比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG

⽐较免疫磁珠法与A蛋⽩亲和层析法纯化兔抗⾎清中的IgG
⽐较免疫磁珠法与A蛋⽩亲和层析法纯化兔抗⾎清中的IgG
郝华1，鄢庆枇1，2，邹⽂政1，2，纪勇1，2
【摘要】［摘要］优化了免疫磁珠分离法纯化抗⾎清的实验条件，并与A蛋⽩亲和层析法⽐较纯化效果，以求得到⼀种简便、快速、⾼效的纯化IgG⽅法.结果表明:从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价⾼达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗⾎清，磁珠与IgG结合10 min达到平衡，其最⼤结合量为
0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋⽩亲和层析法得到的IgG纯度都很⾼，经过SDS－PAGE电泳都只得到25 ku和55 ku左右的两条带;免疫磁珠分离法得到的抗体ELISA效价⾼于A蛋⽩亲和层析法;免疫磁珠分离法反应所需时间(10 min)⼩于A蛋⽩亲和层析法所需的20 min，其得率 (11.5
mg/mL)也⾼于A蛋⽩亲和层析法的10.25 mg/mL.
【期刊名称】集美⼤学学报（⾃然科学版）
【年(卷),期】2011(016)002
【总页数】5
【关键词】［关键词］免疫磁珠;A蛋⽩亲和层析;抗体纯化
0 引⾔
基于抗原－抗体特异性反应的免疫检测技术具有灵敏、快速、准确等优点，被⼴泛应⽤于各类样品的检测.抗体的分离纯化是许多免疫检测的基础性⼯作.⽬前，纯化抗体的⽅法主要有硫酸铵分步盐析法［1］、阴离⼦交换树脂法［2］、A蛋⽩Sepharose层析法［3］、⾼压液相离⼦交换层析法［4］等.虽然这些⽅法⽬前能够满⾜免疫检测的需要，但或者存在操作程序繁琐、时间较长、介质昂贵等问题，或者纯化产物达不到⾼灵敏度或定量检测的要求［5］，因此寻找更为快速、简便、⾼效的抗体纯化技术始终是免疫检测⽅法研究的⼀部分.免疫磁珠分离技术 (immunomagnetic bead-based separation，IMS)是近年来建⽴并得到快速发展的⼀项免疫学检测和分离技术，它是以⾼均⼀性的磁性微球为固相载体，表⾯包被有免疫配基 (如抗体等)，利⽤特异性的免疫反应从混合溶液中分离检测靶物质［6－7］.免疫磁珠的主要特点有:1)分离速度快、效率⾼、可重复性好
;2)操作简单、特异性强;3)不影响被分离细胞或其⽣物材料的⽣物学性状和功能［8］.⽬前该项技术在细胞分离及微⽣物学检测等⽅⾯均取得了较⼤的进展.本⽂⽤免疫磁珠分离技术纯化实验室制备的兔抗⾎清中的IgG，并与A蛋⽩亲和层析法⽐较，以评价免疫磁珠分离技术在抗体纯化中的应⽤前景.
1 材料与⽅法
1.1 磁珠与菌株
本实验所⽤磁珠为Dynal公司的Dynabeads(r)M－280 Sheep anti－Rabbit IgG，浓度为。