miR-29b在2型糖尿病和前期糖尿病患者血清中的表达及临床意义

miR-29b在2型糖尿病和前期糖尿病患者
血清中的表达及临床意义
何丽亚，吴政治，王平，夏光云
(合肥市第一人民医院普内科，安徽合肥230061)
摘要：目的探讨血清m R-29b作为生物标志物在2型糖尿病(T2D)和前期糖尿病中的诊断价值。

方法应用R T-P C R检测
24例T2D患者、22例空腹血糖受损（I F G)或葡萄糖耐量受损（I G T)的前期糖尿病患者以及24例健康对照者的血清中q R-
29B的表达水平，并通过多因素l〇glsC回归和受试者工作特征（R O C)分析明确m4-29b潜在的诊断价值。

结果与健康对照
组（1. 03 ±0. 38)相比，T2D(0.49 ±0. 24)和 I F G/I G T(0. 50 ±0. 33)患者的血清 m i R-29B表达水平显著降低（P <0. 05)。

多因
素 logistic 回归分析证实低表达 m i R-29B与 T2D(0H:0. 51;95%8$0. 16 ~0. 73; P <0. 05)和 I F G/I G T"0H:0. 56;95%8$ 0. 23 ~0. 79; P <0.05)明显相关。

这种关联在考虑年龄、B M I指数和高血压以及其他生化指标后仍然差异有统计学意义。

此 外，R O C分析显示，血清 m i R-29B能清楚区分健康对照和 T2D(A U C 0. 864;95%8 0. 759 ~0. 969;P <0. 001)、I F G/I G T(A U C
0.846;95%80.737 ~0.954;P<0.001)患者。

结论T2D和I F G/I G T患者血清m i R-29B表达水平显著降低，可以作为T2D
和I F G/I G T潜在的诊断指标。

关键词:糖尿病，2型;葡糖耐量试验;人体质量指数;高血压;分子诊断技术;微小R N A29B
doi ：10. 3969/j. issn. 1009 -6469. 2018.07.029
E x p r e s s i o n a n d c l i n i c a l s i g n i f i c a n c e o f s e r u m m i R-29b
i n t y p e2d i a b e t e s m e l l i t u s a n d p r e-d i a b e t e s
H E L i y a，W U Z h e n g z l i i，W A N G P i n g，X I A G u a n g y u n
(Department of General Internal Medicine，the First People"Hospital of Hefei，Hefei，Anhui230061，China)
A b s t r a c t:Objective T o investigate the diagnostic value of s e r u m m i R-29b as a biomarker in type 2 diabetes (T2D)a n d pre-diabetes.
M e t h o d s T h e expression levels of s e r u m m i R-29b of 24 patients with T2D，22patients with impaired fasting glucose (I F G)or i m­paired glucose tolerance (I G T)a n d 24 healthy controls were m e a s u r e d b y R T-P C R.Multivariate logistic regression ing characteristic ( R O C) analysis were conducted to evaluate potential diagnostic value of m i R-29b.Results S e r u m m i R-29b expres­sion levels were significantly decreased in patients witli T2D a n d IFG/IG^T individuals，c o m p a r e d with 0.05).A s determined b y multivariate logistic regression analysis，lower m i R-15a expression w a s significantly
(O R：0.51;95%C I：0.16-0.73;P<0.05) a n d IFG/I(；T( O R，0.56;95%C I，0.23-0.79;P <0. 05). This m a i n e d statistically significant following adjustment for a g e，b o d y m a s s index a n d hypertension，as well as Furt h e r m o r e，R O C analysis revealed that blood m i R-29b distinguished patients with T2D a n d I F G/I G T individuals fromhealthy controls (A U C 0. 864; 95%Cl 0. 759-0. 969;P<0. 001 a n d A U C 0. 846; 95%Cl 0. 737-0. 954;P<0. 001，respectively) .C o n c l u s i o n S e­
r u m m i R-29b expression levels are significantly lower in patients withi T2D a n d IFG/IG^T individuals，a n d m i R-29b in s e r u m m a y serve
as a potential b iomarker for T2D a n d I F G/I G T diagnosis.
K e y w o r d s：Diabetes mellitus，type 2;Glucose tolerance test;B o d y m a s s index;Hypertension;Molecular diagnostic techniques;M i R-29b
2型糖尿病（T y p e 2D i a b e t e s，T2D)是世界范围 内最常见的代谢性疾病，主要特征是胰岛素敏感性 降低和胰岛素抵抗导致的高血糖，占所有糖尿病病 例约90%[1-]。

近期多项研究表明以前的诊断模式，尤其是仅仅基于空腹血糖，低估了糖尿病的存
通信作者:夏光云，女，副主任医师，研究方向为内科常见疾病的诊断 与治疗，E-mail:983398243@ 在，很多糖尿病病例被遗漏[2-]。

虽然口服葡萄糖 耐量试验（O G T T)是糖尿病诊断的金标准，但是因 为检测过程更复杂，一些患者不予采用，这也造成了 一定程度的误诊。

研究发现微小R N A(m i c r o R N A)参与多种代谢途径，包括胰岛素分泌、体内糖平衡、碳水化合物和脂质代谢[47]。

作为翻译阻遏物，m i c r R N A使我们能够更好地理解T2D 发病和发展
过程中的基因表达调节机制，在T2D预防、早期诊 断和治疗中具有潜在应用[8]。

本研究采用R T-P C R法检测T2D患者、具有空 腹血糖受损（<；)或葡萄糖耐量受损（<9的前期 糖尿病患者和健康对照组受试者的血清Q R-29B表 达水平，比较分析其相互关系，并探讨血清Q R-29B 作为生物标志物对T2D和IFG/I G T的预测潜能。

1资料和方法
I. 1研究对象合肥市第一人民医院选取2015年 6月至2016年9月70例受试者:24例T2D患者（10 例男性和14例女性），22例具有I F G或<T的前期 糖尿病患者（10例男性和12例女性），24例健康对照组人员（13例男性和11例女性）。

所有入组者排 除可影响microRNA表达水平的恶性肿瘤、心血管 疾病、肾病或其他慢性疾病。

该研究经合肥市第一 人民医院医学研究和伦理委员会批准，所有受试者 均签署书面知情同意书。

T2D根据世界卫生组织标准诊断:空腹葡萄糖 (F G)水平"7. 0 mmol*L_1，当糖化血红蛋白(\^1'水平>6.5%时，2匕0；99葡萄糖水平" II. 1mmol *L_1。

F G水平为 6. 1 ~ 6.9 mmol *L_1或2 h 0G T T葡萄糖水平为7.8 ~11.0 m m* *L-1的诊断为前期糖尿病(IFG/IGT)。

健康对照组受试者 F G为 4.8 ~5.2 m m o l L j1，2 h 0G T T葡萄糖水平 < 7.8 mmol *L1。

入组完毕后，记录每名受试者的性别、年龄、体 质量、身高、血压等基本资料，并完善体质量指数(B M I)及F G、2h0G T T、H B A1c、甘油三酯（T G)、低 密度脂蛋白（L D L!)、高密度脂蛋白（HDL-C)、血清 总胆固醇(T C)等生化指标的收集，所有数据记录在 案用于后期分析。

1.2血清总R N A提取收集受试者禁食12 h以上的静脉血5 m L，3 000 d *min_1离心5 min，收取 血清标本，置-80 X保存。

标本收集完成后统一■米 用 RNeasy Mini Kit 总 R N A 提取试剂盒（Q I A G E N)按照说明提取血清中游离总R N A。

1.3血清m i R-29b测定miR-29B定量检测采用 茎环逆转录荧光定量P C R方法，以U6为内参，引物与探针购置AppliedBiosystems公司。

逆转录反应 条件为 16 X 30 min、42 X 30 min、85 X 5 min、4 X
5 min。

R T-P C R反应条件为95 X10 min 45个循 环，95 X 15 s 1个循环;60 X 60 s 1个循环。

采用 SDS 1.4 (Applied Biosystems 公司，美国）软件计算 C t值。

目的m i R N A s相对表达量采用相对于U6的2。

11统计学方法实验结果以L±S或百分率表示，计数资料采用整体或分割;!2检验，计量资料多组间比较采用方差分析，T2D和I F G/I G T组与对照组间两两比较时，采用L S D!检验。

多因素logistic 回归分析[以是否诊断为T2D或I F G/I G T为应变量，“是”赋值为“1”，“否’’赋值为“0’’，以“m i R-29表达量、年龄、性别（男为1，女为2)、高血压（是为1，否为 0)、B M I、T G、L D L-C、H D L-C和T C”为自变量]用于评估m i R-29B表达水平与T2D和I F G/I G T 之间的关联。

受试者工作特征（R0C)分析的曲线下面积（A U C)用于评估m i R-29B水平的预测价值。

P <0. 05表明差异有统计学意义。

所有数据分析使用S P S S19. 0统计学软件。

2结果
2.1—般资料比较各组研究对象的基本特征见表1。

各组间年龄、性别、B M I、T G和T C差异无统计学意义，而在高血压、F G、0G T T、H B A1c水平、H D L!和L D L!分布中差异有统计学意义。

T2D组、I F G/I G T组分别和健康对照组比较时，性别和年龄分布差异无统计学意义（；>0. 05)。

与健康对照组相比，T2D患者的B M I显著增加，T G、H D L-C、L D L-C和 T C显著改变。

T2D和 I F G/I G T组高血压患者的百分比明显较高，T G、F G、0G T T和
H B A1c水平与对照组相比差异有统计学意义（P <
0. 05)。

然而，与对照组相比，I F G/I G T组H D L!，L D L-C或T C差异无统计学意义（P >0. 05)。

2.2各组m i R-29b的表达水平m i R-29B表达水平采用R T-P C R进行检测，T2D组m i R-29B为（0. 49±0. 24)，I F G/I G T组为（0. 50± 0. 33)，对照组为(1.03±0.38)。

结果表明与健康对照组相比，T2D 和I F G/I G T组患者血清中m i R-29B的表达水平均显著降低（T2D t.对照：t = 5. 80，P< 0. 001; I F G/
I G T t.对照组：t = 5. 02，P < 0. 001;三组比较：> =
21.46,P <0.001;图 1)。

2.3血清m i R-29b表达水平与T2D、I F G/I G T的关系单因素l o g i s t i c回归分析显示了m i R-29B低表达水平和T2D存在较强关联（O H =0. 51，95%C I: 0. 16 ~0. 73,P <0.05;表2)。

同样地，较低表达水平的m i R-29B与I F G/I G T明显相关（O H= 0. 56, 95%C I:0.23~0. 79，；<0.05;表2)。

当将年龄和性别，以及B M I和高血压，以及T G，L D L-C，H D L-C和T C的水平分别添加至分析模型时，这种关联依然差异有统计学意义，见表3。

2.4m i R-29b表达对T2D和I F G/I G T的预测潜能为了评价血清m i R-29B表达水平在糖尿病诊断
1 对象一般
变量
T2D组IFG/IGT对照组F
(/)值a P a
LSD-t
(/m b
P b
LSD-t
(/)值c
P值c
(n〇24)(n 〇22)(n〇24)
年龄/(岁，L±,52.0 ±6.049.0 ±7.749.0 ±9.1 1.200.309 1.350.1840.00 1.000
性别（男/女)/例10/1410/1213/11(0.79)0.674(0.75)0.386(0.35)0.555 BMI/"kg * m_2，l± s)25.3 ±1.824.5 ±2.224.2 ±1.0 2.600.082 2.210.0240.590.361
高血压/例（％)14 (58.3)9 (40.9)1(4.1)(16.25)0.000(16.39)0.000(9.11)0.003 FG/ (mmol * L _1，l± s)9.4±6.6 6.4 ±3.8 4.4 ±2.57.020.002 3.720.002 1.460.175
2 h OGTT/(mmol * L-^L m,14.6±28.8 ±0.8 6.1 ±0.6266.100.00022.600.0007.060.002 HbA1c/( j，l±,7.5 ±0.8 6.5 ±0.7 4.8 ±0.689.890.00013.270.0008.170.000 TG/ (mmol * L _1，l± , 2.38 ±0.50 2.27 ±0.40 1.49 ±0.20 2.570.084 2.270.028 2.140.038 LDL-C/(mmol *L_1，l±, 3.40 ±0.50 3.17 ±0.70 2.99 ±0.20 4.000.02
3 2.820.019 1.210.233 HDL-C/ (mmol * L _1，l± , 1.00 ±0.10 1.29 ±0.20 1.31 ±0.2024.040.000 6.230.0050.400.656 TC/(mmol *L_1，l±, 5.26 ±0.60 4.97 ±0.50 4.83 ±0.60 2.110.130 1.940.0580.360.718注:T2D为2型糖尿病，B M I为体质量指数，F G为空腹血糖，O G T T为口服葡萄糖耐量试验，H b A l c为糖化血红蛋白，T G为甘油三酯，H D L-C为高密度脂蛋白胆固醇，L D L-C为低密度脂蛋白胆固醇，T C为总胆固醇;a三组间比较，bT2D组与对照组比较，'F G/I G T组与对照组比较
表2血清B R-29b表达水平与T2D和I F G/I G T之间的关系
miR-29b 表达水平
T2D IFG/IGT
0R(95 j 8)P值0R( 95 j 8)P
单因素0.51 (0.16-0.73)0.020.56 (0.23 -0.79)0.01模型1a0.55 (0.31 -0.82)0.040.57 (0.28 -0.83)0.05模型2b0.53 (0.19 -0.79)0.030.58 (0.37 -0.87)0.03模型3c0.57 (0.37 -0.89)0.020.57 (0.35 -0.80)0.05注:模型1/加入年龄和性别进行分析;模型2b，在模型1基础上加入高 血压和BMI;模型3'，在模型2b基础上加入TG& LDL-C &HDL-C和T C;T2D:2 型糖尿病；BMI:体质量指数;TG:三酰甘油；LDL-C:低密度脂蛋白胆固醇; ffl)L-C:高密度脂蛋白胆固醇;T C:总胆固醇
注:两者相比较，aP<0.001
图1血清miR-29b在健康对照、IFG/IGT
和T2D组中的表达情况
中的预，我用R O C分析。

A U C表明血清m i R-29b表达水平能够显著区分T2D患者和健康对照组（A U C0. 864,95j C I:0. 759〜0. 969,P<
0. 001);血清m i R-29b表达水平也能将I F G/I G T与
(A U C0. 846,95j C I:0.737〜0.954，P
<0.001)区分开，见图2。

表3多因素分析结果
变量%O R OR P
年0.5020.2430.920.76 〜1.180.57
性0.6300.2570.830.66 〜1.080.24 miR-29b0.8350.2650.550.31 -0.820.04
图2血清m i R-29b表达水平的R O C曲线:A示m i R-29b表达 水平可以区分T2D患者和健康对照"A U C 0.864;95 j CI 0.759 〜0.969 ;P< 0.001); B示m i R-29b表达水平可以区分IFG/IGT 患者和健康对照"A U C 0.846;95 j C I0.737 〜0.954;P<0.001)
3讨论
近年血清microRNA逐渐成为各种疾病 &治疗和预后的新型生物标志物，包括T2D[941]。

人 血清microRNA的高稳定性使其成为疾病 的想生 。

周知，早期生 式干预可以高效延迟T2D的发生和进展，有外周血生物标志物能够区分T2D患者、IFG/IGT患者和健康个 体，通过早期识别高 的，早期干预将 提高糖尿病的预防、与 [12]。

Kaolina
等[13]开
究T2D和I F G患者外周血中的mi'o R N A标志物，他们发现血清microRNA (miR-144，miR-146a，miR-150，miR-182，miR-192，miR-29a，miR-30d和 miR-320a)可以作为特殊的生物标志物预测T2D。

本研究检测T2D&IFG/I G T和健康对照受试者 的血清中T2D相关miR-29B的表达水平，并研究了 血液miR-29b作为生物标志物用于作为预测T2D 和IFG/I G T的潜在价值。

结果表明，与健康对照相 比，T2D和IFG/I G T个体的血清miR-29b表达水平 显著降低，多因素I g i i回归分析提示较低表达水 平的miR-29b和T2D以及IFG/I G T之间存在关联。

值得注意的是，这种关联在调整已知的T2D相关危 险因素和某些其他生化指标后均没有改变。

R O C 曲线显示，血清miR-29b表达水平可以将T2D和 IFG/I G T患者与健康对照者分开，这表明血清miR-29b可作为T2D和IFG/I G T诊断的生物标记 物。

此前一项基于人群的队列研究中，Zampetaki 等[11)发现循环血浆中一系列m i c o R N A表达水平在 T2D患者中发生改变，包括miR-29b，与T2D发病密 切相关。

然而，研究者并未深入探讨miR-29b作为 血清标志物用于诊断T2D和IFG/IGT。

本研究的结 果进一步延伸了 miR-29b表达水平与IFG/I G T个体 的关联，深入阐述了 miR-29b在T2D和IFG/I G T中的预 价 。

前期众多研究均表明miR-29b参与调控多种肿 瘤的增殖、转移和耐药[1@15)。

近期发现miR-29b通 过多种靶基因参与体内糖平衡、胰岛素分泌的调节，进而影响糖尿病的发病进程[1$17]。

Dooley等[18)发 现miR-29家族可通过调控磷脂酰肌醇-3激酶 (PI3K)通路抑制肥胖和胰岛素抵抗的发生。

另外，多项m i c o R N A筛选均发现miR-29b在糖尿病患者 中的异常表达[17，19—20)。

这些研究均表明miR-29b 与糖尿病的发生和进展密切相关。

流行病学资料指 出，具有I F G的个体在接下来的5 ~ 10年中具有 20% ~30%的机会发展为T2D，如果合并IGT，风险 甚至更高[12)。

本研究观察到血清miR-29b表达水 平在T2D和IFG/I G T患者中均降低，进一步表明 miR-29b表达可能与T2D发生发展紧密相关。

本研究存在以下局限:一是样本量较小，因此这 些结果需要在更大群体样本中进一步证实;二是本 研究专注于血清miR-29b表达水平与T2D和IFG/ I G T之间的关联，并没有研究其他microRNA，后续 研究应检查其他全血m i c o R N A作为T2D和IFG/ I G T预测工具的意义;最后，虽然本研究的结果表明 血清miR-29b在患有T2D&IFG/I G T个体和健康对照者之间表达存在差异，但是m i R-29b预测T2D和 I F G/I G T的临床应用需要进一步研究和优化。

综上所述，T2D和I F G/I G T患者血清中m i R-29b 的表达水平显著降低，血清m i R-29b可以作为预测 T2D和I F G/I G T的潜在生物标志物。

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肾上腺肿瘤腹腔镜手术两种手术径路的选择策略
余洪波，周文生
(蚌埠医学院第一附属医院泌尿外科，安徽蚌埠233004)
摘要：目的探讨腹腔镜与后腹腔镜肾上腺肿瘤手术的临床价值。

方法回顾分析26例行后腹腔镜肾上腺肿瘤手术（经后
腹腔人路，后腹腔镜组）与23例行腹腔镜肾上腺肿瘤手术（经腹腔人路，腹腔镜组）的临床资料，统计分析两种手术方式的手
术并发症发生率、手术时间、术中出血量、术后肠道通气时间、术后住院天数及肿瘤直径等。

结果经腹腔人路者有1(4. 3%)
例因难以控制的肾上腺血管出血导致术野不清中转开放手术;经后腹腔人路者有2(7. 7%)例中转开放手术，其中1例肾脏损伤，另1例因高碳酸血症中转开放。

余46例手术均成功。

经腹腔人路者手术时间（126 ±27.52)m m;出血量（165.7 ±65.32)
m L;术后（3. 87 ±0.81 )d通气;术后住院（9. 83 ±2.39) d。

经后腹腔人路者手术时间（110. 77 ±26. 14) m i n;出血量（149. 04 m 50.05)m L;术后（1.88 ±0.77)d通气;术后住院（7. 15 ±1.71)d。

结论经腹腔人路与后腹腔人路手术方式各有其优缺点，在
治疗上也没有明显的优劣之分。

在实际临床工作中具体选择何种手术方式要根据患者的既往史、肿瘤大小与分期以及与周
围器官、血管的相对位置关系来决定。

关键词：肾上腺肿瘤/外科学;腹腔镜检查;腹膜后间隙
doi ：10. 3969/j. issn. 1009 - 6469. 2018.07.030
S e l e c t i o n s t r a t e g y o f t w o k i n d s o f s u r g i c a l r o u t e s
f o r a d r e n a l t u m o r p a t i e n t s u n d e r
g o i n g l a p a r o s c o p y
Y U H o n g b o，Z H0U W e n s h e n g
(D ep a rtm en t o f U r o lo)/，The F irst A ffilia ted H ospital o f B en gb u M edical C ollege，B e n g b u，A n h u i233004，C h in a) Abstract:Objective T o explore the clinical value of laparoscopic a n d retroperitoneoscopic adrenal tum o r surgery. Meth o d s T h e clinical data of 26 patients undergoing laparoscopic adrenal tumor surgery (p〇st-peritoneal a p p r o a c h，retroperitoneoscop patients undergoing laparoscopic adrenal tum o r surgery ( transperitoneal a p p r o a c h，laparoscopic g r o u p) w ere re T h e incidence of surgical complications，operative t i m e，intraoperative blood loss，postoperative intestinal ventilation t i m e，postoperative hospital stay a n d tum o r diameter for the two surgical procedures w ere statistically analyzed. Results O n e
inal approach resulted i n unclear conversion of o p e n surgical operation d u e to uncontrolled adrenal vascular h e m o r r h a g e；2 (7. 7% ) ca­
ses of trans-abdominal approach h a d o p e n s u r g e r，including 1 case of kidney injury a n d the other o w ere successful. In the group through intraperitoneal a p p r o a c h，the operative time w a s(126 ±27. 52)m i n，th
v o l u m e w a s (165. 7 ±65. 32)m L，the postoperative intestinal ventilation time w a s (3. 87 ±0. 81)d，the postoperative hospital stay w a s
6 〜14 d，with a n average of (9. 83±2. 39) d. In the other g r o u p，the operative time w a s( 110. 7
7 ±26. 14) m i n，the intraoperative bleeding v o l u m e w a s( 149. 04± 50. 05) m L，the postoperative intestinal ventilation time w a s(1.88±0.77)d，the postoperative
通信作者:周文生，男，主任医师，硕士生导师，研究方向为微创泌尿外科，E-mail:zhouwensheng66@sma• com
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(收稿日期：2017-02-21，修回日期：2018-04-20)。