高效液相色谱检查十一酸睾酮其他甾体PPT课件

思考：
• 1.主成分峰与杂质的分离度不够（1.960） • 2.主成分出峰时间太长（21.538min）
如何改变 条件呢？
流动相配比
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流动 乙腈 相
1 90
2 85
3 80
异丙醇 水
55 10 5 15 5
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乙腈-异丙醇-水（90：5：5）
R: 1.182 T: 1.329 n: 10321
3 1.591 1.732 10495 13.529
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第二次思考：
•乙腈价格昂贵，毒性大。
• 而甲醇粘度小，柱压低，价格便宜，适用范 围广，常用于色谱分析的流动相，激素类药 物中较常用。
• 药典为什么不用甲醇代替乙腈呢？
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甲醇-异丙醇-水=90：5：5
R: 1.225 T: 1.338 n: 8099
100ml）
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液相色谱仪器操作
• 开始：装柱 检漏 甲醇冲洗0.5h 流动 相冲洗0.5h 设定参数 待基线稳定后进 样
• 结束：用冲柱水冲洗1h 纯甲醇冲洗1h 收好柱子。
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药典方法
流动相 乙腈-异丙醇-水＝40：40：20下色谱图 主峰 R:1.960 T: 1.258 n:9443
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• 自身对照品溶液配制
• 精密量取供试品溶液1ml至50ml容量瓶，定容（每1ml中含 0.04mg）。
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实验清单
• 仪器：
• 高效液相色谱仪，用十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂，（柱长？）
• 乙腈－异丙醇－水（40:40:20）为流动相；检测 温度室温，检测波长为240nm。（灵敏度？流速？）
• 50ml容量瓶×2 1ml移液管 电子天平 小漏斗
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乙腈：异丙醇：水（85：10：5）
R:3.709 T: 1.834 n: 9309
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乙腈：异丙醇：水（80：15：5）
R: 1.591
T: 1.732 n:10495
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流R
T
n
动
相
出峰时 间 （min）
1 1.182 1.329 10321 11.171
2☆ 3.79 1.84 9309 16.129
• HPLC法的关键是色谱条件的确定 • 了解实验中常用的仪器和溶剂 • 做实验要又有耐心和恒心，操作要细致
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溶剂峰
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高浓度（0.5mg／ml） 低浓度0.01mg／ml
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计算及结论
自身对照溶液主峰峰面积：1691935 样品溶液杂质峰总峰面积：666831
样品溶液杂质峰总峰面积＜自身对照溶液主峰 峰面积
即杂质含量＜2.0％，符合规定。
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心得：
• 药典规定的方法可能不实用，需经具体的 试验验证
250ml 烧杯
50ml量筒 滤纸 洗耳球
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方案修改
• 供试品溶液 2mg ∕1ml
0.5mg∕1ml
• 自身对照溶液 0.04 mg ∕1ml
0.01mg／1ml
• 色谱条件的确定 ：
• 色谱柱：Agilent C185um（150×4.6mm） • 流动相的确定：？
• 流速：1.0ml／min
• 灵敏度：0.01档
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溶液配置及仪器操作
供试品溶液配置：0.5mg/1ml
精密称定50.0mg
乙腈定容至10ml 移液
管移取1.0ml
流动相定容至10ml（乙腈-水
=75：25）
自身对照品溶液配制：0.01mg/ml
移液管移取供试品1.0ml
乙腈溶液定容至
50.0ml（乙腈溶液：10ml乙腈用75%乙腈定容至
高效液相色谱检查十一酸睾酮 其他甾体
何伟康 陈忠坚
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过程
查资料（药典，文献，药物分析及仪器分析课本等）
进行讨论，确定方法，制定仪器清单 实验方案进一步修改
实验
成果
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查资料
• 药典 药物的理化性质，检查方法及具体操作 • 网络 结构式，功效及一些产品名 • 文献 同类药物高效液相色谱法的使用情况 • 分析化学和药物分析教材 高效液相色谱法
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实验方案
• 主成分自身对照法（无杂质对照品） • 将供试品稀释成与杂质限度相当的浓度，作为对照溶液。
分别取供品试溶液和对照溶液进样，计算供试品溶液色谱 图上各杂质峰面积总和，与对照溶液主成分峰面积比较， 确定杂质是否超过限量。
• 供试品溶液配制
• 取本品约0.1g，精密称定，加入流动相约20ml，溶解，定 容至50ml容量瓶（制成每1ml中含2mg的供试品溶液）。
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甲醇-异丙醇-水=80：15：5
R：1.208 T : 1.334 n:8564
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结论
甲醇替代乙腈后分离度较低，柱效有所下降， 所以在实验中使用乙腈较为合适。
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• 选取流动相，进行杂质限量检查。 • 乙腈-异丙醇-水=80：15：5
• 1.进溶剂 • 2.进低浓度对照溶液 • 3.进高浓度供试品溶液