利用CTAB法提取灵芝属部分菌株基因组DNA
ctab法提取dna实验报告
ctab法提取dna实验报告CTAB 法提取 DNA 实验报告一、实验目的掌握 CTAB 法提取 DNA 的原理和操作方法，提取高质量的植物或微生物 DNA，为后续的分子生物学实验（如 PCR、基因测序等）提供纯净的 DNA 样本。
二、实验原理CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，在高离子强度的溶液中能与核酸形成复合物，并通过离心将其与蛋白质、多糖等杂质分离。
随后，用乙醇或异丙醇沉淀 DNA，使其从溶液中析出。
三、实验材料与试剂1、实验材料选取新鲜的植物叶片（或微生物培养物）。
2、实验试剂CTAB 提取缓冲液：2% CTAB，14 M NaCl，20 mM EDTA，100 mM TrisHCl（pH 80），02% β巯基乙醇（使用前加入）。
氯仿异戊醇（24 ： 1）异丙醇70% 乙醇TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）四、实验仪器与设备1、高速冷冻离心机2、恒温水浴锅3、移液器4、涡旋振荡器5、微量紫外分光光度计五、实验步骤1、材料处理植物材料：取新鲜植物叶片约 2 g，用液氮速冻后研磨成粉末。
微生物材料：收集一定量的微生物培养物，离心收集菌体，用无菌水洗涤后重悬。
2、加入提取缓冲液将研磨好的植物粉末（或重悬的微生物）迅速转移至离心管中，加入预热至 65℃的 CTAB 提取缓冲液，充分混匀，65℃水浴保温 30 60 分钟，期间不时轻轻颠倒混匀。
3、抽提加入等体积的氯仿异戊醇（24 ： 1），涡旋振荡 10 15 分钟，使其充分混匀，然后 12000 rpm 离心 10 15 分钟。
4、转移上清用移液器小心吸取上清液至新的离心管中，避免吸取中间的蛋白质层。
5、 DNA 沉淀向上清液中加入 06 07 倍体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀，室温放置10 20 分钟，使 DNA 沉淀。
6、离心收集12000 rpm 离心 10 15 分钟，弃上清。
7、洗涤用 70% 乙醇洗涤沉淀 2 3 次，每次离心 5 10 分钟，弃上清。
ctab法提取dna的原理
ctab法提取dna的原理
CTAB法（Cetyltrimethylammonium Bromide）是一种常用于
提取DNA的方法，原理是利用CTAB结合DNA形成稳定的DNA-CTAB复合物。
与DNA相结合的CTAB可以将其他细
胞组分如蛋白质和RNA等溶解。
下面将介绍CTAB法的操作
步骤：
1. 准备样品：将待提取DNA的生物材料如植物叶片或动物组
织切碎，并放入离心管中。
2. 加入CTAB溶液：向离心管中加入含有CTAB的提取缓冲液，CTAB会结合DNA并分离细胞组分。
3. 细胞破碎：将离心管置于60-65°C的水浴中，短暂加热使细
胞完全破碎。
4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，轻轻摇匀并离心。
这一步可以将DNA从细胞残渣和其他溶解物中提取出来。
5. DNA沉淀：将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的
异丙醇，再次轻轻摇匀。
在冰上静置几分钟后离心，可使
DNA沉淀到离心管底部。
6. 溶解DNA：倒掉上清液，加入70%乙醇洗涤DNA沉淀，
离心去除乙醇。
再次离心后，将残留的乙醇洗涤液倒掉，将离心管倒置在纸巾上，将DNA自然风干。
通过以上步骤，利用CTAB法可以提取到高质量的DNA样品。
此方法的优势在于CTAB的高度阳离子性可以有效溶解其他
细胞组分，而不影响DNA的稳定性。
同时，CTAB法适用于
不同种类的生物材料，如植物，微生物和动物组织等。
实验一 CTAB法提取植物基因组DNA
实验一CTAB法提取植物基因组DNA实验目的:学习从植物组织中(幼叶)提取基因组DNA的基本原理与方法。
实验原理:采用机械研磨的方法破碎植物的组织与细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其就是氧化酶类),其对DNA的抽提产生不利的影响,所以在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。
在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。
CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),就是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜并与核酸形成复合物。
该复合物在高盐的溶液中(>0、7mol/L NaCl)就是可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀(CTAB能溶于乙醇)即可使核酸分离出来。
CTAB溶液在低于15度时会形成沉淀洗出,因此再将其加入冰冷的植物材料中之前必须预热(65度),且离心温度不要低于15度。
实验步骤:1、取幼嫩的植物叶片(3-5g)剪碎液氮研磨成粉,转入1、5ml离心管内。
加入等体积的65℃预热的DNA提取缓冲液置于65℃的恒温水浴摇床上1-2h(1、5h)。
2、加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),轻轻上下颠倒5分钟,静置5分钟,之后于12000rpm离心10分钟。
3、吸取上层水相,重复步骤2一次。
4、吸取上层水相,加入预冷2/3体积的异丙醇,轻缓颠倒2分钟并置-20℃冰箱内10min,待DNA沉淀后于12000rpm离心收集,收集的DNA于70%乙醇中洗2-3次。
将弃去乙醇风干后的DNA加适量水使其溶解。
5、待DNA完全溶解后加入1-2μl不含RNAaseA(10mg/ml),37℃保温1h以除去DNA中的RNA。
6、于Eppendorf管中加入1mL氯仿:异戊醇(24:1)轻轻上下颠倒10分钟后10000rpm离心10分钟。
7、吸取上层水相并先后加入1/10体积的3M醋酸钠及2倍总体积的预冷的无水乙醇,接着置于-20℃冰箱,10分钟后10000rpm离心10分钟,弃去无水乙醇,加入70％乙醇洗涤2-3次,风干,最后将DNA溶于适量(200-500μl) TE中。
ctab法提取dna流程
CTAB法提取DNA流程引言DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的基础实验之一，它可以用于从各种生物样品中纯化DNA，并用于进一步的分析和研究。
CTAB法是一种常用的DNA提取方法之一，其在提取DNA时使用了CTAB作为离子相互作用剂，能够有效地纯化DNA。
本文将详细介绍CTAB法提取DNA的流程。
实验材料与设备•样本：细菌、植物或动物组织样本•CTAB提取缓冲液：含有CTAB、EDTA和TRIS的缓冲液•醇类溶液：包括乙醇和异丙醇•氯仿•甲醇•高盐溶液：含有NaCl和CTAB的溶液•TE缓冲液：含有TRIS和EDTA的缓冲液•离心管•离心机•热平台实验步骤1. 样本处理1.将样本收集或制备成细胞输液。
2.使用离心机将细胞输液离心，分离得到细胞沉淀。
2. 细胞裂解1.向细胞沉淀中加入适量的CTAB提取缓冲液，并充分混匀。
2.放置于热平台上，在适当的温度下，通常为60°C-65°C，孵育一段时间，使细胞充分裂解。
3. 蛋白质沉淀1.将蛋白质沉淀剂（氯仿）加入到裂解液中，充分混匀。
2.离心管盖住盖子，以高转速离心，使裂解液分为上清液和沉淀两部分。
4. DNA沉淀1.将上清液转移到新的离心管中。
2.加入等体积的醇类溶液，充分混匀。
3.放置于冰箱中，使DNA在醇类溶液中沉淀。
5. DNA洗涤1.使用离心机将DNA沉淀离心，将上清液倒出，注意不要破坏DNA沉淀。
2.加入预冷的85%乙醇，使DNA沉淀溶解。
3.放置于冰箱中，使DNA在乙醇中沉淀。
4.重复以上步骤，直至DNA沉淀洗涤干净。
6. DNA溶解1.使用离心机将DNA沉淀离心，将上清液倒出。
2.加入适量的TE缓冲液，使DNA沉淀溶解。
结果与讨论通过CTAB法提取DNA的流程，我们可以成功地从细菌、植物或动物组织样本中获得高质量的DNA。
这种方法利用CTAB作为离子相互作用剂，能够有效地去除细胞的蛋白质和其他杂质，从而纯化DNA。
在DNA溶解的步骤中，使用TE缓冲液可以保护DNA的稳定性并提高其质量。
ctab提取dna的步骤
ctab提取dna的步骤
嘿，咱今天就来讲讲这 CTAB 提取 DNA 的事儿哈！
你想想，DNA 那可是生命的密码呀，藏着好多好多关于生物的秘密呢！要把它提取出来，就好像是在挖掘一个神秘的宝藏。
首先呢，得准备好各种材料和工具，这就好比要去探险，得带上趁手的家伙什儿。
把样本处理好，就像是给宝藏开个门。
然后就是加入 CTAB 啦，这 CTAB 就像是一把神奇的钥匙，能打开那锁住 DNA 的大门。
在合适的温度下让它们好好反应反应，就好像是让钥匙在锁眼里转动，慢慢找到开启的机关。
接着就是一系列的操作啦，什么离心啊，沉淀啊。
这离心就像是把杂质甩出去，留下那最珍贵的部分。
沉淀呢，就像是把宝贝从一堆杂物里慢慢挑出来，让它安安静静地待在那儿。
再之后呢，把沉淀下来的东西洗一洗，这就好比给宝贝擦擦灰尘，让它更干净更漂亮。
最后，就能得到那珍贵的 DNA 啦！你说神奇不神奇？这整个过程就像是一场奇妙的旅程，一步一步地走向那神秘的 DNA 世界。
你看啊，这 CTAB 提取 DNA 虽然听起来挺复杂，但只要咱一步一步认真去做，就肯定能成功呀！就像爬山一样，只要一步一个脚印，
总能爬到山顶看到美丽的风景。
而且这过程中每一步都很重要，少了哪一步都不行呢，就跟盖房子似的，少了一块砖那房子都不结实呀！
所以啊，咱要是想提取出高质量的 DNA，就得认真对待每一个步骤，不能马虎大意哟！你说是不是这个理儿？咱可不能小瞧了这小小的 DNA，它里面蕴含的东西可多着呢！咱得好好去探索，去发现，去解开那些生命的谜团。
怎么样，听我这么一说，是不是对 CTAB 提取DNA 更感兴趣啦？那就赶紧去试试吧！。
CTAB法提取细菌Total_DNA原理
CTAB法提取细菌Total DNA原理CTAB法原理CTAB(Hexadecyltrimethy Ammonium Bromide，十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
阳离子表面活性剂，呈白色或浅黄色结晶体至粉末状。
易溶于异丙醇，可溶于水，熔于热水、乙醇、三氯甲烷，微溶于丙酮，不溶于醚和苯。
在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。
通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
CTAB提取缓冲液的经典配方：Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl 提供一个高盐环境，使DNA充分溶解于液相；CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除；PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
1.用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
使用酚的优点:有效变性蛋白质；抑制了DNase的降解作用。
缺点：能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA；不能完全抑制RNase的活性。
2.氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。
（酚易溶于氯仿中）用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡；降低表面张力，从而减少气泡产生；另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
霉菌提取基因组DNA方法
CTAB法提取真菌基因组DNA1. 取100mg菌体至预先装有300mg石英沙的1.5ml离心管中；2.在离心管中加入500ul 2X CTAB裂解液（2% CTAB W/V，100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 1.4mol/L NaCl）；3.用专用塑料槌充分研磨得到均一的浆状物；4. 60℃水浴1 小时（10分钟翻转离心管一次）；5. 加入2/3体积的苯酚/氯仿/异戊醇溶液（25：24：1）, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
6. 室温下13000rpm离心30分钟；7. 仔细移取上清液至另一1.5ml离心管,重复5-7步骤3-5次，直到两个界面没有沉淀；8.小心加入2倍体积的100%的冷乙醇（-20℃预冷过夜）；9.-20℃放置3个小时或者过夜；10.4度，13000rpm离心30分钟；11.小心倾去上清，将离心管压在干净吸水纸上吸干；12.沿离心管内壁缓慢加入200ul 70%的冷乙醇（4度）,尽量把壁上的沉淀洗入管底；13.11000rpm，4℃离心20min；倾去上清，晾干；14. 加入50-100ul TE（10mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 1mmol/L EDTA,300µg Rnase）到离心管中；15. 37℃水浴30min, 除去RNA；16. 重复5-13步骤，加入100ul TE溶解, -20℃贮存。
17. 取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。
同时取10μl 稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。
CTAB法提取真菌(霉菌、酵母)基因组DNA
CTAB法提取真菌（霉菌、酵母）基因组DNA--试剂配制方法及操作步骤一、试剂配制（一）2%CTAB缓冲液：1、各试剂终浓度：CTAB粉末——20g/L即10X TE{ Tris-HCl PH8.0——100 mmol/LEDTA PH8.0——20 mmol/L }NaCl——1.4mol/L2、配制方法：（1）配制1L: 20gCTAB+100mlTris-HC母液（1m/L）+40mlEDTA母液（0.5m/L）+81.816gNaC I 定容至1L。
（2）配制100ml: 2gCTAB+10mlTris-HC母液（1m/L）+4mlEDTA母液（0.5m/L）+8.1816gNaCl 定容至100ml。
（3）配置 1 x TE100ml10ml Tris-HCl母液（1m/L）+ 4ml EDTA母液（0.5m/L)（二）巯基乙醇分装1ml于离心管中，2%CTAB缓冲液与巯基乙醇以50:1体积混合。
（三）Tris-苯酚、氯仿、异戊醇1 、各试剂浓度：苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）2、配制方法：Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）混合均匀，即，移入棕色玻璃瓶中4C保存。
（四）NaAc 和Nacl1 、浓度：3mol/L2、配制方法：（ 1 ）3MNaAc10ml：称取2.46gNaAc，pH4.0，用ddH2O定容到10ml;（称量40.8gNaOAc.H2O#于烧杯中，加入冰醋酸调节pH到5.2，定容到100ml）；（2）5M NaCl 100ml：称取29.22g NaC,用ddH2O 定容到100ml 称取292.2gNaCI置于1L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解加去离子水将溶液定容到1L后，适量分成小份高温高压灭菌后，4C保存。
二、试验准备（一）1 、高压1.5ml无核酸酶离心管Xn个样品、2ml、5ml离心管；2、高压超纯水500ml （去离子水）用于试剂配制；3、枪头10 小200 小1000";（二）1、巯基乙醇10" X个样品，分装于2ml管；2、T ris-苯酚500" X个样品，分装于5ml管；3、氯仿480" X个样品，分装于5ml管；4、异戊醇20" X个样品，分装于5ml管；5、70%乙醇1.2ml X个样品，分装于5ml管；6、水浴锅65C预热、37C预热；7、N aAc150" X个样品，分装于5ml管；& -20 C预冷无水乙醇1.1ml X个样（或异丙醇），800" X个样品、氯仿异戊醇（24:1） 500" X个样品；9、RaseA B（10mg/ml）解冻；三、试验步骤1、2%CTAB裂解液500" X个样品，放于65C水浴锅中预热；2、真菌悬液离心得到大约100mg 真菌组织于2.0 mL 离心管；3、10" X个样品巯基乙醇加到预热的2%CTAB裂解液中；4、每个样品中加510"CTAB和巯基乙醇混合液，100mg玻璃珠，旋涡震荡研磨裂解30min 或以上（裂解一定要彻底）；5、放入65C水浴锅中，保温30~60min,期间轻摇数次（一般20min左右一次，刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔）。
ctab法提取dna流程
ctab法提取dna流程CTAB法是一种常用的DNA提取方法，它能够从植物、真菌、昆虫等样品中高效地提取DNA。
本文将介绍CTAB法提取DNA的主要步骤及注意事项。
1. 样品制备首先，需要准备好待提取的样品。
对于植物样品，应在新鲜或经过冷冻保存的样品中选取新生叶片或芽。
对于昆虫样品，应选取腹部组织或头部组织，并将其切碎。
2. 组织破碎将样品放入研钵中，并加入适量的液氮使其快速冷冻。
然后使用研钵和研杵将样品彻底破碎，直到完全成为粉末状。
3. 细胞裂解将粉末转移到离心管中，并加入适量的CTAB缓冲液和蛋白酶K，混合均匀后放入65℃水浴中静置30分钟左右。
此过程中CTAB缓冲液能够裂解细胞壁并溶解蛋白质，而蛋白酶K则能够降解核酸外侧的核蛋白质。
4. 分离DNA将上述混合液加入等体积的氯仿中，轻轻摇晃后放置静置。
此时，DNA会在上层形成白色的沉淀，而RNA和蛋白质则会在下层。
使用移液管将上层沉淀转移到新的离心管中，并加入70%的乙醇进行洗涤。
最后将DNA沉淀干燥即可。
5. 检测DNA使用紫外分光光度计或琼脂糖凝胶电泳检测提取得到的DNA。
如果需要保存DNA，则应将其溶于TE缓冲液中，并放置于-20℃冰箱中保存。
注意事项：1. 样品制备时应避免污染，使用无菌操作器材。
2. 细胞裂解时应注意温度和时间的控制，避免过度裂解或过短时间裂解。
3. 在分离DNA时应注意不要将底部物质搅拌到上层沉淀中。
4. 检测DNA时应注意样品的稀释和纯化程度，避免误判结果。
总之，CTAB法是一种简单、高效、适用范围广的DNA提取方法。
在实际操作中，应严格控制每个步骤的条件和操作方法，以确保提取得到高质量的DNA。
利用CTAB法提取植物基因组DNA
利用CTAB法提取植物基因组DNA植物基因组DNA提取是分子生物学领域中常用的技术之一。
目的是为了获取高质量的DNA样品，以便进行PCR、测序、基因克隆以及染色体制备等实验。
目前，CTAB法是植物基因组DNA提取中广泛采用的方法之一。
本文将介绍利用CTAB法提取植物基因组DNA的步骤及注意事项。
1. 准备植物组织样品首先需要准备好待提取的植物组织样品，这些样品可以是叶子、花、芽、根等。
样品应该分别收集、标记，冷藏保存并尽快进行提取。
2. 样品研磨取一小段样品，用液氮将其冷冻，然后用研钵和研杵将其研磨成细碎的粉末状。
如果样品过多，则可以用离心管研磨器等仪器进行批量高效研磨。
3. 细胞壁裂解将磨细的植物组织加入CTAB裂解缓冲液中，加热至65℃，开启混合器磁子，同时混合2-3分钟左右，以破坏细胞壁，释放出DNA。
4. 除去蛋白质加入一定量的氯仿，并短暂的混合均匀，待混合物静置后，可以观察到混合液结成两层。
上层为水相，在此基础上加入同体积的异丙醇，沉淀出DNA进行洗涤和离心。
离心后，上清液含有蛋白质，可以废弃，而下沉淀可以进行枸橼酸溶解。
5. 获取DNA加入枸橼酸缓冲液后，可以分别进行洗涤和沉淀。
最后，通过乙醇提取，可以得到纯度较高的基因组DNA样品。
注意事项：1. 必须严格控制植物组织样品的数量，避免混入过多的杂质干扰提取效果。
2. 在DNA分离过程中，所有试剂、试管和磨具等物品都必须干燥无水，以免水分对提取质量产生干扰。
3. CTAB裂解缓冲液中的NaCl浓度和pH值的调节必须准确，其浓度和pH值直接关系到DNA的结晶和浓度。
4. 在进行DNA纯化过程中，必须注意所有材料的稳定性和纯度，同时要充分保护目标DNA，避免DNA被降解。
总之，CTAB法提取植物基因组DNA是一种安全、高效、可靠的方法。
在实际操作中，应充分掌握其原理、步骤和注意事项，以获取高质量的DNA样品，为后续的实验打下良好的基础。
2种提取灵芝菌丝体基因组DNA方法的比较
2种提取灵芝菌丝体基因组DNA方法的比较作者：孙墨可李晓薇张曼田娟董玉迪来源：《安徽农学通报》2018年第21期摘要：比较2种DNA提取方法提取灵芝菌丝体基因组DNA之间的差异，分别用改良的CTAB法和TPS法提取10株菌丝体基因组DNA，用超微量紫外分光光度计测定和琼脂糖凝胶电泳的方法进行浓度及纯度的测定。
结果表明：利用改良的CTAB法提取灵芝菌丝体基因组DNA得到的浓度与纯度较高，但耗费时间较长；利用TPS法提取的灵芝菌丝体基因组浓度与纯度相对较低，但相对耗费时间较短；这2种方法提取的基因组都可以用于后续的PCR扩增反应。
关键词：灵芝；CTAB；TPS；基因组中图分类号 S567.31 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2018）21-0034-02灵芝（Ganoderma lingzhi）是我国著名的食药用真菌，有着悠久的历史文化[1]。
灵芝含有多糖、萜类化合物、核苷、生物碱、氨基酸多肽、微量元素等多种活性成分。
现代药理研究表明，灵芝具有保肝、抗肿瘤、抗HIV-1及HIV-1蛋白酶活性、抗组织胺释放、抑制血管紧张素、抗氧化、调节免疫及延缓衰老的作用[2-6]。
当前对灵芝分子生物学研究不断深入，如灵芝中的基因克隆与表达，转化体系的建立等[7-9]。
灵芝基因组的提取是进行后续分子生物学研究的基础，基因组DNA的质量直接影响后续实验的质量，实验过程耗时少也是许多研究者的追求。
CTAB是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性[10]。
TPS法是一种快速提取小量DNA的方法，最初用到水稻上。
筆者利用CTAB法与TPS 法分别提取灵芝基因组DNA以进行比较，旨在为今后灵芝分子生物学方面的科研提供较适宜的DNA提取方法。
1 材料与方法1.1 菌株灵芝（G.lingzhi）由吉林农业大学菌物研究所提供。
取生长在PDA培养基上的7～10d的灵芝菌丝10株，进行灵芝基因组DNA的提取。
ctab法提取植物基因组dna资料
ctab法提取植物基因组dna资料一、实验原理CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种去污剂，可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，该复合物在高离子强度（0.7mol/L）的溶液里是可溶的，通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。
在酚仿变性的条件下，去除残留的CTAB和蛋白质等杂质，然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分子从上清溶液中沉淀出来，最后用TE溶解DNA，并加入RNA酶以去除基因组中的RNA，置于-20℃备用。
因此，CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体中提取核酸，例如：植物的叶片组织。
二、实验材料及试剂实验材料：新鲜植物叶片。
试剂与溶液：CTAB提取缓冲液，Tris-饱和酚，氯仿-异戊醇（24:1），异丙醇，70%乙醇，含RNase的TE溶液。
CTAB提取缓冲液：2%（M/V）CTAB，1.4MNaCl，100mMTris-Cl （pH8.0），20mMEDTA，pH8.0，2%（V/V）β-巯基乙醇（使用前加入）。
三、实验步骤取0.5g新鲜植物叶片置于研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成均匀粉末。
将粉末移入1.5mL离心管，加入800μLCTAB分离缓冲液，上下颠倒离心管，混合均匀。
将盛有样品的离心管置于65℃水浴中保温30min，其间每隔3-4min轻摇混匀。
低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。
加入等体积的Tris-酚和氯仿异戊醇，上下颠倒离心管，混合均匀；低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。
加入等体积的氯仿异戊醇上下颠倒离心管，混合均匀；低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。
加入0.6倍体积的异丙醇，轻轻混匀，置于-20℃沉淀30min。
低温12000rpm离心5min去上清，加入500μL70%乙醇洗涤沉淀，常温12000rpm2min，去上清，沉淀尽量干燥。
加入适量含有RNase的TE（20μL）溶解沉淀，37℃水浴30min，消化RNA。
实验一--CTAB法提取植物基因组DNA.doc
实验一--CTAB法提取植物基因组DNA.doc
CTAB法是一种提取植物基因组DNA的标准技术，它是将植物组织或细胞固定剂与有机溶剂混合溶解后，利用高通量PCR技术显微镜适用的植物DNA提取方法，将病毒与细菌遗
传学上的DNA提取技术应用到植物DNA提取上来。
CTAB法的提取策略主要是先收缩细胞壁，然后分解细胞质，使DNA与蛋白质、核酸等其他物质分离。
有两种方法可以用于收缩细胞壁，一种是使用脱水剂，另一种是使用温和
的柱状体破碎物质，这两种方法可以使细胞壁被开裂。
随后，有机溶剂被用来分离DNA，
有机溶剂会与蛋白质和核酸结合，然后消除组织成份，使DNA易于收集。
在有机溶剂洗涤后，用CTAB溶液在冰上半小时沉淀DNA，紧接着用脱盐水冲洗，最后用70%的乙醇对DNA
进行沉淀。
最后，DNA可以被收集，净化，脱水或冻存，随时可用。
此外，为了获得精确的结果，在使用CTAB法提取植物基因组DNA时也有一些需要考
虑的因素，其中包括样本所处的第一步，样品消毒，采取合适的收缩细胞壁和有机溶剂剂量，CTAB溶液沉淀时间，脱盐水洗涤次数，乙醇沉淀次数，DNA注射缓冲液等，如果这些
步骤都能得到恰当的处理，则可以保证获得的 DNA 极为纯净。
为了提高植物DNA提取效率，CTAB法在提取植物基因组DNA时也可以使用DNA限制酶，例如酸性磷酸酶和热胡萝卜素变性酶之类的酶，这种方法可以使细胞壁更易被分解，从而
使DNA更容易被收集。
总而言之，CTAB法提取植物基因组DNA是一种比较有效的方法，能够获得更高质量的DNA，但是在使用这种技术提取植物DNA时，需要注意一些关键的步骤及酶的使用，以确
保获得的DNA有较高的纯度。
CTAB法提取微生物DNA
CTAB法提取微生物DNACTAB法提取细菌DNA一.细菌总DNA提取1.将菌株接种于液体LB培养基中，37℃震荡培养过夜。
2.取1.5ml培养物12000rpm离心2min。
3.沉淀物加入567μl的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30μl 10%SDS和15μl的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h。
4.加入100μl 5mol/L NaCl，加入80μl CTAB/ NaCl溶液，混匀后65℃温育10min。
5.加入等体积酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min，将上清转入另一只离心管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混匀直到DNA沉淀下来，沉淀可稍微离心。
6.沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇，在洁净工作台稍加干燥，重溶于20μl TE缓冲液（含RNaseA＜25ng/ml）中，准备电泳检测。
二．琼脂糖凝胶电泳。
1. 制胶：称取琼脂糖粉末，置于三角瓶中，加入TAE缓冲液配成0.8%的浓度，加热脂使琼脂糖全部融化于缓冲液中，待溶液温度降至65℃时，立即倒入制胶槽中，插入样品梳。
在室温放置0.5-1h，待凝胶全部凝结后，轻轻拔出样品梳。
然后在电泳槽中加入电泳缓冲液直到没过凝胶为止。
2.加样：取0.5-1 ug 左右的样品，体积为10-20ul，加入1/4体积的溴酚兰-甘油指示剂，混匀后小心地加到样品槽中。
同时另取一个已知分子量的标准DNA 水解液，在同一凝胶板上进行电泳。
3. 电泳：维持恒压100V，电泳0.5-1h，直到溴酚兰指示剂移动到凝胶底部，停止电泳。
4. 染色：将凝胶取出后浸入0.5mg/ml 溴乙啶溶液中，染色0.5-1h。
染液可反复多次使用。
5. 观察：将凝胶板置于254nm波长紫外灯下进行观察。
DNA存在的位置呈现橙黄色荧光。
CTAB法提取真菌DNA1. 真菌培养菌丝，真空抽滤后，无菌水洗涤3次，再用80％乙醇洗1次。
2. 取50mg左右吸干的新鲜菌丝，加入600ul2×CTAB 提取缓冲液(含0.7mol/L NaC1，100mmol/L Tris-HC1 pH8.0，20 mmol/L EDTA ，10 g/L PVP-360，20g/LCTAB ,0.1％13-巯基乙醇) ，少许灭菌石英砂，在研钵中将菌丝充分研磨。
ctab法提取dna注意事项
ctab法提取dna注意事项以ctab法提取DNA注意事项DNA提取是分子生物学和遗传学研究中非常重要的一项实验技术。
CTAB法（Cetyltrimethylammonium Bromide法）是一种常用的DNA提取方法，它通过使用CTAB溶液来溶解细胞膜脂质，使DNA从细胞中释放出来。
在进行CTAB法提取DNA的过程中，我们需要注意以下几个方面。
1. 实验前的准备在进行DNA提取实验之前，我们需要准备好所有实验所需的试剂和设备。
这包括CTAB溶液、蛋白酶K、异丙醇、乙酸钠、磷酸盐缓冲液等。
同时，还需要准备好细胞样品，如细菌、植物、动物组织等。
确保所有试剂和设备的质量良好，并根据实验所需的量进行配制和保存。
2. 细胞破碎和溶解CTAB法的关键步骤是将细胞破碎和溶解，使DNA从细胞中释放出来。
破碎细胞的方法可以选择机械破碎、化学破碎或冻融破碎等。
在破碎细胞之后，使用CTAB溶液将细胞溶解，并与细胞中的蛋白质结合形成复合物。
CTAB溶液中的离子浓度和温度的控制非常重要，可以影响DNA的提取效果。
3. 蛋白质去除为了从CTAB-DNA复合物中去除蛋白质，我们需要添加蛋白酶K。
蛋白酶K可以降解蛋白质，但不会对DNA产生影响。
在蛋白酶K 的作用下，蛋白质会被降解，而DNA会被保留下来。
为了确保蛋白酶K的活性，我们需要控制适当的温度和反应时间。
4. DNA沉淀和洗涤添加异丙醇可以使DNA从溶液中沉淀出来。
异丙醇的浓度和加入量需要根据实验的需要进行调整。
沉淀后，我们需要用70%的乙醇洗涤沉淀物，以去除残留的盐和其他杂质。
洗涤过程中需要轻轻地将乙醇倒入试管中，避免对DNA沉淀的损害。
5. DNA溶解和保存最后一步是将DNA溶解在适当的缓冲液中。
磷酸盐缓冲液是常用的溶解DNA的缓冲液，pH值需要根据实验需求进行调整。
溶解后的DNA可以通过测定其浓度和纯度进行质量检测，并可以存储在低温下，如-20℃或-80℃，以便后续实验使用。
ctab法提取dna原理
ctab法提取dna原理咱们要从细胞里把 DNA 给弄出来，CTAB 法可是个厉害的招儿！先来说说 CTAB 是啥。
CTAB 这家伙，学名叫做十六烷基三甲基溴化铵，听着挺复杂，其实你就把它当成一个神奇的小助手。
细胞就像一个小小的城堡，DNA 被藏在里面。
CTAB 能打破城堡的墙壁，让里面的东西都跑出来。
它怎么做到的呢？因为 CTAB 可以和细胞里的一些成分结合，让细胞膜呀、细胞壁呀变得不再那么坚固，就像是给城堡的城墙开了个大口子。
当城墙被攻破，细胞里的各种东西都一股脑儿地跑出来啦，这里面可不光有咱们想要的 DNA ，还有蛋白质、多糖等等。
这时候，CTAB 又发挥作用啦，它能让蛋白质和多糖这些家伙乖乖听话，不跟 DNA 捣乱。
你看啊，DNA 是带负电的，CTAB 能和带负电的 DNA 结合在一起，形成一种复合物。
这个复合物就像是给 DNA 穿上了一层保护衣，让它不容易受到其他杂质的干扰。
接下来，咱们得把 DNA 从这个复合物里给分离出来。
这就得靠一些小手段啦，比如说加点盐。
加盐之后，DNA 就会从复合物里跑出来。
然后呢，再用酒精或者异丙醇这些神奇的液体。
DNA 在酒精或者异丙醇里溶解度很低，所以它就会乖乖地沉淀出来，变成小小的白色絮状物。
你是不是觉得很神奇？就这么一步步地，咱们就把细胞里那小小的 DNA 给提取出来啦！提取出来的 DNA ，就像是找到了宝藏一样。
咱们可以用它来做各种各样的实验，去探索生命的奥秘。
想象一下，通过这个小小的提取过程，我们能了解到一个生物的遗传信息，这多酷啊！CTAB 法就像是一个魔法，能把隐藏在细胞深处的 DNA 给变出来。
每次用这个方法，都感觉自己像是个小小的魔法师，能解开生命的密码。
不管是小小的细菌，还是大大的植物，只要用对了这个方法，DNA 都能被咱们收入囊中。
怎么样，是不是觉得 CTAB 法提取 DNA 特别有趣？这就是科学的魅力呀，总是能带给我们惊喜和探索的乐趣！。
CTAB法枯草芽孢杆菌(Bacillus-subtilis)基因组DNA的提取
CTAB法枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）基因组DNA的提取内容提要以枯草芽孢杆菌为材料，采用CTAB法（十六烷基三甲基溴化铵）提取枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的基因组DNA作为基因扩增的模板，并测定其含量和纯度。
本实验要求：提取高质量的基因组DNA为下一步的基因操作准备。
原理高纯度、高分子量的基因组DNA是构建基因组文库、Southern 杂交(包括RFLP)及PCR等后续的分子生物学操作的基础。
利用基因组DNA较长的特性，可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。
加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA 即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中，可用玻棒将其取出，而小分子DNA 则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部，从而达到提取的目的。
在提取过程中，染色体会发生机械断裂，产生大小不同的片段，因此分离基因组DNA 时应尽量在温和的条件下操作，如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓，以保证得到较长的DNA。
一般来说，构建基因组文库，初始DNA长度必须在100kb 以上，否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。
而进行RFLP 和PCR 分析, DNA长度可短至50kb，在该长度以上，可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下)，并可保证包含PCR 所扩增的片段(一般2kb 以下)。
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同；不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。
在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA 大分子。
尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR 反应等有较强的抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA 时, 应考虑除去多糖和酚类物质。
DNA的含量与纯度在研究工作中十分重要，常常需要测定。
目前使用较多和较简便的是紫外吸收法。
核酸在260nm波长有一特征吸收峰，根据其光密度（OD）值可计算DNA浓度。
利用CTAB法提取灵芝属部分菌株基因组DNA
表 1 几种常见的灵芝菌株
Ta b1 1 S e ve ra l comm o n iso la te s o f Ga no de rm a
编号
1 2 3 4 5 6 7 8
种 类 紫 芝 黑 芝 赤 芝 黑 芝 黑 芝 云 芝 甜 芝 赤 芝
Tag酶 、 ITS4、 ITS5 引物等购于上海生工生物工程技术服务有限公司 。 1 13 16 主要仪器 高速离心机 ( 5415D 高速离心机 , 德国 eppendorf公司 ) ; PCR 扩增仪 ( GeneAmp PCR System 9700,新加坡制造 ) ; 紫外凝胶成像系统 (日本 , B io - Rad 公司 ) ; 核酸蛋白分析仪 ( DU640, 美国 Beckm an 公司 ) 。 1 14 方法 1 14 11 试验材料获取 将适龄的用 SPDA 培养基保存的灵芝菌株在无菌的条件下转接到 PDA 培养基
ZHAN G J ie , KAN G J i2chuan
1 13 2 1 , CU I Yan 2hu i , GUO X in 2 m ei ( 11 The Key L abora tory of A g ricu ltu ra l B iotechnology,
Gu izhou U n iversity, Gu izhou Gu iyang 550025, Ch ina; 21L infen NO. 1 M idd le S chool of S hanx i P rovince, S hanx i L infen 041000 , Ch ina )
山 地 农 业 生 物 学 报 24 ( 6 ) : 555 ～557 , 2005
Journal of Mountain A griculture and B iology
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11P
山地农业生物学报
6 %&&1 年
改良的 !"# 培养基 （ $!"# 培养基） ： 马铃薯 %&&’ ， 山药 %&&’ ，蔗糖 %&’ ，葡萄糖 %&’ ， () % !*+ ,’ ，
［%， ,］ .) % * /0 1’ ， 维生素 2 / %&3’ ， 琼脂 %&’ ， 蒸馏水 / &&&34 ， 5) 自然 。 -’$* +・
灵芝菌丝体中含有大量的灵芝多糖、 三萜类、 蛋白质等物质， J’J 法提取 ’(% 虽然操作简单、 温和， 也 可以提取到分子量较高的 ’(%， 但是所得产物含糖类杂质较多， 对于普通 G#F 的影响较大， 而用 #$%& 法 则能解决这个问题。用传统的 #$%& 法提取 ’(% 的方法中， 饱和酚与氯仿 > 异戊醇是按照等体积加入的。 而在本实验中先是饱和酚的量大于氯仿 > 异戊醇的量， 然后氯仿 > 异戊醇的量大于饱和酚的量， 最后采用上 清液中加入等体积的氯仿 > 异戊醇。这样， 一是为了彻底除掉所提取样品中蛋白质； 二是为了使 ’(% 样品 中的饱和酚的残余量降至最低。另外， 传统的 #$%& 法中除了用高盐提取液外， 还要用无盐沉淀缓冲液和 高盐补充沉淀液， 按照传统的操作步骤， 不但费时而且繁琐， 现在将传统的 #$%& 简化之后， 去掉其中的无 （ 下转第 !"# 页）
/0 ,6 主要试剂及仪器 !" #" !$ 78#2 高盐提取液6 1&339: ・ 4 ; / 8<=> ; )7: 5) ?0 & ， /&339:・ 4 ; / @"8#， &0 .39:・ 4 ; / AB7: 体积分数 / ! ! ; 巯基乙醇 （ 使用之前加） ， 质量浓度 /&&’ ・ 4 ; / 78#2 （ 十六烷基三甲溴化铵） 。 !" #" %$ 8@ 缓冲液6 /&339: ・ 4 ; / 8<=> ; )7: 5) ?0 & ， /339: ・ 4 ; / @"8# 5) ?0 & 。 !" #" #$ 凝胶加样缓冲液6 %0 1’ ・ 4 ; / 溴酚蓝， +&&’ ・ 4 ; / 蔗糖。 !" #" &$ 溴化乙锭 （ @2 ） 液6 /&&3’ 溴化乙锭充分溶解在 /&34 的水中， +C 下避光保存。 !" #" ’$ 1 D 8<=> ; 硼酸电泳缓冲液 （ 5) ?0 & ） 6 1+’ 8<=>， %.0 1’ 硼酸， %&34 &0 139: ・ 4 ; / @"8#。稀释 /& 倍。 8B’ 酶、 E8$+ 、 E8$1 引物等购于上海生工生物工程技术服务有限公司。 !" #" ($ 主要仪器6 高速离心机 （ 1+/1" 高速离心机， 德国 F55FGH9<I 公司） ；!7J 扩增仪 （ KFGF#35 !7J $L>MF3 N.&& ， 新加坡制造） ；紫外凝胶成像系统 （ 日本， 2=9 ; JBH 公司） ；核酸蛋白分析仪 （ "OP+& ， 美国 2FQR3BG 公司） 。 /0 +6 方法 !" &" !$ 试验材料获取 6 将适龄的用 $!"# 培养基保存的灵芝菌株在无菌的条件下转接到 !"# 培养基 %1C 恒温培养 /& S /1H， 用灭菌的解剖刀将菌丝体从培养基上刮取， 放入事先冷却的无菌研钵中， 加液 上， 氮充分研成粉末， 转入 /0 134 F55FGH9<I 离心管中。
%6 结果与分析
%0 /6 "A# 产量和纯度的比较 结果如表 % 所示。从表 % 可见， 供试菌株 / 、 %、 ,、 +、 1、 P、 .、 ? 用简化的 78#2 法提取的 "A# 均为白色 能有效地抑制色素类物质的产生。核酸蛋白分析仪分 或乳白色沉淀， 说明此方法提取的 "A# 效果较好， 析 "A# 效果较好， *" 值接近 /0 ? ， 可用于普通 !7J 扩增， 进行灵芝属分子系统学的研究。
关键词： 灵芝属； 基因组 =>4； ?@49 法； 凝胶电泳 中图分类号： AB#BC D"(C $ ； ABD E DD! ! 文献标识码： 4! ! 文章编号： ;((F E (#%’ （ "((% ） ($ E (%%% E (D
!"#$ %& ’()*"+),-. .’-%/’ 012 &*%/ 3"*),"4 ,$%4")’$ %& !"#$%&’("
DDA
!, !" ’(% 琼脂糖凝胶电泳检测结果 简化的 #$%& 法虽然未用 F(*40% 去除 F(%， 但由于 F(% 在自然状态下能迅速降解， 所得到的 ’(% 样品中不会因残留少量的 F(% 而影响普通的 G#F 反应。从图 @ 的检测结果可以看出， 此方法所得到的 ’(% 条带清晰明亮， 说明 ’(% 含量高， ’(% 片段分子量长在 !AH+ 左右， 可用于普通 G#F 扩增。 !, B" I$J K G#F 扩增结果 用编码核糖体转录间隔区的某段 ’(% 序列设计的引物 I$JC 和 I$JD ， 供试菌株 @ 、 !、 B、 C、 D、 <、 A、 ?用 简化的 #$%& 法提取的 ’(% 进行 I$J K G#F 扩增反应， 扩增出的片断清晰， 分子大小在 C== L D==+9， 且重 复性好， 扩增结果稳定， 可以进行灵芝属菌株的分子系统学研究 （ 见图 ! ） 。
（$） ： %%% & %%’ ， "((% 山 地 农 业 生 物 学 报! "#
)*+,-./
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・研究简报・
利用 !"#$ 法提取灵芝属部分菌株基因组 %&新梅;
（ ;< 贵州大学 农业生物工程省级重点实验室，贵州 贵阳! %%(("% ； "< 山西省 临汾市 临汾一中，山西 临汾! (#;((( ）
［ 1， P］ 量保存缓冲液 （ 8@ ） 。 ， +C 保存待用
!" &" #$ "A# 琼脂糖凝胶电泳6 / ! 的琼脂糖凝胶， &0 1 D 82@ 为电泳缓冲液， 上样 , "4 ?&W 电压下电泳 /V 检测 "A# 样品纯度 （ 通常情况下电泳检测为明亮的一条带， 无杂带， 即达到要求） 。 !" &" &$ E8$ ; !7J 扩增6 采用通用引物 E8$（ 、 E8$1 。 E8$ ; !7J 反应在 !7J + EGMF<GB: 8<BG>Q<=XFH $5BQF< ） 扩增仪上进行。采用 1& "4 反应体系： 8B’ 酶 &0 1 "4； /& D 2YIIF< 1 "4； /&339:・ 4 ; / -’7:% P "4； /&339:・ 4 ;/ HA8! / "4； E8$+ 、 E8$1 引物 &0 %339: ・ 4 ; / 各 / "4； , "4 "A# 模板； 无菌双蒸水补足至 1& "4。反应条件如下： （/） N+C 预变性 13=G； （%） N+C 变性 /3=G； （,） 1&C 退火 /3=G； （+） .%C 延伸 /3=G。 （ % ）S （+ ） 重复 ,& 个循 环； （1） .%C 整理 /&3=G。
第 < 期"
张$ 杰， 等： 利用 #$%& 法提取灵芝属部分菌株基因组 ’(%
表 !" 简化 #$%& 法提取灵芝属菌株 ’(% 的 )’ 值 $*+, !" )’ -*./0 12 ’(% 12 !"#$%&’(" 341.*504 /4367 4389.3230: #$%& 805;1:4
编" 号 @ ! B C D < A ? ’(% 沉淀 白" 色 白" 色 乳白色 白" 色 乳白色 乳白色 白" 色 白" 色 %!<= > %!?= @, ?! @, A? @, <A @, ?B @, AE @, AE @, ?< @, ?<