3α,5α-四氢氧皮质乙二苯内酰胺(3α,5α-tetrahydrodeoxycordifoline lactam)的生物碱成分能够明显减轻心肌缺血后的心肌细胞损伤，从而起到治疗缺血性心脏病的作用。

此成分在缺血性心脏病相关药理学的研究尚未见报道，本发明可为今后开发抗缺血性心脏病药物提供依据。

发明内容
[0003]本发明目的在于提供定心藤中的一种生物碱成分在制备治疗缺血性心脏病药物的应用。

[0004]本发明的技术方案通过以下方式实现的：定心藤中的一种生物碱成分在制备治疗缺血性心脏病药物的应用，所述生物碱的化学式为
[0005]本发明有益效果：本发明中的定心藤中含有的一种名称为3α,5α-四氢氧皮质乙二苯内酰胺(3α,5α-tetrahydrodeoxycordifoline lactam)的生物碱成分能够明显减轻心肌缺血后的心肌细胞损伤，从而起到治疗缺血性心脏病的作用，可为今后开发抗缺血性心脏病药物提供依据。

具体实施方式
[0006]下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

[0007]定心藤中的一种生物碱成分能够明显减轻心肌缺血后的心肌细胞损伤，从而起到治疗缺血性心脏病的作用，可用于制备治疗缺血性心脏病药物，所述生物碱的化学式为：
[0008]药理试验：
[0009](一)、对大鼠H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响
[0010] 1.实验方法
[0011] 1.1细胞培养
[0012]体外培养H9c2心肌细胞，培养液为DMEM(高糖)+10％FBS+0.1％双抗。

取对数生长期的细胞置于96孔细胞培养板上，恒温培养36h后，分组处理。

[0013] 1.2氧化应激损伤模型制备
[0014]取培养24h的H9c2心肌细胞，在培养基中加入100μmol·L-1的H2O2，放入37℃培养箱中培养2h。

[0015] 1.3分组处理
[0016] 1.3.1空白组:取培养24h的H9c2心肌细胞，不进行任何处理，置于37℃，5％CO2培养箱中持续培养2h。

[0017] 1.3.2氧化应激损伤模型组：取培养24h的H9c2心肌细胞，在培养基中加入100μmol·L-1的H2O2，放入37℃培养箱中培养2h。

[0018] 1.3.3给药组：将含该生物碱成分的培养基(终浓度为20、60、200μg·ml-1)作用2h，用PBS冲洗2次后换用含有100μmol·L-1H2O2的培养基配制的不同浓度的生物碱及阳性药N-乙酰半胱氨酸(0.08g·ml-1)，放入37℃培养箱中密闭培养2h。

[0019] 1.4指标测定
[0020] 1.4.1采用MTS法测定细胞活力
[0021] 1.4.2乳酸脱氢酶(LDH)活力测定：取各组样本细胞培养液上清液，按照试剂盒操作说明书，在490nm处测定乳酸脱氢酶(LDH)的活性。

[0022] 2.实验结果
[0023]如下表1-1，1-2所示，与正常组比较，模型组存活率明显降低，LDH漏出量明显升高；生物碱的60μg·ml-1和阳性药提高了细胞存活率，有显著差异，其余浓度没有统计学意义。

以上结果提示该生物碱对细胞氧化应激损伤具有保护作用。

[0024]表1-1对H2O2导致H9c2心肌细胞存活率的影响
[0025]
[0027]注:与模型组比较，**P<0.01,***P<0.001
[0028](二)对大鼠离体灌流心脏心肌缺血的影响
[0029] 1.实验方法
[0030] 1.1分组
[0031]SD大鼠随机分为空白组、模型组、给药低剂量(1.44mg/kg)组、给药中剂量(4.8mg/ kg)组、给药高剂量(14.4mg/kg)组，每组6只，各组大鼠每天腹腔注射给药一次，空白组和模型组腹腔注射等容量的生理盐水。

[0032] 1.2大鼠离体灌流心脏模型建立
[0033]大鼠腹腔注射10％水合氯醛(400mg/kg)进行麻醉，在开胸前10分钟腹腔注射500U-kg-1的肝素。

开胸取心脏后从主动脉套管固定在离体心脏灌流装置，固定后的心脏用(K-H)缓冲液进行灌流，缓冲液充入饱和95％O2和5％CO2并维持在37℃。

心脏在灌流稳定20
分钟后进行20分钟的全心停灌缺血，接下来进行灌流液恢复灌注180分钟。

再灌注180分钟
时收集心脏流出液1分钟，然后取下心脏进行TTC染色。

[0034] 1.3观察指标
[0035] 1.3.1心肌梗死面积：取下心脏后于-80℃冷冻15min，将心脏平行切成2mm厚切片；心脏切片放入1％TTC溶液中，置于37℃水浴中避光染色15min，将染色后的心脏切片于10％福尔马林溶液中固定24h；滤纸吸干心脏切片表面福尔马林溶液，按顺序称重，计算心肌梗死范围。

[0036] 1.3.2血清酶的检测：收集心脏流出液后用相应的试剂盒分别测定测定乳酸脱氢酶(LDH)含量。

[0037] 2.实验结果
[0038] 2.1心肌梗死面积测定结果
[0039]如表1-3所示，与空白组比较，模型组心肌梗死面积具有极显著差异(P<0.001)，与模型组比较，给药高剂量组可明显减少了心肌缺血大鼠心肌梗死面积(P<0.01)，结果表明：该生物碱对心肌缺血损伤大鼠心肌具有显著的保护作用。

[0040]表1-3对心肌缺血梗死面积的影响
[0041]
[0042]注:与空白组比较，###P<0.001,与模型组比较，**P<0.01
[0043] 2.2乳酸脱氢酶(LDH)含量的测定结果
[0044]如表1-4所示，与空白组比较，模型组LDH含量显著升高，与模型组比较，给药中，高剂量组均可减少LDH漏出(P<0.01，P<0.001)，结果表明：该生物碱对心肌缺血损伤大鼠心肌具有显著的保护作用。

[0045]表1-4对心肌缺血损伤大鼠LDH含量的影响
[0047]以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书所作出的等同替换和
显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。