标本存放对胰岛素和C肽检测结果的影响

标本存放对胰岛素和C肽检测结果的影响
目的探讨标本放置时间和温度对胰岛素和C肽结果的影响，以期建立实验室标本存放标准。

方法30例标本采用化学发光的方法检测其胰岛素和C肽水平，并置于室温（21℃）、4℃和-20℃，测定不同保存时间的胰岛素和C肽水平。

结果血清置-20℃温度24h和1w，4℃温度4h与即时检测结果相比无统计学意义（P>0.05）；血清置室温温度（21℃）1h，置4℃温度12h与即时检测结果相比均有统计学意义（P＜0.05）；标本经室温保存2、3h，4℃保存72h与-20℃保存4w（672h）后，胰岛素和C肽水平显著下降（P＜0.01）。

结论标本冷冻是准确检测血清胰岛素和C肽的金标准，而室温下保存可能降低分析物的检测水平。

血浆样品储存在4℃，应在静脉穿刺后4h内进行分析。

Abstract：Objective To investigate the impact of storage time and temperature on test results of insulin and C-peptide，and to develop laboratory Standards for Samples Storage . Methods The serum insulin and C peptide levels in 30 blood samples were determined by chemiluminescence immunoassay. Samples were stored at room temperature，4℃and -20℃，and then analyzed at different times. Results Compared with Point-Of-Care Testing（POCT），there was no substantial change in insulin and C peptide levels when blood samples stored at -20℃for 24 or 168 hours and 4℃for 4 hours（P>0.05）.At room temperature for 1 hour and 4℃for 12 hours，There was significantly difference of insulin and C peptide levels when compared to POCT（P＜0.05）. Significant changes were also observed for insulin and C peptide （decrease at 2 and 3 hours，room temperature；72hours，4℃；672hours，-20℃）（P＜0.01）.Conclusion Our study confirmed that sample freezing is the gold standard for accurate determination of serum insulin and C peptide，that storage at room temperature may decrease the analyte levels. Plasma samples should be stored at 4°C and analysed within 4 hours of venepuncture.
Key words：Insulin ；C peptide ；Storage temperature；Storage time
胰島素C肽检测（INS，C-P）是目前临床为诊断糖尿病和治疗糖尿病最重要的辅助检查[1]，为使胰岛素C肽检测（INS，C-P）结果准确可靠，加强实验室分析前、分析中、分析后质量管理非常必要。

国内多数实验室缺乏标本分析前后的管理标准。

全血标本保存时间及温度的不同，胰岛素C肽检测（INS，C-P）结果可能会发生较大变化。

本文通过不同温度，不同时间存放标本，探讨标本存放条件对胰岛素C肽检测（INS，C-P）结果的影响，以期建立实验室胰岛素C 肽检测（INS，C-P）标本存放标准，对实验质量管理有所改进。

1资料与方法
1.1一般资料标本是随机抽取本院30例患者标本（空腹+餐后），患者32～79岁，男14例，女16例。

标本外观无黄疸，无脂血和溶血。

1.2方法30例标本使用无添加试管采血，离心后血清。

仪器采用北京科美东雅全自动发光检测仪。

试剂为科美东雅INS和C-P试剂，批号INS 20130528，C-P 20130528，规格均为96管。

试验分多次完成，即时正常检测INS和C-P，同时取3份血清各1ml分别入室温温度（21℃）、4℃温度冰箱内、-20℃温度冰箱内。

室温温度（21℃）内血清分别1h、2h、3h进行检测。

4℃温度冰箱内血清分别4h、12h、72h进行检测。

-20℃温度冰箱内血清分别24h、72h、4w进行检测。

实验室质控质控品采用科美东雅公司提供的INS和C-P高低两个质控点。

1.3 统计学处理应用SPSS13.0统计软件进行分析，组间差异比较采用配对设计的两样本均数t检验。

2结果
2.1室温结果从表1中结果可见，即时结果与室温温度（21℃）1h结果发生差异（P＜0.05），随放置时间的延长，室温检测结果浓度不断降低。

即时结果与室温温度（21℃）2h，3h结果发生显著差异（P＜0.01）。

2.2 4℃结果从表2中结果可见，即时结果与4℃温度冰箱内4h结果无变化，无统计学意义。

随放置时间的延长，4℃温度冰箱内的结果浓度开始降低，即时结果与4℃温度冰箱内12h结果发生差异（P＜0.05）。

随放置时间的再次延长即时结果与4℃温度冰箱内72h结果发生显著差异（P＜0.01）。

2.3 -20℃结果从表3中结果可见，即时结果与-20℃温度冰箱内24h，1w结果无统计学意义。

但长时间放置后，即时结果与-20℃温度冰箱内4w结果发生显著差异（P＜0.01）。

3讨论
胰岛素C肽检测（INS，C-P）可用于诊断Ⅰ.Ⅱ型糖尿病，用于判断Ⅱ型糖尿病胰岛素治疗效果，指导临床具有重要作用，对临床诊断非常必要[2]。

胰岛素，C肽均从胰岛素原分裂而成，每一个胰岛素原分子均在胰岛B细胞中特殊蛋白酶的作用下裂解为1分子胰岛素，一分子C肽。

胰岛素分子量5734，C肽分子量3617，它们生物半衰期都很短，胰岛素为15min而C肽也只有20min[3，4]，以上结构和特性存放胰岛素和C肽在室温条件下极不稳定，存放温度和时间的变化可能对检测结果有影响。

从上表中可以看出，胰岛素C肽在室温温度（21℃）保存1h后和4℃保存12h后与即时检测相比，其结果就会发生统计学意义的差异（P＜0.05）。

胰岛素C肽在室温温度（21℃）保存2h和3h后檢测和4℃保存72h后与即时检测相比，其结果既有统计学意义的显著差异（P＜0.01），而-20℃保存72h后无变化，直到4w后结果与即时结果发生显著差异（P＜0.01）。

以上结果表明同一份标本室温保存比4℃保存和-20℃保存结果更低，说明低温能抑制酶的活性[4]，而长时间冷藏和室温均使生物活性降低，结果出现错误。

说明标本冷冻能有效减少干扰。

因此在血液标本的采集﹑运输﹑转移﹑保管和分离过程中应保持低温环境，以最大程度降低生物活性。

面对免疫学检验质量速度的要求，免疫项目检测4h内完成标本的分离与检测，所以我们以4℃保存4h为界限来评价胰岛素C肽检测（INS，C-P）标本放
置时间对胰岛素C肽检测（INS，C-P）的质量影响，结果在4h以内可以满足质量要求。

如有复查标本可进行-20℃保存，可稳定4w，不会造成结果差异。

确保胰岛素C肽检测（INS，C-P）的准确性，保证实验室质量要求。

参考文献：
[1]王艳艳.C肽胰岛素在糖尿病诊治中的作用[J].中外医疗，2009，28（27）：99.
[2]张凤杰.化学发光检测C肽，胰岛素对糖尿病的诊断价值[J].中国误诊杂志，2011，11（34）：8362.
[3]McDonald TJ，Perry MH，Peake RW，et al. EDTA improves stability of whole blood C-peptide and insulin to over 24 hours at room temperature [J]. PLoS One ，2012，7（7）∶e42084.
[4]Jones AG，Hattersley AT. The clinical utility of C-peptide measurement in the care of patients with diabetes [J].Diabet Med，2013，30（7）：803-817.
Sapin R.Insu lin asssays：previously known and new analytical[J].Clin Lab，2003，49（3-4）：113-121.。