复方党参口服液对免疫应激蛋雏鸡免疫分子的影响

复方党参口服液对免疫应激蛋雏鸡免疫分子的影响
张孝清;童小明;温伟业
【摘要】本试验旨在研究以党参为君药制成的复方党参口服液对免疫应激状态下
的蛋雏鸡血清 IgG、白细胞介素‐2和血清促肾上腺皮质激素（ACT H ）水平的影响。

本试验将150羽体重相近健康的1日龄蛋雏鸡随机分成5组，每组30羽，
即高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型对照组和基础组，从3日龄开始，高、中、低剂量组分别按8、4、2 mg／kg体重饮水添加口服液，连续添加10 d。

7
日龄时高、中、低及模型对照组肌肉免疫注射新城疫Ⅰ系疫苗制造免疫抑制模型，基础组不做任何处理。

分别于8、16、24、32、40日龄采血测定复方党参口服液对免疫分子的影响。

结果显示，在16、24、32日龄时，高、中、低剂量组血清
Ig G含量均极显著高于模型对照组（ P＜0.01），且3个剂量组中免疫抑制雏鸡
血清IgG含量由高到低依次为：高剂量＞中剂量＞低剂量；在8、16日龄时，高、中剂量组血清IL‐2含量显著或极显著高于模型对照组（ P＜0.05；P＜0.01），24、40日龄时，3个剂量组均极显著高于模型对照组（P＜0.01），32日龄时，
高剂量组极显著高于模型对照组（P＜0.01），中剂量组显著高于模型对照组（P
＜0.01）；在8、16、24和40日龄时，高、中剂量组血清AC T H含量显著或极显著低于模型对照组（ P＜0.05；P＜0.01），32日龄时，高剂量组显著低于模型对照组（P＜0.05），试验后期3个剂量组和模型对照组的ACTH水平逐渐接近于基础组，说明免疫应激对ACT H的升高呈现一过性。

综上所述，复方党参口服液
能提高免疫应激蛋雏鸡血清中IgG和IL‐2水平，降低ACT H的水平，但是不能
降低到基础组的正常水平，综合来看，高剂量组复方党参口服液效果最优。

%The test was aimed at determining the effects of compound Codonopsis oral liquids with Codonopsis pilosula as monarch drug on levels of IgG ,IL‐2
and ACTH of serum with immuno‐logical stress in layer chickens .One hundred and fifty healthy chickens at one day old with the same body weight were divided into five groups of 30 chickens per group :High dose group ,medi‐um dose group ,low dose group ,model control group and base control group ,respectively .From the 3 days old ,the high ,medium and low dose groups were respectively administered 8 ,4 and 2
mg/(kg · BW) compound Codonopsis oral liquids for 10 days;The chickens of 3 different dose groups and model control group were intramuscularly injected Newcastle disease (ND) va ccinesⅠ to make immunosuppressive models on 7th day .The samples were collected and IgG ,IL‐2
and ACTH contents in serum were determined on the
8th ,16th ,24th ,32th and 40th day .The results showed that on the
16th ,24th and 32th day ,the IgG content of 3 different dose groups were ex‐tremely significantly higher than that of model control group
(P<0 .01) ,and high dose group>middle dose group>low dose group .On the 8th and 16th day ,the IL‐2 level of high and middle dose groups were extremely significantly or significantly higher than that of model control group (P<0 .05 ;P<0 .01) ,and on the 24th and 40th day ,3 different dose groups were extremely signif‐icantly higher than that of model control group (P<0 .01) ,and that of high dose group was ex‐tr emely significantly higher (P< 0 .01)while middle dose group was significantly higher
(P<0.05)than the model control group on the 32th day ;On the
8th ,16th ,24th and 40th day ,the ACT H content of high and middle dose groups were extremely significantly or significantly lower than that of
model control group (P<0 .05 ;P<0 .01) ,and that of high dose group was signifi‐cantly lower than model control group on the 32th day (P<0 .05) .At the late experiment period , the ACT H content of 3 different dose groups were gradually became similar to base control group ,in‐dicating that the effect of immunosuppressant on ACTH was transient .In conclusion ,the compound Codonopsis oral liquids could increase the level of levels of IgG ,IL‐2 and reduce the level of ACTH of se‐rum ,but it could not decrease to the level of base control group ,and high dose had better effects .
【期刊名称】《中国畜牧兽医》
【年(卷),期】2016(043)008
【总页数】6页(P2066-2071)
【关键词】复方党参口服液;蛋雏鸡;免疫应激;免疫分子
【作者】张孝清;童小明;温伟业
【作者单位】朔州职业技术学院生物工程系，朔州036002;山西省应县第一中学校，应县 037600;山西农业大学动物科技学院，太谷030801
【正文语种】中文
【中图分类】S831.5
复方党参口服液是由党参、黄芪、刺五加、牡丹皮、淫羊藿等中药按照配伍原则组成的具有健脾、补肾功能的方剂，按口服夜的制备工艺制成口服液。

目前国内外大量研究表明，党参、黄芪等中药可促进动物免疫器官的发育，提高抗体水平，提高白细胞介素-2 (IL-2)的表达，降低促肾上腺皮质激素(ACTH)水平，从而发挥提高
机体免疫力的作用[1-2]。

但是以党参为君药构成的复方口服液，对免疫应激下的
动物提高免疫机能的研究鲜有报道，本研究旨在通过研究复方党参口服液对免疫分子的作用来阐述其对试验性免疫应激雏鸡的影响，为复方党参口服液的生产和动物免疫应激下的临床应用提供理论依据。

1.1 材料
1.1.1 药物与疫苗复方党参口服液自制，方剂组成：党参、黄芪、刺五加等；新城疫Ⅰ系疫苗(批号：20060512)购自山西隆克尔生物制药公司。

1.1.2 主要试剂I125免疫球蛋白G (IgG)放射免疫分析药盒(20061031)购自原子高科股份有限公司；I125 IL-2放射免疫分析药盒(20061225)购自北京科美东雅生物技术有限公司；I125 ACTH放射免疫试剂盒(20060825)购自天津德普生物技术公司。

1.1.3 主要仪器TDL-5-A台式离心机购自上海安亭科学仪器厂；放射免疫自
动分析仪购自中国科大中佳公司；微量移液器购自北京青云航空仪表有限公司；KQ-600B型超声波清洗器购自昆山市超声仪器有限公司。

1.2 试验设计与饲养管理
1日龄海兰褐雏鸡200羽购自太谷县韩村种鸡场。

雏鸡适应性饲养3 d，并在1、3、7日龄时分别采血3份，测定母源抗体，于当日实施肌肉注射免疫。

在雏鸡3
日龄时挑选150只健康、体重均匀的雏鸡，随机分成5组，每组5个重复，每个
重复6只雏鸡，即口服复方党参液高剂量组(8 mg/kg 体重)、中剂量组(4 mg/kg 体重)、低剂量组(2 mg/kg 体重)、模型对照组和基础组，从3日龄给药连续口服
给药到12日龄，共10 d；7日龄注射新城疫Ⅰ系疫苗2头份(基础组除外)。

整个饲养期为40 d。

雏鸡进入鸡舍之前用福尔马林和高锰酸钾溶液熏蒸消毒鸡舍，提
前1 d对鸡舍预热。

温度达到33 ℃饲养过程中每隔2 d对鸡舍用新吉尔灭带鸡消毒[3]。

1.3 样本的采集与预处理
分别于8、16、24、32、40日龄时每组随机取5羽，编号并称重，无菌心脏采血5 mL，置于一斜面自然析出，3 000 r/min离心10 min。

将血清装入EP管，置于-4 ℃冰箱存储备用。

1.4 测定指标与方法
IgG放射免疫分析试剂盒说明书进行加样，充分混匀，37 ℃温育1 h，3 500
r/min离心20 min，弃去上清液后测各管放射计数60 s；按IL-2放射免疫分析试剂盒说明书进行加样，充分混匀，室温放置15 min，离心前任取2管，作为总放射性T，离心20 min，弃去上清液后，测各管放射计数60 s；按ACTH放射免疫分析试剂盒说明书进行加样，充分混匀，加样后放免管用封口膜封严，4 ℃温育24 h，温育后向所有试管中加入1 mL冷的沉淀溶液，振荡混匀，3 000 r/min离心15 min，弃去上清液后，测各管放射计数60 s。

1.5 数据处理
用SPSS 11.5进行单因数方差分析，结果均以平均值±标准差表示，以P<0.05作为差异显著性判断标准。

2.1 复方党参口服液对免疫应激蛋雏鸡血清IgG含量的影响
各组鸡血清IgG含量变化情况见表1。

由表1可知，模型对照组和基础组IgG含量在8和32日龄时差异不显著(P>0.05)，16、24和40日龄时差异极显著
(P<0.01)，16和24日龄时模型对照组低于基础组，32和40日龄时模型对照高于基础组。

8日龄时模型对照组IgG含量和高、中、低剂量组间差异均不显著(P>0.05)；16日龄时高、中、低剂量组均极显著高于模型对照组(P<0.01)，高剂量和中剂量差异显著(P<0.05)，高剂量组极显著高于低剂量(P<0.01)，中、低剂量组差异显著(P<0.05)；24日龄时高、中、低剂量组IgG含量均极显著高于模型对照组(P<0.01)，高、中剂量组差异不显著(P>0.05)，但极显著高于低剂量
(P<0.01)；32日龄时高、中、低剂量组IgG含量均极显著高于模型对照组
(P<0.01)，高剂量组和中、低剂量组差异极显著(P<0.01)，中、低剂量组差异不
显著(P>0.05)；40日龄时高剂量组IgG含量极显著高于模型对照组(P<0.01)，中剂量组显著高于模型对照组(P<0.05)，低剂量组和模型对照组差异不显著
(P>0.05)，高剂量显著高于低剂量组(P<0.05)。

同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；肩标不同大写字母表示差异
极显著(P<0.01)；肩标相同字母或无字母标注表示差异不显著(P>0.05)。

下同
In the same column，values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05)；And with different capital letter superscripts mean extremely significant difference (P<0.01)；While with
the same or no letter superscripts mean no significant difference
(P>0.05).The same as below
2.2 复方党参口服液对免疫应激蛋雏鸡IL-2含量的影响
复方党参口服液对免疫应激蛋雏鸡IL-2含量的影响见表2。

由表2可知，模型对
照组和基础组IL-2含量在8、32和40日龄时差异不显著(P>0.05)，16日龄时差异极显著(P<0.01)，24日龄时差异显著(P<0.05)，各日龄阶段模型对照组IL-2含量均低于基础组。

8日龄时高、中剂量IL-2含量显著高于模型对照组(P<0.05)，
低剂量组和模型对照组差异不显著(P>0.05)，高、中、低剂量之间差异不显著(P>0.05)；16日龄时高、中、低剂量组IL-2含量极显著高于模型对照组(P<0.01)，中剂量和高、低剂量组差异显著(P<0.05)，高剂量和低剂量差异极显著(P<0.01)；24日龄时高、中、低剂量组IL-2含量极显著高于模型对照组(P<0.01)，高剂量组极显著高于中、低剂量组(P<0.01)，中剂量组显著高于低剂量组(P<0.05)；32日
龄时高剂量组IL-2含量极显著高于模型对照组(P<0.01)，中剂量组显著高于模型
对照组(P<0.05)，低剂量组和模型对照组差异不显著(P>0.05)，高剂量组显著高
于低剂量组(P<0.05)；40日龄时高、中、低剂量组IL-2含量均极显著高于模型对照组(P<0.01)，但3组间差异不显著(P>0.05)。

2.3 复方党参口服液对免疫应激蛋雏鸡ACTH含量的影响
复方党参口服液对免疫应激蛋雏鸡ACTH含量的影响见表3。

由表3可知，模型
对照组ACTH含量和基础组在8、16、24和32日龄时差异均极显著(P<0.01)，40日龄时差异不显著(P>0.05)，模型对照组均高于基础组。

8日龄时高、中剂量
组ACTH含量显著低于模型对照组(P<0.05)，模型对照组和低剂量组差异不显著(P>0.05)，高、中剂量组和低剂量组差异显著(P<0.05)，高、中剂量组间差异不
显著(P>0.05)；16日龄时高、中剂量组ACTH含量极显著低于模型对照组
(P<0.01)，低剂量组显著低于模型对照组(P<0.05)，高、中剂量组显著低于低剂
量组(P<0.05)，高、中剂量组间差异不显著(P>0.05)；24日龄时高、中剂量组ACTH含量显著低于模型对照组(P<0.05)，低剂量组和模型对照组差异不显著(P>0.05)，高、中、低剂量组间差异均不显著(P>0.05)；32日龄时高剂量组ACTH含量显著低于模型对照组(P<0.05)，高、中、低剂量组间差异不显著
(P>0.05)；40日龄时高、中、低剂量ACTH含量均显著低于模型对照组(P<0.05)，但3组间差异不显著(P>0.05)。

各剂量组的ACTH含量值接近于基础组。

3.1 复方党参口服液对免疫应激蛋雏鸡血液中IgG含量的影响
血清中IgG含量是机体体液免疫活性细胞产生体液免疫分子的体现，是体液免疫
功能状态的重要指标[4]。

通过模型分析，16和24日龄时，模型对照组IgG含量
极显著低于基础组，40日龄时，模型对照组IgG含量极显著高于基础组，可能是因为基础组没有受到抗原的刺激，母源抗体逐渐消失，整个试验期一直处于下降趋势。

从16日龄到24日龄时能反映出免疫抑制对机体抗体水平影响，说明模型是
成功的。

与模型对照组相比，高、中、低3个剂量组均能促进IgG含量增加，但
是从试验结果分析，高剂量和中剂量效果优于低剂量，高剂量的效果最优。

从8
日龄到32日龄，高剂量组IgG含量处于上升趋势，32日龄时最高，到40日龄时有平缓的下降迹象，表明24天左右IgG水平就能达到最高浓度，复方党参口服液促进机体的IgG含量增加，说明复方党参口服液能提高雏鸡的体液免疫水平。

本试验结果和刘晶等[5]、杨玉荣等[6]报道IgG含量变化结果相似，但是数值偏低，可能是试验方法不同所致。

3.2 复方党参口服液对免疫应激蛋雏鸡血液中IL-2含量的影响
白细胞介素是介导细胞间相互作用的一组免疫因子，其中IL-2又称为T细胞生长因子，主要由T淋巴细胞(CD4+和CD8+ T细胞)产生，有多种免疫增强效应，在众多的细胞因子网络中起重要作用。

其能维持活化的T细胞生长及克隆性增殖，诱导杀伤细胞的产生及活性，增强细胞免疫功能，也能促进B淋巴细胞产生免疫应答。

同时能促进巨噬细胞和自然杀伤细胞(NK)等增殖，还可诱导分泌多种细胞因子等免疫活性物质。

随着医学领域学者对中药免疫调节作用研究的深入，已发现许多中药提取物、单味中药及其中药复方对IL-2的产生及活性有影响，有的具有增强作用，有的具有抑制作用，有的具有双向免疫调节作用[7-14]。

本试验用复方党参口服液对免疫应激抑制蛋雏鸡血清中的IL-2含量进行了测定，发现与对照组相比，模型对照组IL-2含量在16和24日龄时受免疫应激抑制明显的抑制，后期又呈上升趋势，因此免疫抑制对血液中IL-2含量的影响呈一过性抑制。

8日龄时高、中剂量组IL-2含量高于低剂量，16日龄时高剂量组高于中剂量组，中剂量组高于低剂量组。

24日龄时3个剂量效果均较好。

32日龄时血液中IL-2含量开始下降，此时仅有高剂量效果比较突出，中剂量也有一定的效果。

40日龄时呈现平缓的上升趋势，这可能是由于中药具有缓慢调节作用，药物在雏鸡体内分布和数量缓慢增加，随着机体自身生长，雏鸡免疫功能的增强，与IL-2水平呈上升趋势相叠加，从而增加了IL-2含量。

3个剂量组中免疫抑制雏鸡血清IL-2含量由高到低依次为：高剂量>中剂量>低剂量。

本研究结果和前人的试验结果相
似[15-18]，整个试验期结果表明，复方党参口服液能够提高血液中IL-2水平和机体的细胞免疫机能，进一步证明该药能够提高机体的体液免疫和细胞免疫机能。

3.3 复方党参口服液对免疫应激蛋雏鸡血清中ACTH含量的影响
前人试验表明，当动物机体处于应激状态时，血液中ACTH水平上升会促进肾上
腺糖皮质激素分泌，过多的糖皮质激素分泌可引起机体免疫机能抑制，致使抗病能力下降，诱发各类因免疫力下降引起的疾病[19-22]。

因此，ACTH水平降低，是
解决应激免疫抑制的一个重要标志。

本研究结果表明，模型对照组和基础组除了
40日龄时ACTH含量差异不显著外，其他时间点均极显著高于基础组，后期模型对照组ACTH水平逐渐降低，初步说明免疫应激引起机体的免疫抑制呈现一过性
抑制，可能是随着机体的生长逐渐恢复并接近生理水平。

整个试验期ACTH含量
先升高后降低，16日龄时ACTH含量达到最高。

16日龄时高、中剂量组极显著
低于模型对照组，8和24日龄时高、中剂量组ACTH含量显著低于模型对照组，32日龄时只有高剂量组显著低于模型对照组。

40日龄时高、中、低剂量均显著低于模型对照，40日龄时各剂量组和模型组间ACTH含量开始接近于基础组的含量，进一步证明，试验后期ACTH含量逐步恢复并接近机体的生理水平。

复方党参口
服液能降低免疫应激蛋雏鸡ACTH含量，但是并不能降低到基础组的水平，说明
复方党参口服液对血液中ACTH含量有一定的调控作用，但是不能从根本上降低ACTH的含量。

本试验中模型组和基础组ACTH水平变化趋势和许彤[23]和高文
伟[24]研究结果基本符合，应激前期激素水平较高。

本试验虽然用复方党参口服液未能根本上解决应激引起的ACTH水平偏高这一问题，但是为降低ACTH水平提
供了一个重要的启示，有待于进一步深入研究。

3.4 关于免疫应激模型制作与建立意义
目前制造免疫抑制模型的主要方法是注射环磷酰胺和脂多糖(LPS)，也有报道强毒
攻击作疾病免疫抑制模型。

本试验应用的新城疫Ⅰ系疫苗具有中等毒力，接种于7
日龄的雏鸡有相对较强的毒力。

在肌肉注射过程中主要有3个方面的作用可引起
应激反应：①由于针刺和抓捕；②由于强毒力新城疫毒株的作用于鸡体，免疫应答过程中引起免疫系统作相应的对抗；③由于接种剂量超出正常的免疫剂量，这些因素都会对机体产生应激，试验结果已证明用强毒疫苗能够建立起动物应激模型。

用中药组方来对抗免疫应激能够起到一定的效果，尤其是高剂量作用最优，因此对于消除免疫应激和其他应激因素引起的免疫抑制提供一定依据。

复方党参口服液能提高应激免疫抑制雏鸡血清中的IgG和IL-2的含量，降低血清中的ACTH含量。

通过量效关系分析，高、中剂量复方党参口服液对于提高动物
机体的免疫机能效果较好。

对于抑制应激激素ACTH来说，高剂量复方党参口服
液效果最优。

【相关文献】
[1] Yan J S，Shan A S，Wang H Y，et al.Influence of supercritical CO2 extraction of Schisandra chinensis on antioxidant status，carcass and meat quality of AA broilers[J].The Journal of Poultry Science，2013，50(3)：219-227.
[2] Haruhiko O S，Makoto Y Z，Hiroyuki A B，et al.Heat stress modulates cytokine gene expression in the spleen of broiler chickens[J].The Journal of Poultry Science，2015，2(4)：282-287.
[3] Vestergaard M J，Purup S M，Henckel P，et al.Effects of growth hormone and ovariectomy on performance，serum hormone，insulin-like growth factor-binding proteins，and muscle fiber properties of prepubertal Friesian heifers[J].Journal of Animal Science，1995，73(12)：3574-3584.
[4] 程发祥，张浩，余雄，等．13种激素对暖季天然草场放牧羔羊生长发育调控的研究[J].中国畜牧兽医，2010，37(4)：21-25.
[5] 刘晶，郑世民.雏鸡感染毒害艾美耳球虫后血清免疫球蛋白含量的动态变化[J].动物医学进展，2005，26(4)：75-77.
[6] 杨玉荣，郑世民，刘晶，等.雏鸡服用益生素后免疫器官指数及局部体液免疫球蛋白相对含
量的动态变化[J].畜牧兽医学报，2005，36(4):352-356.
[7] 佟丽，黄添友，吴波，等.三种植物多糖对小鼠脾细胞产生IL-2的影响[J].中国药理通报，1994，10(6)：473-474.
[8] 刘湘龄，雷岁合，董小慧.雷公藤甲素对小鼠移植皮片存活期MLR及IL-2水平的影响[J].西安医科大学学报，1999，20(6)：185-187.
[9] 孙奕，王景明，骆永珍.淫羊藿总黄酮促进免疫功能低下小鼠IL-2和NK活性的实验研究[J].中草药，2002，33(7)：635-637.
[10] 陈智松，吴志奎，王蕾.枸杞多糖对衰老小鼠IL-2、IL-2R的效应[J].中国免疫学杂志，2001，6：312-313.
[11] 王再涛，童光东.温补培元方对脾虚大鼠细胞因子IL-2的影响[J].安徽中医学院学报，2001，20(12)：4l-42.
[12] Zhong X H，Zhou Z X，Li T S，et a1.Anti-abortive effect of Radix scutellariae and Rhizoma atractylodis in mice[J].Amer Chi Med，2002，30(1)：109-117.
[13] Lillehoj H S，Kaspers B，Jenkins M C.et al.Avian interferon and interleukins-2：A review by comparision with mammalian homologues[J].Poult Sci，1992，4：67-85. [14] Chu Y F，Yan X M.Effect of Chinese herbal medicinal ingredients on IL-2 mRNA levels of T lymphocytes in mice measured using semi-quantification RT-PCR[J].Agricultural Sciences in China，2006，5(11)：873-878.
[15] 刘超男.雏鸡应用益生素后细胞免疫功能和IL-2诱生活性的动态变化[J].中国兽医杂志，2005，41(7)：13-15.
[16] 张新强，白凌云.复方党参口服液对正常小鼠IL-2基因表达的影响[J].畜牧兽医科技信息，2013，8：16-17.
[17] 刘成松，王玉萍，史彦斌，等.硫磺熏蒸党参对小鼠免疫功能的影响[J].中药材，2014，
37(11)：1969-1972.
[18] 晏永新，张丽，贾海芳，等.党参多糖口服液对小鼠免疫功能的影响[J].中国兽药杂志，2013，47(3)：18-20.
[19] Cook M E，Miller C C，Park Y，et al.Immune modulation by altered nutrient metabolism：Nutritional control of immune-induced growth depression[J].Poult Sci，1993，72：1301-1305.
[20] 余建国，姜正前，严晗光，等.茯苓多糖对雏鸡细胞免疫活性的影响及其抗肿瘤作用[J].中国
兽药科技，2004，34(11)：70.
[21] 姚实林，张杰，汪涛，等.银翘玉屏风汤拮抗急性风寒应激小鼠免疫功能抑制作用实验研究[J].时珍国医医药，2004，12(2)：97-99.
[22] 商云霞，朱晓庆，谷新利，等.一定纯度中药复方多糖对鸡细胞免疫和体液免疫的影响[J].中
国畜牧兽医，2015，42(4)：943-949.
[23] 许彤.实验性免疫应激对雏鸡血液激素和免疫功能的影响[D].晋中：山西农业大学，1999.
[24] 高文伟.实验性免疫应激对雏鸡体液免疫和细胞免疫功能的影响[D].晋中：山西农业大学，2000.。