黄芪甲苷在体内对高迁移率族蛋白B1介导小鼠调节性T淋巴细胞免疫表型的作用
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２ ，４ ａｎｄ ６‘ ．Ｏｎｅ ｈｕｎｄｒｅｄ ａｎｄ ｔｗｅｎｔｙ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｉｎｃｌｕｄｅｄ，ａｎｄ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｆ ｉｖｅ ｇｒｏｕｐｓ（２０ ｍｉｃｅ ｐｅｒ ｇｒｏｕｐ），ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ａｆｔｅｒ ａｎｅｓｔｈｅｔｉｚｅｄ），ＨＭＧＢ１ ｇｒｏｕｐ，ＨＭＧＢ１十ＮＳ ｇｒｏｕｐ （ＨＭＧＢ１ ＋ ｎｏｒｍａｌ ｓａ— ｌｉｎｅ），ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ Ｉ ｇｒｏｕｐ（ＨＭＧＢＩ＋ＡＳＴ ｏｆ１０ ｍｇ／ｋｇ），ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ ｌＩ ｇｒｏｕｐ（ＨＭＧＢＩ＋ＡＳＴ ｏｆ２０ ｍｇ／ｋｇ）， ａｎｄ ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ Ⅲ ｇ ｒｏｕｐ （ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ ｏｆ ３０ ｍｇ／ｋｇ）．Ｔｈｅ ｌａｔｔｅｒ ｆｏｕｒ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｆｏｕｒ ｓｕｂ— ｇｒｏｕｐｓ（８ ｒａｔｓ ｅａｃｈ），ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ｏｎ ｔｈｅ １ ，３ ，５ ａｎｄ ７ ｐｏｓｔ—ｓｔｉｍｕｌｕｓ ｄａｙ（ＰＳＤ），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
广东医学 ２０１８年 ７月 第 ３９卷第 ｌ３期 Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｊｕ１．２０１８，Ｖｏ１．３９，Ｎｏ．１３
· １９３７ ·
黄 芪 甲苷 在 体 内对 高 迁 移 率 族 蛋 白 Ｂ１介 导小 鼠
调 节 性 Ｔ淋 巴细 胞 免 疫 表 型 的作 用 米
黄 立锋 ，李金 凤 ，姚咏 明 ，张淑 文 ，李文雄
ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｅｇ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＨＭＧＢ１ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎ— ｓｔｒｕｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｉ．Ｐ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＨＭＧＢ１，ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｎｏｒｍａｌ ｓａｌｉｎｅ ｏｒ ＡＳＴ ｗａｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｉ．Ｐ ｏｎ Ｄａｙ
ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ ｂｏｘ １ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｖｉｖｏ． ＨＵＡＮＧ Ｌｉ—ｆｅｎｇ ，１２ Ｊｉｎ一，ｅｎｇ，ＹＡＯ ｙ０ｎｇ—ｍｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｓｈｕ—ｗｅｎ，ＬＩ Ｗｅｎ—ｘｉｏｎｇ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＳｕｒｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｕｎｉｔ．Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｈａｏ—ｙａｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｆ ｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｃａｐｉｔａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉ— ｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２０，Ｃｈｉｎａ
【关键词】 高迁移率族蛋 白Ｂ ；调节性 Ｔ细胞 ；黄 芪甲苷；免疫抑制 ；脓毒症
Ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅ ＩＶ ｏｎ ｔｈｅ ｉｍ ｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＬＩ Ｗ ｅｎ —ｘｉｏｎｇ，Ｅ — ｍａｉｌ：１ｗｘ７１ １５＠ ｓｉｎａ．ｃｏｍ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 ０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ＡｓｔｒａｇａＩｏｓｉｄｅ ＩＶ（ＡＳＴ）Ｏｌ３．ｔｈｅ
ＨＭＧＢ１ ４－ＡＳＴ 组 Ｉ：ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ （１０ ｍｇ／ｋｇ）治 疗 ；（５）ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ组 ＩＩ：ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ （２０ ｍｇ／ｋｇ）治 疗 ； （６）ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ组 Ⅲ：ＨＭＧＢ１ ＋ＡＳＴ（３０ ｍｇ／ｋｇ）治 疗。 以上 ６组再 各分 为 ４个 亚组 （每 组 ５只），于实验 第 １、３、５、７天将 动物 处死 ，提取 其脾 脏 Ｔｒｅｇ细胞 。采 用流 式 细胞 术检 测 Ｔｒｅｇ细胞 Ｆｏｘｐ３蛋 白表 达水 平 ，ＥＬＩＳＡ 法检 测 Ｔｒｅｇ细胞 孵育上 清中 ＩＬ一１０及 ＴＧＦ—Ｂ表 达水平 。结果 ＨＭＧＢ１攻 击组动 物 Ｆｏｘｐ３表达 水平在 １～７ ｄ明显降低 ，与正 常对照组 比较 差异有 统计 学意义（Ｐ＜０．Ｏ１），在 攻击后 第 ３天为 最低 值 ，细胞培 养上 清 中 ＩＬ一 １０及 ＴＧＦ—Ｂ表 达水平 呈现与 Ｆｏｘｐ３相 同 变化 趋 势 ；ＨＭＧＢ１＋Ｎｓ组动 物 Ｆｏｘｐ３、ＩＬ—ｌ０及 ＴＧＦ—ｐ表 达水 平 与 ＨＭＧＢ１攻 击组 比较 差异无 统计 学意 义 （Ｐ＞０．０５）；而 ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ组 Ⅲ及 ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ组 Ⅱ组 Ｆｏｘｐ３表 达水平在给药后均较 ＨＭＧＢ１＋Ｎｓ组明显升高（Ｐ＜０．０１～０．０５），细胞培养上清中ＩＬ一１０及 ＴＧＦ—ｐ表达水平 亦呈现与 Ｆｏｘｐ３相 同变化趋势 。结 论 ＨＭＧＢ１在体 内可抑 制小 鼠 Ｔｒｅｇ细胞免 疫抑制功 能的发挥 ，而 ＡｓＴ可针 对性 拮抗 ＨＭＧＢ１对 Ｔｒｅｇ细胞免疫 功能的抑 制效应 ，显示其 对 ＨＭＧＢ１介导 的促 炎效应具 有治疗作 用。
首都 医科大学附属北京 朝 阳医 院 ＳＩＣＵ， 妇产 科 （北 京 １０００２０）； 中国人 民解放 军 总 医院第 一附 属 医院创伤 研 究 中心（北京 １０００４８）； 首都 医科大 学附属北 京友 谊医院感染 暨急救 医学科（北 京 １０００５０）
【摘要】 目的 进一步明确晚期 炎症介质高迁移率族蛋 白 Ｂ１（ＨＭＧＢ１）在体 内对小鼠调节性 Ｔ细胞 （Ｔｒｅｇ）免 疫 表 型 的影 响 ，同时观 察 不 同剂量 黄 芪 甲苷 （ＡＳＴ）对 ＨＭＧＢ１介 导 的 Ｔｒｅｇ细 胞功 能 变化 的作 用。 方 法 采 用清 洁级 ＢＡＬＢ／ｃ小 鼠 ，予 实验 当天早 、晚各 腹腔 注射 １０ ｇ重组 ＨＭＧＢ１，并 于 注射 后 第２、４、６天腹 腔 注射 生理 盐水 或黄 芪 甲苷 。 实验 分组 ：将 １２０只小 鼠随机 分为 ６组（每 组 ２０只）。（１）正 常 对照 组 ：动物 麻 醉后 活 杀：（２）ＨＭＧＢ１攻 击 组 ：单 纯 注射 重组 ＨＭＧＢ１；（３）ＨＭＧＢ１＋ＮＳ组 ：ＨＭＧＢ１＋生 理 盐水 治 疗；（４）
广东医学 ２０１８年 ７月 第 ３９卷第 ｌ３期 Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｊｕ１．２０１８，Ｖｏ１．３９，Ｎｏ．１３
· １９３７ ·
黄 芪 甲苷 在 体 内对 高 迁 移 率 族 蛋 白 Ｂ１介 导小 鼠
调 节 性 Ｔ淋 巴细 胞 免 疫 表 型 的作 用 米
黄 立锋 ，李金 凤 ，姚咏 明 ，张淑 文 ，李文雄
ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｅｇ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＨＭＧＢ１ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍ ｅｔｈｏｄｓ Ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎ— ｓｔｒｕｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｉ．Ｐ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＨＭＧＢ１，ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｎｏｒｍａｌ ｓａｌｉｎｅ ｏｒ ＡＳＴ ｗａｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｉ．Ｐ ｏｎ Ｄａｙ
ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ ｂｏｘ １ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｖｉｖｏ． ＨＵＡＮＧ Ｌｉ—ｆｅｎｇ ，１２ Ｊｉｎ一，ｅｎｇ，ＹＡＯ ｙ０ｎｇ—ｍｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｓｈｕ—ｗｅｎ，ＬＩ Ｗｅｎ—ｘｉｏｎｇ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＳｕｒｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｕｎｉｔ．Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｈａｏ—ｙａｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｆ ｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｃａｐｉｔａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉ— ｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２０，Ｃｈｉｎａ
【关键词】 高迁移率族蛋 白Ｂ ；调节性 Ｔ细胞 ；黄 芪甲苷；免疫抑制 ；脓毒症
Ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅ ＩＶ ｏｎ ｔｈｅ ｉｍ ｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＬＩ Ｗ ｅｎ —ｘｉｏｎｇ，Ｅ — ｍａｉｌ：１ｗｘ７１ １５＠ ｓｉｎａ．ｃｏｍ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 ０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ＡｓｔｒａｇａＩｏｓｉｄｅ ＩＶ（ＡＳＴ）Ｏｌ３．ｔｈｅ
ＨＭＧＢ１ ４－ＡＳＴ 组 Ｉ：ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ （１０ ｍｇ／ｋｇ）治 疗 ；（５）ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ组 ＩＩ：ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ （２０ ｍｇ／ｋｇ）治 疗 ； （６）ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ组 Ⅲ：ＨＭＧＢ１ ＋ＡＳＴ（３０ ｍｇ／ｋｇ）治 疗。 以上 ６组再 各分 为 ４个 亚组 （每 组 ５只），于实验 第 １、３、５、７天将 动物 处死 ，提取 其脾 脏 Ｔｒｅｇ细胞 。采 用流 式 细胞 术检 测 Ｔｒｅｇ细胞 Ｆｏｘｐ３蛋 白表 达水 平 ，ＥＬＩＳＡ 法检 测 Ｔｒｅｇ细胞 孵育上 清中 ＩＬ一１０及 ＴＧＦ—Ｂ表 达水平 。结果 ＨＭＧＢ１攻 击组动 物 Ｆｏｘｐ３表达 水平在 １～７ ｄ明显降低 ，与正 常对照组 比较 差异有 统计 学意义（Ｐ＜０．Ｏ１），在 攻击后 第 ３天为 最低 值 ，细胞培 养上 清 中 ＩＬ一 １０及 ＴＧＦ—Ｂ表 达水平 呈现与 Ｆｏｘｐ３相 同 变化 趋 势 ；ＨＭＧＢ１＋Ｎｓ组动 物 Ｆｏｘｐ３、ＩＬ—ｌ０及 ＴＧＦ—ｐ表 达水 平 与 ＨＭＧＢ１攻 击组 比较 差异无 统计 学意 义 （Ｐ＞０．０５）；而 ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ组 Ⅲ及 ＨＭＧＢ１＋ＡＳＴ组 Ⅱ组 Ｆｏｘｐ３表 达水平在给药后均较 ＨＭＧＢ１＋Ｎｓ组明显升高（Ｐ＜０．０１～０．０５），细胞培养上清中ＩＬ一１０及 ＴＧＦ—ｐ表达水平 亦呈现与 Ｆｏｘｐ３相 同变化趋势 。结 论 ＨＭＧＢ１在体 内可抑 制小 鼠 Ｔｒｅｇ细胞免 疫抑制功 能的发挥 ，而 ＡｓＴ可针 对性 拮抗 ＨＭＧＢ１对 Ｔｒｅｇ细胞免疫 功能的抑 制效应 ，显示其 对 ＨＭＧＢ１介导 的促 炎效应具 有治疗作 用。
首都 医科大学附属北京 朝 阳医 院 ＳＩＣＵ， 妇产 科 （北 京 １０００２０）； 中国人 民解放 军 总 医院第 一附 属 医院创伤 研 究 中心（北京 １０００４８）； 首都 医科大 学附属北 京友 谊医院感染 暨急救 医学科（北 京 １０００５０）
【摘要】 目的 进一步明确晚期 炎症介质高迁移率族蛋 白 Ｂ１（ＨＭＧＢ１）在体 内对小鼠调节性 Ｔ细胞 （Ｔｒｅｇ）免 疫 表 型 的影 响 ，同时观 察 不 同剂量 黄 芪 甲苷 （ＡＳＴ）对 ＨＭＧＢ１介 导 的 Ｔｒｅｇ细 胞功 能 变化 的作 用。 方 法 采 用清 洁级 ＢＡＬＢ／ｃ小 鼠 ，予 实验 当天早 、晚各 腹腔 注射 １０ ｇ重组 ＨＭＧＢ１，并 于 注射 后 第２、４、６天腹 腔 注射 生理 盐水 或黄 芪 甲苷 。 实验 分组 ：将 １２０只小 鼠随机 分为 ６组（每 组 ２０只）。（１）正 常 对照 组 ：动物 麻 醉后 活 杀：（２）ＨＭＧＢ１攻 击 组 ：单 纯 注射 重组 ＨＭＧＢ１；（３）ＨＭＧＢ１＋ＮＳ组 ：ＨＭＧＢ１＋生 理 盐水 治 疗；（４）