广西眼镜蛇毒中Natrin的抗脂质过氧化作用

表 １ 蛇毒蛋 白Ｎ ｔ ｉ 大鼠肝脏脂质过氧化作 用的影 ａ ｒ ｎ对
响 （＝ ） ｎ ５
置于一 ０ ２￣ Ｃ备用 。临用前 解冻，用 无糖Ｐ Ｓ Ｂ 溶液稀释 ￣５ ｍ 。 Ｊ ｌＯ ｌ
（ ）考 马 斯 亮 蓝 法 测 定 肝 匀 浆 的 蛋 白含 量 ２
采用考 马斯亮兰法制作 蛋 白含量测 定的标准 曲线 ， 以蛋 白浓 度 为 纵 坐 标 ， 吸 光 度 为 横 坐 标 ， 得 回 归 方 程 为
匀 浆 。用 含 糖 Ｐ Ｓ 释 成 ２％ 匀 浆 ，３ ０ ｒ ｍ ｎ 心 １ｍ ｎ Ｂ稀 ０肝 ００／ ｉ离 ０ｉ ， 取上清液 ，用含糖Ｐ Ｓ Ｂ 等体积稀释 ，制成 １％ ０ 肝匀浆 备用液 ，
பைடு நூலகம்
２ 结果
脂质过氧化 测定结果 ：加入不 同浓度 的蛇毒蛋 ￣Ｎ ｔ ｉ ａｒｎ 后 ，各组 的Ｍ Ａ Ｄ 含量均减少 ，各浓度组与对照组间 比较 ，均有 显 著差异 （ Ｏ Ｏ ）。浓度 为０ １ ｇｍ 时ｉ Ａ ．１ ． ｍ ／ ｌ Ｄ 含量最低 ，抑 制 率为４ ． ４ 。 （ ９５％ 见表１ ）
（ 西 医科 大学药学院 ，广西 南宁 ５ ０ ２ ） 广 ３ ０ １
【 摘 要 】从 广西眼镜蛇毒 中分离 出Ｎａ ｉ 白 ，研 究其 对大鼠肝脏 脂质过 氧化 作用的影响。结果表明 ：从 广西眼镜 蛇毒 ｔｎ蛋 ｒ
中分 离出纯的 Ｎａ ｉ ｔｎ组分 ，对 大鼠肝脏 脂质过氧化 具有抑 制作用。 ｒ
（ ）统 计 学 处 理 ４
１ 材料与方法
１１ 主要试剂与仪器 ． （ ）Ｓ 大 鼠，广西 医科大学动物 实验 中心提供 ；动物证 １ Ｄ 号 ：广 西眼镜蛇毒 ，广西医科大 学蛇毒研究所提 供 ，淡黄色
冻干粉 。
Ｓ Ｓ ３ Ｏ Ｐ Ｓ １． 统计软件包对 资料进行 统计 学分 析，结果 以均 数 ±标准差 （ ±ｓ ｉ ）表 示， 各组与对照 组比较 ，Ｐ Ｏ ０ 表 示有 ＜．５ 显著差异。
（ ）Ｔ Ｉ ０ 紫外一 ２ Ｕ８０ 可见分光光度 计，上海通用公司。 （ ） ｉ １ ３ ３ ｔ ｔ ａ ｏ ｙ ｒ ｐ ｎ （Ｅ ） ３ ， ， ， － ｅ ｒ ｅｈ ｒ ｐ ｏ ａ ｅ Ｔ Ｐ ，瑞 士 ： Ｌ 半 一 胱氨酸 ， 海伯 泉生物科技有限公司 ； 一 上 ２ 硫代 巴比妥酸 （ Ｂ ） ＴＡ ， 中国医药 （ 团）上海 化学试剂公司 ：其 余试 剂均为分析纯 。 集 １２ 肝 匀 浆 脂 质 过 氧 化 测 定 ． （ ）１％ １ ０ 肝匀浆的制备 取ｓ 大 鼠，禁食一天，颈椎脱臼法致死 ，称重 ，取 肝脏 ， Ｄ 用预冷到４ ℃的含０ １ｍ ｌ Ｌ ． ５ ｏ ／ 葡萄糖磷 酸盐 缓冲 溶液 （Ｂ ）冲 ＰＳ 洗 四次 ，清 除 表 面 残 余 血 ，用 滤 纸 吸干 ，称 重 。 剪碎 混 合 后
２１ ０ １年 第 １ ０期
大 众 科 技
ＤＡ ＺＨＯＮＧ ＫＥ Ｊ
Ｎｏ １ ２ ． ０。 ０１ １
（ 总第 １ ６期 ） ４
（ ｍｕａｉ ｌ Ｎ 。４ ） Ｃｕ ｌｔ ｅ ｏ１ ６ ｖｙ
广西 眼镜蛇毒 中 Ｎ ｔ ａ ｉ ｒ ｎ的抗脂质 过氧 化作 用
黄燕军 宋 慧 李福森 李 妹 焦 杨 黄 昱
【 关键词 】广西眼镜 蛇毒 ；Ｎａ ｉ；脂质过氧化 ｔｎ ｒ
【 中图分 类号 】Ｒ一 ３ ３２ 【 文献标识码 】Ａ 【 文章编号 】１０ — １１２ １）０ ０７ — ２ ０ ８ １ ５ （ １１— １８ ０ ０
（ ）￣ Ａ 定 ３ Ⅱ测 ）
蛇 毒 是 一 类 有 酶 活 性 和 其 他 生物 活 性 的蛋 白和 多 肽 的混 合 物 “ 。 毒 蛋 白Ｎ ｔ ｉ 是 一 种 从 广 西 眼 镜 蛇 毒 中分 离 出来 蛇 ａｒｎ
混 匀 ， 沸 水 浴 中 加 热 １ｍ ｎ 冷 却 至 室 温 。 ３ ０ ｒｍ ｎ 心 ５ｉ， ００／ ｉ离
的蛋 白， 年来发现它是富含半胱氨酸分泌蛋 白家族 （ Ｒ Ｓ ） 近 Ｃ ＩＰ 成 员，它能够抑￣ Ｃ Ｇ Ｊ ＩＮ 通道和 Ｌ ａ 型ｃ 通道 ，从而推 测 出其可 能 为一类新 型的离子通道阻断剂 ” 。本实验通过硫代 巴比妥酸 分 光光 度法 测 定大 鼠肝 脏脂 质过 氧 化二 级分解 产 物 丙二醛 （Ⅱ ）的含量 ， 从广西眼镜蛇 毒中分离纯化 出的蛇毒蛋 白 ￣Ａ ） 对
ｙ Ｏ ７９ ＋ ． ２ ８ ＝ ． ４ ｘ ０ ０ ５ ，相 关 系 数 ｒ Ｏ ９ ９ 。计 算 得 用 无 糖 Ｐ Ｓ ＝．９０ Ｂ 稀 释 后 肝 匀 浆 蛋 白质 的 含 量 为 Ｃ Ｏ ５ ４ ｇｍ 。 ＝．６ｍ／ ｌ 【 稿 日期 】２ １ — ８ ０ 收 ０１ ０— ７ 【 金项 目】广西科技 厅资助项 目 （ 基 桂科 自０ ９ １ ７ ９ １ ２ ，桂科 青 ０ ４ ０ ３ ５２４ ）
精确量取肝匀浆稀释液ｌ ｌ ｍ ，加入不 同浓度 的样 品液 ，再 加 ｌｍ ｌ Ｌ 酸 亚 铁 溶 液 ０ １ｌ ０ ０ｍ ｌ Ｌ 胱 氨 酸 溶 液 ｍｏ／ 硫 ．ｍ 、 ． １ｏ ／ 半 ０ ０ｍ ，用无糖Ｐ Ｓ￣充到相 同体积 ，混匀 ，３ ￣ ．２ ｌ Ｂ） ｂ ７Ｃ水浴２ ｍ ｎ ０ ｉ。 加入２％ ０ 醋酸溶液２ ｌ ｍ 终止反应 ，最后加入０ ６ ％ Ｂ 溶液 ｌ ｌ ． ７ ＴＡ ｍ，
Ｎ ｔ ｉ抗 脂 质 过 氧 化 作 用进 行 了 初 步 研 究 。 ａｒ ｎ
ｌｍ ｎ Ｏ ｉ ，取上清液 。在 ５ ０ｍ ３ ｎ 处测定吸光度值 ， 以获取脂 质过 氧 化 终产物Ｍ Ａ 量 。空 白管 为 １Ｏ ｍ 肝匀浆 稀释液 加无 糖 Ｄ含 ．Ｏｌ Ｐ Ｓ 液 ，对 照 管 不 加 样 品 ， 以０ Ｉｌ Ｅ （ ０ ｍ ｌＬ Ｂ溶 ．ｍ Ｔ Ｐ ５ ｕ ｏ ／ ）产 生 的 Ｍ Ａ 为标准 。 Ｄ作