中学荧光显微镜实验切片制作方法

中学荧光显微镜实验切片制作方法
一、玻片及盖玻片(Slide and Coverslips)
玻片及盖玻片质量必需很好而没有荧光，玻片厚度≦1.0mm 者便可用，玻片之清洗，必需以中性清洁剂洗净，再浸于含有3％HCl 之乙醇12～24 小时，然后再贮存于纯酒精。

要用时，以清洁纱布擦净或火焰烘干。

用完后可浸于水中，移去封埋物，再经清洁剂及重酪酸－硫酸混合物处置。

重酪酸一硫酸混合物之配法：
①粗制重酪酸钾300 gm
②20％硫酸水溶液3000 ml
③运用珐琅质或陶质容器，先放入20％硫酸水溶液，然后缓缓参加粗制重酪酸钾，以玻璃棒搅拌，此时会发热，俟冷却后运用。

目前已有处置好的玻片出卖，运用上十分便当。

二、组织切片(Tissue Sections)
组织切片愈薄愈好(4μ)，假如切片太厚，则可能自体及非特异荧光增加，目前都用冷冻切片机(Cryostat) 来切，冷冻切片机包括冰冻柜(Refrigerated Cabinet)，温度在0℃～-30℃之间，切片机(Microtome) 放在里面，将组织
在-20℃冰冻10 分钟，就能够切，切下之薄片，以玻片捺下后在室温急速枯燥。

制备好之切片必需尽可能马上固定及染色。

假如切片必需储放短时间( 约1 周)，则固定后密封储放于-70℃，要染色时，切片必需回温到室温方启开。

三、细胞培育法(Cell Culture Preparation)
细胞培育法普通用盖玻片在组织培育盘( 例如24 孔)或培育在玻璃片(Chamber Slide) 上，再和普通接种病毒一样，接种可疑病材乳剂，培育数天，取出，枯燥、固定、水洗，再用标示抗体染色以检查特异荧光。

四、涂抹法或捺压法(Smear and Impression Preparation)
所用玻片需很薄，普通用盖玻片代用，将所要检查之病材，如血液、组织液或其他病材，在玻片上涂抹或捺压，涂抹或捺压片在室温用吹风机或电风扇( 以冷风吹干)，以甲醇或丙酮固定，放于密封标本箱于-20℃备染或马上染色。

五、固定(Fixation)
除了使组织固定于玻片外，另一方面亦可助抗原－抗体复合物之构成，例如把脂质溶解，使抗体抗原较易反响。

普通用100％Methanol 在室温作用2分钟，或丙酮于-20℃下10 分钟来固定微生物抗原及病毒。